Liečebný potenciál z Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) odnože proti indometacínu indukované žalúdočné vredy: a mechanistické exploration.

liečebný potenciál v Picrorhiza kurroa
(Scrofulariaceae) odnože proti indometacínu indukované žalúdočné vredy: a. Mechanistické prieskum
Abstract
pozadie
tejto štúdie sa uskutočnilo vyhodnotenie potenciálu odnoží indického liečivá rastlina, Picrorhiza kurroa
pri hojení indometacínom indukované akútne žalúdočné vredy u myší a preverí jeho schopnosť modulovať oxidačný stres a hladiny prostaglandín (PGE 2) a EGF v priebehu procesu.
metódy
samce Swiss albino myši, vredy s indometacín (18 mg /kg, po, jednorazová dávka) boli liečení viac ako 7 dní s rôznymi dávkami metanol extrakt P. kurroa
odnoží (označené ako PK). Liečenie kapacita najviac účinnej dávky PK (20 mg /kg, p. O. 3 x d) sa porovnávala s omeprazolu (Obmedz) (3 mg /kg, p. O. 3 x d). Účinky liečivá pre liečenie jeden až tri dni na biochemické parametre boli hodnotené porovnaním výsledkov s tým neošetrených myšou na 1 st a 3 rd deň vredov. Žalúdok tkaniva myší boli pre biochemickú analýzu používajú.
Výsledky
makroskopických indexov odhalila maximálny vredy na 3 tretieho dňa po podaní indometacínu, ktorý bol účinne zacelené PK. Pod optimalizované liečebného režimu, PK a Obmedz znižuje indexy vred o 45,1% (P Hotel &0,01), a 76,3% v uvedenom poradí (P Hotel &0,001)., V porovnaní s neošetrenými ulcerácie myšou
v porovnaní s ulcerácie liečených myší, ktoré boli liečené PK po dobu 3 dní ukázala, znížila hladiny kyseliny thiobarbiturové reaktívnych látok (TBARS) (32,7%, P
menšie ako 0,05) a bielkovín karbonyl (37,7%, P Hotel <0,001), a zvýšil mucín (42,2%, P Hotel < 0,01), slizničnej PGE 2 (21,4%, P Hotel < 0,05), a prejavy COX-1 a 2 (26,9% a 18,5%, P Hotel &0,05), EGF (149,0%, P Hotel &0,001) a VEGF (56,9%, P Hotel &0,01). Obmedz znížila TBARS (29,4%, P Hotel &0,05), a proteín karbonyl (38,9%, P Hotel &0,001), a zvýšenie mucín (38,3%, P Hotel &0,01), a to bez zmeny ostatných parametrov výrazne.
Záver
PK (20 mg /kg, po x 3 dni) by účinne liečiť indometacínom indukovanej ulcerácii žalúdka u myší znížením oxidačného stresu, a podpora mucínu, sekrécia syntézu prostaglandínu a rozširovanie výrazov cyklooxygenázy enzýmy a rastové faktory.
pozadí
gastrointestinálne toxicity spojené s nesteroidnými protizápalovými liekmi (NSAID) je dôležitý zdravotný problém, aj napriek nedávnej pokroky farmaceutických [1]. Okrem indukcie žalúdočné vredy, NSAID tiež zdá, že inhibuje hojenie vredu [2, 3]. V dôsledku toho je prevencia gastrointestinálne poruchy aj naďalej predstavovať ohrozenie pre oboch klinické lekára a výskumníkmi. Napriek ich účinnosť pri riadení NSAID vyvolanej žalúdočné vredy sú v súčasnej dobe dostupné syntetické protivredové lieky udeľujú nežiaduce účinky, a sú tiež nákladné, najmä pre vidiecke obyvateľstvo. Za týmto účelom sme uviedli sľubnú anti-ulcerogenním aktivitu niektorých rastlinných produktov [4-6]
Picrorhiza kurroa
. (Family: Scrofulariaceae, všeobecný názov: Picrorhiza, katuka, Kuťka) je malý trváca bylina rastúca v kopcovitých častiach regiónu severozápadnej himalájske v Indii a Nepále. List, kôra a podzemné časti rastliny, hlavne podzemky sú široko používané v tradičnej indickej ajurvédskej () systémy liek od staroveku. Aj keď sa ukazuje, antioxidant, protizápalový a imunomodulačné aktivity, to je najviac cenená pre svoje hepatoprotektívne efekt. Horké odnože Picrorhiza
boli použité pre tisíce rokov v Indii na liečbu ľudí s trávenia [7], a zápcha kvôli nedostatočnému tráveniu sekréciou [8]. Picrorhiza
je považovaný za trophorestorative byliny pre pečeň, rovnako ako silný stimulátor imunitného [9]. Jeho zložka, je tiež hlásil picroliv, že majú choleretic účinok [10], a zabrániť poškodeniu pečene spôsobené etanolom [11], chemické látky [12] a mikroorganizmov [13].
