Healing potentiale Picrorhiza kurroa (Scrofulariaceae) jordstængler mod indomethacin-induceret gastrisk ulcus:. En mekanistisk udforskning

Healing potentiale Picrorhiza kurroa
(Scrofulariaceae) jordstængler mod indomethacin-induceret gastrisk sårdannelse:. En mekanistisk udforskning
Abstrakt
Baggrund
Den foreliggende undersøgelse blev foretaget for at evaluere potentialet i rhizomer i den indiske medicinske plante, Picrorhiza kurroa
i healing indomethacin-induceret akut mave sårdannelse i mus og undersøge dens evne til at modulere oxidativt stress og niveauerne af prostaglandin (PGE 2) og EGF under processen.
Metoder
mandlige schweiziske albinomus, åbne sår med indomethacin (18 mg /kg, po, enkeltdosis) blev behandlet op til 7 dage med forskellige doser af methanol ekstrakt af P. kurroa Salg rhizomer (betegnet PK). Den helbredende kapacitet af de mest effektive dosis af PK (20 mg /kg, s. O. X 3 d) blev sammenlignet med virkningen af ​​omeprazol (Omez) (3 mg /kg, s. O. X 3 d). Virkningerne af lægemiddel-behandling for en og tre dage på de biokemiske parametre blev vurderet ved at sammenligne resultaterne med at ubehandlet mus i en st og 3 rd dag sårdannelse. Maven væv af musene blev anvendt til biokemiske analyser.
Resultater
Den makroskopiske indeks afslørede maksimal sårdannelse på 3 rd dag efter indomethacin administration, som effektivt blev helbredt af PK. Under den optimerede behandling regime, PK og Omez reducerede ulcus indeks med 45,1% (P
< 0,01), og 76,3% henholdsvis (P
< 0,001)., Sammenlignet med de ubehandlede sår mus
Sammenlignet med de sår ubehandlede mus, der blev behandlet med PK i 3 dage viste faldt niveauerne af thiobarbitursyrereaktive stoffer (TBARS) (32,7%, P
< 0,05) og protein carbonyl (37,7%, P
<0,001), og øget mucin (42,2%, P
< 0,01), slimhinde PGE 2 (21,4%, P
< 0,05), og udtryk for COX-1 og 2 (26,9% og 18,5%, P
< 0,05), EGF (149,0%, P
< 0,001) og VEGF (56,9%, P
< 0,01). Omez reducerede TBARS (29,4%, P
< 0,05), og protein carbonyl (38,9%, P
< 0,001), og øget mucin (38,3%, P
< 0,01), uden ændring af de andre parametre væsentligt.
Konklusion
PK (20 mg /kg, po x 3 dage) kunne effektivt helbrede indomethacin-induceret mavesår hos mus ved at reducere oxidativ stress og fremme mucin sekretion, prostaglandinsyntesen og forstærke udtryk af cyclooxygenase enzymer og vækstfaktorer.
Baggrund
Gastrointestinal toksicitet i forbindelse med non-steroide anti-inflammatoriske lægemidler (NSAID) er en vigtig medicinsk problem trods af de seneste farmaceutiske fremskridt [1]. Udover at inducere gastrisk ulceration, synes de NSAID'er også at hæmme sårheling [2, 3]. Derfor forebyggelse af gastrointestinal lidelse er fortsat af bekymring for både klinisk praktiserende læge og forskere. På trods af deres effektivitet i forvaltningen af ​​NSAID-induceret gastrisk ulceration, de i øjeblikket tilgængelige syntetiske anti-ulcus medicin giver bivirkninger, og de er også dyre, især for landbefolkningen. Til dette formål har vi rapporteret lovende mavesårshæmmende aktivitet af flere planteprodukter [4-6]
Picrorhiza kurroa
. (Familie: Scrofulariaceae, almindelig betegnelse: Picrorhiza, katuka, kutki) er en lille flerårig urt vokser i de bakkede dele af nord-vestlige Himalaya-regionen i Indien og Nepal. Bladet, bark og de underjordiske dele af planten, hovedsagelig jordstængler er meget udbredt i de traditionelle indiske (ayurvediske) systemer for medicin siden oldtiden. Selv om det viser antioxidant, anti-inflammatorisk og immunmodulerende aktiviteter, er den mest værdsat for dets hepatobeskyttende virkning. De bitre jordstængler af Picrorhiza
har været anvendt i tusinder af år i Indien for at behandle mennesker med fordøjelsesbesvær [7], og forstoppelse på grund af utilstrækkelig fordøjelsessystemet sekretion [8]. Picrorhiza
betragtes som en trophorestorative urt for leveren, samt en potent immunstimulerende [9]. Dens bestanddel, er picroliv også rapporteret at besidde choleretic effekt [10], og forhindre leverskade forårsaget af ethanol [11], kemikalier [12] og mikroorganisme [13].
