Klinische Bedeutung des uPA-Systems bei Magenkrebs mit Peritonealdialyse metastasis

Klinische Bedeutung des uPA-Systems bei Magenkrebs mit Peritonealdialyse Metastasen
Zusammenfassung
Hintergrund
Es wurde gezeigt, dass Urokinase-Typ Plasminogen-Aktivator (uPA) beteiligt ist in Tumorzellmetastasierung durch die extrazelluläre Matrix zu verschlechtern. Jedoch gibt es wenig direkte Beweise für klinische uPA System Expression in metastatischen peritoneal Geweben von Magenkrebs. Das Ziel dieser Studie war es uPA-System-Expression in Peritonealdialyse Geweben von peritonealen und nonperitoneal Metastasierung Patienten zu untersuchen und den diagnostischen Wert des uPA-Systems zu erkunden.
Methoden
Ausdrücke von uPA, uPAR und PAI-1 waren gemessen durch semi-quantitative RT-PCR und ELISA. uPA-Aktivität wurde unter Verwendung eines uPA-Aktivität kit detektiert.
Ergebnisse
Es gab keinen signifikanten Unterschied in uPA, uPAR, PAI-1-Expression in zwei Arten von peritonealen Gewebes bei sieben Patienten mit peritonealer Metastasierung. Jedoch uPA, uPAR, PAI-1 und Ausdrücke in peritoneal metastatischen Läsionen waren signifikant höher als die in normalen Geweben von peritonealen 24 nonperitoneal Metastasierung Patienten (P
< 0,05). Außerdem wurde in verschiedenen Geweben keine statistische Differenz von uPA-Aktivität beobachtet.
Schlussfolgerungen
Die Expression des uPA-Systems positiv mit Metastasierung peritoneal von Magenkrebs korreliert. Dieser Ausdruck Unterschied bei der Peritonealdialyse oder nonperitoneal Metastasierung Patienten können eine Referenz für die Diagnose von peritonealen Metastasierung liefern.
Schlüsselwörter Magenkrebs ELISA Peritoneal Metastasierung RT-PCR UPA-System Hintergrund
Obwohl die Inzidenz und Mortalität von Magenkrebs gesunken in China in den letzten Jahrzehnten, ist Magenkrebs immer noch eine große Belastung des lokalen Gesundheitsprogramm [1]. Wichtig ist, tritt das Wiederauftreten des Magenkrebs auch nach potenziell kurative Resektion, am häufigsten in Form von peritonealen Metastasierung [2]. Daher besteht ein dringender Bedarf wirksame Früherkennung Strategien für die Peritonealdialyse Metastasierung von Magenkrebs.
Krebs Invasion und Metastasierung sind multifaktoriell Verfahren zu entwickeln, [3] und ein wesentlicher Schritt beinhaltet aufeinanderfolgende Zerstörung und Wiederherstellung der extrazellulären Matrix und Basalmembran, was wiederum erfordert die Beteiligung mehrerer proteolytischer Enzym-Systeme, wie Serin Proteasen und Metalloproteasen [4]. Urokinase-Typ-Plasminogenaktivator (uPA) ist eine der Serin-Proteinasen und es an seinen Rezeptor bindet, der uPA-Rezeptor (uPAR) auf der Oberfläche der Tumorzelle. Nach der Aktivierung wird zellgebundenen uPA Plasminogen in Plasmin umzuwandeln Lage, die dann in der Lage ist, mehrere Komponenten der extrazellulären Matrix abbauen [5]. Die Wirkung des uPA-uPAR-Komplex auf Plasminogen kann durch die Protease-Inhibitoren PAI [6, 7] gesteuert werden. Somit wird eine ausgeglichene Produktion von zellulärer und perizellulären uPA, uPAR, PAI-1 und ist die Voraussetzung für eine effiziente Brenn Proteolyse, die Zelladhäsion und Migration und folglich Tumorzellinvasion und Metastasierung [8, 9]. Starten Sie Ihre wurde beobachtet, dass das uPA-System mit Magenkarzinome gut korreliert, indem die Expression von uPA, uPAR und PAI-1 bei Magenkrebs und normalen Schleimhautgewebe zu messen und ihre Korrelation mit verschiedenen klinischen pathologischen Eigenschaften zu analysieren. Zum Beispiel Plebani et al
. [10] bestimmt uPAR, uPA und PAI-1-Spiegel ELISA bei Magenkrebs mit und normalen Proben von 20 Patienten mit Magenkrebs Operation. uPAR Expressionsniveau ist deutlich höher bei Magenkrebs, und geringe Mengen an uPAR mit einem besseren Überleben assoziiert. Taniguchi et al
. [11] untersuchten die Beziehung zwischen der Expression von uPAR und klinisch-pathologische Parameter anhand von immunhistochemischen Analyse von 102 primären Magenkarzinomen. uPAR-Immunreaktivität wurde in 38 Fällen von 102 (37%) beobachtet. Tumorgröße, Tiefe der Tumorinvasion, Differenzierung, Lymphknotenmetastase [12-15] und Peritoneum Metastasierung [16, 17]: Zusätzlich werden die Ausdrücke von uPA, uPAR, PAI-1 und signifikant mit verschiedenen klinisch-pathologischen Faktoren korreliert.
es hat sich jedoch sehr wenig direkte Beweise für die klinische Bedeutung des uPA-Systems bei der Unterscheidung von Peritonealdialyse metastasierendem von normalen Peritonealdialyse Gewebe bei Magenkrebs zu demonstrieren. Im Vergleich mit dem regulären Verteilung und Anordnung der Lymphknoten, hat Peritonealgewebe eine größere Fläche, die gesamte Bauchhöhle zu besetzen, wodurch sich bringt mehr Zufälligkeit und Unberechenbarkeit in Zelle Peritonealdialyse Metastasen bei Magenkrebs. Somit war das Ziel dieser Studie weiter den Ausdruck Differenz des uPA-Systems zwischen Peritonealdialyse metastatischen Geweben und normalen Peritonealdialyse Gewebe von Magenkrebs zu untersuchen und die Diagnose Bedeutung des uPA-Systems zu bestätigen diese Ergebnisse mit den klinischen Daten zu kombinieren.
