PLoS One: Extra-nyelőcső Pepsin gyomor refluxátum promotált Mandula Hypertrophy

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

A gastrooesophagealis reflux társított számos patológiás körülmények között a felső légutak traktus. A gyomor pepszin belül reflux hozzájárul immunológiai reakciókat a mandula. Ebben a tanulmányban arra törekedtünk, hogy megtalálják a kapcsolatok között pepszin és a mandula túltengés. Katalógusa

módszerei és megtalálása katalógusa

tárni a fogalom, hogy a mandula túltengés volt köszönhető, hogy a pepszin által közvetített gyomorrefluxot mandulában túltengés. Ötvennégy gyermekek mandula túltengés és 30 felnőtt mandulagyulladás vettek előtt sebészi kezelés. Vér és tonsilla szövetek minden egyes beteg gyűjtöttünk az változásainak elemzése limfocita és makrofág számokat párosul hisztológiai és biokémiai elemzést. Pepszin fejezte különböző szinteken a mandulában szövetekben minden tonsillaris túltengés. Pepszin-pozitív sejteket találtunk a kripta hám, a környező limfoid tüsző fejlődő fibrózis, valamint a környező limfoid tüsző, hogy szembe a kripta. És azt is, pepszin festés jól korrelál sérült tonsillaris laphám és a TGF-β1 és iNOS expressziót a mandula részben. Ezen túlmenően, pepszin és a TGF-β1-pozitív sejtet együtt lokalizálódnak CD68-pozitív sejtek a kripta és a környező germinális központok. Összehasonlításképpen makrofág fogékonyság pepszin, perifériás vér mononukleáris sejteket (PBMNCs) voltak észrevehetően nagyobb jelenlétében aktivált pepszin a gyermek csoport. Továbbá, CD11c és CD163-pozitív sejtek szignifikánsan emelkedett aktivált pepszin. Azonban ez nem volt látható a kultúra PBMNCs a felnőtt csoport. Katalógusa

Következtetések katalógusa

A limfociták és monociták egy nagyon proliferatív állam az tonsillaris hipertrófia és összefüggésbe hozható a megnövekedett citokinek -inflammatory tényezők eredményeként kitettség gyomor reflux pepszin.

bevezető hivatkozás: Kim JH, Jeong HS, Kim KM, Lee YJ, Jung MH, Park JJ, et al. (2016) Extra-nyelőcső Pepsin gyomor refluxátum promotált Mandula túltengés. PLoS ONE 11 (4): e0152336. doi: 10,1371 /journal.pone.0152336 katalógusa

Szerkesztő: Gernot Zissel, Universitätsklinikum Freiburg, Németország katalógusa

Beérkezett: október 5, 2015; Elfogadva: március 11, 2016; Megjelent: április 8, 2016 katalógusa

Copyright: © 2016 Kim et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Az adatok elérhetősége: minden releváns adatok a papír és az azt támogató információs fájlokat. katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány által támogatott Basic Science Research Program, a Nemzeti Kutatási Alapítvány Korea (NRF) által finanszírozott, a Tudományos, ICT, és a jövő tervezése (2013R1A1A1012542). Ez a tanulmány támasztja alá az a vezető külföldi Kutatóintézet Recruitment Program, a Nemzeti Kutatási Alapítvány Korea (NRF) által finanszírozott, az Oktatási Minisztérium, Tudományos és Technológiai (MEST) (2012K1A4A3053142)). Ezt a munkát támogatja biomedcal kutatóintézet alap (GNUHBIF-2014-0009) a Kjongszang Nemzeti Egyetemi Kórház. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

Mandula túltengés jelenleg a leggyakoribb oka a mandulaműtét. Bővítése a mandulák miatt előfordul, hogy egy abszolút növekedése teljes számának limfociták a szövetben és az ebből eredő növekedését szövet térfogata. [1, 2] A pontos mechanizmus, amely révén limfocita stimulációs és burjánzás fordul elő, még meg kell határozni. Azt következtetni, hogy az antigén stimuláció az szövetben a limfociták növekedéséhez vezet a limfocita számot és az aktivitás. Előző kísérletek azonosítása kórélettani mechanizmusok középpontjában a mikrobiológiai és immunológiai változások megnagyobbodott mandulák. Számos tanulmány arról számolt be egy lehetséges szerepe a bakteriális organizmusok patogenezisében mandula túltengés. [3-5] azonban növekedett az abszolút száma limfociták belül a mandulák nélkül klinikai fertőzés korábban kimutatták [2], és a specifikus antigének felelős ezeket a változásokat nem sikerült azonosítani. katalógusa

