Klinični pomen sistema uPA pri raku želodca s peritonealno metastazami

Klinični pomen sistema uPA pri raku želodca s peritonealno metastaz
Abstract
Ozadje
Dokazano je, da urokinaza tipa aktivator plazminogena (uPA) je vključen v tumorskih celic metastaz s ponižujoče zunajcelični matriks. Vendar pa je malo neposreden dokaz klinični uPA sistema ekspresije v peritonealno metastaznih tkivih raka želodca. Cilj te raziskave je bil ugotoviti UPA sistema izraz v peritonealno tkivih peritonealno in nonperitoneal bolnikih metastaze, in raziskati diagnostično vrednost sistema uPA.
Metod
Izrazi uPA, uPAR in PAI-1 so merjena s semi-kvantitativno RT-PCR in ELISA. uPA aktivnost je bila odkrita s pomočjo kompleta za dejavnosti UPA.
Rezultati
ni bilo značilne razlike v uPA, uPAR in PAI-1 izraz v dveh vrstah peritonealno tkiva v sedmih bolnikih s peritonealno metastaz. Vendar pa so bili uPA, uPAR in PAI-1 izrazi v peritonealno metastatskih lezij bistveno višje od tistih v običajnih peritonealno tkivih 24 bolnikov nonperitoneal metastazami (P
< 0,05). Poleg tega ni bilo opaziti statistično odstopanje od uPA dejavnosti v več različnih tkivih.
Sklepe
Izraz sistema uPA pozitivno korelira s peritonealno metastaz raka želodca. Ta izraz razlika v peritonealno ali nonperitoneal bolnikov metastazami lahko zagotavljajo referenčni okvir za diagnozo peritonealno metastaz.
Ključne besede
Rak želodca ELISA peritonealni metastaz RT-PCR UPA sistemsko ozadje
Čeprav sta se incidenca in umrljivost zaradi raka želodca zmanjšala iz Kitajske v zadnjih nekaj desetletjih, želodčni rak, je še vedno veliko breme lokalnega zdravstvenega programa [1]. Pomembneje je, da ponovitev raka želodca pojavi tudi po potencialno kurativno resekcijo, najpogosteje v obliki peritonealno metastaz [2]. Zato je nujno treba razviti učinkovite strategije zgodnje diagnoze za peritonealno metastaze raka želodca.
Rak invazija in metastaze so multifaktorske procesov [3] in bistveni korak vključuje zaporedno uničenje in ponovno vzpostaviti ekstracelularnem prostoru in kletnih membran, kar zahteva sodelovanje različnih proteolitičnih encimskih sistemov, kot serinskih proteaz in metaloproteaz [4]. Urokinaznega tipa aktivator plazminogena (uPA) je eden izmed serinskih proteinaz in se veže na njegov receptor, UPA receptorja (uPAR) na površini tumorskih celic. Po aktivaciji celic vezan uPA je lahko pretvarja plazminogen v plazmin, ki se nato lahko razgradijo več komponent ekstracelularnega matriksa [5]. Delovanje kompleksa uPA-uPAR na plazminogena lahko nadzoruje zaviralcev proteaze PAI [6, 7]. Tako je uravnotežena proizvodnjo celične in pericellular uPA, uPAR in PAI-1 je pogoj za učinkovito osrednja proteolize, celično adhezijo in migracijo, in s tem, invazije tumorskih celic in metastaz [8, 9].
