Plos ONE: Extra-požiralnika Pepsin od trebuhu Refluxate predstavljenih tonzil hipertrofija

Povzetek

Ozadje

Gastroezofagealna refluksna je povezana s številnimi patoloških pogojih zgornjega aerodigestive trakta. Želodca pepsin v refluksu prispeva k imunoloških reakcij v tonzilah. V tej študiji smo želeli, da bi našli povezave med pepsin in tonzil hipertrofije.

Metode in iskanju

Raziskovali smo pojem, ali je tonzilarnega hipertrofijo zaradi-pepsin posredovane želodca refluks tonzil hipertrofijo. Štiriinpetdeset otrok s tonzil hipertrofijo in 30 odraslih z tonzilitis so bili zaposleni pred kirurško zdravljenje. Krvi in ​​tonzil tkiva iz vsakega bolnika smo zbrali za analizo sprememb v limfocitov in makrofagov številk, skupaj s histološko in biokemične analize. Pepsin je bila izražena na različnih ravneh v tonzil tkiv iz vsake tonzil hipertrofijo. Pepsin-pozitivne celice so našli v kripta epitela, ki obkroža limfoidnega folikel z razvojem fibrozo, in tudi okoliških limfnega folikla, ki se soočajo z grobnico. In prav tako je pepsin obarvanje dobro povezana s poškodovano tonzil ploščatocelični epitelij in TGF-β1 in iNOS izražanja v oddelku tonzil. Poleg tega, pepsin in TGF-β1-pozitivne celice so sodelovali lokalizirani s CD68 pozitivnih celic v kripti in okoliških semenskih centrov. V primerjavi makrofagne odzivnosti na pepsina so periferne krvne mononuklearne celice (PBMNCs) občutno večji v prisotnosti aktiviranega pepsina v skupini otrok. Poleg tega so CD11C in CD163 pozitivnih celic znatno povečal, aktiviranim pepsina. Vendar to ni bilo videti za kulturo PBMNCs iz skupine odraslih.

Sklepi

limfociti in monociti so v zelo proliferativni države v tonzil hipertrofijo in povezana s povečanim izražanjem pro -inflammatory dejavniki, ki so posledica izpostavljenosti želodec refluksa pepsina

Navedba:. Kim JH, Jeong HS, Kim KM, Lee YJ, Jung MH, Park JJ, et al. (2016) Extra-požiralnika Pepsin od trebuhu Refluxate predstavljenih tonzil hipertrofijo. PLoS ONE 11 (4): e0152336. doi: 10,1371 /journal.pone.0152336

Urednik: Gernot Zissel, Universitatsklinikum Freiburg, Nemčija

Prejeto: 5. oktober 2015; Sprejeto: 11. marec 2016; Objavljeno: 8. april, 2016

Copyright: © 2016 Kim et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

razpoložljivost podatkov. Vse ustrezne podatki so v papirju in njene dodatne informacije datotek

Financiranje:. Ta študija je bila podprta z Basic Science Research Program, skozi National Research Foundation Koreji (NRF), ki ga je ministrstvo za znanost financira, IKT, in prihodnost načrtovanje (2013R1A1A1012542). Ta študija je bila dodatno podprta z vodilni tuji Research Institute Zaposlovanje program, prek nacionalnega Research Foundation Koreji (NRF), ki ga je Ministrstvo za šolstvo, znanost in tehnologijo (MEST) financira (2012K1A4A3053142)). To delo je bilo podprto s biomedcal raziskovalni inštitut sklada (GNUHBIF-2014-0009) iz National University Hospital Gyeongsang. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

tonzil hipertrofija je trenutno najpogostejši razlog za tonzilektomiji. Širitev mandljev pojavi zaradi absolutnega povečanja skupnega števila limfocitov v tkiva in povzroči povečanje volumna tkiva. [1, 2] Natančen mehanizem, s katerim pride do limfocitov spodbujanje in širjenje je treba še določiti. Je bilo sklepati, da antigenski stimulacija limfocitov tkiv vodi k povečanju števila limfocitno in aktivnosti. Prejšnji poskusi ugotavljanja patofiziološke mehanizme, ki so osredotočeni na mikrobioloških in imunoloških sprememb v razširjeni mandljev. Številne študije so poročali o možni vlogi bakterijskih organizmov v patogenezi tonzil hipertrofije. [5/3] Vendar pa je povečanje absolutnega števila limfocitov v tonzile brez klinične okužbe prej pokazale [2] in je odgovorna posebna antigeni za še niso bile ugotovljene te spremembe. je

