Healing Potensiale Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) jordstengler mot indometacin-induserte magesår: a. Mekanistisk leting

Healing Potensiale Picrorhiza kurroa plakater (Scrofulariaceae) jordstengler mot indometacin-induserte magesår: a. Mekanistisk leting
Abstract
Bakgrunn
Denne studien ble gjennomført for å vurdere potensialet av rotstokker av den indiske legemiddel plante, Picrorhiza kurroa
i healing indometacin-indusert akutt mage sårdannelse i mus og undersøke dens evne til å modulere oksidativt stress og nivåene av prostaglandin (PGE 2) og EGF i løpet av prosessen.
Metoder
hann Swiss albino mus, sårdannelse med indometacin (18 mg /kg, po, enkel dose) ble behandlet opp til 7 dager med forskjellige doser av den metanolekstrakt av P. kurroa
rotstokker (betegnet som PK). Den helbredende kapasiteten av de mest effektive dose av PK (20 mg /kg, p. O. X 3 d) ble sammenlignet med omeprazol (Omez) (3 mg /kg, p. O. X 3 d). Effekten av medikamentet-behandling for en og tre dager på de biokjemiske parametere ble vurdert ved å sammenligne resultatene med den for ubehandlede mus i 1 st og 3 rd dag av sårdannelse. Mage vev av mus ble brukt for biokjemiske analyser.
Resultater
Den makroskopiske indeksene viste maksimal sårdannelse på 3 rd dag etter indometacin administrering, som ble effektivt helbredet av PK. Under optimaliserte behandlingsregimet, og PK Omez redusert ulcer-indeksene med 45,1% (P
< 0,01) henholdsvis, og 76,3% (P
< 0,001)., Sammenlignet med de ubehandlede musene sårdannelse
Sammenlignet med sårdannelse ubehandlede mus, de som ble behandlet med PK i 3 dager viste redusert nivåene av tiobarbitursyrereaktive stoffer (TBARS) (32,7%, P
< 0,05) og protein karbonyl (37,7%, P
<0,001), og økt mucin (42,2%, P
< 0,01), slimhinne PGE 2 (21,4%, P
< 0,05), og uttrykk for COX-1 og 2 (26,9% og 18,5%, P
< 0,05), EGF (149,0%, P
< 0,001) og VEGF (56,9%, P
< 0,01). Omez redusert TBARS (29,4%, P
< 0,05), og protein karbonyl (38,9%, P
< 0,001), og økt mucin (38,3%, P
< 0,01), uten å endre de andre parametre betraktelig.
Konklusjon
PK (20 mg /kg, po x 3 dager) kunne effektivt helbrede indometacin-induserte magesår hos mus ved å redusere oksidativt stress, og fremmer sekresjon mucin, prostaglandin syntese og forsterke uttrykk av cyklooksygenase enzymer og vekstfaktorer.
Bakgrunn
Gastrointestinal toksisitet assosiert med ikke-steroide antiinflammatoriske midler (NSAIDs) er et viktig medisinsk problem til tross for nylig farmasøytiske fremskritt [1]. I tillegg til å indusere gastrisk sårdannelse, den NSAIDs synes også å inhibere sårtilhelingen [2, 3]. Derfor forebygging av gastrointestinal lidelse fortsetter å være av interesse for både klinisk praktiserende og forskere. På tross av sin effekt i å håndtere NSAID-indusert magesår, de tilgjengelige syntetiske anti-sår narkotika gi bivirkninger, og er også dyrt, spesielt for befolkningen på landsbygda. For å oppnå dette, har vi rapportert lovende anti-ulcerogent aktivitet av flere planteprodukter [4-6] Hotell Picrorhiza kurroa
. (Familie: Scrofulariaceae, felles navn: Picrorhiza, katuka, kutki) er en liten flerårig urt vokser i de kuperte delene av Nord-vestlige Himalaya-regionen i India og Nepal. Bladet, bark og de underjordiske delene av planten, hovedsakelig jordstengler er mye brukt i tradisjonell indisk (ayurvedisk) systemer av medisin siden antikken. Selv om det viser antioksidant, anti-inflammatorisk, og immunmodulerende aktiviteter, er det mest verdsatt for sin hepatobeskyttende virkning. Den bitre jordstengler av Picrorhiza
har vært brukt i tusenvis av år i India for å behandle mennesker med dårlig [7], og forstoppelse på grunn av utilstrekkelig fordøyelses sekresjon [8]. Picrorhiza
er ansett som et trophorestorative urt for leveren, så vel som en potent immunstimulerende [9]. Dens bestanddel, er picroliv også rapportert å ha choleretic effekt [10], og hindre leverskade forårsaket av etanol [11], kjemikalier [12] og mikroorganisme [13].
