PLoS ONE: dodatnu jednjaka pepsinom iz želuca Refluxate promoviranih Tonzile Hypertrophy

Sažetak pregled

Pozadina pregled

Gastroezofagealna refluksna je povezana s brojnim patološkim uvjetima gornji aerodigestivni trakta. Želučani pepsin u refluks doprinosi imunološkim reakcijama u tonzila. U ovoj studiji željeli smo pronaći odnosa između pepsin i krajnika hipertrofije. Pregled

metode i pronalaženje pregled

Mi smo istražili ideju da li krajnika hipertrofija je zbog refluksa želučanog pepsinskom posredovane u tonzila hipertrofije. Pedeset i četiri djece s tonzila hipertrofije i 30 odrasle osobe s angina su regrutirani prije kirurškog liječenja. Krv i krajnika tkiva iz svakog pacijenta su sakupljene za analizu promjena limfocita i makrofaga brojeva povezanih s histološke i biokemijske analize. Pepsin se izrazio u različitim razinama u tonzila tkiva iz svakog krajnika hipertrofije. Pepsin-pozitivne stanice pronađene su u kripti epitela, oko limfnog folikule s razvoju fibroze, kao i oko limfnog folikul koji suočen kriptu. I također, pepsin bojenje dobro je povezana sa oštećenim krajnika pločastog epitela i TGF-β1 i iNOS izražavanja u odjeljku tonzila. Osim toga, pepsin i TGF-β1-pozitivne stanice su ko-lokalizirana sa CD68-pozitivnih stanica u grobnice i okolnih germinativnim centrima. U odnosu makrofaga reagiranje na pepsina, mononuklearne stanice periferne krvi (PBMNCs) su znatno veće u prisustvu aktiviranog pepsina u dječje skupini. Nadalje, CD11c i CD163-pozitivne stanice značajno su se povećale za aktivnim pepsina. Međutim, to nije bio viđen za kulturu PBMNCs od odraslih grupe. Pregled

Zaključci pregled

limfociti i monociti su u vrlo proliferativni države u krajnika hipertrofije i povezana je s povećanom ekspresijom pro -inflammatory faktori kao rezultat izloženosti želudac refluks pepsina pregled

Izvor:. Kim JH, Jeong HS Kim KM, Lee YJ, Jung MH, Park JJ, i sur. (2016) za dodatnu jednjaka pepsinom iz želuca Refluxate promoviranih Tonzile hipertrofija. PLoS ONE 11 (4): e0152336. doi: 10,1371 /journal.pone.0152336 pregled

Urednik: Gernot Zissel, Universitatsklinikum Freiburg, Njemačka pregled

Primljeno: 5. listopada 2015. godine; Prihvaćeno: 11. ožujka 2016; Objavljeno: 8. travnja 2016 pregled

Copyright: © 2016 Kim et al. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

dostupnost podataka. Sve relevantne podaci u radu i njegove popratne podatke datoteka pregled

Financiranje:. Ova studija je podržan od strane Osnovnog Science Research programa, kroz National Research Foundation Koreje (NRF), financiranog od strane Ministarstva znanosti, ICT, i buduće planiranje (2013R1A1A1012542). Ova studija je dodatno podržan od strane vodećih inozemnih Istraživačkog instituta Zapošljavanje programa, kroz National Research Foundation Koreje (NRF), financiran od Ministarstva obrazovanja, znanosti i tehnologije (MONT) (2012K1A4A3053142)). Ovaj rad je podržan od strane biomedcal Research Institute fonda (GNUHBIF-2014-0009) iz Gyeongsang Nacionalne i sveučilišne bolnice. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Tonzile hipertrofija je trenutno najčešći razlog za tonzilektomiji. Proširenje krajnika nastaje zbog apsolutnog porasta ukupnog broja limfocita u tkiva i rezultira povećanjem obujma tkiva. [1, 2] Točan mehanizam kojim limfocita stimulacija i proliferaciju javlja se tek treba odrediti. To je zaključiti da antigeni stimulacija limfocita tkiva dovodi do povećanja broja limfocitne i aktivnosti. Prethodni pokušaji identificiranja patofizioloških mehanizama su usmjerene na mikrobiološke i imunološke promjene u proširenoj tonzila. Mnoga istraživanja su izvijestili moguću ulogu bakterijskih organizama u patogenezi tonzila hipertrofije. [3-5], ali povećanje apsolutnog broja limfocita unutar krajnika bez kliničkih infekcija prethodno prikazano [2], a specifičnih antigena odgovorne za još nisu identificirani te promjene. pregled