Det primære formål med denne undersøgelse var at undersøge den helbredende ejendom methanol ekstrakt af P. kurroa
rhizomet (betegnet PK) mod indomethacin-induceret akut gastrisk ulceration af mus vis-a-vis
den for den kommercielle lægemiddel, omeprazol (Omez). Indomethacin, en repræsentant for NSAID (NSAID) familie, forårsager mavesår gennem forskellige processer, herunder generering af ROS, hæmning af prostaglandinsyntesen, infiltration af polymorfonukleære leukocytter, induktion af apoptose, og initiering af lipidperoxidationen [14, 15]. Derfor såret helbredende kapacitet af narkotika, vurderet ved histopatologi, blev korreleret med deres effekter i at reducere indometacin-induceret oxidativ stress. Den antioxiderende aktivitet af testprøverne blev analyseret med hensyn til deres evne til at beskytte oxidative skader på lipider, proteiner og thiol-afhængig antioxidantforsvar i gastriske væv. Endvidere er den NSAID-inducerede gastropati også tilskrives den nedsatte syntese af prostaglandiner [16]. Derfor rolle prøverne i stigende slim sekretion, og udtryk for epidermal vækstfaktor (EGF), samt opløftende PGE 2 syntese blev også undersøgt .
Metoder
Plantemateriale
rhizom af P. kurroa
(betegnet som PK), indkøbt fra det lokale marked blev anvendt til det foreliggende arbejde. Anlægget blev taksonomisk identificeret (tiltrædelsen nr. 324.139) ved Botanisk Undersøgelse af Indien, indisk Botanisk Have, Kokata, Indien.
Kemikalier
2-thiobarbitursyre (TBA), ethanol, blev butanol og ethylacetat indkøbt fra E. Merck (Mumbai, Indien), mens trichloreddikesyre (TCA) var fra Thomas Baker (Mumbai, Indien). Alcian Blue, indomethacin, bovint serumalbumin (BSA), haematoxylene, alun, eosin, butylhydroxytoluen (BHT), guanidinhydrochlorid, trifluoreddikesyre (TFA), omeprazol (Omez), 3,3 '-diaminobenzidine (DAB), kanin-anti -mouse EGF og Trizma basen blev indkøbt fra Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA). Andre anvendte reagenser var 35% hydrogenperoxid (Lancaster, Morecambe, UK), 2,4-dinitrophenyl hydrazin (DNPH), dinatriumhydrogenphosphat og natriumdihydrogenphosphat (BDH, Pool Dorset, UK), saccharose og 5,5'-dithiobis -2-nitrobenzioc syre (DTNB) (SRL, Mumbai, Indien), hest og gedeserum (Banaglore Genie, Banaglore, Indien), PGE 2 metabolit kit (Cayman Chemical, Michigan, USA) og peroxidasekonjugeret ged anti kanin IgG (EMD Biosciences, Sandiego, USA).
Instrumentering
absorbans-spektrofotometri blev udført ved 25 ° C under anvendelse af et Jasco V-550 UV-Vis spektrofotometer. Bølgelængde scanninger og absorbansmålinger blev foretaget i en ml kvarts celler 1 cm vejlængde af.
Udarbejdelse af planteekstrakter
Den lufttørrede jordstængler af P. kurroa Hotel (250 g) blev hakket i fine stykker, gennemvædet i methanol (1 l) i to dage, og supernatanten dekanteres. Efter gentagelse af hele processen tre gange, de kombinerede ekstrakter filtreret gennem et nylonnet, og inddampet i vakuum og til slut frysetørret. Den rå ekstrakt, betegnet som PK hele manuskriptet, blev opbevaret i en vakuumekssikkator.