Nedavna raziskava je obravnavala razmerje med extraesophageal refluksne bolezni in zgornjih motenj dihalnih poti. Kronični sinusitis [6], vnetje srednjega ušesa z izlivom [7-9] in obolenj grla so bili vsi preučevali z možnimi etiološke povezave do extraesophageal refluks. [10, 11] Refluxate vsebuje želodčnih encimov (pepsina in HCl), kot tudi duodeno-trebušne slinavke encimi (žolčnih kislin in tripsin). Vloga pepsina želodčnega soka kot del refluxate in interakcije z otorinolaringologijo sistemov ter ENT organov (ušesa, nos in grlo), je bil v veliki meri raziskano. [1, 10, 11]

Pepsin je encim pretvorimo iz pepsinogen, ki ga proizvaja glavni celica želodca in igra pomembno vlogo pri prebavi. Običajno se pepsina najti le v želodcu. Vendar, če pride do extraesophageal refluks se želodčna vsebina iz refluksu lahko doseže laryngopharynx in pepsina kot del želodca refluks je mogoče zaslediti v območjih grla in žrela. To je res tako, kot je Johnston et al. [12] je poročal, da je bil pepsin odkrita v zgornjih dihal sluznici in inducira vnetnih citokinov cikel, kar vnetne poškodbe na grla sluznice. Ti podatki so predlagali vloga refluktirali pepsina v strukturi obrambnega mehanizma imunskega v sluznico ali epitelijskih oblog in spodbujanje vnetnih povzročajo agentov. [12-15]

Podobno je v tonzilah, smo predpostavili, da je v želodcu pepsin v refluksom ima ključno vlogo pri njenem imunološke reakcije mandeljnov, da je izpostavljenost pepsin povzroča tonzil hipertrofijo. V tej študiji smo želeli, da bi našli povezavo med želodca pepsin in tonzil hipertrofije.

Materiali in metode

Etika izjava

Ta študija je bila odobrena s National University Hospital Gyeongsang Institutional Review Board (# GNUHIRB-2014-02-006). Pisni Informirano soglasje, smo dobili pri vseh bolnikih (ali starši) pred njihovo vključitev v študiji.

Študijski predmeti

Ta študija je bila izvedena na 84 bolnikih s klinično diagnozo tonzil hipertrofije. Obiščejo našo bolnišnico za odstranitev mandeljnov, ker trpijo zaradi kroničnega vnetja v mandeljnov ali smrčanje /apneja v spanju zaradi širitve tonzil. Vsi bolniki opravili zdravniški pregled za potrditev diagnoze tonzil hipertrofije ali kronične tonzilitis. Je povprečna velikost mandeljnov je bila ocena 2,5 v tonzil hipertrofija skupini in kronični tonzilitis skupini razred 1.0. (Tabela 1). Pridobili smo tudi mandeljnov tkiva od 54 otrok pred njihovo kirurško zdravljenje (41 dečkov in 13 deklic; razpon starosti od 4-16 let, povprečna starost 8 let) in od 30 odraslih (17 moških in 13 žensk, starostna skupina 17 let in več, pomeni, starost 29 let). Bolniki s sistemskimi boleznimi in druge klinične težave, niso bili vključeni v to študijo. Cela Odvzem krajnika je bila izvedena v splošni anesteziji metodi razkosavanjem in slabši del mandeljnov je za vzorčenje tkiva izbrana. None imela pooperacijskih zapletov