Nedavno istraživanje je pogledao odnos između extraesophageal refluksne bolesti i poremećaja gornjih dišnih putova. Kronični sinusitis [6], upala srednjeg uha sa izljev [7-9] i bolesti grkljana svi su proučavali s mogućim etioloških linkove na extraesophageal refluks. [10, 11] Refluxate sadrži želučanog enzima (pepsin i HCl), kao i duodeno gušterače enzimi (žučne kiseline i tripsin). Uloga pepsina u želučanom soku kao dio refluxate i interakciji s otorinolaringologije sustava i na ORL organe (uho, nos i grlo) je opsežno studirao. [1, 10, 11] pregled

pepsinom je enzim pretvorena iz pepsinogen, koji je proizveden od strane glavnog stanice želuca, i igra važnu ulogu u probavi. Normalno, pepsin je pronađen samo u sadržaju želuca. Međutim, u slučaju extraesophageal refluks, sadržaj želuca s refluksom može doći do laryngopharynx, pepsin kao dio želuca refluks može se otkriti u laryngopharyngeal područjima. To doista slučaj, kao Johnston et al. [12] izvijestili da pepsin je otkriven u gornjim dišnim putovima sluznici inducira proinflamatornog citokina ciklusa, što je rezultiralo upalnih oštećenja u grkljana sluznice. Ovi podaci ukazuju na ulogu pod refluksom pepsina u slom imunološkog obrambenog mehanizma u sluznicu ili epitelnih obloga i promicanje upalnih uzročnika. [12-15] pregled

Isto tako za tonzila, pretpostavili smo da je želučana pepsin u refluks ima ključnu ulogu u njegovom imunološke reakcije od tonzila i da izlaganje pepsin izaziva krajnik hipertrofiju. U ovoj studiji željeli smo pronašli vezu između želuca pepsin i krajnika hipertrofije. Pregled

Materijali i metode pregled

Etika izjava pregled

Ova studija je odobren od strane Gyeongsang Nacionalne sveučilišne bolnice Institutional Review Board (# GNUHIRB-2014-02-006). Pismeni informirani pristanak dobiven je od svih pacijenata (ili roditelja), prije njihovog uključivanja u studiju. Pregled

Ispitanici pregled

Ovo istraživanje je provedeno na 84 pacijenata s kliničkom dijagnozom krajnika hipertrofije. Oni posjetite našu bolnicu za uklanjanje tonzila, jer oni pate od kronične upale u tonzila ili hrkanje /apneja za vrijeme spavanja zbog tonzila proširenja. Svi pacijenti podvrgnuti fizički pregled kako bi potvrdili dijagnozu krajnika hipertrofija ili kronične upale krajnika. Prosječna veličina tonzile bila stupnja 2,5 na krajnik hipertrofija skupini i stupanj 1.0 kroničnog tonzilitisa skupini. (Tablica 1). dobili smo tonzila tkiva od 54 djece prije njihovog kirurško liječenje (41 dječaka i 13 djevojčica, raspon dobi 4-16 godina, prosječne dobi od 8 godina) i od 30 odraslih osoba (17 muškaraca i 13 žena, raspon dobi 17 i više godina, znači dob 29 godina). Pacijenti s sustavne bolesti i drugih kliničkih problema nisu bili uključeni u ovu studiju. Cijeli tonzilektomije se izvodi u općoj anesteziji pomoću disekcije metodu i lošiji dio tonzile su odabrane za uzorkovanje tkiva. Nitko nije imao postoperativni komplikaciju pregled