Fremstilling af lægemidlerne
Lægemidlerne blev fremstillet ud fra PK og Omez som vandige suspensioner i 2% gummi arabicum som vehikel, og indgives til musene oralt.
Farmakologiske tests
Dyr og forsøgsprotokol for ulceration
mandlige schweiziske albino mus blev avlet på Dr. BC Roy post Graduate Institute of Basic Medical Sciences, Kolkata, Indien og BARC Laboratory Animal House Facility , Mumbai, Indien. Disse blev indkøbt efter at have indhentet clearance (Post Graduate Institute of Basic Medical Sciences, Kolkata Animal Ethics Committee 507 /CPCSEA, Sanction No. IAEC /SB-2/2004 /UCM-16, dateret 06.15.04 og BARC Animal Ethics Committee (BAEC) , forsøgsdyr facilitet. sanktionere nr. BAEC /03/05 dateret 11.07.05) fra de respektive Animal etiske komitéer i de to centre og blev håndteret efter International Etik retningslinjer Animal udvalget. Den 6-8 uger gamle mus (25-30 g) blev opdrættet på en afbalanceret laboratorium kost som pr NIN, Hyderabad, Indien og givet postevand ad libitum. De blev holdt ved 20 ± 2 ° C, 65-70% fugtighed, og dag /nat-cyklus (12 timer /12 timer). Ved begyndelsen af ​​hvert forsøg blev alle dyrene identificeret ved typiske hak i øret og lemmer og derefter randomiseret. Dette blev gjort for at udføre alle forsøgene i et blindet måde. Ulceration hos musene blev induceret ved administration af indomethacin (18 mg /kg, s. O.) Opløst i destilleret vand og suspenderes i bæreren, akaciegummi (2%) som en enkelt dosis. Vores studier med 5, 10, 15, 18, 20, 25 og 30 mg /kg, s. o. af indomethacin viste, at de laveste doser (5 og 10 mg /kg) billede mindre ulceration efter 6 timer af administrationen, mens de højere doser (25 og 30 mg /kg) førte til dødelighed. Den valgte dosis (18 mg /kg) producerede optimal ulceration, med inflammation og mucosal fornærmelse, uden at forårsage nogen dødelighed til mus. Dyrene blev frataget mad, men havde fri adgang til postevand 24 timer før mavesår induktion.
Standardisering af narkotika dosis Hus Til standardisering af narkotika doser, PK (5, 10, 20, og 40 mg /kg) blev givet som en enkelt dosis om dagen op til syv dage. Den første dosis PK og Omez fik 6 timer efter indomethacin administration. I de efterfølgende seks dage blev testprøverne givet ved 9 AM på hver dag. Fem mus blev taget i hver gruppe og hvert eksperiment blev gentaget tre gange. Musene blev ofret på 1 st, 3 rd, 5 th og 7 th dag, 4 timer efter administration af sidste dosis PK. Omfanget af sårheling blev vurderet fra de makroskopiske skader scorer (MDS) af de ubehandlede og behandlede sår mus på de respektive dage. Den optimerede behandling regime (medicin dosis og periode med behandling) blev vurderet fra MDS af grupper af mus, der fik den ovennævnte behandling.
Vurdering af sårdannelse og healing fra MDS
Musene blev aflivet efter en overdosis med thiopental. Maven fra de normale og behandlede grupper blev fjernet hurtigt, åbnet langs den største krumning og skyllet grundigt med normalt saltvand. De sår gastriske mucosale områder blev visualiseret ved anvendelse af en gennemsigtig plade og et dissektionsmikroskop. MDS blev vurderet [17] af klassificering gastrisk skade på en 0-4 skala, baseret på sværhedsgraden af ​​hyperæmi og blødende læsioner: 0 - næsten normal slimhinde, 0,5 - hyperæmi, 1 - en eller to læsioner, 2 - alvorlige læsioner , 3 - meget alvorlige læsioner, 4 - slimhinde fuld af læsioner. (læsioner - blødende erosioner, hyperæmi - vaskulære overbelastningerne). Forsøgene blev udført af to efterforskere blindede til gruppen og behandling af dyr. Snittene blev kodet for at fjerne en observatør bias. Data for analyserne er præsenteret som gennemsnit ± SEM fra gennemgangen af ​​mindst tre sektioner pr dyr og fem dyr pr gruppe.
