PLOS NËMMEN: Extra-Esophageal Pepsin aus Mo. Refluxate Opstig Tonsil Hypertrophy

Wat VerfÜgung

Background VerfÜgung

Gastroesophageal reflux ass mat villen pathologic Konditiounen vun der ieweschter aerodigestive TRACT assoziéiert. Gastric pepsin bannent reflux dréit zu immunologic Reaktioune vun der tonsil. An dëser Etude, fir mir d'Relatiounen tëscht pepsin an tonsillar hypertrophy ze fannen. VerfÜgung

Method an Opklärung VerfÜgung

Mir lant de Begrëff ob tonsillar hypertrophy zu pepsin-mediated gastric reflux zu tonsil hypertrophy wéinst war. Fofzeg-véier Kanner mat tonsil hypertrophy a 30 Erwuessener mat tonsillitis sech virun chirurgesch Behandlung agestallt. Blutt an tonsil Stoffer aus all Patient sech fir Analyse vun Ännerungen an lymphocyte an macrophage Zuelen zesummen mat histological an biochemical Analyse recoltéiert. Pepsin war bei verschidden Niveauen am tonsil Stoffer aus all tonsillar hypertrophy ausgedréckt. Pepsin-positiv Zellen sech an der Krypta epithelium, ronderëm den lymphoid follicle mat den Entwécklungslänner fibrosis, an och ronderëm den lymphoid follicle datt d'Krypta konfrontéiert fonnt. An och, pepsin staining war gutt mat beschiedegt tonsillar squamous epithelium an TGF-β1 an iNOS Ausdrock vun der tonsil Rubrik soll. Zousätzlech, pepsin an TGF-β1-positiv Zellen sech mat CD68-positiv Zellen an der Krypta a ronderëm germinal Zentren Co-en der. Am Verglach vun macrophage Réceptivitéit fir pepsin, goufen Randerscheinung Blutt mononuclear Zellen (PBMNCs) trotzdem grousst an der Präsenz vun der Aktivatioun pepsin am Kand Grupp. Ausserdeem, huet CD11c an CD163-positiv Zellen vun ageschalt pepsin vill fräi. Mä, dat war net fir d'Kultur vun PBMNCs aus der erwuessener Grupp gesinn. VerfÜgung

Konklusiounen VerfÜgung

D'lymphocytes an monocytes sinn an engem héich proliferative Staat an der tonsillar hypertrophy an Zesummenhang mat fräi Meenungsäusserung vun pro -inflammatory Facteure wéi e Resultat vun aussetzt Mo. reflux pepsin VerfÜgung

Fro:. Kim JH, Jeong t, Kim kM, Lee YJ, Jung MH, Park JJ, et al. (2016) Extra-Esophageal Pepsin aus Mo. Refluxate Opstig Tonsil Hypertrophy. PLoS NËMMEN 11 (4): e0152336. Doi: 10.1371 /journal.pone.0152336 VerfÜgung

Redakter: Gernot Zissel, Universitatsklinikum Freiburg, LËTZEBUERG VerfÜgung

Arnaque: 5 Oktober 2015; Akzeptéiert: 11. Mäerz 2016; Publizéiert: Abrëll 8, 2016 VerfÜgung

Copyright: © 2016 Kim et al. Dëst ass eng oppen Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Data Disponibilitéit:. All relevant Date sinn bannent de Pabeier a seng Ennerstëtzung Informatiounen Fichieren VerfÜgung

Funding:. Dës Etude vun der Grondakommes Science Research plangen, duerch d'National Research Foundation vun Korea (NRF), finanzéiert duerch de Ministère vun Science, ICT ënnerstëtzt gouf, an Zukunft plangen (2013R1A1A1012542). Dës Etude gouf weider vun der weltgréisste Ausseminister Research Institut Recruitment plangen, ënnerstëtzt duerch d'National Research Foundation vun Korea (NRF), finanzéiert duerch den Edukatiounsministère, Wëssenschaft an Technologie (MEST) (2012K1A4A3053142)). Dëst Wierk war vun biomedcal Fuerschung Institut Fong (GNUHBIF-2014-0009) aus der Gyeongsang National University Hospital ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

Tonsil hypertrophy ass momentan déi gemeinsam Grond fir tonsillectomy. Erweiderung vun der tonsils existeiert wéinst engem absolute Erhéijung vun der Gesamtzuel vun lymphocytes an der Otemschwieregkeeten an doraus zu enger Erhéijung vun Otemschwieregkeeten Volumen. [1, 2] Déi genee Mechanismus duerch deen nach alles gin huet Stimulatioun an Prolifératioun lymphocyte existeiert. Et gouf opgrond datt antigenic Stimulatioun vun der Otemschwieregkeeten lymphocytes féiert zu enger Erhéijung vun Rezepter Zuel an Aktivitéit. Virdrun Versich um pathophysiologic Mechanismen Erkenntnesser hunn op microbiological an immunologic Ännerungen am groussen tonsils konzentréiert. Vill Studien hu eng méiglech Roll vun bakteriell Organismen an der pathogenesis vun tonsil hypertrophy gemellt. [3-5] awer eng Erhéijung vun der absoluter Zuel vun lymphocytes bannent de tonsils ouni Medeziner Wonn war virdru gewise [2], an der konkreter antigens responsabel fir dës Ännerung identifizéiert net ginn hunn. VerfÜgung