priprema Protein i imunoblot analiza pregled

Ekstrakti tkiva iz krajnika su pripravljeni kako slijedi: a. Tonzile su uklonjeni i homogenizirani u puferu za lizu čine PBS (pH 7,4), 1 % Triton X-100, 1 mM EDTA koji sadrži 10 uM leupeptina i 200 uM fenilmetilsulfonil fluorid. Lizat se podvrgavaju ultrazvuku nekoliko puta tijekom 3 do 5 minuta, svaki i centrifugira na 12.000 okretaja u minuti tijekom 20 minuta na 4 ° C. Supernatanti se skupe i koncentracija proteina svakog lizata je određena koristeći bicinkroniničnoj kiselini (BCA) komplet za određivanje proteina (Pierce, Rockford IL, USA) prema protokolu proizvođača. Albumin goveđeg seruma se koristi kao standard. Iste količine proteina (50 ug) su nanesene na 10% natrij dodecil sulfata (SDS), poliakrilamid gelu. Nakon elektroforeze, proteina u gelu se prenesu na nitroceluloznu membranu (Schleicher &Schuell, Dassel, Njemačka). Membrane su blokirane s 5% nemasnog mlijeka u Tris-puferiranoj fiziološkoj otopini koja sadrži 0,1% Tween-20. Ugrušci su sondirani s primarnim antitijelima na poliklonalna anti-A (pepsin sc-99.081, Santa Cruz Biotechnology CA, USA) na 4 ° C preko noći. Kao kontrola doziranja, mrlje su ponovno ispitane sa anti-β-aktin antitijelo (Sigma, St. Louis MO, USA). Primarni protutijelo vizualizira pomoću sekundarnog protutijela (peroksidaza konjugirani kozji anti-zečji IgG, 1: 10.000, Pierce) s ECL kita (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway NJ, USA) pregled

Imunohistokemija pregled.

Imunobojenje je izvršeno na 5 mm debele koronarne sekcije paraformaldehida-fiksne i parafin uklopljenih sekcije pomoću avidinom biotiniliranog peroksidaza-kompleks pribora (ABC, Vector Laboratories, Burlingame CA, USA). Nakon deparaffinization ksilena, sekcije su rehidrirane etanolom. Nakon ispiranja u PBS, sekcije su blokirane s 1% normalni kozji serum i zatim se pomiješa s anti-pepsin A (sc-99.081, Santa Cruz), iNOS, TGF-β1 i CD68 antitijela nabavljeni od Santa Cruz Biotechnology, na 4 ° C preko noći u vlažnoj komori. Nakon ispiranja u PBS, su inkubirani tijekom 90 min na sobnoj temperaturi sa sekundarnim antitijelima (Santa Cruz Biotechnology, biotin-konjugirana anti-zečja imunoglobulina G, 1: 200). Konačno, rezovi su inkubirani s ABC 60 minuta na sobnoj temperaturi, ispere u PBS i zatim razvijena sa 0.027% 3,3'-diaminobenzidin tetrahidrokloridom (Sigma) sa 0.003% vodikovog peroksida. Rezovi su prebrojane s hematoksilinom (Sigma). Pregled

Double imunofluorescencija bojenje pregled

Kako bi okarakterizirali pepsina A-pozitivnih stanica, dvostruko imunofluorescencija je provedeno na tonzila tkiva. Deparaffinization i dohvat antigena su izvedene. Nespecifično vezanje je antitijelo blokirane u PBS s 0,1% normalnog seruma tovara (Vector Laboratories) i 0,3% Triton X-100 (Sigma) kroz 45 minuta. Uzorci su potom inkubirani sa anti-pepsin A antitijela (1: 100; sc-99.081, Santa Cruz) razrijedi se u PBS koji sadrži 0,1% goveđeg serumskog albumina (Sigma), na 4 ° C preko noći. Nakon ispiranja, magarac Cy3-konjugirani anti-zečje IgG sekundarno antitijelo (1: 100, EMD Millipore, Billerica MA, USA) primijenjena je kroz 1 sat na sobnoj temperaturi. Za dvostruko obilježavanje, nakon blokiranja u PBS koji sadrži 10% normalni kozji serum i 0,3% Triton X-100, sekcije su inkubirane s anti-CD68 (1: 100; Santa Cruz), na 4 ° C preko noći. Alexa488-konjugirani anti-mišji IgG sekundarno antitijelo (1: 100; Invitrogen, Carlsbad CA, USA) je zatim dodana tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi. Sekcije su postavljene s anti-blijedi otopina koja sadrži 4 ', 6-diamidino-2-fenilindolom (DAPI) (Vector Laboratories), i promatrana pod fluorescentnim mikroskopom (Carl Zeiss mikroskopa GmbH, Jena, Njemačka). Karakterizirati CD68-pozitivnih stanica, dvostruko imunofluorescencija je proveden kako je gore opisano. Za dvostruko označavanje, anti-TGF-β1 (1: 100; Santa Cruz) i anti-iNOS (1: 100; Santa Cruz) se primjenjuju i magarećim Cy3-konjugiranog anti-zečje IgG sekundarno antitijelo (1: 100; EMD Millipore ) na sekcijama CD68 obojani. pregled