Primárnym cieľom tohto prešetrovania bolo štúdium hojenie vlastnosť metanolu extraktu P. kurroa
podzemok (označené ako PK) proti indometacínom indukované akútne žalúdočné vredy myšou tvárou v tvár
že komerčného lieku, omeprazol (Obmedz). Indometacín, zástupca (NSAID) rodina nesteroidné protizápalové lieky, spôsobuje vznik žalúdočných vredov pomocou rôznych procesov, vrátane generácia ROS, inhibíciu syntézy prostaglandínu, infiltrácia polymorfonukleárnych leukocytov, indukciu apoptózy, a začatie peroxidácie lipidov [14, 15]. Preto, hojenie vredov kapacity liekov, posudzovaných histopatológie, korelovala s ich účinkami na znižovanie indometacínom indukovanej oxidatívny stres. Antioxidačná aktivita testovaných vzoriek bola testovaná z hľadiska ich schopnosti chrániť oxidačné poškodenia lipidov, bielkovín a tiol závislé antioxidačné obrany v žalúdočnej tkanive. Okrem toho NSA indukované gastropatia je tiež pripisovaná zníženej syntéze prostaglandínov [16]. V dôsledku toho, role skúšobných vzoriek v zvyšujúce sekréciu hlienu, a expresie epidermálneho rastového faktora (EGF), ako aj zvyšovanie PGE 2 syntéza boli tiež skúmané.
Metódy
rastlinného materiálu
podzemok P. kurroa
(označené ako PK), získať na miestnom trhu bolo použité k súčasnej práci. Závod bol identifikovaný taxonomically (prírastkové č. 324139), ktorú botanickej Survey of India, Indian Botanická záhrada, Kokata, India.
Chemikálie
2-thiobarbiturovou kyseliny (TBA), etanol, butanol a etylacetát boli získané z E. Merck (Bombaj, India), zatiaľ čo kyselina trichlóroctová (TCA) bol od Thomasa Bakera (Bombaj, India). Alcian modrá, indometacín, hovädzie sérový albumín (BSA), haematoxylene, kamenec, eozín, butylovaný hydroxytoluén (BHT), guanidínu hydrochlorid, kyselina trifluóroctová (TFA), omeprazol (Obmedz), 3,3 '-diaminobenzidine (DAB), králičie anti -mouse EGF a Trizma základňa boli nadobudnuté od spoločnosti Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA). Ďalšie činidlá boli použité 35% peroxidu vodíka (Lancaster, Morecambe, UK), 2,4-dinitrofenylová hydrazín (DNPH), hydrogenfosforečnan sodný a dihydrogenfosforečnan sodný (BDH, Pool Dorset, UK), sacharóza a 5,5'-dithiobis -2-nitrobenzioc kyselina (DTNB) (SRL, Bombaj, India), kôň a kozie sérum (Banaglore Genie, Banaglore, India), PGE 2 metabolitu kit (Cayman Chemical, Michigan, USA) a s peroxidáze konjugovaná kozia anti- králičie IgG (EMD Biosciences, Sandiego, USA).
Prístrojové
absorbancie spektrum bolo vykonané pri teplote 25 ° C za použitia JASC v-550 UV-Vis spektrofotometer. Skenov vlnovej dĺžky a meranie absorbancie bola vykonaná v 1 ml kremenných buniek 1 cm dĺžky dráhy.
Príprava rastlinné výťažky
vysušená na vzduchu podzemku P. kurroa
(250 g) boli nakrájané na malé kúsky, namočené v metanole (1 liter) za dva dni, a supernatant bol dekantuje. Po opakovaní Celý proces sa trikrát, spojené extrakty boli prefiltrujú cez nylonovú sieťovinou, a odparí sa vo vákuu a nakoniec lyofilizované. Surový extrakt, označený ako PK v celom rukopisu, bol uložený vo vákuovom exsikátore.
