Gydymasis potencialo Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) šakniastiebiai prieš indometacino sukelta skrandžio opų: mechaninė exploration.

Gydymasis potencialą Picrorhiza kurroa
(Scrofulariaceae) šakniastiebiai prieš indometacino sukelta skrandžio opų. Mechaninė žvalgyba
Santrauka
fonas
šiame tyrime buvo atlikta siekiant įvertinti iš Indijos vaistinio augalo, Picrorhiza kurroa pervežimas šakniastiebių potencialą gydant indometacinu sukeltas ūminis skrandžio opų pelių ir ištirti savo gebėjimus moduliuoti oksidacinį stresą ir lygių prostaglandinų (PGE 2) ir "EGF proceso metu.
metodai
Vyras Šveicarijos albinosės pelės, Čūlājošs su indometacinu (18 mg /kg, PO, vienkartinė dozė), buvo gydomi iki 7 dienų skirtingų dozių metanolio ekstraktas p kurroa
šakniastiebiai (paskirtas PK). Gijimo talpa iš labiausiai veiksmingą dozę PK (20 mg /kg kūno svorio, p. O. × 3 d) buvo lyginamas su omeprazolio (Omez) (3 mg /kg kūno svorio, p. O. × 3 d). Narkotikų elgesio už vieną ir tris dienas apie biocheminių parametrų poveikis buvo įvertintas palyginant rezultatus su tuo nevalytų peles, 1 ST ir 3 iosios dienos opų. Skrandžio audinių pelių buvo naudojami biocheminės analizės.
Rezultatai Viesbutis The makroskopinių indeksai atskleidė didžiausią išopėjimo apie 3 iojo dieną po indometacinu administravimą, kuris buvo efektyviai išgydyti PK. Pagal optimizuotas gydymo režimo, PK ir Omez sumažino opos indeksai 45,1% (p
< 0,01) ir 76,3% (p
< 0,001)., Palyginti su negydytų Pūžņojošs pelių
palyginti su opą neapdorotų pelių, kurie buvo gydyti su PK 3 dienas parodė, sumažėjo tiobarbitūro rūgšties reaktyviosios medžiagų kiekį (TBARS) (32,7%, p
< 0,05) ir baltymų karbonilą (37,7%, p
< 0,001), ir padidėjo mucino (42,2%, P
< 0,01), gleivinės PGE 2 (21,4%, P
< 0,05), ir išraiškos COX-1 ir 2 (26,9% ir 18,5%, P
< 0,05), EGF (149,0%, P
< 0,001) ir VEGF (56,9%, P
< 0,01). Omez sumažino TBARS (29,4%, P
< 0,05), ir baltymų karbonil (38,9%, P
< 0,001), ir padidėjo mucino (38,3%, P
< 0,01), be nekeičiant kitų parametrų gerokai.
Išvada
PK (20 mg /kg peroraliai × 3 dienas), gali efektyviai išgydyti indometacino sukelta skrandžio opų pelėms mažinant oksidacinį stresą, ir skatinti mucino sekreciją, prostaglandinų sintezę ir plėsti išraiškos ciklooksigenazės fermentų ir augimo faktorių.
faktai
toksinio poveikio virškinimo traktui, susijusio su nesteroidiniais vaistais nuo uždegimo (NVNU), yra svarbus medicinos problema, nepaisant pastaraisiais farmacijos pažanga [1]. Be skatinančius skrandžio išopėjimas, NVNU taip pat atrodo, kad slopina opos gydymas [2, 3]. Todėl prevencija virškinimo sutrikimas ir toliau kelti pavojų tiek klinikinės praktikos ir mokslininkams. Nepaisant jų veiksmingumo valdymą NVNU sukeltos skrandžio išopėjimas, remiantis šiuo metu turimais sintetiniai antiopinės narkotikai suteikia šalutinį poveikį, o taip pat brangus, ypač kaimo gyventojams. Siekiant šio tikslo, mes turime pranešė perspektyvus kovos su opų veiklą keliose augaliniams produktams [4-6]
Picrorhiza kurroa
. (Šeima: Scrofulariaceae, bendras pavadinimas: Picrorhiza, katuka, kutki) yra nedidelis daugiametis augalas auga kalvotose dalių šiaurės vakarų Himalajų regione Indijoje ir Nepale. Lapų, žievę ir požeminės augalo dalys, dažniausiai šakniastiebiai yra plačiai naudojami tradicinių Indijos (Ajurvedos) medicinos sistemų nuo seniausių laikų. Nors tai rodo, veikia kaip antioksidantas ir anti-uždegiminių ir imunomoduliacinis veiklą, ji labiausiai vertinami dėl savo kepenims poveikį. Gorkij šakniastiebiai Picrorhiza
buvo naudojama tūkstančius metų Indijoje gydyti žmones su virškinimo [7], ir vidurių užkietėjimas dėl nepakankamo virškinimo sekrecijos [8]. Picrorhiza
yra laikomas trophorestorative augalus, kad kepenų, taip pat kaip stiprus imunostimuliantu [9]. Jo sudedamosios picroliv taip pat pranešė, kad turi choleretic poveikį [10], ir užkirsti kelią kepenų žala etanolio [11], chemijos [12] ir mikroorganizmų [13].