Obrnuti lančana reakcija polimeraze transkripcijom (RT-PCR)

Ukupna RNA bila je ekstrahirana iz tkiva tonzila pomoću trizolne metode u skladu s protokolom koji je preporučio proizvođač ( GIBCO, Grand Island, NY). Jednake količine (5 ug) DNA bez ukupne RNA iz svakog uzorka su pretvoreni u cDNA pomoću 200 U od Superscript II RT (GIBCO, Grand Island, NY) u reakcijskom volumenu od 20 ul. Reverzna transkripcija provedena je na 22 ° C tijekom 10 minuta, na 42 ° C tijekom 45 min, a na 95 ° C tijekom 5 minuta. Reakcijski produkti (2,0 ul) su podvrgnuti PCR amplifikaciju (Promega, Madison, WI, USA) u reakcijskom volumenu od 50 ul. Svaki nizovi primera su kao što slijedi: IL-1 (189 bp), 5'-TCATTGCTCAAGTGTCTGAAGC-3 '(smislena) i 5'-TGGTCGGAGATTCGTAGC-3' (antisens); IL-6 (628 bp), 5'-ATGAACTCCTTCTCCACAAGCGC-3 '(smislena) i 5'-GAAGAGCCCTCAGGCTGGACTG-3' (antisens); TNF-β (443 bp), 5'-AGTGACAAGCCTGTAGCCC-3 '(smislena) i 5'-GCAATGATCCCAAAGTAGACC-3' (antisense). PCR je izvedena pomoću BioRad-termičkog ciklusa u skladu s uputama proizvođača. Jednaki volumeni Amplifikacijski produkti bili su analizirani pomoću 1.5% agaroza gel elektroforeze uz 0,5 mg /ml etidijeva bromida bojanja. Pregled

Analiza protočnom citometrijom i in vitro pregled uzgoj pregled

Svi uzorci krvi su obrađeni u roku od 2 sata nakon uzimanja krvi. Mononuklearne stanice periferne krvi (PBMNCs) su izolirane centrifugiranjem u gradijentu gustoće preko Ficoll gradijenta (Sigma, St. Louis MO, USA) kroz 25 minuta na 2300 okretaja u minuti i isperu se tri puta u PBS. PBMNCs kod 1 × 10 ^{5 stanice su zatim analizirane protočnom citometrijom. Bilo pepsin sudjeluje u monocita na diferencijaciju makrofaga, preostale stanice se nanesu u posude za uzgajanje u prisutnosti /odsutnosti ili aktiviranog pepsina (Thermo znanstvene, Rockford IL, USA) koja sadrži uvjete monocita kultura. Utvrditi razinu populacija makrofaga, nakon 8 do 15 dana, stanice su sakupljene i analizirane pomoću tekuće citometrije korištenjem antitijela za CD11c i CD163. Sve su stanične kulture su održavane na 37 ° C s 5% CO _{2 u vlažnoj atmosferi. Pregled}}

Stanična održivost pregled

RAW264.7 stanice, mišje stanične linije makrofaga kao što je, su kultivirane istražiti učinak pepsina na makrofaga proliferacije. Stanice su tretirane u raznim koncentracije pepsina (0,01-5 ug /ml) i stanična vijabilnost je ispitana CCK-8 (kit brojanja Kit-8 Dojindo Molecular Tech. Inc., Rockville, MD, USA). Sposobnost stanica za život u svakoj koncentraciji predstavljao kao mnogostrukost promjene. Tor mijenja se računaju kao omjer konačne vrijednosti u svakoj prisutnosti pepsina na vrijednosti u nedostatku pepsin (postavljena kao "1"). Vrijednosti su prikazane kao srednja vrijednost ± SEM. * P izvoznici < 0,05 prema odgovarajućoj odsutnosti pepsin (0 ug /ml). Pregled