pripravek protein in analiza imunoblot

tkivnega izvlečki iz mandljev smo pripravili takole:. Mandeljne smo odstranili in homogenizirali v liznega pufra sestavljena iz PBS (pH 7,4), 1 % Triton X-100, 1 mM EDTA, ki vsebuje 10 mikrometrov leupeptin in 200 uM fenilmetilsulfonil fluorid. Za lizate večkrat sonificiramo 3 do 5 minut vsak zase in centrifugirali pri 12000 obratih na minuto za 20 minut pri 4 ° C. Supernatante zberemo in koncentracijo proteina vsakega lizata je bila določena z uporabo bicinchoninic kislina (BCA) protein analiznega kompleta (Pierce, Rockford IL, USA) po protokolu proizvajalca. Albumin govejega seruma uporabimo kot standard. Enaka količina beljakovin (50 ug) smo naložili na 10% natrijevega dodecil sulfata (SDS) poliakrilamidnem gelu. Po elektroforezi so proteini v gelu prenese na nitrocelulozno membrano (Schleicher & Schuell, Dassel, Nemčija). Membrane smo blokirali s 5% mlečne maščobe, ki niso v Tris pufrom, ki vsebuje 0,1% Tween-20. Blots bilo zaznati s primarnimi protitelesi, da poliklonski anti-pepsina A (sc-99.081, Santa Cruz Biotechnology CA, ZDA) pri 4 ° C preko noči. Kot kontrolo nakladanje, blots so ponovno zaznati z anti-β-aktina protitelesa (Sigma, St. Louis MO, ZDA). Primarno protitelo smo vizualizirali z uporabo sekundarnih protiteles (hrenovo peroksidazo konjugiranih kozje anti-kunčje IgG, 1: 10.000, Pierce) z ECL kit (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway NJ, USA)

Imunohistokemija
.

imunskim barvanjem smo izvedli na 5 mm debeline koronalnih odsekov-paraformaldehid fiksno in parafinskih vgrajeni oddelkov uporabo komplete-avidin Biotinilirana-hrenovo peroksidazo-kompleks (ABC, Vector Laboratories, Burlingame CA, ZDA). Po deparaffinization v ksilena smo sekcije rehidrirano z etanolom. Po spiranju v PBS, so odseki blokirani z 1% normalno kozjim seruma in nato obdelamo z anti-pepsina A (sc-99.081, Santa Cruz), iNOS, TGF-β1 in CD68 protitelesa kupili od Santa Cruz Biotechnology pri 4 ° C preko noči v navlaženi komori. Po spiranju v PBS, so inkubirali 90 minut pri sobni temperaturi s sekundarnim protiteles (Santa Cruz Biotechnology, biotin-konjugiranim anti-kunčje imunoglobulina G, 1: 200). Končno so bili odseki inkubirali z ABC 60 min pri sobni temperaturi, sprali v PBS in nato razvil z 0,027% 3,3'-diaminobenzidine tetrahidroklorid (Sigma) z 0,003% vodikovega peroksida. Oddelki so jih nasprotno s hematoksilinom (Sigma).

Zakonska imunofluorescenco

Za označevanje pepsina A-pozitivnih celic, je bil dvojni imunofluorescenčni izvedli na tonzil tkiva. Deparaffinization in iskanje antigen so bile izvedene. Nespecifična protitelesa vezavo smo blokirali v PBS z 0,1% normalno osla seruma (Vector Laboratories) in 0,3% Triton X-100 (Sigma) za 45 minut. Odseki smo nato inkubirali z anti-pepsin protitelesa (1: 100; sc-99.081, Santa Cruz) razredčimo v PBS, ki vsebuje 0,1% goveji serumski albumin (Sigma) pri 4 ° C preko noči. Po izpiranju, osel Cy3-konjugiranim anti-kunčjega IgG sekundarno protitelo (1: 100, EMD Millipore, Billerica MA, ZDA) je bila uporabljena za 1 uro pri sobni temperaturi. Dvojno označevanje po blokiranje v PBS, ki vsebuje 10% normalnega kozji serum in 0,3% Triton X-100, smo sekcije inkubirana z anti-CD68 (1: 100; v Santa Cruz) pri 4 ° C preko noči. Alexa488-konjugiranim anti-mišji IgG sekundarno protitelo (1: 100; Invitrogen, Carlsbad CA, ZDA) nato uporabi za 1 uro pri sobni temperaturi. Oddelki so bili nameščeni s proti bledenju raztopina, ki vsebuje 4 ", 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (Vector Laboratories) in opazili pod fluorescenčnim mikroskopom (Carl Zeiss mikroskopija GmbH, Jena, Nemčija). Za karakterizacijo CD68-pozitivnih celic, je dvojna imunofluorescenčni izvedemo, kot je opisano zgoraj. Za dvojno označevanje, anti-TGF-β1 (1: 100; v Santa Cruz) in anti-iNOS (1: 100, Santa Cruz), so bili uporabljeni in osel Cy3 konjugiranih anti-rabbit IgG sekundarna protitelesa (1: 100; EMD Millipore ) na CD68 obarvajo odsekov.