Pagrindinis tikslas šiame tyrime buvo tirti gijimą nuosavybė metanolio ekstrakto P. kurroa pervežimas šakniastiebiai (paskirtos PK) prieš indometacino sukeltas ūminis skrandžio opų pelių VIS-à-vis
kad komercinės narkotikų, omeprazolu (Omez). Indometacino, priklausanti nesteroidiniais priešuždegiminiais vaistais (NVNU) šeimos atstovas, sukelia skrandžio opas per įvairius procesus, įskaitant kartos Ros slopindamas prostaglandinų sintezę, infiltracija polimorfonuklearinių leukocitų, sukeliama apoptozė ir inicijavimo lipidų peroksidacijos [14, 15]. Taigi, opos gydymas pajėgumus narkotikų, vertinamų histopatalogiją, koreliavo su jų poveikio mažinimo indometacino sukeltas oksidacinis stresas. Antioksidantas veikla bandiniai buvo tiriami atsižvelgiant į jų gebėjimą apsaugoti oksidacijos žalą lipidų, baltymų, ir tiolio priklauso nuo antioksidanto atsiliepimo į skrandžio audiniuose. Be to, NVNU sukeltos gastropatijos yra taip pat priskiriami sumažėjusio sintezės prostaglandinai [16]. Vadinasi, bandymo pavyzdžių vis gleivių sekrecija vaidmuo, ir išraiška epidermio augimo faktoriaus (EGF) lėšos, taip pat kėlimo PGE 2 sintezė taip pat buvo tiriami.
Metodai
augalinės medžiagos Viesbutis The šakniastiebiai ir p kurroa pervežimas (paskirtas PK) gaunami iš vietinės rinkos buvo naudojama šiame darbe. Gamykla buvo taksonomiškai identifikuoti (prisijungimas Nr. 324139) Botanikos tyrimo Indijos, Indijos botanikos sodas, Kokata, Indija.
Chemicals
2-tiobarbitūro rūgštis (TBA), etanolis, butanolio ir etilo acetatas buvo gaunami iš E. Merck "(Mumbajus, Indija), o trichloracto rūgštis (TCA) buvo Thomas Baker (Mumbajus, Indija). Alcian mėlyna, indometacino, galvijų serumo albuminas (BSA), haematoxylene, alūnas, eozinas, butilhidroksitoluenas (BHT), -guanidiną hidrochloridas, trifluoracto rūgšties (TFA), omeprazolo (Omez), 3,3 '-diaminobenzidine (TBP), triušių kovos -mouse bendras EGF ir Trizma bazė buvo gaunami iš Sigma Cheminės medžiagos (St Louis, MO, JAV). Kiti naudojami reagentai buvo 35% vandenilio peroksido (Lankasteris, Morecambe, Jungtinė Karalystė), 2,4-dinitrofenilhidrazino (DNPH), dinatrio vandenilio fosfato ir natrio divandenilio fosfatas (BDH, baseinas Dorsetas, Jungtinė Karalystė), sacharozė ir 5,5'-dithiobis -2-nitrobenzioc rūgštis (DTNB) (SRL, Mumbajus, Indija), arklys ir ožys serumas (Banaglore Genie, Banaglore, Indija), PGE 2 metabolito komplektas (Kaimanų chemijos, Mičiganas, JAV) ir peroksidazės konjuguoto ožkos kovos su sukčiavimu triušis IgG (EPD biomokslai, Sandiego, JAV).