In vitro pregled migracija Test pregled

Standardna jednoslojna ispočetka Model rana se koristi za opisivanje prijemljivosti makrofagi na pepsin. RAW264.7 stanice su nasađene na ploče za kulturu tkiva sa 6 jamica, do konfluentnosti i monoslojevi ranjeno grebanje duž površine kulture tkiva plastike žiletom. Oštrica je pritisnut u sredini posude, čime rezanje stanica sloj i istovremeno obilježavanja "rana granicu" na podlozi plastike. Tada je oštrica nježno klizila jednosmjerno ukloniti pola pritoka stanica sloj. Na "ranjeni monosloj" se dvaput ispere s fosfatnim puferom pH 7,4 (PBS), ponovo nahrane 1 mM medijem bez seruma koji sadrži mitomicin i inkubira u standardnim uvjetima za kulturu 24 h. Pregled

Statistički analiza pregled

Svi podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SEM Usporedbe između skupina analizirane su dvosmjerni t pregled testa. Vjerojatnost vrijednosti ( P pregled) < 0,05 smatrano je kao značajno. Pregled

Rezultati

pepsinom je izražen u tonzila

imunoblot pokazali da pepsin ekspresija proteina je kao samo jedna traka iz ekstrakata oba tonzila pacijenata s tonzila hipertrofiju. Pepsin je visoko izražen kao više sastava u pozitivnoj kontroli ekstrakta želuca tkiva. Gotovo nema pepsin obojenje uočeno je iu drugim tkivima uključujući tumor, limfni čvor (LN), štitnjače (tvoja), parotidne žlijezde (parotidne g.), Žlijezde slinovnice (SG) (Slika 1A). Sve tonzila tkiva pokazala je pozitivan signal za pepsin (Slika 1B). Međutim, razina detekcije pepsina u tonzile su malo drugačije u svakog bolesnika (slika 1B). Imunokemijsko bojenje je izveden identificirati pepsinom pozitivnih stanica tonzila tkivu. Pepsin-pozitivne stanice selektivno se nalaze u nastavku površini epitela, uglavnom se nalazi u kripti (slika 1C-a i b), koje okružuje više negativnih žerminal centara (Slika 1 C-C i D), ali i okolnih limfnih folikula s pretjeranim razvoj fibroze (Sl 1C-e i f). Želuca sekcije korištene kao pozitivna kontrola pokazala je tipičan uzorak pepsinom bojenjem, pretežno u žljezdane stanicama (Slika 2D-a), ali ne i u limfnim čvorovima (Slika 1D-b) i štitnjače (Slika 1D-c).

u pepsina-pozitivne stanice su otkrivene u oštećene tonzila pločastog epitela Netlogu

da biste potvrdili odnos s tonzila pločastih oštećenja epitela i refluksa, pokušali smo pronaći pepsina-pozitivnih stanica u oštećenoj ili netaknutom krajnika epitelnih arhitektura. Oštećeni pločastog epitela, nepravilni ili slomljeni, pronađeni su u tonzila tkiva s krajnika hipertrofija (slika 2A i 2D, dolje). Pepsin-pozitivne stanice bile su detektirane u ozlijeđenim mjestima (desno umetnuti na slici 2A, 2D, 2E i 2F) u usporedbi s normalnim epitel (lijevi umetka sa slike 2A i 2B). Posebno, signali su pronađena snažno oko pukotine i oštećenja mandula pločastog epitela (isprekidanim linijama na slici 2C i 2E). Pregled

TGF-β1 i iNOS-pozitivne stanice bile su detektirane u tonzila bolesnika s tonzila hipertrofiju

Imunohistokemijsko bojanje TGF-β1 i iNOS izvršena je istražiti odnos između pepsinskom bojenja i upala. Oba TGF-β1 i iNOS-pozitivni signali su također otkrivena u regijama slične pepsinskom bojenja, kao što je u kripti epitela (slika 3A i 3B), okružuje žerminal centre (Slika 3c i 3d), a okružuje limfnog mahuna s pretjeranim razvoj fibroze (Sl 3E i 3F). pregled

pepsinom i TGF-β1 otkrivene su u CD68-pozitivnih stanica u mandula hipertrofija tkiva pregled