rezenten Fuerschung huet an der Relatioun tëscht extraesophageal reflux Krankheet an ieweschter airway Entwécklungsstéierungen ausgesinn. Chronescher sinusitis [6], otitis Medien mat effusion [7-9] an laryngeal Onuerdnung hunn all mat méiglech etiologic Linken studéiert ginn ze extraesophageal reflux. [10, 11] Refluxate enthält gastric Enzymen (pepsin an HCl) souwéi duodeno-pancreatic Enzymen (Bile Saieren a trypsin). D'Roll vun pepsin zu gastric Jus als Deel vun der refluxate an Interaktioun mat otolaryngology Systemer an ENT Organer (Ouer, Nues, a Kräizer) extensiv studéiert gouf. [1, 10, 11] VerfÜgung

Pepsin ass eng Aktivitéit ëmgerechent aus pepsinogen, déi vun der Chef Zell vun de Mo. produzéiert gëtt, a spillt eng wichteg Roll an unzereegen. Normalerweis ass, pepsin fonnt nëmmen an de Mo Inhalter. Allerdéngs, wann extraesophageal reflux existeiert, kann de Mo. Inhalter vun der reflux erreechen der laryngopharynx, an pepsin als Deel vun de Mo. reflux kann an der laryngopharyngeal Beräicher nogewise ginn. Dat ass jo de Fall als Johnston et al. [12] gemellt dass pepsin am ieweschte airway mucosa fonnt huet an induces engem proinflammatory cytokine Zyklus, an demagogesch Schued un der laryngeal mucosa doraus. Dës Donnéeën hunn eng wichteg Roll fir refluxed pepsin an der Zesummenbroch vun der immun Ofwier Mechanismus vun der mucosal oder epithelial linings a Promotioun vun demagogesch dauernd Agenten ugeholl. [12-15] VerfÜgung

Zerfall vun der tonsil, mir Hypothes, datt gastric pepsin bannent reflux huet eng Schlësselroll an hir immunologic Reaktioun vun tonsil an datt pepsin aussetzt induces tonsil hypertrophy. An dëser Etude, fir mir d'Relatioun tëscht gastric pepsin an tonsillar hypertrophy ze fannen. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

IFLA- Ausso VerfÜgung

Dës Etude vun der Gyeongsang National University Hospital ofgeseent gouf institutionell Kritik Verwaltungsrot (# GNUHIRB-2014-02-006). Schrëftlech informéiert Averständnes war vun der all Patienten (oder Elteren) virun hir Abezéiung vun der Emfro. VerfÜgung

Sécuritéit Sujeten VerfÜgung

Dës Etude op 84 Patiente mat de Medeziner Diagnos vun tonsillar hypertrophy gesuergt huet. Si bei eis Spidol fir d'Entféierung vum tonsil well se aus chronescher inflammation um tonsil leiden oder Geschnaarchts /Députéierten wéinst tonsil Erweiderung. All Patienten mécht kierperlech Examen d'Diagnos vun tonsillar hypertrophy oder chronesch tonsillitis ze confirméieren. Déi heeschen Gréisst vun tonsil war Schouljoer 2,5 an tonsil hypertrophy Grupp a mannerwäerteg 1.0 chronescher tonsillitis Grupp. (Table 1). Mir kritt der tonsil Stoffer aus 54 Kanner virun hirem chirurgesch Behandlung (41 Jongen an 13 Meedercher; Alter Rei 4-16 Joer, mengen Alter 8 Joer) an aus 30 Erwuessener (17 Männercher an 13 Weibchen; Alter Gamme 17 a méi, mengen Alter 29 Joer). Patienten mat systemesch Entwécklungsstéierungen an aner Krankheete Problemer goufen net an dëser Etude mat abegraff. Ganz tonsillectomy war ënner allgemeng Anästhesie benotzt dissection Method an schwaach am Kader vun tonsil war fir Otemschwieregkeeten probéieren ausgewielt gesuergt. Keen huet all Thes Komplikatiounen VerfÜgung