Undersøgelser af biokemiske parametre
MDS Resultaterne viste maksimal sårheling efter tre dages medicinsk behandling. Maven sårdannelse i de ubehandlede mus nåede også højdepunkt på 3 rd dag efter indomethacin administration. Derfor vurderede vi de biokemiske parametre under den optimerede behandling regime [PK (20 mg /kg) og Omez (3 mg /kg)] op til 3 rd dag kun ulceration. Til dette blev de følgende syv grupper hver indeholdende 5 mus valgt blandt dem, der anvendes til MDS-analysen og de viste data stammer fra tre gentagelser:
Gruppe I - normale kontrolmus; Gruppe II - sår mus, og aflivet efter 10 h (betragtes som én dag); Gruppe III - sår mus, og ofret på 3 rd dag; Gruppe IV-V - sår mus, behandlet med PK og Omez henholdsvis i 1 dag, og aflivet 4 timer efter administration af testprøver; Gruppe VI-VII -., Sår mus, der blev behandlet med PK og Omez henholdsvis i 3 dage, og ofret i 3 rd dag, 4 timer efter den sidste dosis af testprøverne
Kvantificering af protein og lipid skader under ulceration og helbredelse
kirtelmaven væv blev samlet fra fem dyr for hvert væv, skyllet med passende buffer og anvendt til biokemiske undersøgelser. De våde vægte af vævene blev registreret, og forsøgene blev udført i triplikater. Glandulær portioner fra kontrol blev sår og lægemiddelbehandlede mus taget med forskellige tidsintervaller homogeniseret med en glas-teflon homogenisering rør i en 50 mM phosphatbuffer, pH 7,4 og centrifugeret ved 1200 x g til opnåelse af supernatanten. Mængden af ​​protein carbonyler i vævshomogenatet, blev bestemt efter en rapporteret fremgangsmåde [18]. DNPH (4 ml, 10 mM) i 2 M HCI blev tilsat til supernatanten (1,0 ml), som blev inkuberet i 1 time med intermitterende rystning. Iskold 20% vandig TCA-opløsning (5 ml) blev tilsat, og blandingen inkuberet i 15 minutter. Det udfældede protein blev vasket 3 gange med ethanol-ethylacetat (1: 1), opløst i 1 ml af en opløsning indeholdende 6 M guanidin HCI i 20 mM kaliumphosphat (monobasisk) justeret til pH 2,3 med trifluoreddikesyre. Efter centrifugering blev absorbansen af ​​supernatanten læst ved 362 nm (∈ = 2,2 × 10 4 M -1 cm -1).
Til analysen af ​​lipidperoxidation (i form af TBARS), en 10% homogenat fra hver af de respektive prøver blev fremstillet i en buffer (320 mM sucrose, 5 mM HEPES, 20 mM EDTA og 0,01% BHT). Disse blev underkastet differentiel centrifugering (1200 x g og 12000 x g) for at opnå de mitokondrielle pellets, som blev vasket med puffer (150 mM KCI og 20 mM phosphatbuffer) og til sidst suspenderet i en 50 mM phosphatbuffer, pH 7,4. Mitokondriemembranen fraktion (1 ml) blev behandlet med TCA-TBA-HCI (2 ml, 15% TCA, 0,375% TBA, 0,25 N HCl) indeholdende 0,01% BHT, opvarmet på et kogende vandbad i 15 minutter, afkølet og centrifugeret . Absorbansen af ​​supernatanten blev målt ved 535 nm (∈ = 1,56 × 10 5 M -1 cm -1) [19].