Povratne verižno reakcijo prepis-polimerazo (RT-PCR)

Total RNA je bila vzeta iz mandeljnov tkiv z metodo TRIzola v skladu s protokolom, ki ga priporoča proizvajalec ( GIBCO, Grand Island, NY). Enaka količina (5 ug) iz DNK brez celotne RNA iz vsakega vzorca smo pretvorili na cDNA z uporabo 200 U nadpisano II RT (Gibco, Grand Island, NY), v 20 ul reakcijski volumen. Reverzna transkripcija smo izvedli pri 22 ° C za 10 min pri 42 ° C 45 min in pri 95 ° C 5 min. Reakcijske produkte (2,0 ul) smo podvržemo pomnoževanje (Promega, Madison, WI, ZDA) v 50 ul reakcijske volumna. Vsak oligonukleotidov sekvence so bile: IL-1β (189 bp), 5'-TCATTGCTCAAGTGTCTGAAGC-3 '(čut) in 5'-TGGTCGGAGATTCGTAGC-3' (antisense); IL-6 (628 bp), 5'-ATGAACTCCTTCTCCACAAGCGC-3 '(čut) in 5'-GAAGAGCCCTCAGGCTGGACTG-3' (antisense); TNF-β (443 bp), 5'-AGTGACAAGCCTGTAGCCC-3 '(čut) in 5'-GCAATGATCCCAAAGTAGACC-3' (antisense). PCR smo izvedli z uporabo toplotne ciklerja BioRad skladu z navodili proizvajalca. Enake količine za pomnoževanje izdelkov, smo analizirali z 1,5% agarozno gelsko elektroforezo z 0,5 mg /ml etidijevega bromida barvanjem.

Flow citometrična analiza in in vitro
gojenje

Vse vzorce krvi so bile predelane v 2 urah po jemanju krvi. Periferne krvne mononuklearne celice (PBMNCs) izoliramo z gostoto gradientnim centrifugiranjem preko Ficoll gradientu (Sigma, St. Louis MO, ZDA) 25 minut pri 2300 obratih na minuto in speremo trikrat v PBS. PBMNCs na 1 × 10 ^{5 celic smo nato analizirali z citometrije toka. Ali je pepsin vključen v monocitov na makrofagov diferenciacijo, so se preostale celice nanese na kulturnih jedi v prisotnosti /ali odsotnosti aktivnega pepsina (Thermo znanstveno, Rockford IL, ZDA), ki vsebuje pogoje, monocitov kulture. Opredeliti raven makrofagne populacije, po 8 do 15 dni, smo celice poberemo in analiziramo s pretočno citometrijo z uporabo protiteles za CD11C in CD163. Vse celične kulture smo vzdrževali pri 37 ° C s 5% CO _{2 v navlaženi atmosferi}}

preživetja celic

RAW264.7 celice, smo kultivirali miš makrofagne podobno celično linijo. raziskati vpliv pepsina na makrofagne orožja. Celice smo obdelali v različnih koncentraciji pepsina (0,01-5 ug /ml) in viabilnost celic smo pregledali CCK-8 kit (štetje celic Komplet 8, Dojindo Molekularna Tech. Inc., Rockville, MD, ZDA). Celica preživetja v vsaki koncentraciji je bila predstavljena kot kratno spremembo. Gube spremembe izračunan kot razmerje končne vrednosti v vsakem prisotnosti pepsina na vrednost v odsotnosti pepsina (nastavljena kot "1"). Vrednosti so predstavljeni kot povprečje ± SEM. * P
< 0,05 vs. ustrezne odsotnosti pepsina (0 mg /ml).

In vitro
migracije test

Standardni enoplastna praske model, rana je bila uporabljena za opredelitev odzivnost makrofagov na pepsin. RAW264.7 celice smo zasejali v 6 vdolbinami tkivne kulture ploščah, kultiviranih sotočju, in plast ranjenih s praskanjem vzdolž površine kulture plastike tkiva z rezilom britve. Rezilo je pritisnjena navzdol v sredini posode, s čimer rezanje celične plasti in sočasno označevanje "rane mejo" na osnovnem plastike. Nato je rezilo nežno zdrsnila v isto smer za odstranitev polovico konfluentne celične plasti. "Ranjenci enoplastna" smo dvakrat sprali s fosfatnim pufrom pH 7,4 (PBS), ponovno nahranjene z 1 mM vsebujejo mitomicina mediju-seruma odvzeta in inkubiranih pri standardnih pogojih gojenja 24 ur.