Instrumentuotė
absorbcijos spektrometrijos analizės metodu buvo atliktas esant 25 ° C, naudojant Jasco V-550 UV-VIS spektrofotometras. Bangos nuskaito ir absorbcijos matavimai buvo atlikti 1 ml kvarco ląstelių 1 cm storio kiuvetės.
Paruošimas augalų ekstraktų
šakniastiebiai P. kurroa
(250 g) oro džiovinti buvo supjaustomas smulkiais gabaliukais, mirkyti metanolyje (1 l) dvi dienas ir viršutinis sluoksnis nupilamas. Po to, kai pakartojant visą procesą tris kartus, sujungti ekstraktai buvo filtruojamas per nailono tinklelio, ir išgarinamas vakuume ir pagaliau liofilizuotas. Žalios ekstraktas, paskirtas PK per ranka, buvo saugomi dulkių eksikatoriuje.
Paruošimas narkotikai Viesbutis The vaistai buvo ruošiamas iš PK ir Omez kaip vandeninės suspensijos 2%, gumiarabikas, kaip transporto priemonės, ir administruoja su pelėmis žodžiu.
farmakologiniai bandymai
Gyvūnai ir eksperimento protokolu dėl išopėjimo
Vyras Šveicarijos albinosės pelės buvo veisiami ne dr BC Roy Post Graduate institute of būtinosios medicinos mokslų, Kolkata, Indija ir BARC laboratorija gyvūnų House priemonę , Mumbajus, Indija. Tai buvo įsigyta gavus klirensas (pakopos institutas būtinosios medicinos mokslų, Kolkata Gyvūnų etikos komitetas 507 /CPCSEA, Sankcija Nr IAEC /SB-2/2004 /UCM-16, d 06.15.04 ir BARC Gyvūnų etikos komitetas (BAEC) , laboratorinių gyvūnų įrenginys. sankcionuoti Nr. BAEC /03/05 d 11.07.05) iš atitinkamų gyvūnų etikos komitetų dviejų centrų ir buvo perkrauta po tarptautinių gyvūnų etikos komitetas gairėse. 6-8 savaičių amžiaus pelėms (25-30 g) buvo auginami subalansuotu laboratorinių dietos, kaip už NIN, Hyderabad, Indija ir atsižvelgiant į vandentiekio vandenyje iki soties. Jie buvo laikomi esant 20 ± 2 ° C, 65-70% drėgmės, ir dienos /nakties ciklas (12 h /12 h). Kiekvieno eksperimento pradžioje, visi gyvūnai buvo žymimas tipinių rantuotą ausies ir galūnių ir tada atsitiktinės atrankos. Tai buvo padaryta siekiant atlikti visas eksperimentus aklu metodu. (O arba 18 mg /kg kūno svorio, p..) Išopėjimas į pelių buvo sukeliama administravimo indometacino ištirpinamas distiliuotame vandenyje ir suspenduotos transporto priemonės, gumiarabikas (2%), kuris vienkartinė dozė. Mūsų tyrimai su 5, 10, 15, 18, 20, 25 ir 30 mg /kg kūno svorio, p. O. indometacinas, parodė, kad mažiausios dozės (5 ir 10 mg /kg), jei nedidelį opų po 6 h jį įvedant, o didesnės dozės (25 mg ir 30 mg /kg) leido mirtingumo. Pasirinktas dozė (18 mg /kg) gaminamas optimalų opų, su uždegimu ir gleivinės įžeidimą, nesukeliant jokios mirtingumą pelėms. Gyvūnai buvo atimta maisto produktas, bet galėjo laisvai patekti į vandenį iš čiaupo 24 h prieš opa indukcijos.
Standartizacija narkotikų dozės
už kovos su narkotikais dozių standartizavimo, PK (5, 10, 20, ir 40 mg /kg) buvo suteiktas kaip viena dozė per dieną iki septynių dienų. Pirmoji dozė PK ir Omez buvo suteikta 6 val po indometacino administracija. Vėlesniais šešias dienas, o tiriamieji mėginiai buvo suteikta 9 val kiekvieną dieną. Penki pelių buvo paimti kiekvienos grupės ir kiekvienas eksperimentas buvo pakartotas tris kartus. Pelėms buvo paaukotas ant 1 St, 3 Rd, 5 -oji ir 7 -osios dienas, 4 val po paskutinės dozės PK administravimą. Iš opų gydymo apimtis buvo įvertinta iš makroskopinių žalos balai (MDS) neapdoroto ir gydytų Pūžņojošs pelių atitinkamu dienų. Optimizuota gydymo režimas (narkotikų dozės ir gydymo trukmė) buvo įvertinti nuo MDS iš pelių grupių, vartojusių aukščiau gydymą.