Måling af ikke-protein-thiol (NP-TSH )
Efter en rapporteret metode [20], mavens slimhinde NP-TSH blev målt. Kort fortalt blev fundiske mave homogenater fra kontrolprøven sår, medikament-behandlede mus fremstillet i 0,2 M Tris-HCI-buffer, pH 8,2 indeholdende 20 mM EDTA og centrifugeret. En alikvot af homogenatet (1 ml) blev udfældet med iskold 20% TCA (1 ml) og centrifugeret. Supernatanten (1 ml) blev tilsat til 2 ml 0,8 M Tris-HCI-buffer, pH 9 indeholdende 20 mM EDTA og blandet med 0,1 ml 10 mM DTNB. Absorbansen af ​​den gule chromogen ved 412 nm (∈ = 13,6 × 10 4 M -1 cm -1) blev aflæst.
Mucin-assay
Efter en rapporteret fremgangsmåde [21] , den frie mucin i mavens væv blev estimeret. Kort fortalt blev glandulære del af maven adskilt fra hulrummet i maven, afvejes og overføres straks til 10 ml 0,1% w /v Alcian Blue (Ab) opløsning (i 0,16 M sucroseopløsning bufret med 0,05 mM natriumacetatopløsning, pH justeret til 5,8). Efter farvning i 2 timer blev det overskydende farvestof fjernes fra vævet ved to successive skylninger med 10 ml 0,25 M saccharoseopløsning. Farvestoffet kompleksbundet med mavevæggen slim blev ekstraheret med 10 ml 0,5 M magnesiumchlorid ved intermitterende rystning (1 min) ved 30 minutters intervaller i 2 timer. Den blå ekstrakt (2 ml) blev kraftigt rystet med et tilsvarende volumen diethylether. Den resulterende emulsion blev centrifugeret ved 3600 rpm i 10 min, og absorbansen af ​​det vandige lag blev aflæst ved 580 nm. Mængden af ​​Ab ekstraheret pr g våd kirtelvævet blev beregnet ud fra en standardkurve fremstillet ved anvendelse af forskellige koncentrationer af Ab.
COX-1 og COX-2-ekspression assay
inden for 30 min af høst, de sår dele af mave væv blev fikseret i neutral-bufferet 10% formaldehyd saltvand og sektioneret. Efter 24 timers fiksering efterfulgt af indlejring i en paraffinblokken, blev det skåret i sektioner af 5 mikron på et objektglas og udtrykkene for COX-1 og COX-2 blev kvantificeret efter en rapporteret fremgangsmåde [22], med let modifikation. Efter afparaffinering i xylen blev sektionerne behandlet med en gradueret række af alkohol og efterfølgende rehydratiseres i PBS ved pH 7,5. Snittene blev sekventielt behandlet med 3% hydrogenperoxid i PBS, og protein-blokkere (5% bovint serumalbumin, 5% normalt gedeserum i PBS) og inkuberet natten over ved 4 ° C med primært antistof (muse-anti-COX-1 og COX 2, 1: 200). Efter inkubation i 2 timer ved stuetemperatur med peroxidase-konjugeret kanin-anti-muse-sekundært antistof (1: 500), blev en positiv reaktion detekteret ved udsættelse for stabil DAB i 2 til 5 min. I kontrolforsøg sektioner blev antistoffer udeladt, og kun PBS blev tilsat. Efter kontrafarvning dias med Meyers hematoxylin blev intensiteten af ​​farvede immunolocalized produkter evalueret ved brug Biovis MV500 software. Fem områder fra hver sektion blev scannet og den integrerede optiske densitet (IOD) i hvert område blev beregnet. IOD af den negative kontrol blev trukket fra IOD af hver eksperimentelle afsnit for hvert dyr i alle grupper.
Prostaglandin assay
Efter høst af maven, blev corpus (fuld tykkelse) udskåret, vejet (100 mg ) og suspenderet i 10 mM natriumphosphatpuffer, pH 7,4 (1 ml). Vævet blev hakket fint med en saks og inkuberet ved 37 ° C i 20 min. Efter centrifugering (9000 x g), prostaglandin E 2 (PGE 2) niveauer i supernatanten blev målt ved ELISA [23], og koncentrationerne er udtrykt som pg /mg protein.