a legújabb kutatások nézett a kapcsolatát extraesophageal reflux betegség és a felső légúti betegségek. Krónikus orrmelléküreg-gyulladás, [6] középfülgyulladás folyadékgyülemet [7-9] és gége betegségek mind vizsgálták lehetséges etiológiai Hivatkozások extraesophageal reflux. [10, 11] refluxátum tartalmaz gyomor enzimek (pepszin és HCI), valamint duodeno-hasnyálmirigy enzimek (epesavak és tripszin). A szerepe a pepszin a gyomornedvben részeként refluxátum és kölcsönhatás otolaryngology rendszerekben és ENT szervek (fül, orr és torok) már széles körben tanulmányozták. [1, 10, 11]

A pepszin egy enzim átalakított pepszinogén, ami által a fő sejtjének a gyomor, és fontos szerepet játszik az emésztésben. Normális esetben, pepszin csak található a gyomor tartalma. Azonban, ha extraesophageal reflux történik, a gyomor tartalma a reflux elérheti a laryngopharynx, és pepszin részeként a gyomor reflux lehet kimutatni a laryngopharyngeal területeken. Ez valóban ez a helyzet, mint Johnston et al. [12] beszámolt arról, hogy a pepszin volt kimutatható felső légúti nyálkahártya és indukál proinflammatorikus citokin ciklus, így a gyulladásos károsodást a gége nyálkahártya. Ezek az adatok arra utalnak, szerepe visszafolyatás mellett forraljuk pepszin a lebontásban az immunrendszer védekezőképességét a nyálkahártya vagy a hámszövet bélés és előmozdítását gyulladásos okozó szerekkel. [12-15] katalógusa

Hasonlóképpen a mandulában, azt feltételeztük, hogy a gyomorsav pepszin belül reflux kulcsszerepe van annak immunológiai reakció a mandula, és hogy a pepszin expozíció indukál mandula túltengés. Ebben a tanulmányban arra törekedtünk, hogy megtalálják a kapcsolatát gyomor pepszin és a mandula túltengés. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai nyilatkozat katalógusa

Ez a tanulmány által jóváhagyott Kjongszang National University Hospital intézményi Review Board (# GNUHIRB-2014-02-006). Írásos beleegyezését adta kapott minden beteg (vagy szüleik) előtt, hogy bekerült a vizsgálatba. Katalógusa

Vizsgálati alanyok katalógusa

Ezt a tanulmányt végeztünk 84 betegnél a klinikai diagnózis tonsillaris túltengés. Látogatják kórházba eltávolítása mandula, mert szenvednek a krónikus gyulladás mandula vagy horkolás /alvási apnoe miatt mandula bővítés. Minden betegnél fizikális vizsgálat a diagnózis megerősítésére a tonsillaris hipertrófia vagy krónikus mandulagyulladás. Az átlagos mérete mandula fokozatú volt 2,5 mandulában hipertrófia és fokozatok 1,0 krónikus mandulagyulladás csoportban. (Asztal 1). Megszereztük a mandula szöveteket a 54 gyerek előtt a sebészi kezelés (41 fiú és 13 lány; korosztály 4-16 év, átlagéletkor 8 év) és 30 felnőtt (17 férfi és 13 nő; életkor 17 és idősebb, azt jelenti, életkor 29 év). Szisztémás rendellenességek és más klinikai problémákat nem szerepelnek ebben a vizsgálatban. Egész mandulaműtét volt altatásban segítségével boncolási módszer és alsó részén, a mandula került kiválasztásra a szöveti mintavételre. Semelyik volt olyan posztoperatív komplikáció.