Hovedmålet med denne undersøkelsen var å studere den helbredende eiendommen av metanol ekstrakt av P. kurroa
rhizome (betegnet som PK) mot indometacin-indusert akutt magesår av mus vis-à-vis hotell som av kommersielle narkotika, omeprazol (Omez). Indometacin, en representant for den ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler (NSAID) familie, forårsaker magesår gjennom ulike prosesser, herunder produksjon av ROS, hemming av prostaglandinsyntesen, infiltrasjon av polymorfonukleære leukocytter, induksjon av apoptose, og initiering av lipidperoksidasjon [14, 15]. Derfor sår helbredende evner av narkotika, vurdert av histopatologi, ble korrelert med sine effekter i å redusere indometacin-induced oxidative stress. Antioksidantaktiviteten av testprøvene ble analysert med hensyn til deres evne til å beskytte oksidative skader på lipider, proteiner og tiol-avhengige antioksidantforsvar i gastrisk vev. Videre er det NSAID-indusert gastropati også tilskrives den reduserte syntesen av prostaglandiner [16]. Følgelig, rollen av testprøvene i stigende slimsekresjon, og ekspresjon av epidermal vekstfaktor (EGF), så vel som å heve PGE 2 syntese ble også undersøkt.
Metoder
Plantemateriale
rhizome av P. kurroa plakater (betegnet som PK), anskaffet fra det lokale markedet ble brukt til dette arbeidet. Anlegget ble taksonomisk identifisert (tiltredelse no. 324139) ved Botanisk Survey of India, Indian Botanical Garden, Kokata, India.
Kjemikalier
2-tiobarbitursyre (TBA), etanol, butanol og etylacetat ble anskaffet fra E. Merck (Mumbai, India), mens trikloreddiksyre (TCA) var fra Thomas Baker (Mumbai, India). Alcian blått, indometacin, bovint serumalbumin (BSA), haematoxylene, alun, eosin, butylert hydroksytoluen (BHT), guanidinhydroklorid, trifluoreddiksyre (TFA), omeprazol (Omez), 3,3 '-diaminobenzidine (DAB), kanin-anti -mouse EGF og Trizma basen ble anskaffet fra Sigma Chemicals (St. Louis, Missouri, USA). Andre reagenser som ble anvendt var 35% hydrogenperoksid (Lancaster, Morecambe, UK), 2,4-dinitrofenyl-hydrazin (DNPH), dinatriumhydrogenfosfat og natriumdihydrogenfosfat (BDH, Pool Dorset, UK), sukrose og 5,5'-ditiobis -2-nitrobenzioc syre (DTNB) (SRL, Mumbai, India), hest og geit serum (Banaglore Genie, Banaglore, India), PGE 2 metabolitt kit (Cayman Chemical, Michigan, USA) og konjugert geit anti- kanin IgG (EMD Biosciences, Sandiego, USA).
Instrumentering
absorbans spektrofotometri ble utført ved 25 ° C ved hjelp av en Jasco V-550 UV-Vis spektrofotometer. Bølgelengde skanner og absorbansmålinger ble gjort i en ml kvarts celler av en cm banelengde.
Utarbeidelse av planteekstrakter Bedrifter Den lufttørkede jordstengler av P. kurroa product: (250 g) ble hakket i fine biter, fuktet i metanol (1 liter) i to dager og supernatanten dekantert. Etter gjentagelse av hele prosessen tre ganger ble de kombinerte ekstraktene ble filtrert gjennom en nylonduk, og fordampet i vakuum og til slutt frysetørket. Det rå ekstrakt, betegnet som PK gjennom manuskriptet, ble lagret i en vakuum-dessikator.