EGF ekspression assay
immunfarvning af EGF blev udført [22] efter en lignende metode anvendes til COX-1 og COX-2, med mindre modifikationer. I dette tilfælde, efter blokering af endogen peroxidase og behandling med proteinet blokkere blev vævssnittene inkuberet natten over ved 4 ° C med primært antistof ved en passende fortynding. I kontrolforsøg sektioner, kun PBS tilsat udeladelse antistofferne. Efter inkubation i 1 time ved stuetemperatur med peroxidase-konjugeret gede-anti-kanin IgG, blev en positiv reaktion påvist ved eksponering til DAB for 2 til 5 min. Efter kontrafarvning dias med Meyers hematoxylin blev intensiteten af ​​farvede immunolocalized produkter kvantificeres ved hjælp Biovis MV500 software. Fem områder fra hver sektion blev scannet og den integrerede optiske densitet (IOD) i hvert område blev beregnet. IOD af den negative kontrol blev trukket fra IOD af hver eksperimentelle afsnit for hvert dyr i alle grupper.
Assay af serum VEGF
serum VEGF blev målt ved anvendelse blodprøverne drages af aorta descendens, med kommercielt tilgængelige ELISA-kits ifølge producentens instruktion.
gastrisk sekretorisk assay (pylorous ligering model)
at undersøge virkningerne af testlægemidlerne på gastrisk sekretion, blev pyloric ligering af maven standardiseret i vores laboratorium udføres. En gruppe af mus (eksperimentel kontrol) modtog 2% gummi arabicum i destilleret vand (0,2 ml pr mus, PO), medens de forskellige behandlingsgrupper fik PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg × 3 d), indomethacin (18 mg /kg × 1 d) som sådan eller sammen med PK (20 mg /kg x 3 d), Omez (3 mg /kg x 3 d). På 3 rd dag blev maven af ​​dyrene åbnet under let etherbedøvelse for pyloric ligering (PL). Efter lukningen af ​​maven, blev dyrene sat i bure under lys tilbageholdenhed og lov til at komme fra bedøvelsen. Efter 6 timer blev dyrene aflivet, abdomen blev åbnet, og en ligatur blev placeret rundt om spiserøret. Maven blev fjernet og indholdet blev drænet ind i et gradueret centrifugerør efter at give et mindre hak langs den største krumning støder op til pyloric ligering. Maveindholdet blev opsamlet, målt og centrifugeret, og underkastet biokemisk analyse.
Statistisk analyse
Dataene er præsenteret som gennemsnit ± SEM. Parametrisk data, som omfatter alle de biokemiske parametre blev analyseret ved anvendelse af en parret "t" test for de parrede data eller envejs variansanalyse (ANOVA) efterfulgt af en Dunnet multiple sammenligninger slutværdierne. Nonparametric data (makroskopisk delekærv) blev analyseret ved anvendelse Kruskal-Wallis test (ikke-parametrisk ANOVA) efterfulgt af en Dunns multiple sammenligninger slutværdierne. En sandsynlighed værdi på P
< 0,05 blev betragtet som signifikant. IC 50 værdi på PK blev anslået ved hjælp af Probitanalyse og signifikansniveau af analyserne blev undersøgt af chi-square test.
Resultater
Udvinding og fytokemiske analyse
udvinding proces gav methanol ekstrakt, PK i 12,57% vægt /vægt udbytte. TLC-analyse af PK afslørede det at være en kompleks blanding af et stort antal organiske forbindelser, de fleste af disse er til stede som glycosider som afsløret ved Molisch test. Tilstedeværelse af apocynin, andorsin, picrosides I og II, og katukoside sammen med andre uidentificerede forbindelser i PK blev bekræftet ved sammenligning af dens TLC profil med de af de autentiske prøver.