Kao što je opisano u uvodu, da hipoteza da pepsina bojenje u mandula potječe iz želuca i može se odnositi na mandula upalu. Dvostruko imunofluorescencija bojenje za CD68 je izveden za karakterizaciju pepsin-pozitivne stanice. CD68 je 110 Kd transmembranski glikoprotein i reprezentativni biljeg humanih monocita i tkivni makrofagi koji sudjeluju u upali. CD68-pozitivne stanice su jasno vidjeti u tonzila s tonzila hipertrofije (Slika 4). Treba spomenuti, CD68-pozitivnih stanica snažno colocalized s pepsin i TGF β1-pozitivnih stanica oba u kripti (slika 4a) i okolnih žerminal centri (Slika 4b). Za razliku od ko-lokaliziranje pepsin i CD68, pepsin nisu zajedno lokaliziranje s B-limfocita (CD20 pozitivne) u folikularne centara i T-limfocita (CD45) u interfollicular regijama (Slika 4C). Ti podaci, kao što je prikazano na slici 3, je predložio da pepsin bojenje mogu biti povezane s upalnim odgovorima u tonzila bolesnika s tonzila hipertrofiju. I također, da bi se otkrilo glavni mehanizam tonzila ozljeda upalnih posrednika posredovanih bijelih krvnih stanica, uključujući PBMNCs i makrofaga, razinama krajnika IL-6, IL-1β i TNF-α mRNA ispitani su pomoću RT-PCR (slika 4D). Zanimljivo, svi su oni bili izraženi u tonzila tkiva s krajnika hipertrofije. Ovi podaci pokazuju da je glavni mehanizam krajnika hipertrofije mogu biti uzrokovane upalnih medijatora. Pregled

pepsinom vozio pacijenata dobivena iz monocita diferencirati da makrofagi

Za potvrdu odnos pepsinskom bojenja i makrofaga, se uzgaja mononuklearne stanice periferne krvi (PBMNCs) iz tonzilarnih hipertrofične pacijentima makrofaga mediju za kulturu (u prisutnosti ili odsutnosti aktiviranog pepsina) tijekom 15 dana. Mi nadalje određuje razinu monocita populacije i analizirane makrofaga fenotip protočnom citometrijom. Ljudski makrofagi se proizvode diferencijaciju monocita u tkivima. Oni igraju važnu ulogu u nespecifične obrane (urođeni imunitet), a također pomažu pokrenuti posebne obrambene mehanizme (Adaptive imunitet) primanjem druge imunološke stanice kao što su limfociti. Mogu se identificirati protočnom citometrijom s njihovim specifičnim ekspresiju proteina su CD markera uključujući CD11c i CD163. Populacija monocita zaključiti iz strane protoka i naprijed raspršiti (slika 5A), značajno je povećana, u prisutnosti aktiviranog pepsin (aPepsin), u odnosu na ne povećanje na dan 8, a bez značajnog povećanja na dan 15 (Slika 5B). Osim toga, istražili smo monocita na diferencijaciju makrofaga koristeći CD11c i CD163 antitijela. U CD11c i CD163-pozitivne stanice su znatno povećati aPepsin 8. dan nakon uzgoja. Ne značaj pronađen je u drugim uvjetima (Slika 5c). Međutim, monocita populacija nije bila značajna i razine za CD11c i CD163 u odrasloj skupini i na dan 8. i 15. Ovi podaci sugeriraju da pepsin potencijalno uključena u diferencijaciju makrofaga i djeca s povećanim refluks želuca može biti više izložen učincima pepsin okoliš od odraslih. pregled

pepsinom izazvana makrofaga održivost i migracija pregled

također smo istraživali da li pepsin bio uključen u makrofaga funkciju. RAW264.7 stanice su uzgojene u prisutnosti ili odsutnosti aktiviranog pepsina tijekom 24 sata. Došlo je do značajnog povećanja ovisi o dozi u vitalnosti RAW264.7 stanica pepsin (Slika 6A). Migracija RAW264.7 stanica također je izazvana pepsina u oba ogrebotina ranu i transjažična testovima migracije sustava (Slika 6b i 6c). Pregled

Rasprava pregled

Ova je studija prva pokazala da je pepsin je otkriven u Hipertrofični krajnika pepsin-pozitivne stanice su lokalizirani u epitelnim kriptama okružuje germinalnog centra i na limfoidne folikule s prekomjernom razvoju fibrotični izgled. Osobito, pepsin obojenje korelira s ekspresijom upalom povezanih faktora pepsin i CD68 colocalized i aktivira pepsin dovelo do diferencijacije monocita makrofaga. [16] Ovi nalazi ukazuju na potencijalno nove patofizioloških mehanizama koji stoje iza krajnika hipertrofiju. Pregled