Vertinimas išopėjimo ir gydymo nuo MDS Viesbutis The pelėms buvo paaukota po perdozavimo tiopentalis. Skrandis nuo įprastų ir apdorotų grupių buvo greitai pašalintas, atidarė kartu didesnio kreivumo ir kruopščiai nuplauti fiziologiniu. Į Čūlājošs skrandžio gleivinės plotai buvo ryškinamos naudojant skaidrų lapą ir Sekcijiniai mikroskopu. MDS buvo įvertintas [17] pagal klasifikavimo skrandžio žalą dėl 0-4 masto, remiantis hiperemiją ir hemoraginės pažeidimų sunkumo: 0 - beveik normalus gleivinės, 0,5 - hiperemija, 1 - vienas arba du pakitimams gydyti, 2 - sunkių pažeidimų , 3 - labai sunkus pažeidimas, 4 - gleivinė pilnas pažeidimų. (pakitimai - hemoraginių erozijų, hiperemija - kraujagyslių perkrovas). Bandymai buvo atliekami dviem tyrėjų nežinojusių grupės ir gydymo gyvūnų. Skyriai buvo koduojami pašalinti stebėtojo šališkumas. Duomenis, analizes pateikti kaip vidurkis ± SEM iš trijų sekcijų vienam gyvūnui ir penkių gyvūnų skaičius grupėje.
Tyrimus dėl biocheminių parametrų minimumo peržiūros Viesbutis The MDS rezultatai atskleidė didžiausią opos gydymas po trijų dienų gydymas vaistais. Skrandžio išopėjimas negydytos pelėmis taip pat pasiekė aukščiausią tašką apie 3 iojo dieną po indometacinu administravimą. Taigi, mes įvertino biocheminius parametrus pagal optimizuotas valymo režimą [PK (20 mg /kg) ir Omez (3 mg /kg)] iki 3 iosios dienos tik išopėjimu. Dėl to, šie septyni grupės, kurių kiekvienoje yra 5 pelėms buvo atrinkti iš tų, kurie naudojami MDS testo ir pateikti duomenys yra gaunami iš trijų kartotinių: Rīga, I grupės - normalios kontrolės pelės; II grupė - Pūžņojošs pelių ir paaukojo po 10 h (laikomi vieną dieną); III grupė - Pūžņojošs pelių ir paaukojo ant 3 iosios dienos; IV grupė-V "- Pūžņojošs pelėms, gydomi PK ir Omez atitinkamai 1 dieną, ir paaukojo 4 val po administracijos mėginių; VI-VII grupė -. Pūžņojošs pelės, gydomiems PK ir Omez atitinkamai 3 dienas, ir paaukoti 3 iojo dieną, 4 val po paskutinės dozės ir su mėginiais
kiekybinio baltymų ir lipidų žalą metu išopėjimas ir gydymo
liaukų skrandžio audinių buvo sujungtos iš penkių gyvūnų kiekvieno audinio, skalaujami atitinkamą buferinį ir naudojama biocheminių tyrimų. Šlapia svoriai yra audinių buvo registruojama, o Eksperimentai buvo atliekami trimis egzemplioriais. Liaukiniame dalimis nuo kontrolės, Čūlājošs ir narkotikų gydytų pelių, kurių buvo imtasi skirtingais laiko intervalais buvo homogenizuoti su stiklo teflonu suliejant Mėgintuvėlis 50 mM fosfatinis buferis, kurio pH 7,4 ir centrifuguojamas 1200 × g įsigyti skystį. Baltymų karbonilais audinyje homogenate suma buvo nustatyta po nurodomas metodo [18]. DNPH (4 ml, 10 mmol), 2 M HCl buvo įtraukta į supernatanto (1,0 ml), kuris buvo inkubuojami 1 h su pertrūkiais purtant. Ledinio 20% vandeninio TBS tirpalo (5 ml) buvo pridėta ir mišinys inkubuojamas 15 min. Nusodintas baltymas plautas 3 kartus su etanoliu-etil acetato (1: 1), ištirpinama 1 ml tirpale, kurį sudaro 6 m guanidino HCl 20 mM kalio fosfato (monobazinio) pH sureguliuojamas iki 2,3 su trifluoracto rūgštimi. Po centrifugavimo virš nuosėdų absorbcija buvo skaityti 362 nm (∈ = 2,2 × 10 4 m -1 cm, -1).