Protein Virbereedung an immunoblot Analyse VerfÜgung

Ray dovu aus tonsils bereet sech wéi follegt zesummen:. Tonsils goufen ofgegruewen an homogenized zu lysis gefiermt an vun PBS (pH 7.4) feieren, 1 % Triton X-100, 1 mm héich 10 μM leupeptin an 200 μM phenylmethylsulfonyl fluoride mat. D'lysates sech e puer mol fir 3 bis 5 min all an centrifuged bei 12.000 Ziichter fir 20 min bei 4 ° C sonicated. D'supernatants sech gesammelt an d'FAQ Konzentratioun vun all lysate war mat engem bicinchoninic Seier (BCA) FAQ assay Kit (Pierce, Rockford IL, USA) sech no de Protokoll d'Hiersteller. Bovine serum albumin war wéi e Liewesniveau benotzt. Gläich Montanten vun FAQ (50 μg) sech zu engem 10% Natrium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gelies iwwerlaascht op. No electrophoresis, Proteinen am gelies sech op enger nitrocellulose Membran transferéiert (Schleicher & Schuell, Dassel, Däitschland). Schläimhait sech mat 5% Nët-Fett Mëllech an Tris-gefiermt Salins mat 0,1% Tween-20 gespaart. Blots sech mat der Primärschoul antibodies Komedie anti-Pepsin A bis polyclonal (sc-99081, Santa Cruz Déi CA, USA) bei 4 ° C Iwwernuechtung. Als Luede Kontroll, goufen blots mat anti-β-actin antibody (Fläch, St. Louis MO, USA) s-Komedie. mat enger ECL Kit (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway NJ, USA) VerfÜgung

Immunohistochemistry VerfÜgung.: D'Primärschoul antibody war mat Première antibodies (Pierce 10.000 horseradish peroxidase-conjugated Geess IgG anti-Kanéngchen, 1) visualized

Immunostaining war op 5-mm décke coronal Rubriken vun paraformaldehyde-fix a paraffin-Ënnerbewosstsinn Rubriken standing der avidin-biotinylated-horseradish peroxidase-komplex Trikoten (ABC; Vecteure Laboratoiren, Burlingame CA, USA) benotzt. No deparaffinization zu xylene, Rubriken sech mat Ethanol rehydrated. Nom Wäschen vun PBS, huet de Rubriken mat 1% normal Geess serum gespaart an dann mat enger Anti-Pepsin A (sc-99081, Santa Cruz), iNOS, TGF-β1, an CD68 antibodies kaaft vu Santa Cruz Déi bei 4 ° behandelt C Iwwernuechtung an engem humidified ëmkomm. No an PBS wäschen, waren se fir 90 min bei Raumtemperatur mat Première antibody (: 200 Santa Cruz Déi, biotin-conjugated anti-Kanéngchen immunoglobulin G, 1) incubated. Endlech, huet de Rubriken fir 60 min bei Raumtemperatur mat ABC incubated, vun PBS rinsed, an dann mat 0,027% 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (Fläch) mat 0,003% Waasserstoff Hem entwéckelt. D'Sektiounen sech mat hematoxylin counterstained (Fläch). VerfÜgung

Double immunofluorescence staining VerfÜgung

Pepsin A-positiv Zellen Fir Markenzeeche, duebel immunofluorescence war op der tonsil Stoffer gesuergt. Deparaffinization an antigen retrieval waren gesuergt. Non-spezifesch antibody bindend war mat 0,1% normal Esel serum (Vecteure Laboratoiren) an 0.3% Triton X-100 (Fläch) fir 45 min an PBS gespaart. Iwwernuechtung verdënntem vun PBS mat 0,1% Bovine serum albumin (Fläch) bei 4 ° C;: Rubriken sech dann mat anti-Pepsin A antibody (sc-99081, Santa Cruz 100 1) incubated. No falsch, Esel Cy3-conjugated anti-Kanéngchen IgG Secondaire antibody (1: 100; EMD Millipore, Billerica MA, USA) war fir 1 Stonn bei Raumtemperatur applizéiert. Fir duebel Etikette, no an PBS erauszesichen 10% normal Geess serum an 0.3% Triton X-100 mat, Rubriken sech mat Anti-CD68 incubated (1: 100; Santa Cruz) bei 4 ° C Iwwernuechtung. Alexa488-conjugated anti-Maus IgG Secondaire antibody (1: 100; Invitrogen, Karlsbad CA, USA) war dann fir 1 Stonn bei Raumtemperatur applizéiert. Sektiounen huet schéi mat anti-staark Léisung mat 4 ", 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (Vecteure Laboratoiren), an ënner engem fluorescence microscope (Carl König Microscopy GmbH, Jena, Däitschland) observéiert. Fir CD68-positiv Zellen, duebel immunofluorescence war gesuergt, wéi uewe beschriwwen Markenzeeche. Fir duebel Etikette, anti-TGF-β1 (1: 100; Santa Cruz) an Anti-iNOS (1: 100; Santa Cruz) sech applizéiert an dann Esel Cy3-conjugated anti-Kanéngchen IgG Secondaire antibody (1: 100; EMD Millipore ) op CD68-Kierchefënster Sektiounen. VerfÜgung

Réckproduktioun Transkriptiouns-Polymerase Kette Reaktioun (RT-Hinnen alleguer) VerfÜgung