Príprave liečivá
Lieky boli pripravené z PK a Obmedz ako vodnej suspenzie v 2% arabská guma, keď vozidlo, a podávať myšiam orálne.
farmakologických skúšok
Zvieratá a experimentálne protokol pre vredov
samce Swiss albino myšou boli chované na Dr. BC Roy postgraduálneho Institute of základných lekárskych vied, Kalkata, India a BARC laboratórnych zvierat domu facility , Mumbai, India. Tie boli nadobudnuté po získaní povolenia (Post Graduate Institute of základných lekárskych vied, Kalkata etická komisia Animal 507 /CPCSEA, Sankcie č IAEC /SB-2/2004 /UCM-16 zo dňa 06.15.04 a BARC etická komisia zvierat (BAEC) , laboratórne zviera zariadenie. postihovať č. BAEC /03/05 zo dňa 07.11.05) z príslušných zvieracích etickými výbormi oboch centier a boli riešené nasledujúcich medzinárodných etických pokynov výboru zvierat. 6-8 týždňov staré myší (25-30 g) boli chované na vyváženom laboratórne stravou podľa NIN, Hyderabad, India a vzhľadom k vode z vodovodu ad libitum. Boli udržiavané pri teplote 20 ± 2 ° C, 65-70% vlhkosť, a deň /noc cyklu (12 h /12 h). Na začiatku každého experimentu, všetky zvieratá boli identifikované typické zárezy v uchu a končatín a potom sa randomizovaná. To bolo vykonané vykonávať všetky experimenty v zaslepenej fáze. Ulcerácia u myší bola indukovaná podávaním indometacín (18 mg /kg, p. O.) Sa rozpustí v destilovanej vode a v nosiči suspendovaná, arabskou gumu (2%) v jednej dávke. Naša štúdia s 5, 10, 15, 18, 20, 25 a 30 mg /kg, p. o. of indometacín bolo zistené, že najnižšie dávky (5 a 10 mg /kg), za predpokladu, menšie vredov po 6 hodinách jeho podaní, zatiaľ čo vyššie dávky (25 a 30 mg /kg) viedlo k mortalite. Zvolená dávka (18 mg /kg), vyrobené optimálne vredov, so zápalom a slizničné urážky, bez toho aby došlo k úhynu myšiam. Zvieratá bola odopretá potrava, ale mala voľný prístup k vode z kohútika 24 hodín pred vredu indukcie.
Štandardizácia dávke lieku
pre štandardizáciu drogových dávok, PK (5, 10, 20 a 40 mg /kg) dostala ako jediná dávka za deň až sedem dní. Prvá dávka PK a Obmedz dostali 6 hodín po podaní indometacínu. V nasledujúcich šiestich dňoch, testované vzorky boli uvedené v 9 hodín ráno v každý deň. Piatich myší boli odobraté v každej skupine a každý pokus sa opakoval trikrát. Myši boli usmrtené o 1 st, 3 rd, 5 th a 7 th dní, 4 hodiny po podaní poslednej dávky PK. Rozsah vredov bola hodnotená z makroskopických skóre poškodenia (MDS) neošetrených a ošetrených ulcerácia myšou na daný deň. Optimalizovaný režim liečby (lieky dávky a doba liečby) boli hodnotené z MDS zo skupín myší liečených vyššie liečbu.
Posúdenie vredov a uzdravenie z MDS
Myši boli usmrtené po predávkovaní s tiopentalom. Žalúdok od normálnych a liečených skupín boli rýchlo odstránené, otvorí sa pozdĺž veľkého zakrivenie, a dôkladne opláchnuté fyziologickým roztokom. Ulcerovaného žalúdočnej sliznice oblasti boli vizualizované za použitia transparentné fólie a mikroskopu. MDS bola hodnotená [17] a triedenie žalúdočné ujmy na stupnici 0-4, na základe závažnosti a hyperémia hemoragických lézií: 0 - takmer normálne sliznice, 0,5 - hyperémiu, 1 - jeden alebo dva lézií, 2 - závažné lézie , 3 - veľmi ťažké lézie, 4 - sliznice plný lézií. (Lézie - hemoragické erózie, hyperémia - cievne kongescia). Pokusy sa uskutočnili dva vyšetrovatelia nepoznali skupiny a zaobchádzanie so zvieratami. Rezy boli kódované tak, aby eliminovať pozorovateľa zaujatosť. Údaje za analýz sú uvedené ako priemer ± SEM z preskúmania minimálne troch sekcií na zviera a piatich zvierat na skupinu.