fehérje készítmény és immunoblot analízis

Tissue kivonatok mandulák a következőképpen állítjuk elő: a mandulákat eltávolítottuk és homogenizáltuk lízis pufferben alkotják PBS-ben (pH = 7,4), 1 % Triton X-100, 1 mM EDTA-t tartalmazó, 10 mM leupeptin, és 200 uM fenil-metil-fluorid. A lizátumokat szonikáltuk többször 3-5 percig minden egyes és centrifugáltuk 12.000 rpm-en 20 percen keresztül 4 ° C hőmérsékleten. A felülúszókat összegyűjtöttük, és a fehérje koncentráció minden lizátum segítségével határoztuk meg bicinchoninsav- (BCA) fehérje esszé kit (Pierce, Rockford IL, USA) alkalmazásával a gyártó protokollja. Szarvasmarha-szérumalbumint használtunk standardként. Egyenlő mennyiségű fehérjét (50 ug) felvittünk egy 10% -os nátrium-dodecil-szulfát (SDS) poliakrilamid-gél. Az elektroforézis után a fehérjék a gél átvittük nitrocellulóz membránra (Schleicher &Schuell, Dassel, Németország). A membránokat blokkoltuk 5% zsírmentes tej Tris-pufferolt sóoldatban, amely 0,1% Tween-20. A blottokat primer antitestekkel poliklonális anti-A pepszin A (SC-99081, Santa Cruz Biotechnology, CA, USA), 4 ° C-on egy éjszakán át. A terhelési kontrollként a blotokat újra megvizsgáltuk anti-β-aktin antitestet (Sigma, St. Louis, MO, USA). Az elsődleges antitestet tettük láthatóvá, szekunder ellenanyagok használatával (torma-peroxidáz-konjugált kecske anti-nyúl IgG-t, 1: 10000; Pierce) egy ECL-készlet (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway NJ, USA).

Immunhisztokémia katalógusa

immunfestést végeztünk 5 mm vastag koronális metszeteket paraformaldehid-fixált és paraffinba ágyazott az avidin-biotin-torma-peroxidáz-komplex készletek (ABC; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Miután deparaffinization xilolban, metszeteket rehidrálni etanolban. A mosás után PBS-ben, a metszeteket blokkoltuk 1% -os normál kecske szérummal és ezután egy anti-A pepszin A (SC-99081, Santa Cruz), iNOS, a TGF-β1, és CD68 antitestek vásárolt a Santa Cruz Biotechnology, 4 ° C egy éjszakán át nedves kamrában. Mosás után PBS-ben, inkubáltuk 90 percen át szobahőmérsékleten szekunder antitesttel (Santa Cruz Biotechnology, biotin-konjugált anti-nyúl immunglobulin g, 1: 200). Végül a metszeteket ABC 60 percen át szobahőmérsékleten keverjük, PBS-sel öblítjük, majd fejlesztették 0,027% 3,3'-diaminobenzidin-tetrahidroklorid (Sigma) és 0,003% hidrogén-peroxid. A metszeteket hematoxilinnel ellenfestettük (Sigma).

Dupla immunfluoreszcens festéssel

jellemzésére A pepszin A-pozitív sejteket, dupla immunfluoreszcenciával végeztük a mandula szövetekben. Deparaffinization és antigén feltárást végeztünk. A nem-specifikus antitest kötődés blokkoltuk PBS-ben 0,1% -os normál szamár-szérum (Vector Laboratories) és 0,3% Triton X-100 (Sigma) 45 percig. A metszeteket ezután inkubáltuk anti-A pepszin A-antitesttel (1: 100; SC-99081, Santa Cruz) hígítjuk PBS-ben, amely 0,1% szarvasmarha-szérumalbumint (Sigma), 4 ° C-on egy éjszakán át. Öblítés után, szamár Cy3-konjugált anti-nyúl IgG szekunder ellenanyagot (1: 100; EMD Millipore, Billerica MA, USA) alkalmaztunk 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A kettős jelölés, blokkolás után PBS-ben, amely 10% -os normál kecske szérummal és 0,3% Triton X-100, metszeteket anti-CD68 (1: 100; Santa Cruz), 4 ° C-on egy éjszakán át. Alexa488-konjugált anti-egér IgG másodlagos antitesttel (1: 100; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) visszük, 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A metszeteket anti-fading tartalmazó oldatot 4 ', 6-diamino-2-fenil-(DAPI) (Vector Laboratories), és a megfigyelt fluoreszcens mikroszkóp alatti (Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Németország). Jellemzésére CD68-pozitív sejteket, dupla immunfluoreszcenciával végeztük, ahogy fent leírtuk. A kettős jelölés, anti-TGF-β1 (1: 100; Santa Cruz) és anti-iNOS (1: 100; Santa Cruz) alkalmaztunk, majd szamár Cy3-konjugált anti-nyúl IgG szekunder ellenanyagot (1: 100; EMD Millipore ) a CD68-festett metszeteken.

reverz transzkripciós polimeráz-láncreakció (RT-PCR)