Fremstilling av legemidlene
Medikamentene ble fremstilt fra PK og Omez som vandige suspensjoner i 2% gummi acacia som kjøretøyet, og administrert til mus peroralt.
farmakologiske tester
Dyr og eksperimentell protokoll for sårdannelse
mannlige sveitsiske albino mus ble avlet på Dr. BC Roy Post Graduate Institute for medisinske basalfag, Kolkata, India og BARC Forsøksdyr Hus Facility , Mumbai, India. Disse ble anskaffet etter å skaffe clearance (Post Graduate Institute for medisinske basalfag, Kolkata dyreetikk Committee 507 /CPCSEA, Sanksjon No. IAEC /SB-2/2004 /UCM-16, datert 06.15.04 og BARC dyreetikk komité (BAEC) , forsøksdyravdeling. sanksjonere nei. BAEC /03/05, datert 11.07.05) fra de respektive dyreetiske komiteer av de to sentrene og ble håndtert følgende Internasjonale animal etikkomité retningslinjer. Den 6-8 uker gamle mus (25-30 g) ble oppdratt på en balansert laboratorium diett som per NIN, Hyderabad, India og gitt springen vann ad libitum. De ble holdt ved 20 ± 2 ° C, 65-70% fuktighet, og dag /natt syklus (12 h /12 h). I begynnelsen av hvert forsøk ble alle dyrene identifisert av typiske hakk i øret og lemmer og deretter randomisert. Dette ble gjort for å utføre alle forsøkene i en blindprøve. Sår i mus ble indusert ved administrering av indometacin (18 mg /kg, p. O.) Oppløst i destillert vann og suspenderes i bæreren, akasiegummi (2%) som en enkel dose. Våre studier med 5, 10, 15, 18, 20, 25 og 30 mg /kg, p. o. av indometacin viste at lave doser (5 og 10 mg /kg) gitt mindre sår etter 6 timer fra administrasjonen, mens høyere doser (25 og 30 mg /kg) førte til dødelighet. Den valgte dose (18 mg /kg) ga optimal sårdannelse, inflammasjon og med slimhinne fornærmelse, uten å forårsake noen dødelighet hos mus. Dyrene ble fratatt mat, men hadde fri tilgang til å tappe vann 24 timer før sår induksjon.
Standardisering av legemiddeldose
For standardisering av legemiddeldoser, PK (5, 10, 20 og 40 mg /kg) ble gitt som en enkelt dose per dag opp til syv dager. Den første dosen med PK og Omez fikk 6 t etter indometacin administrasjon. I de etterfølgende seks dager, ble testprøvene fikk kl 9 om morgenen hver dag. Fem mus ble tatt i hver gruppe, og hvert eksperiment ble gjentatt tre ganger. Musene ble ofret på en st, 3 rd, 5 th og 7 th dager, fire timer etter administrering siste dose av PK. Omfanget av sårtilheling ble vurdert fra de makroskopiske skader score (MDS) av de ubehandlede og behandlede sårdannelse mus på de respektive dagene. Den optimaliserte behandling regime (narkotika dose og behandlingsperiode) ble vurdert fra MDS av grupper av mus som fikk den ovennevnte behandling.
Vurdering av sårdannelse og healing fra MDS
Musene ble avlivet etter en overdose med tiopental. Magen fra de normale og behandlede grupper ble fjernet hurtig, åpnet langs den store kurvatur, og grundig skylt med normal saltløsning. De sårdannelse mage slimhinneområder ble visualisert ved hjelp av et gjennomsiktig ark og en dissekere mikroskop. MDS ble vurdert [17] ved gradering av gastrisk skade på en 0-4 skala, basert på alvorligheten av hyperemia og hemoragisk lesjoner: 0 - nesten normal slimhinne, 0,5 - hyperemi, 1 - én eller to lesjoner, 2 - alvorlige lesjoner , 3 - svært alvorlige skader, 4 - slimhinnen full av lesjoner. (lesjoner - hemoragisk erosjoner, Hyperemia - vaskulære blodansamlinger). Forsøkene ble utført ved to forskere blindet til gruppen og behandling av dyr. Seksjonene ble kodet for å eliminere en observatør bias. Data for analysene er presentert som gjennomsnitt ± SEM fra gjennomgangen av minimum tre seksjoner per dyr og fem dyr per gruppe.