Ima opazili so, da je sistem uPA dobro korelira z želodca raka, z merjenjem nivoja ekspresije uPA, uPAR in PAI-1, raka želodca in normalne sluznice tkiva in analiziramo njihovo korelacijo z različnih kliničnih patoloških lastnosti. Na primer, Plebani sod
. [10] določi uPAR, UPA in PAI-1 stopenj z ELISA v raka želodca in običajne vzorce od 20 bolnikov z rakom želodca operacijo. uPAR nivo izražanja je bistveno višja pri raku želodca in nizke ravni uPAR so povezane z boljšim preživetjem. Taniguchi et al
. [11] raziskovali odnos med izražanjem uPAR in clinicopathologic parametrov z uporabo imunohistokemičnim analizo iz 102 osnovnih želodca karcinomov. uPAR radioinkorporacijo opazili v 38 primerih od 102 (37%). Poleg tega so izrazi uPA, uPAR in PAI-1 močno povezana z različnimi clinicopathological dejavnikov: velikost tumorja, globina tumorske invazije, diferenciacija, bezgavkah metastaze [12-15], in trebušno mreno metastazami [16, 17].
Vendar pa je prišlo do zelo malo neposrednih dokazov o klinični pomen sistema uPA pri oznaka peritonealno metastatskega od običajnih peritonealno tkiv pri bolnikih z rakom želodca. V primerjavi z redno distribucijo in ureditev bezgavk, peritonealna tkivo ima večje območje, ki obsega celotno peritonealno votlino, kar prinaša več naključnost in nepredvidljivost v celici peritonealno metastaz pri raku želodca. Tako je bil cilj te študije za nadaljnjo preiskavo izraz razliko sistema uPA med peritonealno metastatskih tkiv in normalnih peritonealno tkiv raka želodca in za potrditev diagnoze pomen sistema uPA s kombiniranjem te rezultate kliničnih podatkov.
metode
kliničnega vzorca
ocenili smo 31 bolnikov (21 moških, 10 žensk) z diagnozo raka želodca, ki je bil sprejet v našem oddelku med julijem 2010 in decembrom 2010. Njihova povprečna starost je bila 62.58 let (razpon, 23 do 85). Bolniki so diagnosticirali raka želodca, ki temelji na predoperativno ali pooperativne patološke analize. Med njimi je bilo 7 bolnikov peritonealno metastaz (patološko tip: 1 primer zmerno diferenciranega cevastega adenokarcinom, 1 primer razreda II do III adenokarcinoma, 3 primere slabo diferencirani adenokarcinom, in 3 primere slabo diferencirani adenokarcinom kombinaciji s karcinomom pečat obroč celic) , medtem ko je 24 bolnikov imelo nonperitoneal metastaze (patološki tip: 3 primeri zmerno diferenciranega cevaste adenokarcinom, 3 primeri razred II adenokarcinom, 2 primerih razreda II do III adenokarcinom, 9 primerov slabo diferencirani adenokarcinom, 3 primerov karcinoma pečatni prstan celic, 1 primer mucinozni karcinoma, 1 primer razred II adenokarcinoma v kombinaciji z Pečatnjak karcinomom, 1 primeru razreda III adenokarcinoma v kombinaciji s karcinomom Pečatnjak celic in 1 primeru razreda II adenokarcinoma v kombinaciji z mucinozni karcinom).
V bolniki s peritonealno metastaze, smo izrezali peritonealno metastaze poškodb, kot tudi majhno količino omentum majus, pelveoperitoneum in diafragmalnega potrebušnice brez peritonealno metastaz. Pri bolnikih z nonperitoneal metastaze, smo izvedli tudi nekaj resekcije v omentum majus, pelveoperitoneum ter preponska peritonej. Zbrane vzorce smo hranili pri -80 ° C za nadaljnjo analizo.