Dėl lipidų peroksidacijos analizė (kalbant apie TBARS), 10% Homogenatas iš kiekvieną iš atitinkamų mėginių buvo gautas buferio (320 mM sacharozės, 5 mM HEPES, 20 mM EDTA ir 0,01%, BHT). Tai buvo atliktas diferencijuoti centrifuguojant (1200 × g ir 12000 × g), kad gauti mitochondrijų granules, kurie buvo plautos su buferiniu tirpalu (150 mM KCl ir 20 mM fosfatinis buferis) ir pagaliau, suspenduotų 50 mM fosfato buferio, pH 7,4. Mitochondrinė membrana frakcija (1 ml) buvo gydomi TCA-TBA-HCl (2 ml, 15% TCA, 0,375% TBA, 0,25 N HCl), kurių sudėtyje yra 0,01% BHT, kaitinama verdančio vandens vonioje 15 min, atšaldomas ir centrifuguojamas , Viršdegutinio absorbcija buvo matuojamas 535 nm (∈ = 1.56 × 10 5 m -1 cm, -1) [19].
Matavimas ne baltymų tioliu (NP-SSH )
Po pranešė metodą [20], skrandžio gleivinės NP-TTH buvo matuojamas. Trumpai tariant, fundic skrandžio homogenatai nuo kontrolinio, opą, vaistų gydytų pelių buvo padaryta 0,2 m Tris-HCl buferiniame tirpale, pH 8,2, turintis 20 mM EDTA ir centrifuguojama. Homogenatas (1 ml) alikvotinė buvo nusodinamas ledinio 20% TBS (1 ml) ir centrifuguojamas. Supernatantas (1 ml) buvo įtraukta į 2 ml 0,8 M Tris-HCl buferiniame tirpale, pH 9, kuriame yra 20 mM EDTA ir sumaišyti su 0,1 ml 10 mM DTNB. Geltonosios chromogeną absorbcija esant 412 nm (∈ = 13,6 × 10 4 m -1 cm, -1) buvo skaityti.
Mucino tyrimą
gavusi pranešimą metodą [21] , laisvas mucino į skrandžio audinių buvo įvertinta. Trumpai tariant, liaukų dalis skrandžio buvo atskirtas nuo skrandžio spindžio, pasverti ir nedelsiant perkeliamas į 10 ml 0,1% w /v Alcian mėlyna (AB) sprendimą (pagal 0,16 M sacharozės tirpalas, palaikantis su 0,05 mM natrio acetato tirpalo, pH vertė 5,8). Po to, kai dažymo 2 h, perviršis dažų buvo pašalintas iš audinio nuo dviejų iš eilės plovimų su 10 ml 0,25 M sacharozės tirpale. Dažiklis kompleksinis junginys su skrandžio sienos gleivių buvo ekstrahuojamas 10 ml 0,5 M magnio chlorido pagal su pertrūkiais purtant (1 min), 30 min intervalais 2 h. Mėlyna ekstraktas (2 ml) buvo stipriai sukratoma su tokio paties tūrio dietilo eteriu. Gautas emulsija buvo centrifuguojamas esant 3600 apsisukimų per minutę 10 min, ir vandeninio sluoksnio optinis tankis buvo skaityti 580 nm bangos ilgiui. AB kiekis išgaunamas už g drėgno liaukinio audinio buvo apskaičiuojamas iš standartinės kreivės parengta naudojant įvairius koncentracijos Ab.