Total RNS war vun tonsil Stoffer mat der TRIzol Method no de Protokoll vun den Hiersteller recommandéiert Quecksëlwer ( GIBCO, Grand Island, NY). Gläich Quantitéiten (5 ug) vun DNA-gratis total RNS aus all Prouf ware bis cDNA ëmgerechent mat 200 U vun SuperScript II RT (GIBCO, Grand Island, NY) zu engem 20 μl Reaktioun Volume. Ëmgekéierte Transkriptiouns war fir 10 min, fir 45 min bei 42 ° C an 22 ° C gesuergt, a bei 95 ° C fir 5 min. D'Reaktioun Produkter (2.0 μl) sech un Hinnen alleguer amplification (Promega, Madison, allem, USA) zu engem Volume 50 μl Reaktioun ënnerworf. All primer Message sech wéi follegt zesummen: IL-1β (189 BP), 5'-TCATTGCTCAAGTGTCTGAAGC-3 "(Senn) an 5'-TGGTCGGAGATTCGTAGC-3" (antisense); IL-6 (628 BP), 5'-ATGAACTCCTTCTCCACAAGCGC-3 "(Senn) an 5'-GAAGAGCCCTCAGGCTGGACTG-3" (antisense); TNF-β (443 BP), 5'-AGTGACAAGCCTGTAGCCC-3 "(Senn) an 5'-GCAATGATCCCAAAGTAGACC-3" (antisense). Hinnen alleguer war mat der BioRad thermesch LS standing laut dem vun den Hiersteller gëtt Uweisungen. Gläich Bänn vun der amplification Produite vun 1,5% vun agarose gelies electrophoresis mat 0,5 mg /ml vun ethidium bromide staining analyséiert goufen. VerfÜgung

Flow cytometric Analyse an kënschtlech VerfÜgung ubauen VerfÜgung

all Blutt Echantillon waren der Vereedegung Blutt bannent 2 Stonnen Filteren. Randerscheinung Blutt mononuclear Zellen (PBMNCs) waren déi Dicht packt centrifugation iwwer eng Ficoll packt (Fläch, St. Louis MO, USA) fir 25 min bei 2.300 Ziichter isoléiert an huet dräi Mol am PBS gewäsch. PBMNCs op 1 × 10 5 Zellen sech dann duerch onkontrolléiert cytometry analyséiert. Ob pepsin zu monocyte zu macrophage dat Équipe ass, huet sech de Rescht Zellen op Kultur Platen a Präsenz /oder Feele vun ageschalt pepsin plated (Thermo wëssenschaftleche, Rockford IL, USA) wouvun monocyte Kultur Konditiounen. Fir den Niveau vun macrophage Populatioun identifizéieren, no 8 an 15 Deeg, huet Zellen gesammelt an assayed duerch onkontrolléiert cytometry antibody fir CD11c an CD163 benotzt. All Zell Kulturen sech op 37 ° C haten mat 5% CO _{2 an enger humidified Atmosphär. VerfÜgung}

Zell Nuetsvolen VerfÜgung

RAW264.7 Zellen, Maus macrophage-wëll Zell Linn, huet den Territoire den Effet vun pepsin op macrophage Prolifératioun ze ermëttelen. D'Zellen sech zu verschiddenen Konzentratioun vun pepsin (0.01-5 μg /ml) an Zell Nuetsvolen war vun CCK-8 Kit (Zell Counting Kit-8, Dojindo cuisine Tech. Galaxy Rockville, MD, USA) iwwerpréift behandelt. Zell Nuetsvolen zu all Konzentratioun war wéi fantastesch änneren vertrueden. Déi fantastesch Ännerungen wéi d'Verhältnis vun der Finale Wäert vun all Präsenz vun pepsin un de Wäert vun Feele vun pepsin berechent ginn (Formatioun als "1"). Wäerter sinn wéi déi heeschen ± Sem vertrueden. * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05 vs. den entspriechende Feele vun pepsin (0 μg /ml). VerfÜgung

An kënschtlech VerfÜgung Migratioun assay VerfÜgung

A Standard Meter Modell monolayer Null war benotzt d'Réceptivitéit vun bis Markenzeeche macrophages zu pepsin. RAW264.7 Zellen sech zu 6-gutt Otemschwieregkeeten Kultur Placken, cultured zu Niewebaach rakommen, an der monolayers sech duerch Schëtter laanscht d'Uewerfläch vun der Otemschwieregkeeten Kultur Plastiksplacke mat engem Raséierapparat viischt blesséiert. D'viischt war an der Mëtt vun der Schossel gezwongen huet, also d'Zell futti opzedeelen an concomitantly Thema "Meter Grenz" op d'Basisdaten Plastik. Dunn huet d'viischt Stiermer verbannen unidirectionally Halschent vun de Spuenien wär Zell futti ze läschen. De "Blesséierten monolayer" war zweemol mat phosphate-gefiermt Salins pH 7.4 (PBS), bass-z'iesse mat 1 mm mitomycin-haltege serum-entzu mëttelfristeg gewäsch, a fir 24 HR ënner normale Kultur Konditiounen incubated. VerfÜgung

statistique Analyse VerfÜgung

All Donnéeën ginn als mengen ± Sem presentéiert Vergläicher tëschent Gruppe waren déi zwee-tailed analyséiert t VerfÜgung Test. Wahrscheinlechkeet Wäerter ( P VerfÜgung) &Si besteet; 0,05 bedeitendst considéréiert goufen. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