Vsi bolniki so bili živi na koncu raziskave, in naša raziskava je odobril odbor za etiko Shanghai East Hospital, pridružena Tong Ji University.
celični kulturi
celic iz peritonealne mesothelial celične linije (HMrSV5) smo vzdrževali v DMEM (Sigma, St. Louis, USA), dopolnjenem z 10% fetalnega govejega seruma. Celice so bile kultivirajo skoraj vsak dan z 1: 4 ali 1: 5 redčenju v kulturi bučk pri 37 ° C v atmosferi s 5% CO 2
Skupaj ekstrakcijo RNA in cDNA sintezo
Total RNA je bila. izoliramo z celično padavin z uporabo kit ekstrakcijo RNA RNeasy ™ po navodilih proizvajalca (Qiagen, Valencia, ZDA). Čistost RNA in koncentracije smo določili s spektrofotometričnim absorbanco pri 260 in 280 nm oz. Reverzna transkripcija smo izvedli na 1 ug celotne RNA z uporabo oligo (dt) primerjev in AMV reverzna transkriptaza (Promega, Madison, ZDA). 20 ul PCR reakcijsko zmes vsebovana 2 ul 10 x RT blažilec, 2 ul dNTP-jev, 4 ul MgCl 2, 0,5 ul RNasin, 1 ul oligo (dt) 18, 0,75 ul reverzne transkriptaze in 1 ug RNA . Pogoj PCR je bila 70 ° C za 10 minut, 42 ° C za 15 min in 99 ° C za 5 minut, nakar smo cDNA shranjeni pri 4 ° C (v roku 3 mesecev).
Delno kvantitativno RT PCR
vrednosti genske ekspresije uPA, uPAR in PAI-1 smo določili s primerjavo z beta-aktina gena ali gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH). 25 ul RT-PCR reakcijsko zmes vsebuje 1 ul cDNA, smisel in anti-sense začetnih oligonukleotidov (vsaka 0,25 ul), 2,5 ul 10 × PCR pufer, 2 p 25% MgCl 2, 0,5 ul Taq polimerazo, 1 ul dNTP in 17,5 ul RNase brez H 2O. Nested PCR je bil uporabljen za ojačanje karcinoembrionski antigena (CEA) z 1 ul prvega produkta PCR, ki se uporabljajo za druge PCR predlogo. Pogoje pomnoževanja so bili: (i) začetna denaturacija pri 95 ° C 5 minut; (Ii) 30 ciklov denaturacija pri 94 ° C 1 min; (Iii) prileganje pri 56 ° C za 30 sekund za uPA, 60 ° C, 1 minuto pri uPAR, 55 ° C za 1 minuto, PAI-1, ali 72 ° C za 2,5 min za CEA; in (iv) podaljšanje pri 72 ° C 1 min 2,5 min. Primerji PCR uporabljajo bilo takole: za uPA, A, 5-AGAATTCACCACCATCGA GA-3 'in B, 5'-ATCAGCTTCACAACAGTCA T-3'; Za uPAR, A, 5-ACA GGAGCTGCCCTCGCGAC-3 'in B, 5'-GAGGGGGATTT CAGGTTT AGG-3'; Za PAI-1, A, 5'-CTTTGGTGAAGGGTCTGC-3 'in B, 5'-CTC CACCTCTGAAAAGTCC-3'; Za CEA, A, 5-TCTGGAACTTCTCCTGGTCT CAGCTGG-3 ', B, 5'-TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC-3' in C, 5'-GGGCCACTGTCGGCATCATG ATTGG-3 '; Za P-aktin, A, 5'-TTGAAGGTAGTTTC GGGAAT-3 'in B, 5'-GAA AATCTG GCACCACAC CTT-3'; Za GAPDH, A, 5'-GAAGGTGAAGGCGGAGT C-3 'in B, 5'-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3'. Primerji A in B, CEA bili uporabljeni za prvo PCR, medtem ko so se primerji B in C se uporablja za drugo pomnoževanje. Produkt pomnoževanja je 474 bp, 1046 bp, 409 bp, 131 bp, 591 bp in 230 bp oz.