Studier av biokjemiske parametere
MDS Resultatene viste maksimal sårtilheling etter tre dager med medikamentell behandling. Magen sårdannelse i ubehandlede mus også nådd toppen på 3 rd dag etter indometacin administrasjon. Derfor, vi vurdert de biokjemiske parametere under optimaliserte behandlingsregimet [PK (20 mg /kg) og Omez (3 mg /kg)] opp til 3 rd dagen for sårdannelse bare. For dette ble de følgende syv grupper hver inneholdende 5 mus valgt fra de som brukes for den MDS analysen, og de data som er vist er utledet fra tre replikater:
Gruppe I - normale kontroll mus; Gruppe II - sårdannelse mus, og ofret etter 10 h (regnes som én dag); Gruppe III - sårdannelse mus, og ofret på 3 rd dag; Gruppe IV-V - sårdannelse mus, behandlet med PK og Omez henholdsvis for en dag, og ofret 4 timer etter administrasjon av prøver; Gruppe VI-VII -. Sårdannelse mus behandlet med PK og Omez henholdsvis i 3 dager, og ofret i 3 rd dag, fire timer etter den siste dosen av prøvene
kvantifisering av protein og lipid skader under sårdannelse og helbredelse
kjertelmagen vev ble oppsamlet fra fem dyr for hvert vev, renset med passende buffer og anvendt for biokjemiske studier. Den våte vekt av vev ble registrert, og eksperimentene ble utført i tre paralleller. Kjertel Delene fra kontrollen, ble sårdannelse og medikamentbehandlede mus tatt ved forskjellige tidsintervaller ble homogenisert med en teflon-glass homogenisere røret i en 50 mM fosfatbuffer, pH 7,4 og sentrifugert ved 1200 x g for å oppnå supernatanten. Mengden av protein karbonyler i vev homogenat ble bestemt etter en rapportert metode [18]. DNPH (4 ml, 10 mM) i 2 M HCl ble tilsatt til supernatanten (1,0 ml), som ble inkubert i 1 time med intermitterende rysting. Iskald 20% vandig TCA-løsning (5 ml) ble tilsatt og blandingen ble inkubert i 15 min. Det utfelte protein ble vasket 3 ganger med etanol-etylacetat (1: 1), ble oppløst i 1 ml av en oppløsning inneholdende 6 M guanidin-HCl i 20 mM kaliumfosfat (monobasisk) justert til pH 2,3 med trifluoreddiksyre. Etter sentrifugering ble absorbans av supernatanten avlest ved 362 nm (∈ = 2,2 x 10 4 M -1 cm -1).
For analyse av lipidperoksidasjon (i form av TBARS), en 10% homogenat fra hver av de respektive prøver ble fremstilt i en buffer (320 mM sukrose, 5 mM HEPES, 20 mM EDTA og 0,01% BHT). Disse ble underkastet differensiell sentrifugering (1200 x g og 12 000 x g) for å oppnå de mitokondrielle pellets, som ble vasket med buffer (150 mM KCI og 20 mM fosfatbuffer) og til slutt suspendert i en 50 mM fosfatbuffer, pH 7,4. Den mitokondriemembranfraksjonen (1 ml) ble behandlet med TCA-TBA-HCl (2 ml, 15% TCA, 0,375% TBA, 0,25 N HCl) inneholdende 0,01% BHT, oppvarmet på et kokende vannbad i 15 minutter, avkjølt og sentrifugert . Absorbansen av den overliggende væske ble målt ved 535 nm (∈ = 1,56 x 10 5 M -1 cm -1) [19].
Måling av ikke-protein tiol (NP-TSH )
Etter en rapportert metode [20], ble det gastrisk mucosal NP-TSH målt. Kort sagt ble fundisk mage homogenater fra kontroll, sårdannelse, medikament-behandlede mus tatt opp i 0,2 M Tris-HCl-buffer, pH 8,2 inneholdende 20 mM EDTA og sentrifugert. En alikvot av homogenatet (1 ml) ble utfelt med iskald 20% TCA (1 ml) og sentrifugert. Supernatanten (1 ml) ble tilsatt til 2 ml 0,8 M Tris-HCl-buffer, pH 9 inneholdende 20 mM EDTA og blandet med 0,1 ml av 10 mM DTNB. Absorbansen av den gule kromogen ved 412 nm (∈ = 13,6 x 10 4 M -1 cm -1) ble avlest mucin-analyse.