Intenzivno upala je poznati faktor rizika za tonzila hipertrofiju. [17] TGF-β1 i iNOS poznati medijatori upale. [18-20] u hipertrofične tonzila, povećanje T i B stanica broji pokazala pozitivnu korelaciju s bakterijski broji i veličina mandula. [21, 22] U epidemiološkim studijama, pušenje, alergija i ponavljanim respiratornih infekcija može povezati s prolaznim ili trajnim hipertrofije limfnog tkiva. [22, 23] imunološki parametri, genetska predispozicija i lokalne limfocita disfunkcija čini da igraju ulogu u etiologiji rekurentne angina i krajnika hipertrofije. [22, 24] Neke studije su pokazale da krajnika hipertrofija bila povezana s povećanim veličine limfnog folikula, ali ne i broj folikula [25], a također je povezana s povećanom težinom tonzila, povećane mahuna promjer, područje i broj. [26] pregled

povratan podražaja patogenim agensima tijekom upalnog procesa dovodi do aktiviranja monocita i makrofaga. [27] za citokine koje izlučuju makrofagi stimuliraju imunosne stanice, a također uzrokuju širenje endotelnih stanica i fibroblasta. [28] s vremenom, imunološki aktivna tkiva zamjenjuje fibroznog tkiva. [28] U ovoj studiji, pretpostavili smo da antigen je pepsin i mi iznijela dvije hipoteze objasniti promatranje krajnika hipertrofije s želučani refluks (Slika 7). Jedan mehanizam može biti izravna stimulacija limfocita po pepsina od refluxate koje su prepoznate kao antigena. Drugi mogući mehanizam uključuje pepsina izazvanu ozljeda epitela u tonzilarnih grobnica, što rezultira cryptitis od rezidentnih bakterija sa tijeku antigenske stimulacije specijaliziranih kripte epitela. To bi dovelo do povećanja broja limfocita, a može igrati ulogu u krajnika hipertrofije. Pregled

Na početku pepsin dolazi u dodir s epitela i predstavljeni na intraepitelne limfocita, sup limfociti, interfollicular i intrafollicular limfociti , u tom redoslijedu. Limfociti zatim razmnožavaju kao odgovor na pepsinskom djeluje kao antigen, uzrokujući krajnika folikula za povećanje i tonzila tkiva proći hipertrofiju. Alternativno, tonzile-tkiva makrofaga prepoznaju refluks posredovanog pepsin na površini B stanica kao strano tijelo i aktiviraju. Makrofaga aktivacija uzrokuje sekreciju proupalnih citokina, a ti citokini izazivaju upalu, kao i dodatna aktivacije limfocita, koje dovode do krajnika hipertrofije. Ovaj posljednji hipoteza izgleda da ima više podrške nego prije, jer kako je prikazano na slici 4, pepsin i CD68-pozitivne stanice su colocalized ispod površine epitela nalazi u kripti (Slika 4A), a također okružuje limfoidne folikule s prekomjernom uslijedila fibroze (Sl 4B). Međutim, malo korelaciju s pepsin i CD20 i CD45, kao markera B i T stanica, odnosno, zabilježeno je u tonzila tkiva (slika 4c). Pregled

Također, procjenjuje ekspresiju CD163 iz PBMNCs kulture s krajnika hipertrofiju , CD163 se izraziti samo zrelih makrofaga, ali nije prisutna na monocite. uzgojene se PBMNCs 8 do 15 dana u prisutnosti 10% FCS i 10 ng /ml M-CSF-a, nakon standardne uvjete za kulturu humanih makrofaga. Rezultati In vitro studije kulture
PBMNCs pokazala da je u djeteta skupini, CD163-pozitivni brojevi stanica bila je značajno veća u prisutnosti aktiviranog pepsina kao i CD11c-pozitivne stanice. Za usporedbu, nije bilo razlike u ekspresiji CD11c i CD163 iz kulture PBMNCs od odraslih (S1 sl). Ovi podaci sugerirali da PBMNC reakcija na aktivnom pepsina u djece može biti osjetljiviji nego u odraslih. Iako se ne može objasniti što pepsin izazvanu mehanizam je uključen u diferencijaciju makrofaga, ne možemo isključiti mogućnost da diferencijaciju makrofaga i sama mogla ubrzati refluks posredovanog oštećenja krajnik. Pregled