Kvantitativna analiza ELISA
Tris pufrom (pH 8,5, 1,8 ml) dodamo k zamrznjenega tkiva (100 do 300 mg) in homogenizaciji smo izvedli v ledeni kopeli. Nato dodamo 0,2 ml 10% Trixon X-100, da se zagotovi končno koncentracijo 1% Trixon X-100 v homogenatu. Homogenat smo stresali 16 ur in nato centrifugirali v hlajeni centrifugi pri 4 ° C 1 uro pri 100.000 g
. Supernatant smo prenesli v novo epruveto in koncentracijo proteina smo določili s testom bicinchoninic kisline. Koncentracije uPA, uPAR in PAI-1 antigen, so bile določene z uporabo ELISA seta v skladu z navodili proizvajalca (ameriški diagnostica, Greenwich, ZDA). Reakcijo smo ustavili z dodatkom 50 ul H 2SO 4 in absorpcija je bila merjena pri 450 nm na čitalniku ELISA plošče (EL312e mikroploščnem čitalniku, Bio-TEK Instruments, WINOOSKI, ZDA). Vrednosti uPA, uPAR in PAI-1 antigenom smo izrazili kot ng /mg proteina.
UPA testa aktivnosti
je uPA aktivnost izmerjena z uporabo UPA Preskusno aktivnost komplet (Chemicon). Na kratko smo tkivo proteina pomešamo s pufrom in inkubiramo s kromogenim substratom pri 96 vdolbinami pri 37 ° C za 2 do 24 ur. Absorbanco smo prebrali na OD 405, in aktivnosti (enote) je ekstrapolirati iz standardne krivulje.
Statistična analiza
so bili vsi analizirati podatke s SAS različica 6.12 programsko opremo in rezultati so bili zabeleženi kot povprečno ± standardno odstopanje. Pomembnost razlik med skupinami smo ovrednotili z analizo variance, sledi preskus seznanjenih t
. P
< 0.05 zdela statistično značilne.
Rezultati
Semi-kvantitativno RT-PCR analizo CEA, UPA, uPAR in PAI-1 mRNA izraz
CEA je pomemben označevalec gastrointestinalnega tumorjev. S čimer smo uporabili visoko občutljivost ugnezdena metodo RT-PCR za odkrivanje ekspresije CEA v želodčnih raka tkiva z ali brez peritonealno metastaz. Kot je bilo pričakovati, so bili rezultati vseh pozitiven CEA v peritonealno metastatskih lezij sedem bolnikov s peritonealno metastazami (slika 1). Tudi s prostim opazovanjem oči bolnikov peritonealno metastaze, trije primeri so pokazali, CEA-pozitiven izraz v nonperitoneal metastatskih tkiva. Med 24 bolniki z nonperitoneal metastaze, 2 imel CEA-pozitiven izraz v normalnih peritonealno tkivih. Ne CEA izraz je bila odkrita v peritonealni mesothelial celične linije HMrSV5. Vendar uPA, uPAR in PAI-1could je izražen v HMrSV5 celicah (slika 2). Slika 1 CEA mRNA izražanja v sedmih primerov raka želodca s peritonealno metastaz. M: 1000 bp dvojno podajo; Lanes 1, 2, 3, 4, 5, 6, in 7 navedla sedem peritonealno metastaznih primerov. beta-aktina je bila uporabljena za notranjo referenco za normalizacijo izražanje CEA. Proizvodi pomnoževanja so bili 131 bp CEA in 591 bp P-aktina, oz. CEA, karcinoembrionski antigen.
Slika 2 UPA sistem mRNA izraz v HMrSV5 celici. M, 1000 bp dvojno podajo; pas 1, uPA; lane 2, uPAR; proga 3, PAI-1; proga 4, β-aktina. β-aktina je bila uporabljena za notranjo referenco. Proizvodi pomnoževanja so bili 474 bp uPA, 1046 bp uPAR, 409 bp PAI-1 in 591 bp P-aktina, oz.