Ved å følge en rapportert metode [21] , den frie mucin i mage vev ble beregnet. I korte trekk ble kjertel del av magen adskilt fra lumen av magen, veiet og umiddelbart overført til 10 ml 0,1% vekt /volum Alcian blått (Ab) -løsning (i 0,16 M sukrose-løsning bufret med 0,05 mM natriumacetat-oppløsning, pH ble justert til 5,8). Etter farging i 2 timer ble overskudd av farge fjernet fra vevet ved to suksessive skyllinger med 10 ml 0,25 M sukrose-løsning. Fargestoffet kompleksdannet med den gastriske vegg slim ble ekstrahert med 10 ml 0,5 M magnesiumklorid med intermitterende rysting (1 min) med 30 minutters intervaller i 2 timer. Den blå ekstrakt (2 ml) ble kraftig rystet med et like stort volum av dietyleter. Den resulterende emulsjon ble sentrifugert ved 3600 rpm i 10 minutter, og absorbansen av det vandige laget ble avlest ved 580 nm. Mengden av Ab ekstrahert per g av våt kjertelvev ble beregnet fra en standardkurve fremstilt ved anvendelse av forskjellige konsentrasjoner av Ab.
COX-1 og COX-2 ekspresjon assay
Innen 30 min høsting, er sårdannelse partier av mage vev ble fiksert i nøytral-bufret 10% formol saltvann og seksjonert. Etter 24 timer med fiksering, etterfulgt av å bygge inn i en parafinblokk, ble det skåret i seksjoner av 5 mikron på en glassplate, og de uttrykk for COX-1 og COX-2 ble kvantifisert etter en rapporterte fremgangsmåte [22], med ubetydelig modifikasjon. Etter deparaffinization i xylen, ble delene behandlet med en gradert serie av alkohol og deretter rehydratisert i PBS ved pH 7,5. Snittene ble i rekkefølge behandlet med 3% hydrogenperoksid i PBS, og protein blokkere (5% bovint serumalbumin, 5% normalt geiteserum i PBS), og inkubert over natten ved 4 ° C med primært antistoff (mus anti-COX-1 og COX 2, 1: 200). Etter inkubasjon i 2 timer ved romtemperatur med peroksidase-konjugert kanin-anti-muse-sekundært antistoff (1: 500), ble en positiv reaksjon detekteres ved eksponering for stabil DAB i 2 til 5 min. I kontrollseksjoner, ble antistoffer utelatt, og bare PBS ble tilsatt. Etter kontra lysbildene med Meyers hematoxylin ble intensiteter av fargede immunolocalized produkter evaluert med Biovis MV500 programvare. Fem områder fra hver seksjon ble skannet og integrert optisk tetthet (IOD) i hvert område ble beregnet. Den IOD til den negative kontrollen ble subtrahert fra den IOD av hver eksperimentelle del for hvert dyr i alle gruppene.
Prostaglandin assay
Etter høsting av magen, ble corpus (full tykkelse) skåret ut, veiet (100 mg ) og suspendert i 10 mM natriumfosfatbuffer, pH 7,4 (1 ml). Vevet ble hakket fint med saks og inkubert ved 37 ° C i 20 min. Etter sentrifugering (9000 x g), prostaglandin E 2 (PGE 2) nivåer i supernatanten ble målt ved hjelp av ELISA [23], og konsentrasjonene er uttrykt som pg /mg protein.