Štúdie týkajúce sa biochemických parametrov
Výsledky odhalili MDS maximálny hojenie vredu po troch dňoch farmakologická liečba. Žalúdok vredy v neliečených myší takisto dosiahla vrchol na 3 tretí deň po indometacínu správy. Z tohto dôvodu sme hodnotili biochemické parametre v rámci optimalizované liečebného režimu [PK (20 mg /kg) a Obmedz (3 mg /kg)] až do 3 rd deň iba ulcerácie. Za týmto účelom sa tieto siedmimi skupinami z ktorých každá obsahuje 5 myší boli vybrané z ktorej sa používajú pre stanovenie MDS a so údaje sú odvodené z troch opakovaní:
skupiny I - normálne kontrolné myši; Skupina II - ulcerated myši, a obetovali po 10 hodinách (považovaný za jeden deň); Skupina III - ulcerated myši, a obetoval na 3 rd deň; Skupina IV-V - vredy myši, spracuje sa s PK a Obmedz, respektíve na 1 deň, a obetoval 4 hodín po podaní testovaných vzoriek; Skupina VI-VII -. Vredy myši, ošetrené PK a Obmedz, respektíve po dobu 3 dní, a obetovaná v 3 rd deň, 4 hodiny po poslednej dávke skúšobných vzoriek
vyčíslenie škody bielkovín a lipidov v priebehu vredov a hojenie
žalúdočných žliaz tkaniva boli zhromaždené z piatich zvierat pre každú tkanivo, premyje vhodným pufrom a použité na biochemické štúdie. Mokré váhy tkaniva boli zaznamenané a experimenty boli vykonávané v triplikátech. Žľazovej časti z ovládacieho, vredy a drog liečených myší nasnímané v rôznych časových intervaloch boli homogenizované s sklo-teflonového homogenizačné trubice v 50 mM fosfátového pufra, pH 7,4 a centrifugována pri 1200 x g na získanie supernatantu. Množstvo proteínu karbonyl tkanivového homogenátu, bola určená na základe hláseného spôsobom [18]. DNPH bol pridaný (4 ml, 10 mM) v 2 M kyseliny chlorovodíkovej k roztoku (1,0 ml) a bola vykonaná inkubácia po dobu 1 hodiny s prerušovaným trepanie. Pridá sa 20% vodný roztok TCA (5 ml) ľadovo chladného a zmes sa inkubuje po dobu 15 min. Vyzrážaný proteín sa premyje 3x etanolom a etylacetátu (1: 1), sa rozpustí v 1 ml roztoku, ktorý obsahuje 6 M guanidínu HCI v 20 mM fosforečnanu draselného (jednosýtne), upraví sa na pH 2,3 s kyselinou trifluoroctovú. Po odstredení sa absorbancia supernatantu bola odpočítaná pri 362 nm (∈ = 2,2 x 10 4 M -1 cm -1).
Pre analýzu peroxidácie lipidov (z hľadiska TBARS), 10% homogenát z každého z jednotlivých vzoriek bol pripravený v pufri (320 mM sacharózy, 5 mM HEPES, 20 mM EDTA a 0,01% BHT). Tie boli podrobené diferenciálnym odstredením (1200 x g po a 12000 x g po) a získa sa mitochondriálnej pelety, ktoré sa premyjú pufrom (150 mM KCl a 20 mM fosfátovom pufri), a nakoniec sa suspenduje v 50 mM fosfátovom pufri, pH 7,4. Frakcia mitochondriálnej membrány (1 ml) sa spracuje s TCA-TBA-HCl (2 ml, 15% TCA, 0,375% TBA, 0,25 N HCl), obsahujúca 0,01% BHT, zahrieva na vriacom vodnom kúpeli po dobu 15 minút, ochladí sa a odstredí , Absorbancia supernatantu bola meraná pri 535 nm (∈ = 1,56 x 10 5 M -1 cm -1) [19].
Meranie nebielkovinového tiol (NP-TSH )
Po hlásenej metóda [20] žalúdočnej sliznice NP-TSH bol meraný. Stručne povedané, fundic žalúdočné Homogenát z kontrolných, ulcerácie, u myší ošetrených liečivom boli vykonané v 0,2 M Tris-HCl pufra, pH 8,2 obsahujúci 20 mM EDTA a centrifugovány. Alikvotná časť homogenátu (1 ml) bol vyzráža ľadovo studeným 20% TCA (1 ml) a odstredí. Supernatant (1 ml) sa pridá k 2 ml 0,8 M Tris-HCl pufra, pH 9 obsahujúceho 20 mM EDTA a zmieša sa s 0,1 ml 10 mM DTNB. Absorbancia žltého chromogénu pri 412 nm (∈ = 13,6 × 10 4 M -1 cm -1) bola prečítaná.