Teljes RNS-t extraháltunk a mandulából szövetekből a TRIzol szerinti eljárás a protokoll a gyártó által ajánlott ( GIBCO, Grand Island, NY). Egyenlő mennyiségű (5 ug) DNS-mentes teljes RNS minden mintából alakítunk cDNS felhasználásával 200 U SuperScript II RT (GIBCO, Grand Island, NY), egy 20 ul reakció-térfogatban. A reverz transzkripciót végeztünk 22 ° C-on 10 percig, 42 ° C hőmérsékleten 45 percig, és 95 ° C-on 5 percig. A reakció termékek (2,0 ul) vetettük alá PCR-amplifikáció (Promega, Madison, WI, USA) egy 50 ul reakció-térfogatban. Mindegyik primer szekvenciák a következők voltak: az IL-1β (189 bp), 5'-TCATTGCTCAAGTGTCTGAAGC-3 '(szensz), és 5'-TGGTCGGAGATTCGTAGC-3' (antiszensz); IL-6 (628 bp), 5'-ATGAACTCCTTCTCCACAAGCGC-3 '(szensz), és 5'-GAAGAGCCCTCAGGCTGGACTG-3' (antiszensz); A TNF-β (443 bp), 5'-AGTGACAAGCCTGTAGCCC-3 '(szensz), és 5'-GCAATGATCCCAAAGTAGACC-3' (antiszensz). A PCR-t a BioRad thermal cycler utasításainak megfelelően a gyártó által biztosított. Egyenlő térfogatú az amplifikációs termékek analizáltuk 1,5% agarózgél-elektroforézissel 0,5 mg /ml etidium-bromid festéssel tettük láthatóvá.

Áramlási citometriás analízis és a in vitro
termesztés

Minden vérmintát került feldolgozásra 2 órán belül bevétele után vérben. Perifériás vér mononukleáris sejteket (PBMNCs) izoláltunk sűrűséggradiens-centrifugálással Ficoll gradiens (Sigma, St. Louis, MO, USA) 25 percig 2300 rpm és háromszor mostuk PBS-ben. PBMNCs 1 × 10 ^{5 sejteket ezután áramlási citometriával analizáltuk. Függetlenül attól, hogy a pepszin részt vesz a monocita makrofág differenciálódás, a maradék sejteket a kultúrára edényeket jelenléte /vagy távollétében aktivált pepszin (Thermo Scientific, Rockford IL, USA) tartalmazó, a monocita tenyésztési körülmények között. Azonosításához a szint makrofág populáció után 8 és 15 nappal, a sejteket összegyűjtöttük és vizsgáltuk áramlási citometriával alkalmazásával antitest CD11c és CD163. Minden sejt tenyészeteket 37 ° C hőmérsékleten, 5% CO _{2-tartalmú nedvesített atmoszférában.}}

A sejtek életképességét

RAW264.7-sejtek, egér makrofág-szerű sejtvonal, tenyésztettük hatásának vizsgálatára a pepszin a makrofág proliferáció. A sejteket különböző koncentrációjú pepszin (0,01-5 ug /ml), és a sejtek életképességét vizsgáltuk CCK-8-készlet (sejtszámláló Kit-8, Dojindo Molecular Tech. Inc., Rockville, MD, USA). A sejtek életképességét minden koncentrációt is képviseltette szeres változás. A szeres változásokat számítjuk az arány a végső értéket az egyes pepszin jelenlétében, hogy az értéket a hiányában a pepszin (beállítva, mint "1"). Értékek szerepelnek, mint az átlag ± SEM. * P katalógusa < 0,05 vs. megfelelő hiányában pepszin (0 ng /ml). Katalógusa

In vitro katalógusa migrációs assay katalógusa

A hagyományos egyrétegű karcolás seb modell jellemzésére használt érzékenységének makrofágok pepszinnel való. RAW264.7 sejteket oltottunk 6 mérőhelyes szövettenyésztő lemezeken, tenyésztjük összefolyásig, és az egyrétegű tenyészeteket sebesült karcolás felülete mentén a szövettenyésztő műanyag egy borotvapengével. A penge nyomva a közepén az étel, így a vágás a sejtréteg és ezzel egyidejűleg a jelölést a "seb határ" az alapul szolgáló műanyag. Ezután a penge óvatosan csúszott egyirányban eltávolítani a fele a konfluens sejtréteg. A "sebesült egyrétegű" kétszer mostuk foszfáttal pufferolt sóoldattal, pH 7,4 (PBS), re-táplált 1 mM mitomicin-szérumot tartalmazó megfosztott tápközegben, és inkubáljuk standard tenyésztési körülmények között 24 órán át.