EGF uttrykk analysen
farging av EGF ble utført [22] å følge en lignende fremgangsmåte som brukes for COX-1 og COX-2, med mindre modifikasjoner. I dette tilfellet, etter å blokkere endogen peroksidase og behandling med proteinet blokkere, ble vevssnittene inkubert over natten ved 4 ° C med primært antistoff ved passende fortynning. I kontroll seksjoner, bare PBS ble tilsatt utelate antistoffene. Etter inkubasjon i 1 time ved romtemperatur med peroksidase-konjugert geite-anti-kanin-IgG, ble en positiv reaksjon detekteres ved eksponering til DAB 2 til 5 min. Etter kontra lysbildene med Meyers hematoxylin ble intensiteter av fargede immunolocalized produkter kvantifisert ved hjelp Biovis MV500 programvare. Fem områder fra hver seksjon ble skannet og integrert optisk tetthet (IOD) i hvert område ble beregnet. IOD til den negative kontrollen ble subtrahert fra den IOD av hver eksperimentelle del for hvert dyr i alle gruppene.
Analyse av serum-VEGF VEGF
serum ble målt ved hjelp av blodprøver trukket fra den nedadgående aorta, med kommersielt tilgjengelige ELISA kit følgende produsentens instruksjoner.
gastrisk sekretorisk assay (pylorous ligeringsmodellen)
for å studere virkningene av test-legemidler på gastrisk sekresjon, ble den pyloriske ligering av mage standardisert i vårt laboratorium utført. Én gruppe mus (eksperimentell kontroll) mottok 2% akasiegummi i destillert vann (0,2 ml pr mus, po), mens de forskjellige behandlingsgrupper ble gitt PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d), indometacin (18 mg /kg x 1 d) som sådan eller sammen med PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d) henholdsvis. På 3 rd dag, ble magen av dyrene åpnet under lett eteranestesi for pyloric ligation (PL). Etter nedleggelsen av magen, ble dyrene satt i bur under lett tilbakeholdenhet og lov til å komme seg etter bedøvelsen. Etter 6 timer ble dyrene avlivet, buken ble åpnet og en ligatur ble plassert rundt spiserøret. Magen ble fjernet, og innholdet ble drenert inn i et gradert sentrifugerør etter at en liten nick langs den store kurvatur i tilknytning til pyloric ligering. Mageinnholdet ble oppsamlet, målt, sentrifugert og underkastet biokjemisk analyse.
Statistisk analyse
Dataene er presentert som gjennomsnitt ± SEM. Parametriske data som omfatter alle de biokjemiske parametere ble analysert ved hjelp av en sammenkoblet 't' test for parede data eller en enveis analyse av varians (ANOVA) etterfulgt av en Dunnet multiple sammenligninger legge test. Metriske data (makroskopisk scorings) ble analysert ved hjelp av Kruskal-Wallis test (parametrisk ANOVA) etterfulgt av en Dunns multiple sammenligninger poste test. En sannsynlighet verdi av P
< 0,05 ble betraktet som signifikant. IC 50 Verdien av PK ble estimert ved hjelp av sannsynlighetsanalyse og signifikansnivået av analysene ble undersøkt av chi-kvadrat test.
Resultater
Utvinning og phytochemical analyse
utpakkingen ga metanol ekstrakt, PK i 12,57% w /w yield. TLC-analyse av PK viste at den var en kompleks blanding av et stort antall organiske forbindelser, de fleste av disse er tilstede i form glykosider som avsløres ved Molisch test. Tilstedeværelse av apocynin, andorsin, picrosides I og II, og katukoside sammen med andre uidentifiserte forbindelser i PK ble bekreftet ved sammenligning av dens TLC profil med de til autentiske prøver.
Standardisering av dosen av PK for magesår helbredelse i mus
dosen av PK for effektiv sårtilheling ble optimalisert ved å utføre behandlingen med PK (5, 10, 20 og 40 mg /kg) opp til syv dager, og sammenligning av MDS verdiene av de behandlede og ubehandlede mus på de respektive dagene . Tidsforløpet av omfanget av magen sårdannelse (som åpenbart fra MDS verdier) og forebygging av ulike doser av PK er vist i fig. 1. Musene som fikk bilen bare viste ingen slimhinnelesjoner. Behandling av mus med indometacin (18 mg /kg) ga typiske tidsavhengige akutte skader i mageslimhinnen. Den sårdannelse nådd maksimum på 3 rd dag av sårdannelse når MDS verdi økte med 162,1% i forhold til at på dag én (P
< 0,001). Deretter var det en gradvis bedring på grunn av naturlig healing, og på 7 th dagen etter sårdannelse, ble MDS verdi redusert med 49,2% i forhold til at på dag én (P
< 0,01). Figur 1 Tidsforløpet for mage sårdannelse og forebygging av ulike doser av PK. Mage sårdannelse hos mus indusert ved oral administrering av indometacin (18 mg /kg kroppsvekt). Forskjellige doser av PK ble anvendt for eksperimentene. De sår indeksene ble målt på forskjellige dager 4 timer etter siste dose med PK og verdiene er gjennomsnitt ± SEM (N = 15). aP
< 0,01, BP
< 0.001 sammenlignet med første dag sårdannelse ubehandlet mus; cP
< 0,01, dP
< 0.001 sammenlignet med gruppen III mus.