Pepsin war an der tonsil VerfÜgung ausgedréckt

Immunoblot Donnéeë gewisen, datt pepsin FAQ als eenzeg Band aus dovu souwuel d'tonsil vun Patienten ausgedréckt huet mat tonsil hypertrophy. Pepsin war héich wéi verschidde Gruppen am positive Kontroll vun Mo. Otemschwieregkeeten dovu ausgedréckt. Quasi keng pepsin staining war an aner Stoffer dorënner entholl, lymph Node (Am), Schild (Thy), parotid drüs (Parotid g.), Bloc (SG) (Lalumi 1A) observéiert. All vun tonsil Stoffer Schatzkummer engem positive Signal fir pepsin (Lalumi 1B). Allerdéngs, Detectioun Niveau vun pepsin an der tonsil sech liicht anescht an all Patient (Lalumi 1B). Immunohistochemical staining war standing der pepsin-positiv Zellen am tonsil Otemschwieregkeeten z'identifizéieren. Pepsin-positiv Zellen sinn an der ënnert Uewerfläch epithelium, haaptsächlech an der Krypta (Lalumi 1c-en an b), ronderëm déi méi negativ germinal Zentren (Lalumi 1c-c an d), an der Géigend och de lymphoid follicle mat iwwerdriwwe selektiv fonnt Entwécklungslänner fibrosis (Lalumi 1c-E an f). Mo. Rubriken benotzt als eng positiv Kontroll duerch eng typesch Muster vun pepsin staining, virun allem an der glandular Zellen (Lalumi 2D-e), mee net an der lymph Node (Lalumi 1D-b) an Schild (Lalumi 1D-c).

d'pepsin-positiv Zellen am beschiedegt tonsil squamous epithelium VerfÜgung

fonnt goufen d'Relatioun mat tonsil squamous epithelium Schued a reflux fir ze bestätegen, probéiert mir pepsin-positiv Zellen am blesséiert oder intakt tonsillar epithelial ze fannen Architektur. Beschiedegt squamous epithelium, onregelméisseg oder gebrach, goufen an der tonsil Stoffer mat tonsillar hypertrophy (Lalumi 2A an 2D, ënnen) fonnt. Pepsin-positiv Zellen sech am blesséiert Siten (riets opginn an Lalumi 2A, 2D, 2E an 2F) am Verglach zu normalen epithelium fonnt (lénks opginn an Lalumi 2A an 2B). Besonnesch, goufen d'Signaler ëm clefts an beschiedegt tonsil squamous epithelium (prompt Linnen an Lalumi 2C an 2E). VerfÜgung

TGF-β1 an iNOS-positiv Zellen fonnt goufen am tonsil vun Patienten mat tonsil hypertrophy fonnt

Immunohistochemical staining fir TGF-β1 an iNOS war standing der Relatioun tëscht pepsin staining an inflammation ze ermëttelen. Béid TGF-β1 an iNOS-positiv Signaler och an Regiounen gläicht pepsin staining, wéi an der Krypta epithelium (Lalumi 3A an 3B) fonnt, ronderëm den germinal Zentren (Lalumi 3C an 3D), a ronderëm d'lymphoid follicle mat iwwerdriwwe Entwécklungslänner fibrosis (Lalumi 3 an 3F). VerfÜgung

Pepsin an TGF-β1 sech zu CD68-positiv Zellen am tonsil hypertrophy Otemschwieregkeeten fonnt VerfÜgung

Als zu Erschléisse beschriwwen, mir dass pepsin staining an der Hypothes tonsil originates vun de Mo a konnt dinn gin inflammation zu tonsil. Double immunofluorescence staining fir CD68 war standing der pepsin-positiv Zellen ze Markenzeeche. CD68 ass eng 110-Beien zB stéiert transmembrane glycoprotein an engem Vertrieder Bissau vum Mënsch monocytes an Otemschwieregkeeten zu inflammation Équipe macrophages. CD68-positiv Zellen sech am tonsil mat tonsil hypertrophy (Lalumi 4) kloer observéiert. Vun Note, CD68-positiv Zellen staark mat pepsin an TGF- β1-positiv Zellen souwuel an der Krypta (Lalumi 4A) an der Géigend germinal Zentren (Lalumi 4B) colocalized. Am Géigesaz zu colocalization vun pepsin an CD68, pepsin net mat B-lymphocytes (CD20 positiv) an der follicular Zentren an T-lymphocytes (CD45) am interfollicular Regiounen (Lalumi 4C) Co-localize. Dës Donnéeën, wéi och déi vun Lalumi 3 proposéiert dës datt pepsin staining kéint zu der demagogesch Äntwerte vun der tonsil vun Patienten mat tonsil hypertrophy Zesummenhang ginn. An och, déi grouss Mechanismus vun tonsil blesséiert opgedeckt vun demagogesch mediators mediated vun wäiss Zellen dorënner PBMNCs an macrophages, Niveauen fir tonsillar IL-6, IL-1β an TNF-α mRNA sech duerch RT-Hinnen alleguer (Lalumi 4D) iwwerpréift. Spannen, all dës goufen an der tonsil Stoffer mat tonsillar hypertrophy ausgedréckt. Dës Daten drop hindeit, datt de grousse Mechanismus vun tonsillar hypertrophy kéint vun demagogesch mediators verursaacht ginn. VerfÜgung