Statisztikai elemzés katalógusa

az összes adatot átlag ± SEM Az összehasonlítást a két csoport között elemeztük kétfarkú t katalógusa teszt. Valószínűségi értékek ( P katalógusa) < 0,05 szignifikánsnak tekintettük.

Eredmények

A pepszin-ben kifejezve a mandulában

immunoblot adatok azt mutatták, hogy a pepszin fehérje expresszálódott, mint egy egyetlen sávot származó kivonatok mind a mandula betegek a mandula túltengés. A pepszin-ben erősen expresszálódik a többszörös sávok a pozitív kontroll a gyomor szöveti kivonatok. Gyakorlatilag nincs pepszin volt festődés más szövetekben, beleértve a tumor, a nyirokcsomó (LN), a pajzsmirigy (Thy), fültőmirigy (parotis g.), Nyálmirigy (SG) (1A ábra). Minden a mandula szövetek mutatott pozitív jel pepszin (1B ábra). Azonban, felderítése szintje pepszin a mandulában kissé eltér minden egyes beteg esetében (1B ábra). Immunhisztokémiai festéssel végeztünk, hogy azonosítsa a pepszin-pozitív sejtek a mandula szövetben. A pepszin-pozitív sejteket szelektíven találhatók a felszín alatt epithelium, elsősorban található a kripta (ábra 1C-a és b), a környező a több negatív csíraközpontok (ábra 1C-C és D), valamint a környező a limfoid tüsző túlzott fejlődő fibrózis (ábra 1C-e és f). Gyomor szakaszok használunk pozitív kontroll mutatott tipikus mintázata pepszin festődés, elsősorban a mirigyes sejtek (ábra 2D-a), de nem a nyirokcsomó (ábra 1D-B) és a pajzsmirigy (ábra 1D-C).

a pepszin-pozitív sejteket a sérült mandulában laphám katalógusa

megerősítéséhez kapcsolatban mandula laphám károk és reflux, kerestünk pepszin-pozitív sejtek a sérült vagy ép tonsillaris epithelialis építészet. Sérült laphám, szabálytalan vagy törve, találtak a mandulában szövetek tonsillaris hypertrophia (2A és 2D, alább). A pepszin-pozitív sejtet találtak a sérült helyek (jobb beilleszteni a 2A ábra, 2D, 2E és 2F), összehasonlítva a normál epithelium (bal inszert ábrán a 2A és 2B). Különösen a jeleket erősen talált körül hasadékok és sérült tonsilla laphám (szaggatott vonalak ábrán 2C és 2E).

TGF-β1 és iNOS-pozitív sejtet találtak a mandulában betegek mandula hipertrófia

az immunhisztokémiai TGF-β1 és iNOS végeztünk, hogy vizsgálja meg a kapcsolat a pepszin festés és a gyulladást. Mindkét TGF-β1 és iNOS-pozitív jeleket is detektáltunk régiók hasonló pepszin festéssel, például a kripta epithelium (ábra a 3A és 3B ábrák), a környező a germinális központ (3C és 3D), és a környező a limfoid tüsző túlzott fejlődő fibrózis (ábra 3E és 3F).

a pepszin és a TGF-β1 detektáltunk CD68-pozitív sejtek a mandulában hipertrófia szövet

Amint azt a Bevezetés, feltételeztük, hogy a pepszin festés a mandula származik a gyomor és a kapcsolatos lehet a mandula-gyulladás. Dupla immunfluoreszcens festéssel CD68 végeztünk, hogy jellemezzük a pepszin-pozitív sejteket. CD68 egy 110 Kd transzmembrán glikoprotein és egy reprezentatív marker humán monociták és a szöveti makrofágok részt gyulladás. CD68-pozitív sejteket világosan megfigyelhető a mandulában a tonsilla hipertrófia (4. ábra). Megemlítjük, CD68-pozitív sejtek erősen kolokalizálódott pepszin és a TGF-β1-pozitív sejtek, mind a kripta (ábra 4A) és a környező csíraközpontok (4.b ábra). Ellentétben kolokalizációját pepszin és CD68, pepszin nem működött lokalizálni a B-limfociták (CD20 pozitív) a follikuláris központok és a T-limfociták (CD45) az interfolikkuláris régiókban (4c). Ezek az adatok, valamint, hogy a 3. ábrán bemutatott azt javasolta, hogy a pepszin festés lehetnek kapcsolatban a gyulladásos válaszokat, a mandulában betegek mandula túltengés. És azt is, hogy felfedje a fő mechanizmus a mandula sérülés gyulladásos mediátorok által közvetített fehérvérsejtek, beleértve a PBMNCs és makrofágok szinteket tonsilla IL-6, az IL-1β és a TNF-α mRNS vizsgáltuk RT-PCR (ábra 4d). Érdekes módon, az összes ilyen fejeztük ki a mandulában szövetekben tonsillaris túltengés. Ezek az adatok arra utalnak, hogy a legfőbb mechanizmusa tonsillaris túltengés okozhatja gyulladásos mediátorok. Katalógusa