Testu hlienu
Po hlásenú spôsob [21] , bola odhadnutá voľná mucín v žalúdočných tkanivách. V stručnosti, žliaz časť žalúdka, bola oddelená od lumen žalúdka, zvážený a okamžite sa prenesie do 10 ml 0,1% w /v roztoku Alcian modrej (Ab) (v 0,16 M roztoku sacharózy s vyrovnávacou pamäťou s 0,05 mM roztoku octanu sodného, pH upravené na 5,8). Po zafarbení po dobu 2 hodín, prebytok farbiva bol odstránený z tkaniva dvoma po sebe nasledujúcimi premytím s 10 ml 0,25 M roztoku sacharózy. Farbivo v komplexe s žalúdočnej stenou slizu sa extrahuje 10 ml 0,5 M chloridu horečnatého prerušovaným trepaním (1 min) v 30 minútových intervaloch po dobu 2 hodín. Modrá extrakt (2 ml) sa intenzívne trepe s rovnakým objemom dietyléteru. Výsledná emulzia sa odstredí pri 3600 otáčkach za minútu po dobu 10 minút a absorbancia vodnej vrstvy bola odpočítaná pri 580 nm. Množstvo Ab extrahuje na g vlhkého žľazovej tkaniva bola vypočítaná zo štandardnej krivky pripravenej s použitím rôznych koncentrácií Ab.
COX-1 a COX-2 expresia testu
počas 30 minút zberu ulcerovaného časťami žalúdočné tkaniva boli fixované v neutrálnom pufrovanom 10% formolový fyziologickým roztokom a rezy. Po 24 hodinách fixačných nasleduje uloženie do parafínu bloku, sa rozreže na úseky 5 mikrónov na podložné sklíčko a výrazy COX-1 a COX-2 boli kvantifikované po hlásené postupom [22], s miernou modifikáciou. Po Deparafinizace v xyléne, rezy boli ošetrené s odstupňovanou radom alkoholu a následne rehydratuje v PBS pri pH 7,5. Rezy boli postupne zmieša s 3% peroxidom vodíka v PBS, a proteínových blokátory (5% hovädzieho sérového albumínu, 5% normálnym kozím sére v PBS) a inkubované cez noc pri 4 ° C s primárnou protilátkou (myší anti-COX-1 a COX 2, 1: 200). Po inkubácii po dobu 2 hodín pri teplote miestnosti s peroxidáze konjugovaný králičie anti-myšou sekundárnou protilátkou (1: 500), pozitívna reakcia bola detekovaná vystavením stabilná DAB po dobu 2 až 5 minút. V regulačných stupňov, protilátky boli vynechané, a pridá sa iba PBS. Po kontrastným sklíčok s Meyerovej hematoxylínom, intenzita farebných immunolocalized produktov boli vyhodnotené pomocou softvéru Biovis MV500. Päť oblastí z každej sekcie boli naskenované a integrovaná optická hustota (Iod) v každej oblasti bola vypočítaná. Iod negatívnej kontroly bola odpočítaná od Iod každej experimentálnej časti pre každé zviera vo všetkých skupinách.
Prostaglandín test
Po zbere žalúdka, korpus (plná hrúbka) bol vyrezaný, zváži (100 mg ) a suspenduje sa v 10 mM pufri fosforečnanu sodného, ​​pH 7,4 (1 ml). Tkanivo bolo mleté ​​jemne nožnicami a inkubované pri 37 ° C počas 20 min. Po odstredení (9000 x g), prostaglandín E (PGE 2)
expresie EGF 2 úrovne v supernatante bola meraná pomocou ELISA [23], a koncentrácie sú vyjadrené ako pg /mg proteínu. test
imunozbarvení EGF bola vykonaná [22] v nadväznosti na podobnú metódou použitou pre COX-1 a COX-2, s menšími modifikáciami. V tomto prípade, po blokovanie endogénnej peroxidázy a liečby s blokátormi bielkovín, tkanivové rezy boli inkubované cez noc pri 4 ° C s primárnou protilátkou v príslušnom riedení. V regulačných stupňov, iba bol pridaný PBS vynechaním protilátky. Po inkubácii po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti s peroxidáze konjugovaná kozia anti-králičia IgG, pozitívne reakcie bola detekovaná vystavením DAB pre 2 až 5 minút. Po kontrastným sklíčok s Meyerovej hematoxylínom, intenzita farebných immunolocalized výrobkov boli kvantifikované pomocou softvéru Biovis MV500. Päť oblastí z každej sekcie boli naskenované a integrovaná optická hustota (Iod) v každej oblasti bola vypočítaná. Iod negatívnej kontroly bola odpočítaná od Iod každej experimentálnej časti pre každé zviera vo všetkých skupinách.