Pepsin gefuer d'Patienten-ofgeleet monocytes zu macrophages differenzéiert VerfÜgung

d'Relatioun vun pepsin staining an macrophages Fir ze bestätegen, mir kultivéiert Randerscheinung Blutt mononuclear Zellen (PBMNCs) aus tonsillar hypertrophic Patienten zu macrophage Kultur mëttelfristeg (an Presenz oder Feele vun ageschalt pepsin) fir 15 Deeg. Doriwwer eraus Niveau vun monocyte Populatioun alles, an analyséiert cytometry duerch onkontrolléiert macrophage phenotype. Mënsch macrophages sinn déi dat vun monocytes zu Stoffer produzéiert. Si spillen eng kritesch Roll an Net-spezifesch Ofwierspiller (Leitmotiv excellence), an hëllefen och spezifesch Ofwier Mechanismen (Lycée gemaacht) lancéieren déi aner immun Zellen wéi lymphocytes astellen. Si kënne benotzt Flux cytometry duerch hir spezifesch Ausdrock vu Proteinen als CD lues dorënner CD11c an CD163 identifizéiert ginn. D'Populatioun vun monocytes opgrond vun Flux Säit an no luucht (Lalumi 5A) war an Präsenz vun ageschalt pepsin (aPepsin) wesentlech méi, wéi bis keng Erhéijung op Dag Verglach 8, a kee groussen Erhéijung op den Dag 15 (Lalumi 5B). Zousätzlech, ze propagéieren mir de monocyte zu macrophage dat antibodies CD11c an CD163 benotzt. D'CD11c an CD163-positiv Zellen sech duerch aPepsin op Dag 8 no ubauen vill fräi. Nee Bedeitung war an aner Konditiounen (Lalumi 5C) fonnt. Allerdéngs war d'monocyte Populatioun net relevant an och Niveauen fir CD11c an CD163 am Erwuessenen Grupp souwuel op Dag 8 an 15. Dëst Daten drop hindeit datt pepsin potenziell zu macrophage dat Équipe ass an Kanner mat fräi Mo. reflux méi kënnen ze Effekter vun engem ausgesat pepsin Ëmwelt wéi Erwuessener. VerfÜgung

pepsin entschlof macrophage Nuetsvolen a Migratioun VerfÜgung

Mir propagéieren och ob pepsin zu macrophage Funktioun Équipe war. RAW264.7 Zellen sech cultured an der Presenz oder Feele vun ageschalt pepsin fir 24 Stonnen. Et war e wesentleche Portioun-ofhängeg Erhéijung vun RAW264.7 Zell Nuetsvolen vun pepsin (Lalumi 6A). Migratioun vun RAW264.7 Zellen war och vun pepsin zu souwuel Null Meter an transwell Migratioun System assays (Lalumi 6B an 6C) entschlof. VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

Dës Etude zougedréckt éischt datt pepsin an der nogewise gouf hypertrophic tonsil an pepsin-positiv Zellen sech an der Krypta epithelium en der d'germinal Zentrum Ëmfeld, an an der lymphoid follicle mat iwwerdriwwe Entwécklungslänner fibrotic krut. Gëlt, war pepsin staining mat Ausdrock vun inflammation-Zesummenhang Faktoren soll, an pepsin an CD68 colocalized, an ageschalt pepsin Nerve dat vun monocytes zu macrophages. [16] Des Conclusiounen fir potenziell Roman pathophysiological Mechanismen tonsillar hypertrophy enge Punkt. VerfÜgung

dégoût inflammation ass e bekannte Risiko Faktor fir tonsil hypertrophy. [17] TGF-β1 an iNOS sinn bekannt mediators vun inflammation. [18-20] am hypertrophic tonsils, d'Erhéijung vun T a B Zell zielt awer e positive Korrelatioun mat bakteriell zielt an tonsil Gréisst. [21, 22] Am epidemiologic Studien, fëmmen, evitéieren an onbekannt Otmungsproblemer Aids kéint mat flüchteg oder permanent hypertrophy vun lymphoid Otemschwieregkeeten Associé. [22, 23] Immunologic Parameteren, genetesch predisposition a lokal lymphocyte Viagra Agrément eng ze spillen Roll an der etiology vun onbekannt tonsillitis an tonsillar hypertrophy. [22, 24] bewisen Verschidde Studie datt tonsillar hypertrophy mat fräi lymphoid follicle Gréisst verbonne war, mä net d'Zuel vun follicles [25] a war och fir fräi tonsil Gewiicht, fräi follicle Zesummenhang Duerchmiesser, Géigend an Nummer. [26] VerfÜgung