A pepszin vezette a betegek származó monociták differenciálódni makrofágok katalógusa

Annak igazolására viszonyának pepszin festés és makrofágok mi termesztett perifériás vér mononukleáris sejtek (PBMNCs) mandulaextraktumokból hipertrófiás betegek makrofág táptalajt (jelenlétében vagy távollétében aktivált pepszin) 15 napig. Mi továbbá meghatározni szintje monocita populáció, és elemezték a makrofágok fenotípus áramlási citometriával. Humán makrofágok által termelt differenciálódását monociták a szövetekben. Ezek kritikus szerepet játszanak a nem-specifikus védelmi (veleszületett immunitás), és segíthet kezdeményez specifikus védekező mechanizmusok (adaptív immunitás) felvételével más immunsejtek, mint például limfocitákban. Ezek alkalmazásával azonosíthatók áramlási citometriával saját egyedi fehérjék expresszióját CD markerek, beleértve a CD11c és CD163. A lakosság monociták levezethető flow oldalról és forward scatter (5A) szignifikánsan nagyobb volt a jelenlétében aktivált pepszin (aPepsin) képest nem nőtt a 8. napon, és nincs jelentős növekedés a 15. napon (5B). Ezen kívül vizsgáltuk a monocita makrofág differenciálódás a CD11c és CD163 antitesteket. A CD11c és a CD163-pozitív sejtek szignifikánsan emelkedett aPepsin 8. napon tenyésztés után. Nincs jelentősége találtak egyéb feltételek (ábra 5C). Azonban a monocita populáció nem volt jelentős, valamint szintek CD11c és CD163 felnőtt csoportban mindkét napon 8 és 15. Ezek az adatok arra utalnak, hogy a pepszin potenciálisan részt makrofág differenciálódás és gyermekek fokozott gyomor reflux lehet jobban ki vannak téve a hatásait pepszin környezetet, mint a felnőttek. katalógusa

a pepszin hatására makrofág életképesség és migráció katalógusa

Azt is vizsgáltuk, hogy a pepszin részt a makrofágok működését. RAW264.7 sejteket jelenlétében vagy hiányában az aktivált pepszin 24 órán át. Volt egy jelentős dózis-függő növekedése RAW264.7 sejtek életképességét pepszin (ábra 6a). Migrációja RAW264.7 sejtek által kiváltott is pepszin mind karcolás tekercses transzwell migrációs rendszer esszék (6B és 6C). Katalógusa

Vita katalógusa

Ez a vizsgálat azt mutatta, hogy az első pepszin kimutatható volt a hipertrófiás mandula és pepszin-pozitív sejteket lokalizálódik a kripta hám körülvevő germinális központ, és a lymphoid folliculus túlzott fejlődő fibrotikus megjelenését. Nevezetesen, pepszin festődést korrelált expressziója gyulladással kapcsolatos faktorok és pepszin és CD68 kolokalizált, és aktivált pepszin vezetett differenciálódását monociták a makrofágok. [16] Ezek az eredmények rámutatnak a potenciálisan új patofiziológiai mechanizmusok mögöttes tonsilla túltengés.