PK, på alle de valgte dosene viste maksimal sårtilheling på 3 rd dag av sårdannelse, og effekten var doseavhengig. Sammenlignet med de respektive kontroller sårdannelse, den MDS reduksjoner (45,1% -52,9%, P
< 0,01) av PK (20 og 40 mg /kg) var like og vesentlig bedre enn den som ved sin lavere dose (10 mg /kg). Effekten av PK (5 mg /kg) var ubetydelig. Under lignende betingelser, behandling med Omez (3 mg /kg) i 3 dager reduserte MDS-verdien med 76,3% (P
< 0,001) sammenlignet med den gruppen III mus. Den helbredende observert på å forlenge behandlingen inntil syv dager med PK var bedre enn det som ble observert med tre-dagers behandling regime. Men en stor del av dette skyldes autohealing, med mindre bidrag fra PK.
Samlet behandling med PK (20 mg /kg) og Omez (3 mg /kg) i 3 dager etter sår induksjon følger optimal sårtilheling . I lys av disse, ble alle etterfølgende eksperimenter utført med den samme behandlingsregime. Den valgte dose Omez, som også er anbefalt terapeutisk dose for mennesker ble optimalisert ved oss ​​[6].
For de ubehandlede mus, ble peak sårdannelse (maks MDS) observert på den tredje dagen av indometacin administrasjon. Derfor ble dette tidspunkt valgt for å finne ut IC 50 verdi til PK. Tatt i betraktning de MDS verdier av 3 rd dag sårdannelse ubehandlet mus som 100%, IC 50 Verdien av PK ble funnet å være 23.30 ± 3.50 mg /kg.
Kvalitativ vurdering Bedrifter Den makroskopiske undersøkelser viste at indometacin administrasjon førte til en markert skade på kjertel parti av musene gastrisk mucosa. Innen 6 timer etter indometacin administrasjon, overfladisk erosjon og mild betennelse i magen ble observert indikerer akutt magesår. På dagen for sår induksjon, tap av foveolar struktur sammen med kryptiske arkitektur var de fremtredende trekk i de fleste av de ubehandlede mus. Dessuten ble det observert mild inflammatorisk infiltrat som inneholdt nøytrofiler i lamina propria. Behandling med både PK og Omez selv for en dag begrenset skaden med usammenhengende områder av ribbet strukturell epitel.
Indomethacin indusert gastropathy ble mye uttales på den tredje dagen viser stanset ut flere områder av sår med inflammatoriske infiltrere inneholder nøytrofile granulocytter og makrofager i slimhinner, sub-mucosa og muskel frakk sammen med hemoragisk serosa. Et stort antall av unormale celler med endret kjernen til cytoplasma-forhold ble lagt merke til. Behandling med PK og Omez i 3 dager førte til redusert antall inflammatoriske celler sammen med et øket antall friske normale celler i mageslimhinnen, såvel som submucosa, serosa og muskellagene med minst slimhinne lunger.