onbekannt stimuli vun pathogenic Agenten, während de demagogesch Prozess, zu Aktivatioun vun monocytes an macrophages Féierung. [27] d'vun macrophages secreted cytokines immun Zellen ureegen, a féieren och Prolifératioun vun endothelial Zellen a Här iwert mech selwer. [28] an der Zäit, ass eng immunologically aktiv Otemschwieregkeeten vun fibrotic Otemschwieregkeeten ersat. [28] an dëser Etude, gemengt mir, datt d'antigen war pepsin a mir no zwee hypotheses der Observatioun vun tonsillar hypertrophy ze erklären mat gastric reflux (Lalumi 7). Ee Mechanismus kéint direkt Stimulatioun vun der lymphocytes vun pepsin vun refluxate datt den antigenic unerkannt ginn. Aner méiglech Mechanismus handelt pepsin-Bewegung opkomm fir d'epithelium an der tonsillar crypts, déi aus résident Bakterien mat éierlechen antigenic Stimulatioun vun der spezialiséiert Krypta epithelium zu cryptitis Resultater. Dës géif zu der Zuel vun lymphocytes zu enger Erhéijung vun der an enger Roll an tonsillar hypertrophy spille kann. VerfÜgung

ufanks pepsin kennt an Kontakt mat der epithelium an ass zu der intraepithelial lymphocytes virgestallt, déi subepithelial lymphocytes, interfollicular an intrafollicular lymphocytes an datt Uerdnung. D'lymphocytes an Äntwert ze pepsin schléit eng antigen proliferate dann, de tonsillar follicles dauernd hypertrophy ze vergréisseren an d'tonsil Stoffer ze forméieren. Geff unerkennen tonsil-Otemschwieregkeeten macrophages der reflux-mediated pepsin op hir Zell Uewerfläch wéi engem frieme Kierper an ageschalt ginn. Macrophage Aktivéierung bewierkt secretion vum pro-demagogesch cytokines, an dës cytokines inflammation souwéi zousätzlech lymphocyte Aktivéierung induce, datt Resultat vun tonsillar hypertrophy. Dëse Fonds Hypothes ebenfalls méi Ënnerstëtzung wéi fréier ze hunn, well den zu Lalumi 4, pepsin an CD68-positiv Zellen an der Krypta (Lalumi 4A) an och ronderëm d'lymphoid follicle mat iwwerdriwwe fälschlecherweis fibrosis (Lalumi matzen ënnert der Uewerfläch epithelium colocalized goufen dës 4B). Allerdéngs, wéineg Korrelatioun mat pepsin an CD20 an CD45, wéi lues vun B an T Zellen respektiv, war an der tonsil Otemschwieregkeeten (Lalumi 4C) observéiert. VerfÜgung

Mir évaluéieren och den Ausdrock vun CD163 aus PBMNCs Kultur mat tonsillar hypertrophy . CD163 ass nëmmen duerch d'Figuren macrophages ausgedréckt, mä feelen op monocytes. Mir cultured PBMNCs fir 8 an 15 Deeg an der Presenz vun 10% FCS an 10 Dummeldéng /ml M-CSF, dëse Standard Konditioune fir d'Kultur vun de Mënscherechter macrophages. Resultater vun kënschtlech VerfÜgung PBMNCs Kultur Studie weisen, datt an der Kand Grupp, CD163-positiv Zell Zuelen an Präsenz vun ageschalt pepsin souwéi CD11c-positiv Zellen bedeitend méi héich waren. Am Verglach, gouf et keen Ënnerscheed am Ausdrock vun CD11c an CD163 aus der Kultur vun PBMNCs vun Erwuessener (S1 Lalumi). Dës Donnéeë ugeholl, datt e PBMNC Reaktiounen ausgeléist pepsin vun Kanner vläicht méi sensibel ginn, wéi an Erwuessener. Obwuel mer net erklären kënnen déi pepsin-entschlof Mechanismus zu macrophage dat Équipe ass, kann mer net ausschléissen, datt macrophage dat selwer reflux-mediated tonsil Schued Boost konnt. VerfÜgung