Intense gyulladás egy ismert kockázati tényezője mandula túltengés. [17] a TGF-β1 és iNOS ismert mediátorok a gyulladás. [18-20] hipertrófiás mandulák, a növekedés a T- és B-sejtek száma pozitív korrelációt mutatott a bakteriális számít, és mandula méretű. [21, 22] epidemiológiai vizsgálatokban, a dohányzás, az allergia és visszatérő légúti fertőzések lehet társítani átmeneti vagy tartós hypertrophiájának limfoid szövet. [22, 23] Immunológiai paraméterek, a genetikai hajlam és a helyi limfocita diszfunkció úgy tűnik, hogy játsszon szerepe a etiológiájában visszatérő mandulagyulladás és tonsilla hipertrófia. [22, 24] Egyes tanulmányok kimutatták, hogy a mandula hipertrófia társult fokozott limfoid tüsző méretű, de nem a tüszők számát [25], és szintén kapcsolódik megnövekedett mandulában súly, fokozott tüsző átmérő, terület és száma. [26]

az ismétlődő ingerek által kórokozókkal, közben a gyulladásos folyamat vezet aktiválását monociták és a makrofágok. [27] a citokinek által szekretált makrofágok serkentik az immunsejteket, és szintén okozhat proliferációt az endoteliális sejtek és a fibroblasztok. [28] az idő, immunológiailag aktív szöveti helyébe fibrotikus szövet. [28] Ebben a vizsgálatban azt feltételeztük, hogy az antigént pepszint és mi előadott két hipotézis magyarázza a megfigyelés a tonsillaris hipertrófiája gyomorrefluxot (7. ábra). Az egyik mechanizmus lehet közvetlen ingerlése a limfociták pepszin az refluxátum felismert antigén. Egy másik lehetséges mechanizmus a pepszin okozta sérülés a hám a tonsillaris kripták, ami cryptitis honos baktériumok folyamatos antigén stimulációt a szakosított kripta hám. Ezek vezetne számának növekedése a limfociták és szerepet játszhat a tonsillaris hipertrófia.

Kezdetben pepszin érintkezésbe kerül a hám és bemutatják a intraepiteliális limfociták, a subepithelialis limfociták, interfollikuláris és intrafollikuláris limfociták , ebben a sorrendben. A limfocitákat ezután adott válaszban megnyilvánuló proliferációs pepszin eljáró egy antigént, ami a tonsillaris tüszők nagyításához, és a mandula szövetek alávetni túltengés. Alternatív módon, mandula-szöveti makrofágok felismerik a reflux-mediált pepszin a sejtfelszínükön, mint idegen test és aktiválva vannak. Makrofág aktiválás hatására szekréció proinflammatorikus citokinek, és ezek a citokinek indukálnak gyulladás, valamint további limfocita aktiválás, amelyek eredményeként tonsillaris hipertrófia. Ez utóbbi hipotézist, úgy tűnik, több támogatást, mint az előbbi, mivel, amint az a 4. ábrán, pepszin és CD68-pozitív sejteket kolokalizált a felszín alatt hám található a kripta (ábra 4a) és a szintén körülvevő limfoid tüsző túlzott követő fibrózis (ábra 4B). Ugyanakkor kevés összefüggést pepszin és CD20 és CD45, mint markerei B- és T-sejtek rendre volt megfigyelhető a mandulában szövetben (ábra 4C).

Azt is értékelték a kifejezés a CD163 származó PBMNCs kultúra tonsillaris hipertrófia . CD163 fejezzük csak érett makrofágok, de hiányzik a monociták. Mi tenyésztjük PBMNCs 8 és 15 nap jelenlétében 10% FCS-t és 10 ng /ml M-CSF-fel, a következő standard körülmények a kultúra humán makrofágok. Eredményei in vitro katalógusa PBMNCs végzett vizsgálatok azt mutatták, hogy a gyermek csoport, CD163-pozitív sejtek számát szignifikánsan magasabbak voltak a jelenlétében aktivált pepszin valamint CD11c pozitív sejteket. Összehasonlításképpen, nem volt különbség a kifejezés a CD11c és CD163 a kultúra PBMNCs felnőttektől (S1 ábra). Ezek az adatok azt javasolta, hogy a PBMNC reakció aktivált pepszin gyermekek lehetnek érzékenyebbek, mint a felnőttek. Bár nem tudjuk megmagyarázni, mely a pepszin kiváltott mechanizmus vesz részt makrofág differenciálódás, nem zárhatjuk ki, hogy a makrofágok differenciálódása maga meggyorsíthatja reflux közvetített mandula károkat. Katalógusa