Prema istraživanju, pepsin posredovane refluks uzrokuje ne samo izravna oštećenja krajnika epitel, ali i stimulira krajnika makrofaga ili krajnika epitelne stanice na lučenje kemokina /citokine koji privlači i aktivira imunološke stanice koje posreduje neke od oštećenja tonzila sluznice. Mikroskopska upala, karakterizira TGF β1 i iNOS izražavanja u tonzile tkiva (kripte epitela, oko centra linije klica i limfnog folikula s prekomjernom razvoju fibrozni izgled), zabilježen je u bolesnika s težim simptomima (podaci nisu prikazani). To znači da je pepsin (i kiselina) induciranu proizvodnju IL-8 i ostalih upalnih posrednika od refluxate promicati migraciju i aktivaciju leukocita periferne krvi. [14] Ovi rezultati potvrđuju hipotezu da mehanizam citokin-posredovane odgovorne za mandula ozljeda u djece s krajnika hipertrofije. Sluznica bolesnika s hipertrofijom krajnika proizvodi značajno veće količine različitih citokina. [29, 30] Ti upalni medijatori aktiviraju imunološki stanica zapošljavanje i migracije na stranicama refluxate interakcije i mogu biti uključeni u patofiziologiji tonzila hipertrofije. Pregled

na temelju nalaza iz literature i naših rezultata u ovom istraživanju, predlažemo da lokalna i sistemska aktiviranje putovima će promovirati limfocita infiltraciju i proliferacije (uključujući i T-stanica), uz diferencijaciju makrofaga i širenje rezultiralo krajnika hipertrofije od povećane monocitne i brojevi limfocitne stanica. Ako trenutno nalazi dokazuju da je to točno, oni mogu pružiti održiv cilj za razvoj intervencijskih pristupa za liječenje ili sprječavanje krajnika hipertrofije kod djece. Usprkos dokazi upalnih medijatora i limfocitne proliferacije u patogenezi tonzila hipertrofija je međuigra između preosjetljivošću pepsinskom refluksa i krajnika upala ostaje nejasno da u ovoj studiji. Daljnje studije su jamstvo da bolje razumiju signalne putove uključene u genezi refluksa simptoma i upala te da identificiraju uz razvoj novih terapeutskih pristupa. Pregled

Zaključci pregled

Utvrdili smo da limfociti i monociti su u visoko proliferativno stanje u tonzilama s krajnika hipertonije i povezana s povećanom ekspresijom proupalnih čimbenika kao rezultat izlaganja želučanu refluks pepsina. Ovi rezultati ukazuju na potencijalno nove patofiziološkim mehanizmima krajnika hipertrofiju. Iz naše in vitro
podataka, utvrditi da postoji svibanj biti mogućnost objektivne karakterizacije mehanizama uključenih u cilju razvoja specifičnih tretmana za ovu indikaciju bolesti. Naši podaci sugerirali da su mehanizmi u podlozi proliferaciju limfnog tkiva krajnika hipertrofije su različita i može omogućiti buduće ne-kirurški terapijske intervencije pepsin koji mogu anulira potrebu za tonzilektomiji ciljanje, a što dovodi do involucije hipertrofične krajnika. Pregled

Podrška Informacije pregled S1 slici. Analiza protočnom citometrijom monocita stanovništva i monocita diferencijacije PBMNCs odraslih s kroničnim angina.
Limfocite i monocite su identificirani sa strane i naprijed raspršiti. Limfociti i monociti su također potvrdila bojanjem s CD4 i CD8 i CD14 antitijela. PBMNCs su uzgajane u uvjetima makrofaga specifične kulture sa ili bez aktiviranog pepsina za 15 dana. Monociti populacija je identificiran od strane i naprijed scatter profila u protočnom citometrijom u svakom stanju. Svaka razina je u odnosu na vrijednosti Dan 8 stanica u odsutnosti pepsin koji su dani proizvoljan vrijednost "1". Monocita na diferencijaciju makrofaga je ispitana bojanjem CD11c i CD163 antitijela pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0152336.s001 pregled (TIF) pregled

• PLoS ONE: Geometrijska miješanje, peristaltiku, a Geometrijska faza u želucu
• PLoS ONE: Crijevna matičnih stanica markeri u intestinalne metaplazije želuca i ovog jednjaka