COX-1 ir COX-2 ekspresijos Bandymo
per 30 min nuėmimo, opą dalis iš skrandžio audiniai buvo nustatyta neutrali buferinis 10% formalino fiziologiniu tirpalu ir suskirstyta. Po to, kai 24 h įtvirtinimo po to įmontuoti į parafiną bloko, ji buvo sumažinti į sekcijas 5 mikronai ant stiklelio ir COX-1 ir COX-2 išraiškos buvo kiekybiškai po pranešė procedūros [22], su nežymiais pakeitimais. Po deparaffinization į ksileno, sekcijos buvo gydomi rūšiavo serijos alkoholio, o vėliau rehidrataciją PBS esant pH 7,5. Skyriai buvo nuosekliai gydomi 3% vandenilio peroksido PBS, ir baltymų blokatorių (5% galvijų serumo albumino, 5% normalus ožkos serumo PBS), ir inkubuojami per naktį 4 ° C su pirminiais antikūnais (pelės anti-COX-1 ir COX 2, 1: 200). Po inkubacijos už 2 valandas kambario temperatūroje su peroksidazės konjuguota triušio anti-pelės antrinio antikūno (1: 500), teigiama reakcija buvo aptikta poveikio į stabilią DAB nuo 2 iki 5 min. Be kontrolės skyriuose, antikūnai buvo praleistas, ir buvo įtraukta tik PBS. Po counterstaining skaidres su Meyer hematoksilinu, spalvotų immunolocalized produktų intensyvumas buvo vertinamas naudojant Biovis MV500 programinę įrangą. Penki sritys iš kiekvienos sekcijos buvo nuskaitomi ir integruotas optinis tankis (DAP) kiekvienoje srityje buvo apskaičiuojamas. Neigiamos kontrolės DAP buvo atimama iš kiekvieno eksperimentinės skyriuje kiekvieno gyvūno jodas visose grupėse.
Prostaglandinas tyrimas
Po derliaus nuėmimo, skrandžio, geltonasis (pilnas storis) buvo pašalintų, pasverti (po 100 mg ) ir suspenduotos 10 mM natrio fosfato buferio, kurio pH 7,4 (1 ml). Audinių buvo smulkinta smulkiai su žirklės ir inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 20 min. Po centrifugavimo (9000 × g), prostaglandino El 2 (PGE 2) lygis supernatanto buvo matuota naudojant ELISA [23], ir koncentracija išreiškiama pg /mg baltymo.
EGF ekspresijos tyrimas
EGF imunodažymu buvo atliktas [22], po panašiu būdu naudojamo COX-1 ir COX-2, su nedideliais pakeitimais. Šiuo atveju, po blokavimo endogeninę peroksidaze ir gydymą baltymų blokatorių, audinių dalys buvo inkubuotos per naktį 4 ° C su pirminiais antikūnais tuo atitinkamo praskiedimo. Be kontrolės skyriuose, tik PBS buvo įtraukta pašalinant antikūnus. Po inkubacijos 1 val kambario temperatūroje su peroksidazės konjuguoto ožkos anti-triušio IgG, teigiama reakcija buvo aptikta poveikio DAB nuo 2 iki 5 min. Po counterstaining skaidres su Meyer hematoksilinu, spalvotų immunolocalized produktų intensyvumas buvo įvertinami naudojant Biovis MV500 programinę įrangą. Penki sritys iš kiekvienos sekcijos buvo nuskaitomi ir integruotas optinis tankis (DAP) kiekvienoje srityje buvo apskaičiuojamas. Neigiamos kontrolės DAP buvo atimama iš kiekvieno eksperimentinės skyriuje kiekvieno gyvūno visose grupėse jodas.
Analizės serume VEGF Viesbutis The VEGF kiekį serume buvo matuojamas naudojant brėžiama nuo mažėjančia aortos kraujo mėginius, su komerciniu laisvų ELISA rinkiniai šie gamintojo nurodymus.
skrandžio sekrecijos tyrimą (pylorous perrišimas modelis)
studijuoti bandymo narkotikų skrandžio sekrecijos poveikį, buvo atliktas prievarčio perrišimas skrandžio standartizuotas mūsų laboratorijoje. Viena grupė pelių (eksperimentinio kontrolės) gavo 2%, gumiarabikas distiliuotame vandenyje (0,2 ml per pelių, PO), o įvairių gydymo grupės buvo suteiktas PK (20 mg /kg × 3 D), Omez (3 mg /kg kūno svorio × 3 d), indometacino (18 mg /kg × 1 d) kaip toks, arba kartu su PK (20 mg /kg × 3 d), Omez (3 mg /kg × 3 d) atitinkamai. Dėl 3 iojo dieną gyvūnų pilvo buvo atidaryta pagal šviesos eterio anesteziją už prievarčio perrišimas (PL). Uždarius pilvo, gyvūnai buvo įdėti į varžas pagal šviesos atramos ir leido atsigauti nuo narkozės. Po 6 h, gyvūnai buvo paaukotas, buvo atidaryta pilvo ir Ligatūra buvo dedamas aplink stemplę. Skrandis buvo pašalintas ir turinys buvo nusausintos į graduotą centrifugavimo mėgintuvėlyje po to mažą slapyvardį palei didesnio kreivumo ribojasi su prievarčio perrišimas. Skrandžio turinys buvo surinkti, išmatuoti, centrifuguoti ir taikomos biocheminės analizės.