UPA sistem proteinsko ekspresijo v želodčnih tkivih raka, z ali brez peritonealno metastaz
kvantitativno metodo ELISA smo uporabili za dolo UPA, uPAR in PAI-1 proteinske vsebine v peritonealno metastatskih lezij in CEA-negativnih nonperitoneal metastatskih tkiv 7 bolnikih s peritonealno metastaze, in CEA-negativne normalno peritonealno tkiv 24 bolnikov nonperitoneal metastaz. Rezultati (tabela 1) je pokazala, da ni bilo bistvenih razlik v uPA, uPAR in PAI-1 izraz v dveh vrstah peritonealno tkiva sedem bolnikov peritonealno metastaz. Vendar pa so bili uPA, uPAR in PAI-1 ekspresijo bistveno višja v peritonealno metastaznih lezij kot tiste običajne peritonealno tkiv 24 bolnikov nonperitoneal metastazami (P
< 0,05) .table 1 uPA proteinski sistem ekspresije v želodcu raka tkivih ali brez peritonealno metastaz
Protein
peritonealno metastaze (7 primerov)
Nonperitoneal metastaz (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

uPA
3.312
2.488
0.408
0.784
0.640
3.088
1.664
0.280
0.632
0.488
2.952
0.648
0.672
0.664
0.224
0.712
0.504
0.280
0.800
0.424
0.520
0.488
0.440
0.656
0.328
0.480
0.128
0.440
0.256
0.384
0.376
1.440
0.512
0.440
0.848
0.312
0.464
0.168
uPAR
3.664
4.936
1.432
0.345
1.034
2.720
2.304
0.640
1.256
0.532
2.744
2.192
1.536
0.239
0.479
1.432
1.808
0.704
0.671
0.561
0.912
1.280
0.792
0.845
0.390
1.184
0.480
0.272
0.432
0.633
1.064
2.728
1.280
0.467
0.291
1.120
0,968
0,776
PAI-1
1,511
4,204
0,568
3,665
Ne odkrivanje
3,872
1,725 ​​
0,262
1,426
0,071
2,782
0,876
0,488
3,598
Ne odkrivanje
0.369
0,745
0.662
0,488
Ne odkrivanje
1.315
3,023
0,894
0,127
0,289
1,041
0,262
0,963
Ne odkrivanje
0,1-95
1,181
0,977
0,041
0,329
0,395
0,085
0,316
0.382
uPA odkrivanje dejavnost
prav tako smo zaznali UPA dejavnost v peritonealno metastatskih lezij in CEA-negativnih nonperitoneal metastatskih tkiv 7 peritonealno metastaze bolnikov in CEA-negativne normalne peritonealno tkiva 24 bolnikov nonperitoneal metastaz. Rezultati so pokazali, da ni bilo statistično odstopanje v več različnih tkivih (tabela 2) .table 2 UPA dejavnost želodčnih tkivih raka, z ali brez peritonealno metastaze
peritonealno metastaze (7 primerov)
Nonperitoneal metastaze (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

19.936
16.536
3.914
4.510
5.635
0.846
3.091
1.942
5.407
4.151
1.417
8.725
3.117
4.702
0.899
2.352
16.170
2.142
10.046
2.419
2.820
4.799
1.302
3.730
2.828
2.123
3.310
5.299
7.287
1.233
6.066
6.533
7.922
6.485
8.150
7,802
4,466
3,468
Razprava
Zaradi svoje pomanjkanja specifičnih kliničnih manifestacij v zgodnji fazi peritonealno metastaze, je najboljša možnost zdravljenja vedno zgrešil pri bolnikih z rakom želodca. Pojav ascitesa, trebušni tumorji in črevesne ovire nakazuje, da je faza raka želodca. Zato je učinkovita diagnoza raka želodca s peritonealno metastaz je še vedno izziv v ambulantah. Trenutno je glavna diagnostična metoda za raka želodca s peritonealno metastaz vključuje peritonealno lavažo in citološke preiskave [18, 19]. Vendar pa pozitivni rezultati kažejo zgolj prikriti peritonealno metastaz, ker je peritonealna metastaze tudi ne nastajajoči čeprav so prisotni v peritonealni tekočini tumorske celice. Zato se zdi, detekcija pri peritonealno tkivih bolj neposreden in natančen. Presenetljivo peritonealno tkiva pokrivajo celotno peritonealno votlino, pri čemer tumorske celice implantacija je naključno, tako direktno detekcijo tumorskih celic v peritonealno tkivih je zelo težko. Molekularni biologi menijo, da obstajajo nekatere molekularne spremembe v self-tumorskih celic in njihovih prizadetih tkivih, in te spremembe v tkivih se lahko začne, preden jih [9], se obrnite na tumorske celice. Na podlagi tega koncepta, smo raziskovali molekularne spremembe v peritonealno tkiva, da razišče morebitno diagnozo peritonealno metastaz.