Stanovenie sérového VEGF
Sérum VEGF bola meraná s použitím vzoriek krvi odobratá z zostupnej aorty, s komerčne dostupné ELISA kity nasledujúce inštrukcií výrobcu.
vylučovanie žalúdočnej testu (pylorous modelu ligácia)
pre štúdium účinkov testovaných liekov na žalúdočnú sekréciu, bola vykonaná ligácia vrátnika žalúdka štandardizovaná v našom laboratóriu. Jedna skupina myší (experimentálna kontrola) dostal 2% arabskú gumu v destilovanej vode (0,2 ml na myšiach, po), pričom jednotlivé skupiny liečby dostali PK (20 mg /kg x 3 d), Obmedz (3 mg /kg × 3 d), indometacín (18 mg /kg x 1 d), ako také, alebo spolu s PK (20 mg /kg x 3 d), Obmedz (3 mg /kg x 3 d) v tomto poradí. Na 3 rd deň, brucha zvierat bol otvorený pri ľahkej éterové anestézii pre pyloru ligácia (PL). Po uzavretí brucha, zvieratá boli dané do klietok pri ľahkej obmedzenia a nechajú sa zotaviť z anestézie. Po 6 hodinách boli zvieratá usmrtené, bola otvorená brušná dutina a obväz bol umiestnený okolo pažeráka. Žalúdka bola odstránená a obsah bol vypustený do odmernej centrifugačnej skúmavky po malého prezývku pozdĺž veľkého zakrivenia priliehajúce k pyloru ligácia. Žalúdočné obsahy boli zhromaždené, merať, odstredí, a podrobí sa biochemickú analýzu.
Štatistická analýza
Údaje sú uvedené ako priemer ± SEM. Parametrické údaje, ktoré obsahuje boli analyzované všetky biochemické parametre s použitím párového testu "T" pre párové dáta alebo jednosmernej analýzy variance (ANOVA) nasledované Dunnet mnohopočetné porovnanie písať test. Neparametrické údaje (makroskopické skórovacej) boli analyzované pomocou Kruskal-Wallis ANOVA test (neparametrické) nasledovaný Dunn mnohopočetné porovnanie po skúške. Hodnota pravdepodobnosť P Hotel < 0,05 bola považovaná za významnú. IC 50 hodnota PK bola odhadnutá pomocou analýzy probit a úroveň významnosti analýz bol skúmaný pomocou testu chí-kvadrát.
Výsledky
Ťažba a fytochemické analýza
procesu extrakcie poskytla metanol extrakt, PK v 12,57% w /w výťažku. TLC analýza ukázala, PK to, že je komplexná zmes veľkého množstva organických zlúčenín, väčšina z nich sa vyskytuje v glykozidy ako bolo zistené Molisch testu. Prítomnosť apocynin, andorsin, picrosides I a II, a katukoside spolu s ďalšími neidentifikovaných zlúčenín v PK bola potvrdená porovnaním jeho TLC profilu s tými z autentických vzoriek.
Štandardizácia dávky PK pre žalúdočných vredov u myší
dávka PK pre efektívne hojenie vredov boli optimalizované prevedením liečbu PK (5, 10, 20 a 40 mg /kg) až sedem dní a porovnávanie hodnôt MDS na ošetrených a neošetrených myšou na daný deň , Časový priebeh v rozsahu žalúdku ulcerácie (ako je odhalené z hodnôt MDS) a jej prevencia rôznymi dávkami PK sú uvedené na Obr. 1. Myši dostávajú vozidlo ukázal len žiadne slizničných lézií. Liečba myší indometacín (18 mg /kg), vyrobené typicky závislé na čase akútnej lézií v žalúdočnej sliznici. Ulcerácia dosiahla maximum na 3 rd deň vredov, kedy je hodnota MDS zvýšila o 162,1%, v porovnaní s na jeden deň (P Hotel &0,001). Potom, došlo k postupnému oživeniu v dôsledku prirodzeného uzdravenia, a na 7. teho dňa po vredov, hodnota MDS bola znížená o 49,2% v porovnaní s na jeden deň (P Hotel &0,01). Obrázok 1 Časový priebeh žalúdočných vredov a jej prevencia rôznymi dávkami PK. Žalúdočné vredy u myší bola vyvolaná podaním indometacínu (18 mg /kg telesnej hmotnosti). Rôzne dávky PK boli použité pre experimenty. Vred indexy boli merané v rôznych dňoch 4 hodín po podaní poslednej dávky PK a hodnoty sú priemer ± S.E.M. (N = 15). aP Hotel < 0,01, BP Hotel < 0,001 v porovnaní s 1. deň ulcerated liečených myší; cP Hotel < 0,01, dP Hotel < 0,001 v porovnaní so skupinou myší III.