Statistični analiza

Vsi podatki so prikazani kot povprečje ± SEM Primerjave med skupinami smo analizirali z dvema zimske t
preizkus. Verjetnost vrednosti ( P
) < 0.05 so bistvenega pomena.

Rezultati

Pepsin je bilo izraženo v tonzil

podatki imunoblot je pokazala, da je pepsin beljakovin, izražena kot eno skupino iz izvlečkov obeh tonzilah bolnikov z tonzil hipertrofijo. Pepsin je bil močno izražen kot več pasov v pozitivno kontrolo želodec tkivnih ekstraktov. Skoraj was no pepsina obarvanje opazili tudi v drugih tkivih tumor, bezgavke (ln), ščitnico (Thy), obušesni žlezi (parotidne g.), Žlezah slinavkah (SG) (slika 1A). Vse mandeljnov tkiv pokazal pozitiven signal za pepsina (slika 1B). Vendar so bile vrednosti zaznavnosti pepsina v tonzilah nekoliko drugačna v vsakem bolniku (slika 1B). Imunohistokemijsko je bila izvedena za identifikacijo pepsina-pozitivnih celic v tonzil tkivu. Pepsin-pozitivne celice selektivno najdete v spodnji površini epitela, v glavnem nahajajo v kripti (slika 1C-a in b), ki obdaja več negativnih zarodna centrov (slika 1C-c in d), in tudi okoli limfoidnega folikel s prekomerno razvijanje fibrozo (slika 1C-e in f). Želodcu odseki, ki se uporabljajo kot pozitivno kontrolo pokazala tipičen vzorec pepsinom barvanja, pretežno v žleznih celic (slika 2D-a), vendar ne v bezgavke (Slika 1D-b) in ščitnice (Slika 1D-c).

celice pepsina pozitivni bili odkriti v poškodovano tonzil ploščatocelični epitelijskega

za potrditev odnos z tonzil ploščatocelični škodo epitelijskega in refluksa, smo poskušali najti pepsina-pozitivnih celic v poškodovanega ali nepoškodovanega tonzil epitelnih arhitektura. Poškodovana ploščatocelični epitelij, nepravilna ali zdrobljen, so našli v eni ali obeh tonzilah tkivih tonzil hipertrofijo (slika 2A in 2D, spodaj). Pepsin-pozitivnih celic so odkrili pri poškodovanih mestih (desno vstaviti na sliki 2A, 2D, 2E in 2F) v primerjavi z normalno epitela (levo vstavite v Slika 2A in 2B). Še posebej so bili signali močno našel okoli shiz in poškodovane tonzil ploščatega epitela (prekinjenih črt na sliki 2C in 2E).

TGF-β1 in iNOS-pozitivne celice je bilo odkritih v tonzilah bolnikov z tonzil hipertrofijo

Imunohistokemijsko za TGF-β1 in iNOS je bila izvedena raziskati odnos med pepsin barvanjem in vnetja. Oba TGF-β1 in iNOS pozitivni signali so odkrili tudi v regijah, ki so podobni pepsin barvanjem, kot so v kripti epitela (slika 3A in 3B), ki obdaja zarodna centrov (slika 3C in 3D), in obdaja limfoidnega folikel s prekomerno razvijanje fibroza (Slika 3E in 3F).

pepsin in TGF-β1 so odkrili pri CD68 pozitivnih celic v tonzil hipertrofija tkiva v