CEA je skupno s tumorjem povezan antigen, ki je mednarodno sprejeta kot označevalec želodčno-črevesni tumorja [20, 21]. Zato smo zaznali izražanje CEA v peritonealno tkivih. Pozitivni rezultati CEA-izrazom kažejo, da so prisotne v peritonealno tkivih tumorske celice. Kot je bilo pričakovati, so naši rezultati pokazali, da je bil CEA izraženo v vseh peritonealno metastaznih poškodb na sedmih bolnikov peritonealno metastaz. Zanimivo je, da so trije bolniki s peritonealno metastaz, pri katerih je bil CEA pozitivno izraženi v nonperitoneal metastatskih tkiv in dveh bolnikih z nonperitoneal metastaze, ki so imeli pozitiven CEA izraz v normalnih peritonealno tkivih. To kaže, da so imeli ti bolniki potencial za razvoj peritonealno metastaz
Kot vključuje pomembne proteolitične encime, je sistem uPA v tumorskih celicah dokazali interakcijo z zunajcelične matrice za olajšanje tvorbe mikrookolje metastaz.; Tako lahko sistem uPA vključeni v proces peritonealno metastaz [22]. najdemo izraz sistema uPA se v vstavljeno tumorskih in gostiteljskih tkivih poveča [23, 24]. Sistem je sestavljen iz uPA serinske proteaze uPA je, receptor glikolipida-zasidrana, uPAR ter inhibitor serpinov, PAI-1, [25]. Zato smo želeli raziskati celovito spremembe v teh treh dejavnikov v peritonealno tkiv z ali brez metastaz
Sistem uPA se porazdeli po različnih celicah.; Naša RT-PCR je pokazala, da bi uPA, uPAR in PAI-1 tudi izraženi v mesothelial celicah. Da bi se izognili nespecifične rezultate, se je še kvantitativni test ELISA se uporablja za odkrivanje izražanje sistema proteinov UPA. Ugotovili smo, da so bili uPA, uPAR in PAI-1 vsebina proteinske bistveno višja CEA-pozitivnih poškodbe ali CEA-negativne peritonealno tkiva pacientov peritonealno metastazami v primerjavi z običajnimi peritonealno tkiva pacientov nonperitoneal metastazami (P
< 0,05) . Predvsem lahko pride v povečanem uPA vsebnosti sistem beljakovin v CEA-negativnih peritonealno tkiv bolnikov s peritonealno metastazami večji klinični pomen. Ta ugotovitev je pokazala, da bi lahko ti CEA-negativna peritonealno tkiva v stanju subkliničnega peritonealno metastaze in da je napredovanje te bolezni lahko privede do peritonealno metastaz. Čeprav uPA sistemske spremembe v peritonealno tkiva še niso dokončno dokazano v tumorskih celicah, spremembe v peritonealno tkivih vsaj zagotavlja referenčni vrednosti za diagnozo peritonealno metastaz [26]. Heiss et al
. [27] ugotovila, da bi se uPAR šteje kot vzdrževani indeksom za napovedovanje raka želodca micrometastasis kostnega mozga v primerjavi z Cytokeratin (CK18). V tej študiji je bila uPAR vsebnost beljakovin tudi v CEA negativnih peritonealno tkiva pacientov peritonealno metastazami bistveno višja kot v CEA negativne peritonealno tkiva pacientov nonperitoneal metastazami (P
< 0,05). Na kratko, predlagamo, da povečana uPAR in PAI-1 izrazov v peritonealno tkiv bolnikov nonperitoneal metastazami se lahko šteje kot referenčni kazalnik za peritonealno metastaz.