Standardisering af dosis af PK for mavesår helbredelse i mus
dosen af ​​PK for effektiv sårheling blev optimeret ved at udføre behandling med PK (5, 10, 20 og 40 mg /kg) op til syv dage, og sammenligne MDS værdier af det behandlede og ubehandlede mus på de respektive dage . Tidsforløbet for omfanget af mavesår (som afsløret fra MDS-værdier) og forebyggelse af forskellige doser af PK er vist i fig. 1. Musene modtager bærer viste kun ingen slimhindelæsioner. Behandling af mus med indomethacin (18 mg /kg) producerede typiske tidsafhængige akutte læsioner i den gastriske slimhinde. Den sårdannelse nåede maksimum på 3 rd dag sårdannelse når MDS-værdi er steget med 162,1% i forhold til den på dag ét (P
< 0,001). Derefter var der en gradvis stigning skyldes naturlig heling, og efter 7 th dag efter sårdannelse blev den MDS værdi reduceret med 49,2% sammenlignet med på dag ét (P
< 0,01). Figur 1 Tidsforløbet for mavesår og forebyggelse af forskellige doser af PK. Mave ulceration hos mus blev induceret ved oral administration af indomethacin (18 mg /kg legemsvægt). Forskellige doser af PK blev anvendt til forsøgene. Såret indekser blev målt på forskellige dage 4 timer efter den sidste dosis af PK og værdierne er gennemsnit ± S.E.M. (N = 15). aP
< 0,01, BP
< 0,001 sammenlignet med 1. dag sår ubehandlet mus; cP
< 0.01, dP
< 0,001 sammenlignet med gruppe III-mus.
PK, på alle de valgte doser viste maksimal sårheling på 3 rd dag ulceration, og virkningen var dosisafhængig. Sammenlignet med de respektive sår kontrol, de MDS reduktioner (45,1% -52,9%, P
< 0,01) ved PK (20 og 40 mg /kg) var ens, og væsentligt bedre end ved dens lavere dosis (10 mg /kg). Virkningen af ​​PK (5 mg /kg) var ubetydelig. Under lignende forhold, behandling med Omez (3 mg /kg) i 3 dage reducerede MDS værdien med 76,3% (P
< 0,001) sammenlignet med den gruppe III-mus. Helbredelsen observeret på at udvide behandlingen op til syv dage med PK var bedre end det observeret med tre-dages behandlingsregime. Men en stor del af dette skyldtes autohealing, med mindre bidrag fra PK.
Samlet set behandling med PK (20 mg /kg) og Omez (3 mg /kg) i 3 dage efter mavesår induktion forudsat optimal sårheling . I lyset af disse blev alle efterfølgende forsøg udført med den samme behandlingskur. Den valgte dosis Omez, hvilket også er den anbefalede terapeutiske dosis for mennesker blev optimeret ved os [6].
For de ubehandlede mus, blev peak ulceration (maksimum MDS) observeret på den tredje dag i indomethacin administration. Derfor var dette tidspunkt valgt at finde ud af IC 50 værdi på PK. I betragtning af de MDS værdier 3 rd dag sår ubehandlede mus som 100%, IC 50 værdi på PK viste sig at være 23,30 ± 3,50 mg /kg.
Kvalitativ vurdering Salg The makroskopiske undersøgelser afslørede, at indomethacin administration ført til en markant skader på glandulær del af musene maveslimhinden. Inden 6 timer efter indomethacin administration, overfladisk erosion og mild betændelse i maven blev observeret indikerer akut sårdannelse. På dagen for ulcus-induktion, tab af foveolar struktur sammen med kryptiske arkitektur var den fremtrædende træk i de fleste af de ubehandlede mus. Også var mild inflammatorisk infiltrat indeholder neutrofiler observeret i lamina propria. Behandling med både PK og Omez selv for en dag begrænset skaden med pletvis områder af blottet strukturel epitel.
Indomethacin induceret gastropathy blev meget udtalt på den tredje dag der viser den udstansede flere områder af ulceration med inflammatoriske infiltrat indeholder neutrofiler og makrofager i slimhinde, sub-slimhinde og muskel frakke sammen med blødende serosa. Et stort antal af unormale celler med ændret kerne til cytoplasma forholdet blev bemærket. Behandling med PK og Omez i 3 dage medførte reduceret antal inflammatoriske celler sammen med et forøget antal raske normale celler i maveslimhinden samt submucosa, serosa og muskellag med minimal mucosal overbelastning.