Kot je opisano v uvodu, smo hipotezo, da pepsin obarvanje v Krajnik izvira iz želodca in lahko povezan z tonzil vnetja. Dvojna imunofluorescenco za CD68 je bila izvedena za označevanje pepsina-pozitivnih celic. CD68 je 110-Kd transmembranski glikoprotein in predstavnik označevalec človeških monocitov in tkiv makrofagov, ki sodelujejo pri vnetju. CD68-pozitivnih celic so očitno opazili v mandeljnov s tonzil hipertrofije (slika 4). Pomembno je omeniti, CD68 pozitivnih celic močno colocalized z pepsin in TGF β1-pozitivnih celic tako v kripti (slika 4A) in okoliških seme in centrov (slika 4B). V nasprotju z colocalization pepsina in CD68, pepsin niso sodelovali lokalizirati z B-limfocitov (CD20 pozitivnih) v folikularnih centrov in T-limfocitov (CD45) v interfollicular regijah (slika 4c). Ti podatki, kot tudi, da je prikazano na sliki 3, je predlagal, da bi se pepsin obarvanje povezano z vnetnih odzivov v mandeljnov bolnikov z tonzil hipertrofijo. In tudi, da razkrije glavni mehanizem tonzil škode, ki jo vnetnih mediatorjev, ki jih povzroča belih krvnih celic, vključno z PBMNCs in makrofagov, vrednosti tonzil IL-6 so IL-1β in TNF-α mRNA preučil RT-PCR (slika 4D). Zanimivo je, da so bili vsi ti izrazi v tonzil tkivih tonzil hipertrofijo. Ti podatki kažejo, da se lahko glavni mehanizem tonzil hipertrofije vnetnih mediatorjev povzroča.

Pepsin odpeljal monocitov bolnikih, ki izhajajo razlikovati za makrofagov

Za potrditev odnos pepsin barvanjem in makrofagov, smo gojili mononuklearne celice periferne krvi (PBMNCs) iz tonzilarnega hipertrofičnih pacientov v makrofagov gojišča (v prisotnosti ali odsotnosti aktiviranega pepsina) za 15 dni. Poleg tega smo ugotovili stopnjo monocit prebivalstva, in analizirali makrofagov fenotip s pretočno citometrijo. Človeški makrofagov so proizvedeni z diferenciacijo monocitov v tkivih. Igrajo ključno vlogo pri nespecifičnega obrambe (naravne imunosti), kot tudi za pomoč sproži določene obrambne mehanizme (adaptive odpornost), ki jih zaposluje druge imunske celice, kot so limfociti. Opredeljeni so lahko s pomočjo toka citometrijo značilno izražanje proteinov kot CD markerji vključno CD11C in CD163. Populacija monocitov izpeljati s strani toka in sprednjim razprševanja (slika 5A) smo v prisotnosti aktiviranega pepsina (aPepsin) znatno poveča v primerjavi z ne poveča na dan 8, in brez znatnega povečanja na dan 15 (slika 5B). Poleg tega smo raziskovali monocitov diferenciaciji makrofagov uporabo CD11C in CD163 protitelesa. V CD11C in CD163 pozitivnih celic so znatno povečali za aPepsin na 8. dan po gojenje. Ne pomen bilo mogoče najti v drugih pogojih (slika 5C). Vendar prebivalstvo monocit ni bila pomembna in tudi vrednosti za CD11C in CD163 pri odraslih skupini tako na dan 8. in 15. Ti podatki kažejo, da se pepsin lahko sodeluje pri diferenciaciji makrofagov in otroci s povečano želodčno refluksu so lahko bolj izpostavljeni učinkov pepsin okolje kot odrasli.

pepsin povzroča makrofagov preživetja in migracije

prav tako smo raziskali, ali je pepsin vključen v delovanje makrofagov. RAW264.7 celice smo gojili v prisotnosti ali odsotnosti aktiviranega pepsina 24 ur. Prišlo je do znatnega povečanja odmerka odvisno preživetje RAW264.7 celic, ki jih pepsina (slika 6A). Migracija RAW264.7 celic smo ga pepsina povzroča tudi tako praske rane in transwell migracija sistemske teste (slika 6B in 6C).

Pogovor

Ta študija je prvič pokazala, da je pepsin odkrita v hipertrofična mandeljnov pepsina-pozitivne celice lokaliziran v kripti epitela obdaja zarodno center, v limfnem folikle s čezmernim razvoju fibrozne videz. Predvsem je pepsin obarvanje povezana z izražanjem dejavnikov, povezanih z vnetjem, in pepsin in CD68 colocalized, in aktivira pepsin prišlo do diferenciacije monocitov v makrofage. [16] Te ugotovitve kažejo na morebitne nove patofizioloških mehanizmov osnovna tonzilarnega hipertrofija.