S testom aktivnosti uPA v želodcu tkiva za rakom in njihovim ekstracelularnega matriksa, Okusa et al
. [28] Poročilo, ki je višja uPA dejavnost močno povezana s tumorji z peritonealno metastaz in tumorjev z globljim vdorom v želodčni steni. uPA proizvaja stromalnih celicah lahko urejajo rakavih celic invazijo [29]. Vendar pa naši rezultati so pokazali, da ni bistvene razlike v uPA dejavnosti med različnimi tkivi. To lahko pripišemo dinamično dejavnost uPA, ki se zdi, da so odvisni od posebnih mobilnih okoljih, in navaja, da je sreča [30].
Sklepi
Naša študija je pokazala, da je uPA izraz sistem bistveno višja v peritonealni tkivih bolnikov s peritonealno metastazami, kot pri bolnikih nonperitoneal metastaz. Ta izraz razlika lahko pomeni referenco za diagnozo peritonealno metastaz. Vendar pa še vedno obstajajo nekatere omejitve v tej študiji. Število primerov, vključenih v tej študiji je bila majhna, predvsem zato, ker je bilo nekaj bolnikov s peritonealno metastaz v naši bolnišnici priznal med julijem 2010 in decembrom 2010. Poskušali smo odstranili vpliv tega problema z vključitvijo tkiva (vključno omentum majus, pelveoperitoneum, in Dijafragmatičan peritonej) v tej študiji. Nadaljnje študije z višjimi številkami predmetov je še vedno potrebna za pridobitev jasnejše in bolj prepričljive rezultate
Kratice
CEA:.
Karcinoembrionalen antigen
DMEM:
Dulbecco modificirana Eagle je srednje
ELISA:
Enzyme povezana imunsko preiskovalno
GAPDH:
gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaza
PCR:
verižno reakcijo s polimerazo
RT:
reverzne transkriptaze
RT-PCR:
reverzne transkriptaze verižna reakcija s polimerazo
uPA:
Urokinaza aktivator plazminogena
uPAR:
Urokinaza aktivator plazminogena receptor
deklaracij
Zahvala
hvaležnostjo priznavamo naslednje posameznike:. Xuehua Chen, ki so sodelovali v poravnavo več zaporedij in pomagali pri pripravi rokopis. Zavedamo se tudi, Yubao Ji, Yi Zhang in Bin LV, ki so prispevali k tej študiji. "Izvirne oddane datoteke za slike
Spodaj so povezave do avtorjev
avtorji izvirnih predloženih spisov za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 40001_2012_56_MOESM2_ESM.tif avtorjev 40001_2012_56_MOESM1_ESM.tif avtorjev prvotne datoteke za sliko 2 nasprotujočimi si interesi
Avtorji izjavi, da nimajo nobenih finančnih ali nefinančnih konkurenčnih interesov. Prispevkov
avtorjev
YD in ZZ izdelana študija, in izvedli RT-PCR, ELISA in odkrivanje dejavnosti z HZ in ZZhou. YD, MZ in XW sodelovala v poravnavo več zaporedij in pripravila rokopis. ZZ pomagal izvesti statistično analizo. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• FOLFIRI kot terapija druge izbire pri bolnikih z rakom želodca-docetakselom obdelamo: zgodovinski kohorti
• Odkrivanje promotor hypermethylation otoka CpG elektronskega kadherina v želodcu srca odkrivanje adenocarcinoma