Effekt av PK og Omez på lipidperoksidasjon og protein oksidasjon i magen vev
effektene av indometacin inntak alene og etter administrasjon av PK og Omez på omfanget av lipidperoksidasjon (målt i TBARS), protein oksidasjon (målt i protein karbonyl innhold ), er det tiol-avhengige forsvarssystemet (NP-TSH) og slimstoffinnhold i magevevet hos mus er vist i tabell 1 og tabell 2.Table 1 virkningen av PK og Omez på nivåene av TBARS, proteinkarbonyler, ikke- protein tiol, og mucin i sårdannelse mage vev av micea på dag én av sårdannelse
Parametere
gruppe i mus normal kontroll

Gruppe II første dag sårdannelse kontroll
Gruppe III PK-behandlet
Gruppe IV Omez behandlet
TBARS (nmol /mg protein)
0,85 ± 0,03
1,18 ± 0.05c
0,94 ± 0.06d
0,89 ± 0.07d
proteinkarbonyler (nmol /mg protein)
1,08 ± 0,05
1,62 ± 0.09b
1,49 ± 0,12
1,53 ± 0,07
NP-TSH (nmol /mg vev)
1,99 ± 0,09
1,66 ± 0.08b
1,86 ± 0,08
1,81 ± 0,09
mucin (mikrogram /g vev)
335,03 ± 14,43
213,02 ± 0.59b
240,33 ± 20,49
253,33 ± 14.53d
aStomach sårdannelse i mus ble indusert ved oral administrering av indometacin (18 mg /kg) . PK (20 mg /kg /dag x 1 dag) og Omez (3 mg /kg /dag x 1 dag) ble anvendt som testprøvene. Analysene ble utført 4 timer etter administrasjon av testprøvene. Verdiene er gjennomsnitt ± SEM (n = 15). BP
< 0,05, cP
< 0,01 sammenlignet med normale mus; dP
< 0,05 sammenlignet med gruppe II-mus.
Tabell 2 Effekten av PK og Omez på nivåene av TBARS, proteinkarbonyler, ikke-protein tiol, og mucin i sårdannelse gastrisk vev av micea på dag tre av sårdannelse
Parametere
gruppe I normale kontroll
gruppe III tredje dag sårdannelse kontroll
Gruppe V PK-behandlet <.no> Gruppe VI Omez behandlet
TBARS (nmol /mg protein)
1,02 ± 0,06
1,53 ± 0.06c
1,03 ± 0.09d
1,08 ± 0.05d
proteinkarbonyler (nmol /mg protein)
1,18 ± 0,07
2,61 ± 0.17c
1,62 ± 0.10f
1,59 ± 0.09f
NP-TSH (nmol /mg vev)
2,06 ± 0,09
1,73 ± 0,09
2,06 ± 0.14d
2,05 ± 0.1d
mucin (mikrogram /g vev)
343,30 ± 16,91
213,29 ± 17.91b
303,34 ± 17.4e
295,06 ± 15.62e
aStomach sårdannelse i mus ble indusert ved oral administrering av indometacin (18 mg /kg). PK (20 mg /kg /døgn x 3 dager) og Omez (3 mg /kg /døgn x 3 dager) ble anvendt som testprøvene. Analysene ble utført på dag tre av sårdannelse, 4 timer etter den siste dose av stoffet. Verdiene er gjennomsnitt ± SEM (n = 15). BP
< 0,05, cP
0,001 sammenlignet med normale mus, dP
< 0.05 EP
< 0,01, FP
< . 0.001 sammenlignet med gruppen III mus
Indomethacin administrasjon markert stimuleres lipidperoksidasjon i mage vev, heve TBARS innhold med 38,8% (P
< 0,01) og 53% (P
< 0,001) henholdsvis på en st og 3 rd dag for sår, sammenlignet med de normale kontrollmusene. Behandling med PK og Omez viste umiddelbar virkning, noe som reduserer TBARS innhold på 20,3% og 24,6% sammenlignet med gruppen II mus (P
< 0,05). Behandling med PK og Omez i tre dager redusert den med 32,7% og 29,4% i forhold til gruppe III mus (P
< 0,05).
Sammenlignet med normalverdi, protein karbonyl innholdet i sårdannelse musene var høyere (50%) på den første dagen (P
< 0,05) som økte med 120,3% på topp sårdannelse (P
< 0,001). Ingen av test-legemidler viste umiddelbar innvirkning på dag en.

• Beskyttende effekter av (1- (4-hydroksy-fenyl) -3-m-tolyl-Propenonderivat chalcon i indometacin-indusert gastrisk erosiv skade i rats
• Det humane mage-patogen Helicobacter pylori har en potensiell aceton karboksylase som forbedrer dens evne til å kolonisere mus