Laut dem aktuellen studéieren, pepsin-mediated reflux féieren net nëmmen direkt Schied un der tonsillar epithelium, mä stimuléiert och de tonsillar macrophages oder tonsillar epithelial Zellen chemokines /cytokines datt ugezunn an ageschalt der immun Zellen, datt e puer vun de Schued un der tonsil mucosa zu secrete mediated. Microscopic inflammation, engersäits duerch TGF- β1 an iNOS Ausdrock vun der tonsil Otemschwieregkeeten (Krypta epithelium, déi germinal Zentrum Ëmfeld, an d'lymphoid follicle mat iwwerdriwwe fibrotic krut Entwécklungslänner), ass bei Patienten mat schwéieren Symptomer observéiert (Donnéeën net gewisen). Dëst beinhalt datt d'pepsin (an Seier) -induced Produktioun vun IL-8 an aner demagogesch mediators vun der refluxate Wanderung an Aktivéierung vun Randerscheinung Blutt leukocytes förderen. [14] Des Conclusiounen beléieren der Hypothes, datt eng cytokine-mediated Mechanismus fir déi responsabel ass tonsil Verletzung vun Kanner mat tonsillar hypertrophy. D'mucosa vun Patienten mat tonsillar hypertrophy produzéiert vill grouss Quantitéiten vun verschiddenen cytokines. [29, 30] Dës demagogesch mediators immun Zell Rekrutement a Migratioun fir d'Siten vun refluxate Interaktioun aktivéieren a kann am pathophysiology vun tonsil hypertrophy Équipe ginn. VerfÜgung

Baséierend op d'Conclusiounen aus der Literatur an eis Resultater vun dëser Etude, proposéieren mir déi lokal an systemesch Aktivatioun vun demagogesch Weeër ginn lymphocyte einfach an Prolifératioun (dorënner T Zellen) zesumme mat macrophage dat an Prolifératioun geplatzt tonsillar hypertrophy vum verstäerkten Promotioun monocytic a Rezepter Zell Zuelen. Wann déi aktuell Conclusiounen beweisen korrekt ze ginn, kann se e liewensfäeg Zil fir Entwécklung vun interventional Approche fir Behandlung oder Präventioun vun tonsillar hypertrophy vun Kanner bidden. Trotz der Pri- Beweiser fir demagogesch mediators an lymphocyte Zouhuelen vun der pathogenesis vun tonsil hypertrophy, de System léisst tëscht hypersensitivity zu pepsin reflux an tonsillar inflammation Iwwerreschter vun dëser Etude onkloer. Weider Studien sinn wierklech besser d'sécher Weeër an der Genesis vum reflux Symptomer a inflammation Équipe verstoen an mat den Entwécklungslänner nei therapeutesch Approche ze identifizéieren laanscht. VerfÜgung

Konklusiounen VerfÜgung

Mir etabléiert, datt lymphocytes an monocytes sinn an engem héich proliferative Staat an der tonsils mat tonsillar hypertrophy a mat fräi Ausdrock vu pro-demagogesch Facteure wéi e Resultat vun aussetzt gastric reflux pepsin assoziéiert. Dës Conclusiounen Punkt fir potenziell Roman pathophysiological Mechanismen tonsillar hypertrophy Basisdaten. Vun eisen kënschtlech VerfÜgung Donnéeën, gedoe mir dass do kann d'Méiglechkeet vun objektiv characterization vun de Mechanismen fir Équipe ginn ze bestëmmter Fleeg fir dës Krankheet Hinweis entwéckelen. Eis Date proposéiert, datt d'Mechanismen lymphoid Otemschwieregkeeten Verbreedung zu tonsillar hypertrophy sinn z'ënnerscheedde Basisdaten a vläicht fir Zukunft Net-chirurgesch therapeutesch Interventiounen erlaben pepsin gezielt, datt de Besoin fir e tonsillectomy obviate kann, an all Kéiers zu involution vun der hypertrophic tonsils. VerfÜgung

Ennerstëtzung Informatiounen VerfÜgung S1 Figebam. Flow cytometric Analyse vun monocyte Bevëlkerung an monocyte dat aus PBMNCs vun Erwuessener mat chronescher tonsillitis. VerfÜgung Lymphocytes an monocytes sech mat Säit identifizéiert a vir luucht. Lymphocytes an monocytes sech och vun staining mat CD4 an CD8 an CD14 antibodies confirméiert. PBMNCs sech zu macrophage-spezifesch Kultur Konditiounen Territoire mat oder ouni ageschalt pepsin fir 15 Deeg. Monocytes Bevëlkerung war aus Säit an no luucht Profiler an Flux cytometry zu all Conditioun identifizéiert. All Niveau war mat dem Wäert vu Dag 8 Zellen zu Feele vun pepsin Verglach dass en nët arbiträr Wäert vun "1" entscheet huet. Monocyte zu macrophage dat vun staining mat CD11c an CD163 antibodies iwwerpréift war VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0152336.s001 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung

• PLOS NËMMEN: Geometrësch Mixing, Peristalsis, an dem geometreschen Phase vun de Mo.
• PLOS NËMMEN: Intestinal Stammzellenfuerschung lues an der Intestinal Metaplasia vun Mo. an Barrett d'Esophagus