Intense vnetje je znan dejavnik tveganja za tonzil hipertrofijo. [17] TGF-β1 in iNOS so znani mediatorji vnetja. [18-20] v hipertrofičnih tonzile, povečanje števila celic T in B je pokazala pozitivno korelacijo z bakterijsko število in velikost Krajnik. [21, 22] V epidemioloških študijah, kajenje, alergijami in ponavljajoče se okužbe dihal, morda povezujejo s prehodno ali trajno hipertrofija limfnem tkivu. [22, 23] imunološke parametre, genetska predispozicija in lokalni limfocitov disfunkcija zdi, da igrajo vlogo v etiologiji ponavljajočimi tonzilitis in tonzil hipertrofije. [22, 24] Nekatere študije so pokazale, da je bila tonzilarnega hipertrofija povezana s povečano velikostjo limfnega folikla, ne pa števila foliklov [25] in prav tako je bila povezana s povečano težo tonzil, povečana folikle premer, površina in število. [26]

Ponavljajoče dražljaji, ki jih povzročitelji bolezni, med vnetnim procesom, privede do aktivacije monocitov in makrofagov. [27] citokini makrofagi izločajo spodbujanje imunske celice, in prav tako povzročijo širjenje endotelijskih celic in fibroblastov. [28] V času, imunološko aktivno tkivo se nadomesti s fibrozno tkivo. [28] V tej študiji, smo predpostavili, da je antigen pepsina in smo pripravili dve hipotezi, da pojasni opazovanje tonzil hipertrofije pri želodca refluks (slika 7). Eden od mehanizmov je lahko neposredna stimulacija limfocitov z pepsina za refluxate, ki so priznane kot antigenski. Drug možen mehanizem predvideva, pepsin povzročeno škodo epitela v tonzilarnega grobnicah, kar ima za posledico cryptitis od rezidenčnih bakterij s stalnim antigensko stimulacijo specializiranega kripta epitela. To bi privedlo do povečanja števila limfocitov in lahko igrajo vlogo pri tonzil hipertrofije.

Najprej pepsin prihaja v stik z epitela in predstavljeni na intraepitelijskih limfocitov, subepitelno limfociti, interfollicular in intrafollicular limfociti v tem vrstnem redu. Limfocitov nato razmnoževali v odgovor na pepsin deluje kot antigen, zaradi katere je tonzilarnega foliklov za povečavo in tonzil tkiva opraviti hipertrofijo. Druga možnost je, Krajnik tkiv makrofagov priznati, refluks posredovane pepsin na svoji površini celice kot tujek in se aktivirajo. Makrofagov aktivacija povzroči izločanje vnetnih citokinov, in te citokini sprožijo vnetje, pa tudi dodatno aktivacijo limfocitov, da je rezultat v tonzil hipertrofijo. Zdi se slednji hipoteza, da imajo večjo podporo kot nekdanjega saj, kot je prikazano na sliki 4, je bilo colocalized pepsina in CD68-pozitivnih celic pod površinskega epitelija, ki se nahaja v kripti (slika 4A) in prav tako obdaja limfoidnega folikel s čezmernim sledila fibrozo (sl 4B). Vendar pa je malo korelacija z pepsin in CD20 in CD45, kot označevalci B in T celic oziroma, so opazili v tonzil tkivu (slika 4C).

Ocenili smo tudi izražanje CD163 iz PBMNCs kulture z tonzil hipertrofijo . CD163 je izražena le zrelih makrofagov, vendar odsoten monociti. gojimo smo PBMNCs 8 do 15 dni v prisotnosti 10% FCS in 10 ng /ml M-CSF po standardnih razmer za kulturo človeških makrofagov. Rezultati in vitro
PBMNCs študije kulture pokazala, da so številke CD163 pozitivnih celic v skupini otrok bistveno višja, v prisotnosti aktivnega pepsina kot tudi CD11C-pozitivnih celic. Za primerjavo, ni bilo razlike v izražanju CD11C in CD163 iz kulture PBMNCs od odraslih (S1 Sl). Ti podatki kažejo, da je lahko PBMNC reakcija na aktivno pepsina pri otrocih bolj občutljiva kot pri odraslih. Čeprav ne moremo razložiti, ki je mehanizem pepsina povzroča vključeni v makrofagov diferenciacije, ne moremo izključiti, da bi lahko makrofagov razlikovanje sama pospeševanja povratni posredovano škodo Krajnik.