Statistinė analizė Bendrovės duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SEM. Parametrų duomenys, kurie apima visus biocheminius parametrus buvo analizuojami naudojant suporuotas "t" testą suporuotas duomenimis arba į vieną pusę dispersinė analizė (ANOVA), po A Dunnet daugeliui lyginimų rašyti testą. Nenparametrinai duomenys (makroskopinis balais) buvo analizuojami naudojant Kruskal-Wallis testą (neparametrinis ANOVA), po kurio Dunn anketa daugeliui lyginimų rašyti testą. Tikimybės vertė P
< 0,05 buvo laikomas reikšmingu. IC 50 vertė PK buvo nustatyta naudojant Probit analizė ir reikšmingumo lygis analizių buvo tiriama pagal chi-square testą.
Rezultatai
gavyba ir phytochemical analizė
ekstrahavimo procese nedavė metanolis ekstraktas, pK 12.57% m /m išeigos. TLC analizė PK atskleidė, kad ji būtų kompleksinis mišinys, daug organinių junginių, dauguma iš jų yra pateikti kaip glikozidų kaip atskleidė Molisch testo. Buvimas apocynin, andorsin, picrosides I ir II ir katukoside kartu su kitais nenustatytų junginių PK buvo patvirtinta palyginti savo TLC profilio su tais, iš autentiškų pavyzdžių.
Standartizavimas dozę PK skrandžio opų gydymo pelių
PK dozė veiksmingai opų gydymo buvo optimizuotas atliekant gydymą PK (5, 10, 20 ir 40 mg /kg) iki septynių dienų ir lyginant MDS reikšmes apdoroto ir neapdoroto pelėmis ant atitinkamų dienų , Laikas Žinoma Skrandžio opų (kaip atskleidė iš MDS vertes) ir jos prevenciją skirtingų dozių PK tiek, kiek yra parodyta Fig. 1. Pelės, gaunantys automobilį paaiškėjo tik neturi gleivinės pakitimus. Gydymas pelėms su indometacino (18 mg /kg) pagamintas Įprastas laikas priklauso nuo ūmaus pažeidimus, skrandžio gleivinės. Opų pasiekė didžiausią apie 3 iosios dienos opų, kai MDS vertė padidėjo 162,1%, palyginti su vienos dienos (P
< 0,001). Vėliau ten buvo laipsniškas atsigavimas dėl gamtinių gydomųjų ir ant 7 -osios dieną po opų, MDS vertė buvo sumažinta 49,2%, palyginti su vienos dienos (P
< 0,01). 1 pav laiko eiga skrandžio opų ir jos prevenciją skirtingų dozių farmakokinetikos. Skrandžio opos pelėms buvo sukeltas skiriant geriamosios indometacino (18 mg /kg kūno masės). Skirtingos dozės PK buvo naudojamas kartu eksperimentams. Opa indeksai buvo matuojamas skirtingomis dienomis 4 val po paskutinės dozės farmakokinetikos ir vertybės yra vidurkis ± S.E.M. (N = 15). AP
< 0,01, BP
< 0,001, palyginti su 1 dienos Pūžņojošs neapdorotas peles; cP
< 0,01, dp
< 0,001, lyginant su III grupės pelių.