Virkning af PK og Omez på lipidperoxidation og protein oxidation i maven væv
virkningerne af indomethacin indtag alene og efter administration af PK og Omez af omfanget af lipidperoxidation (målt i TBARS), protein oxidation (målt af protein carbonyl indhold ), er det thiol-afhængige forsvarssystem (NP-TSH) og mucin indhold i mavens væv af mus vist i tabel 1 og tabel 2.Table 1 effekten af ​​PK og Omez på niveauerne af TBARS, protein carbonyler, ikke- protein thiol, og mucin i sår gastriske væv af micea på dag et af sårdannelse
Parametre
gruppe i mus normal kontrol

Gruppe II 1. dag sår kontrol
Gruppe III PK-behandlede
gruppe IV Omez-behandlet
TBARS (nmol /mg protein)
0,85 ± 0,03
1,18 ± 0.05C
0,94 ± 0.06d
0,89 ± 0.07d
protein carbonyler (nmol /mg protein)
1,08 ± 0,05
1,62 ± 0.09b
1,49 ± 0,12
1.53 ± 0,07
NP-TSH (nmol /mg væv)
1,99 ± 0,09
1,66 ± 0.08b
1,86 ± 0,08
1,81 ± 0,09
mucin (pg /g væv)
335,03 ± 14,43
213,02 ± 0.59b
240,33 ± 20,49
253,33 ± 14.53d
aStomach ulceration i mus blev induceret ved oral administration af indomethacin (18 mg /kg) . PK (20 mg /kg /dag × 1 dag) og Omez (3 mg /kg /dag × 1 dag) blev anvendt som testprøver. Analyserne blev udført 4 timer efter administration af prøverne. Værdierne er gennemsnit ± SEM (n = 15). bP
< 0,05, cP
< 0.01 sammenlignet med normale mus; dP
< 0,05 sammenlignet med Gruppe II-mus.
Tabel 2 Effekten af ​​PK og Omez på niveauerne af TBARS, protein carbonyler, ikke-protein thiol og mucin i sår gastriske væv af micea på dag tre af ulceration
Parametre
gruppe I normale kontrol
Gruppe III 3. dag sår kontrol
Gruppe V PK-behandlede

gruppe VI Omez-behandlet
TBARS (nmol /mg protein)
1,02 ± 0,06
1,53 ± 0.06c
1,03 ± 0.09d
1,08 ± 0.05d
protein carbonyler (nmol /mg protein)
1,18 ± 0,07
2,61 ± 0.17c
1,62 ± 0.10f
1,59 ± 0.09f
NP-TSH (nmol /mg væv)
2,06 ± 0,09
1,73 ± 0,09
2,06 ± 0.14d
2,05 ± 0.1d
mucin (pg /g væv)
343,30 ± 16,91
213,29 ± 17.91b
303,34 ± 17.4e
295,06 ± 15.62e
aStomach ulceration i mus blev induceret ved oral administration af indomethacin (18 mg /kg). PK (20 mg /kg /dag × 3 dage) og Omez (3 mg /kg /dag × 3 dage) blev anvendt som testprøver. Analyserne blev udført på dag tre af ulceration, 4 timer efter den sidste dosis af lægemidlet. Værdierne er gennemsnit ± SEM (n = 15). bP
< 0,05, cP
0,001 sammenlignet med normale mus, dP
< 0,05, eP
< 0,01 FP
< . 0,001 sammenlignet med gruppe III-mus
Indomethacin administration markant stimuleret lipidperoxidation i gastrisk væv, hæve TBARS indhold ved 38,8% (P
< 0,01) og 53% (P
< 0,001) henholdsvis på 1 st og 3 rd dag sårdannelse, sammenlignet med de normale kontrol mus. Behandling med PK og Omez viste øjeblikkelig virkning, hvilket reducerer TBARS indhold ved 20,3% og 24,6% i forhold til gruppen II mus (P
< 0,05). Behandling med PK og Omez i tre dage reduceret det med 32,7% og 29,4% i forhold til gruppens III mus (P
< 0,05).
Sammenlignet med den normale værdi, protein carbonyl indholdet af sår mus var højere (50%) på den første dag (P
< 0,05) som steg med 120,3% ved peak sårdannelse (P
< 0,001). Ingen af ​​de test narkotika viste umiddelbar virkning på dag ét.

• Beskyttende virkninger af (1- (4-hydroxy-phenyl) -3-m-tolyl--propenon chalcon i indomethacin-induceret gastrisk eroderende skader i rats
• Den humane gastriske patogen Helicobacter pylori har en potentiel acetone carboxylase, der forbedrer dens evne til at kolonisere mus