Glede na trenutne študije,-pepsin posredovano refluks povzroči ne le neposredna škoda na tonzil epitela, ampak tudi spodbudila tudi tonzilarnega makrofagov ali tonzilarnega epitelijskih celic izločajo kemokinov /citokine, ki privlači in aktivacijo imunske celice, ki jih povzroča nekaj škode na tonzil sluznice. Mikroskopsko vnetje, ki ga zaznamuje TGF β1 in iNOS izražanja v tonzil tkiva na (kripta epitela, ki obdaja zarodno center in limfnega folikla s prekomerno razvija fibrozne videz), je opaziti pri bolnikih s hudimi simptomi (podatki niso prikazani). To pomeni, da pepsina (in kislina) inducirano proizvodnjo IL-8 in drugih vnetnih mediatorjev, ki jih refluxate spodbujanje migracije in aktivacije levkocitov periferne krvi. [14] Te ugotovitve potrjujejo hipotezo, da je mehanizem posredujejo citokini odgovorna za Krajnik poškodba pri otrocih s tonzil hipertrofijo. Sluznica bolnikov z tonzil hipertrofijo proizvaja precej velike količine različnih citokinov. [29, 30] Te vnetnih mediatorjev aktivirati zaposlovanje imunske celice in prehod na lokacijah refluxate interakcije in lahko sodelujejo v patofiziologijo tonzil hipertrofije.

na podlagi ugotovitev iz literature in rezultatov v tej študiji, predlagamo, da bodo lokalne in sistemske aktivacije vnetnih poti spodbujanje limfocitov infiltracijo in širjenje (vključno s T celic), skupaj z diferenciacijo makrofagov in širjenje posledica tonzil hipertrofijo s povečano monocitno in limfocitna število celic. Če sedanje ugotovitve dokazujejo, da so točni, lahko pa nudijo izvedljive cilje za razvoj intervencijskih pristopov za zdravljenje ali preprečevanje tonzil hipertrofije pri otrocih. Kljub precejšnji dokaz za vnetnih mediatorjev in proliferacijo limfocitov v patogeneze tonzil hipertrofije, prepletanje preobčutljivostjo na pepsin refluksom in tonzil vnetja ostaja nejasno, v tej študiji. Nadaljnje raziskave so utemeljene, da bi bolje razumeli signalne poti, ki sodelujejo pri nastanku simptomov refluksa in vnetje ter opredeliti skupaj z razvojem novih terapevtskih pristopov.

Sklepi

Ugotovili smo, da so limfociti in monociti v zelo proliferativni država v tonzile z tonzil hipertrofijo in povezana s povečanim izražanjem pro-vnetnih dejavnikov, ki so posledica izpostavljenosti želodca refluks pepsina. Te ugotovitve kažejo na morebitne nove patofizioloških mehanizmov, povezanih tonzilarnega hipertrofijo. Iz naše vitro
podatkov, ugotovimo, da lahko obstaja možnost objektivno opredelitev mehanizmov, ki sodelujejo, da bi razvili posebne tretmaje za to indikacijo bolezni. Naši podatki kažejo, da so mehanizmi, povezane širjenja limfnem tkivu v tonzil hipertrofijo različni in lahko za prihodnje non-kirurški terapevtskih posegov ciljanje pepsin, ki lahko prepreči potrebo po tonzilektomiji, in vodi do involucijo od hipertrofičnih mandljev.

Podpora Informacije
S1 sl. Pretočna citometrična analiza monocit prebivalstva in monocit razlikovanje od PBMNCs odraslih s kronično tonzilitis.
Limfociti in monociti so bile ugotovljene s strani in naprej razprševanja. Limfociti in monociti bila potrjena tudi z obarvanjem s CD4 in CD8 in CD14 protiteles. PBMNCs gojimo v pogojih kulture makrofag specifično z ali brez aktivnim pepsinom za 15 dni. Monociti populacija je bila ugotovljena s strani in terminskih profilov sipanja v citometrije toka v vsakem stanju. Vsaka stopnja je bila v primerjavi z vrednostjo dan 8 celic v odsotnosti pepsina, ki so bile dane poljubno vrednost "1". Monocit do diferenciacije makrofagov so bile pregledane z obarvanjem z CD11C in CD163 protitelesa
doi:. 10,1371 /journal.pone.0152336.s001
(TIF)

• Plos ONE: Geometrijski Mešanje, peristaltiko in Geometrično faza v želodec
• Plos ONE: Črevesne Stem Cell Označevalci v intestinalno metaplazijo za želodec in Barrett Esophagus