PK, visuose pasirinktų dozių parodė didžiausią opos gydymas apie 3 iosios dienos opų, ir poveikis priklausė nuo dozės. Palyginti su atitinkamų Pūžņojošs kontrolės, MDS mažinimas (45,1% -52,9%, p
< 0,01) PK (20 ir 40 mg /kg) buvo panašūs, ir žymiai geriau nei, kad jo mažesnę dozę (10 mg /kilogramas). PK (5 mg /kg) poveikis buvo nereikšmingas. Panašiomis sąlygomis, gydymas Omez (3 mg /kg), 3 dienas sumažino MDS reikšmė 76,3% (p
< 0,001), palyginti su III grupės pelių. Gijimo pastebėta išplėsti gydymo iki septynių dienų PK buvo geresnis nei buvo pastebėta su trijų dienų gydymo režimas. Tačiau didžioji dalis tai buvo dėl to autohealing, su mažiau įnašo PK.
Apskritai, gydymą PK (20 mg /kg) ir Omez (3 mg /kg), 3 dienas po to, kai opa indukcija teikiamų optimalų opos gydymas , Atsižvelgiant į šiuos, visas sekančias Eksperimentai buvo atliekami su tuo pačiu valymo režimą. Pasirinkta dozė Omez, kuris taip pat yra rekomenduojama terapinė dozė žmogui buvo optimizuota mus [6].
Dėl nedengtų pelių, piko išopėjimas (ne daugiau kaip MDS) buvo stebimas trečią dieną indometacino administravimo. Taigi, šį kartą vieta buvo pasirinkta sužinoti IC 50 vertė PK. Atsižvelgiant į MDS vertybes 3 iosios dienos Pūžņojošs neapdorotas peles kaip 100%, IC buvo nustatyta 50 vertė PK būti 23.30 ± 3.50 mg /kg.
Kokybinis vertinimas
Makroskopiniu egzaminų parodė, kad indometacino administravimo dėl to labai žalos liaukų dalį pelių skrandžio gleivinės. Per 6 h po indometacino administravimą, paviršutinišką eroziją ir lengvas uždegimas, skrandžio buvo pastebėtas nurodant ūmų išopėjimo. Dėl opa indukcijos dieną, praradimas foveolar struktūros kartu su paslaptingas architektūra buvo ryškus bruožas dauguma neapdorotų pelių. Taip pat, švelnus uždegimo Infiltrate, kurių sudėtyje yra neutrofilų buvo pastebėtas plonų sluoksnių Propria. Gydymas tiek PK ir Omez net vieną dieną riboto žalą su fragmentiškas sričių nebeliko struktūrinės epitelio.
Indometacino sukeltas gastropatijos tapo daug ryškus trečią dieną Rodoma perforuoti daugelio sričių išopėjimo su uždegiminių įsiskverbti, kurių sudėtyje yra neutrofilų ir makrofagų gleivinė, Sub-gleivinė ir raumenų sluoksnis kartu su hemoraginis serosa. buvo pastebėta Daug nenormalių ląstelių su pakitusiu branduolio į citoplazmos santykis. Gydymas PK ir Omez 3 dienas iš lėmė sumažėjusios uždegiminių ląstelių skaičius kartu su padidėjusia skaičius sveikų normalių ląstelių skrandžio gleivinės, taip pat submucosa, serosa ir raumenų sluoksnius su minimaliu gleivinės spūstis.
Poveikis PK ir Omez lipidų peroksidacijos ir baltymų oksidacijos skrandžio audinio Viesbutis The indometacinas suvartojimo vien poveikio ir pavartojus PK ir Omez dėl lipidų peroksidacijos kiek (matuojama pagal TBARS), baltymų oksidacija (matuojamas baltymo karbonilo turinį ), tiolis priklauso nuo gynybos sistema (NP-TSH) ir mucino turinį skrandžio audinių pelių yra pateikti 1 lentelėje ir 2.Table 1 lentelė PK ir Omez poveikį TBARS, baltymų karbonilais lygius, ne- baltymų tiolio ir mucino į opą skrandžio audinio micea vienos dienos opų
parametrai
I grupė pelių normalu kontrolė pervežimas
II grupė 1. dieną Pūžņojošs kontrolė
III grupė PK elgiamasi
IV grupė Omez gydytų

TBARS (nmoles /mg baltymo)
0,85 ± 0,03
1,18 ± 0.05c
0,94 ± 0.06d 0.07d
0,

• Apsauginiai poveikis (1- (4-hidroksi-fenil) -3-m-tolil-propenone chalkonų į indometacino sukelta skrandžio erozinio žalos žiurkėms
• Žmogaus skrandžio patogenas Helicobacter pylori turi potencialų acetono karboksilazės, kuris didina jo gebėjimas kolonizuoti pelėms