A jelenlegi tanulmány, pepszin által közvetített reflux okozhat nem csak közvetlen kárt a tonsillaris hám, hanem ösztönözte a tonsillaris makrofágok vagy a mandula hámsejtek, hogy titkos kemokinek /citokinek, vonzott, és aktiválta az immunsejtek által közvetített egyes károk a mandula nyálkahártyát. Mikroszkópos gyulladás, azzal jellemezve, TGF-β1 és iNOS expressziót a mandulában szövetben (kripta epithelium, a környező a germinális központ, és a limfoid tüsző túlzott fejlődő fibrotikus megjelenés), figyelhető meg súlyos tünetek (az adatokat nem mutatjuk be). Ez azt jelenti, hogy a pepszin (és sav) által kiváltott IL-8, és egyéb gyulladásos mediátorok által a refluxátum elősegítik migrációját és aktiválását a perifériás vér leukociták. [14] Ezek az eredmények alátámasztják a hipotézist, hogy egy citokin-mediált mechanizmus felelős a mandula sérülés gyerekeknél tonsillaris túltengés. A nyálkahártya betegek tonsillaris hypertrophia Lényegesen nagy mennyiségű különböző citokinek. [29, 30] Ezek a gyulladásos mediátorok aktiválják az immunsejtek toborzás és a migráció a helyszínek refluxátum interakció és be lehet vonni kórélettanáért mandula túltengés. Katalógusa

az eredmények alapján az irodalomból és a mi eredmények ebben a vizsgálatban, azt javasoljuk, hogy a helyi és szisztémás aktiválásának gyulladásos útvonalak elősegíti limfocita infiltráció és proliferációt (beleértve a T-sejtek), valamint makrofág differenciálódását és proliferációját eredményezve tonsillaris hipertrófia a megnövekedett monocitás és limfocita sejtek számát. Ha a jelenlegi eredmények bizonyítják, hogy pontos legyen, akkor olyan életképes cél kidolgozásával beavatkozással megközelítések kezelésére vagy megelőzésére tonsilla hipertrófia gyermekeknél. Annak ellenére, hogy jelentős bizonyítékok gyulladásos mediátorok, limfocita proliferáció patogenezisében mandula megnagyobbodás összjátéka túlérzékenység pepszin reflux és a mandula gyulladás tisztázatlan maradt ebben a vizsgálatban. További vizsgálatok szükségesek, hogy jobban megértsék a részt vevő jelátviteli utak közrejátszik a reflux tüneteinek és a gyulladás és azonosítására, valamint a fejlődő új terápiás megközelítéseket. Katalógusa

Következtetések katalógusa

Megállapítottuk, hogy a limfociták és monociták vannak nagyon proliferatív állam a mandulák a tonsillaris hipertrófia és összefüggésbe hozható a megnövekedett expresszióját pro-gyulladásos tényezők eredményeként kitettség gyomor reflux pepszin. Ezek az eredmények rámutatnak a potenciálisan új patofiziológiai mechanizmusa tonsillaris túltengés. A mi in vitro katalógusa adatokat hozunk létre, hogy lehet azt a lehetőséget objektív jellemzése mechanizmusok kidolgozása érdekében specifikus kezelés a betegség jele. Adataink azt javasolta, hogy a hatásmechanizmust limfoid szövet proliferáció tonsillaris hypertrophia különbözőek, és lehetővé teszik a jövő nem műtéti terápiás beavatkozások célzó pepszin, hogy szükségtelenné válhat egy mandulaműtét, és ami a sorvadást a hipertrófiás mandulák. Katalógusa

Támogató Információs katalógusa S1 ábra. Áramlási citometriás vizsgálata monocita lakosság és a monociták differenciálódás PBMNCs felnőttek krónikus mandulagyulladás.
Limfociták és monociták azonosítottak oldalsó és forward scatter. A limfocitákat és a monocitákat is megerősítette festéssel CD4 és CD8 és CD14 antitesteket. PBMNCs tenyésztést makrofág-specifikus tenyésztési körülmények vagy a nélkül aktivált pepszin 15 nap. Monociták lakosság azonosították oldalról és forward scatter profilok áramlási citometriával minden feltételt. Minden szinten összehasonlítottuk az érték a nap 8-sejtek hiányában pepszin, hogy kaptak egy tetszőleges értéke "1". Monocita makrofág differenciálódás vizsgáltuk festéssel CD11c és CD163 antitestek. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0152336.s001 katalógusa (TIF) hotelben

• PLoS One: Geometriai Keverés, perisztaltika, és a geometriai fázis a gyomor
• PLoS One: Bél őssejtmarker az intestinalis metaplasia a gyomor és a Barrett-nyelőcső