PK, na všetkých zvolených podaní ukázali maximálnu hojenia vredu na 3 rd deň vredov, a účinok bol závislý od dávky. V porovnaní s príslušnými kontrolami ulcerácie, zníženie MDS (45,1% -52,9%, P Hotel &0,01) podľa PK (20 a 40 mg /kg) boli podobné, a výrazne lepšie ako u jeho nižšej dávke (10 mg /kg). Účinok PK (5 mg /kg) bol zanedbateľný. Za podobných podmienok, ošetrenie Obmedz (3 mg /kg) počas 3 dní zníženia hodnoty MDS o 76,3% (P Hotel &0,001) v porovnaní so skupinou myší III. Hojenie pozorovať na predĺženie liečby až sedem dní s PK bol lepší, než bolo pozorované u trojdňového liečebného režimu. Avšak, veľká časť toto bolo kvôli autohealing, s menšou príspevok PK.
Celkovo liečbu PK (20 mg /kg) a Obmedz (3 mg /kg) počas 3 dní po vred indukčnej zaistená optimálna hojenie vredu , S ohľadom na tieto, všetky nasledujúce experimenty boli vykonávané s rovnakým liečebného režimu. Zvolená dávka Obmedz, ktorý je tiež odporúčaná terapeutická dávka pre človeka bola optimalizovaná nás [6].
U neošetrených myší, vrchol ulcerácie (maximum MDS) bol pozorovaný na tretí deň indometacín podania. Z tohto dôvodu, tentokrát bod bol vybraný zistiť IC 50 hodnoty PK. S ohľadom na hodnoty MDS dňa 3 rd ulcerated liečených myší za 100%, IC bol nájdený 50 hodnota PK, aby 23.30 ± 3,50 mg /kg.
Kvalitatívne hodnotenie
makroskopické vyšetrenia bolo zistené, že indometacín podávanie viedlo k značnému poškodeniu glandulární časti myšou žalúdočnej sliznice. Do 6 hodín po podaní, indometacínom povrchovej erózii a mierny zápal v žalúdku bola pozorovaná indikuje akútnu vredov. V deň indukcie vredov, strata foveolární konštrukcia spolu s kryptickým architektúrou bol význačný rys vo väčšine neliečených myší. Tiež, mierny zápalový infiltrát, obsahujúce neutrofily bola pozorovaná v lamina propria. Liečba oboma PK a Obmedz aj na jeden deň obmedzené poškodenie sa škvrnitým oblastiam obnažených štrukturálne epitelu.
Indomethacin indukovanej gastropatia stal oveľa vyhlásil tretí deň zobrazujúci prerazený mnohých oblastiach vredov s zápalový infiltrát, obsahujúce neutrofily a makrofágy v užívateľskej sliznice, sub-sliznice a svalov plášť spolu s hemoragickú blany. Veľký počet abnormálnych buniek so zmenenou jadra pomerom cytoplazmy do boli zaznamenané. Liečba pomocou PK a Obmedz 3 dni viedla k zníženiu počtu zápalových buniek spolu so zvýšeným počtom zdravých normálnych buniek v žalúdočnej sliznici, ako aj submukóze, serózne blany a svalovej vrstvy s minimálnym preťaženia sliznice.
Vplyv PK a obmedz na peroxidáciu lipidov a oxidácii proteínov žalúdočnej tkanive
účinky indometacínu príjmu samotnej a po podaní lieku PK a obmedz o rozsahu peroxidácie lipidov (merané TBARS), oxidácie proteínu (merané v zmysle obsahu proteínu karbonylovou ), obranný systém tiol závislé (NP-TSH) a mucín obsah v žalúdočnej tkanive myší sú uvedené v tabuľke 1 a v tabuľke 2.Table 1 Vplyv PK a Obmedz na úrovni TBARS, proteínových karbonyl, non proteín tiol, a mucín v vredy žalúdočné tkanive lopty v deň jeden z vredov
Parameters
myšou skupiny aj normálny regulácia

skupina II prvý deň ulcerated ovládanie
skupina III PK ošetrené
skupina IV Obmedz ošetrené
TBARS (nmol /mg proteínu)
0,85 ± 0,03
1,18 ± 0.05c
0,94 ± 0.06d
0,89 ± 0.07d
proteínových karbonyl (nmol /mg proteínu)
1,08 ± 0,05
1,62 ± 1,49 ± 0.09b
0,12
1,53 ± 0,07
NP-TSH (nmol /mg tkaniva)
1,99 ± 0,09
1,66 ± 0.08b
1,86 ± 0,08
1,81 ± 0,09
mucínu (ig /g tkaniva)
335,03 ± 14,43
213,02 ± 0.59b
240,33 ± 20,49
253,33 ± 14.53d
aStomach vredy u myší bola vyvolaná podaním indometacínu (18 mg /kg) , PK (20 mg /kg /deň x 1 deň) a Obmedz (3 mg /kg /deň, 1 deň x) boli použité ako skúšobné vzorky. Testy boli vykonané 4 hodín po podaní testovaných vzoriek. Hodnoty sú priemer ± SEM (n = 15). bP Hotel < 0,05, CP Hotel < 0,01 v porovnaní s normálnou myši; dP Hotel < 0,05 v porovnaní so skupinou II myšou.
Tabuľka 2 Vplyv PK a Obmedz na úrovni TBARS, proteínových karbonyl, non-proteín tiolov, a mucín v vredy žalúdočné tkanive lopty tretí deň ulcerácie
Parameters
skupina I normálna kontrolná
skupina III tretí deň ulcerated ovládanie
Group V PK liečených
Skupina VI Obmedz ošetrené
TBARS (nmol /mg proteínu)
1,02 ± 0,06
1,53 ± 0.06c
1,03 ± 0.09d
1,08 ± 0.05d
proteínové karbonyly (nmol /mg proteínu)
1,18 ± 0,07
2,61 ± 0.17c
1,62 ± 0.10f
1,59 ± 0.09f
NP-TSH (nmol /mg tkaniva)
2,06 ± 0,09
1,73 ± 0,09
2,06 ± 0.14d
2,05 ± 0.1d
mucín (ng /g tkaniva)
343,30 ± 16,91
213,29 ± 17.91b
303,34 ± 17.4
295,06 ± 15.62
aStomach vredy u myší bola vyvolaná podaním indometacínu (18 mg /kg). PK (20 mg /kg /deň x 3 dni) a Obmedz (3 mg /kg /deň x 3 dni) boli použité ako skúšobné vzorky. Testy boli vykonané v deň tri vredov, 4 h po poslednej dávke liečiva. Hodnoty sú priemer ± SEM (n = 15). bP Hotel < 0,05, CP
0,001 v porovnaní s normálnym myšiam, dP Hotel < 0,05, EP Hotel < 0,01 FP Hotel < . 0,001 v porovnaní so skupinou III myši
podávanie indometacínu výrazne stimuloval peroxidáciu lipidov v žalúdočnej tkanive, zvyšovanie obsahu TBARS o 38,8% (P Hotel &0,01) a 53% (P Hotel &0,001) respektíve na 1 st a 3 tretím dňom vredov, v porovnaní s bežným kontrolných myšou. Liečba PK a Obmedz ukázal okamžitý účinok, zníženie obsahu TBARS o 20,3% a 24,6% v porovnaní s myšou, skupiny II (P
menšie ako 0,05). Liečba PK a Obmedz počas troch dní ju znížila o 32,7% a 29,4% v porovnaní s myšami skupiny III (P Hotel < 0,05).
V porovnaní s bežnou hodnotou, obsah bielkovín karbonyl z ulcerovaného myší bola vyššia (50%) v prvý deň (P Hotel < 0,05), ktoré vzrástli o 120,3% na špičkový vredov (P Hotel < 0,001). Žiadny z testovaných liečiv ukázali, bezprostredný vplyv na jeden deň.

• Ochranné účinky (1- (4-hydroxy-fenyl) -3-m-tolyl-propenon chalkón v indometacínom vyvolanej gastrickej erozívnou poškodenie u potkanov
• Ľudský patogén žalúdka Helicobacter pylori má potenciálny karboxylázy acetónu, ktorá zlepšuje jeho schopnosť kolonizovať myšou