Methoden
Klinische Probe
Wir haben 31 Patienten untersucht (21 Männer, 10 Frauen) mit einer Diagnose von Magenkrebs, die zu unserer Abteilung zwischen Juli 2010 und Dezember 2010 Ihr Durchschnittsalter betrug 62,58 Jahre (Bereich zugelassen worden war, 23-85). Die Patienten wurden mit Magenkrebs diagnostiziert basierend auf der präoperativen und postoperativen pathologischen Analyse. Unter ihnen sieben Patienten hatten Peritonealdialyse Metastasen (pathologische Art: 1 bei mäßig differenzierten Rohr Adenokarzinom, 1 Fall von Klasse II bis III Adenokarzinom, 3 Fälle von schlecht differenzierten Adenokarzinom, und 3 Fälle von schlecht differenzierten Adenokarzinom kombiniert mit Siegelringzellkarzinom) , während 24 Patienten nonperitoneal Metastasierung (pathologische Art hatte: 3 Fälle von mäßig differenzierten Rohr Adenokarzinom, 3 Fälle von Grad II Adenokarzinom, 2 Fälle von Grad II bis III Adenokarzinom, 9 Fälle von schlecht differenzierten Adenokarzinom, 3 Fälle von Siegelringzellkarzinom, 1 Fall von muzinöse Karzinom, 1 Fall von Klasse II Adenokarzinom mit Siegelringzellkarzinom kombiniert, 1 Fall von Grad III mit Siegelringzellkarzinom kombiniert Adenokarzinom, und 1 Fall von Klasse II-Adenokarzinom mit muzinöse Karzinom kombiniert.) In der
Patienten mit peritonealer Metastasierung, exzidiert wir die peritonealen Läsionen Metastasierung sowie eine kleine Menge von Omentum majus, pelveoperitoneum und diaphragmatic Peritoneums ohne peritonealen Metastasierung. Bei den Patienten mit nonperitoneal Metastasierung, ein paar Resektionen des Omentum majus, pelveoperitoneum und Zwerchfell Peritoneum wurden ebenfalls durchgeführt. Die gesammelten Proben wurden bei -80 ° C zur weiteren Analyse gespeichert.
Alle Patienten am Ende der Forschung noch am Leben waren, und unsere Studie wurde von der Ethikkommission der Shanghai East Hospital, angegliedert an Tongji-Universität genehmigt.
Zellen
Zellkultur aus einer peritonealen Mesothelzellen Zelllinie (HMrSV5) wurden in DMEM (Sigma, St. Louis, USA), ergänzt mit 10% fötalem Rinderserum gehalten. 4 oder 1: 5-Verdünnung in Kulturflaschen bei 37 ° C unter einer Atmosphäre von 5% CO 2
Gesamt-RNA-Extraktion und cDNA-Synthese
Gesamt-RNA wurde. Die Zellen wurden fast täglich von 1 subkultiviert isoliert durch Zell Fällung eine RNeasy ™ RNA-Extraktions-Kits mit folgenden Anweisungen des Herstellers (Qiagen, Valencia, USA). Die RNA-Konzentration und Reinheit wurden durch spektrophotometrische Absorption bei 260 und 280 nm, jeweils bestimmt. Reverse Transkription wurde auf 1 &mgr; g Gesamt-RNA unter Verwendung von Oligo (dT) Primern durchgeführt und AMV-reverse Transkriptase (Promega, Madison, USA). Die 20 &mgr; l PCR-Reaktionsmischung 2 enthielt ul 10 × RT-Puffer, 2 &mgr; l dNTPs, 4 &mgr; l MgCl 2, 0,5 &mgr; l RNasin, 1 &mgr; l Oligo (dT) 18, 0,75 &mgr; l reverse Transkriptase und 1 &mgr; g RNA . Die PCR-Bedingungen waren 70 ° C für 10 min, 42 ° C für 15 min, und 99 ° C für 5 min, wonach die cDNA bei 4 ° C (3 Monate) gelagert.
Semi-quantitative RT- PCR, Die Genexpressionsniveaus von uPA, uPAR, PAI-1 und wurden durch Vergleich mit β-Aktin-Gen oder Glyceraldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase (GAPDH) bestimmt. Die 25 &mgr; l RT-PCR-Reaktionsgemisch enthielt 1 ul cDNA, Sense- und Antisense-Primern (jeweils 0,25 &mgr; l), 2,5 &mgr; l 10 × PCR-Puffer, 2 &mgr; l 25% MgCl 2, 0,5 &mgr; l Taq-Polymerase, 1 &mgr; l dNTP und 17,5 &mgr; l RNase-freiem H 2O. Nested PCR wurde zur Amplifizierung von carcinoembryonales Antigen (CEA) mit 1 ul ersten PCR-Produkt verwendet, für die zweite PCR-Matrize verwendet. Die Amplifikationsbedingungen waren: (i) anfängliche Denaturierung bei 95 ° C für 5 min; (Ii) 30 Zyklen von Denaturierung bei 94 ° C für 1 min; (Iii) Annealing bei 56 ° C für 30 s für uPA, 60 ° C für 1 min für uPAR, 55 ° C für 1 min für PAI-1, oder 72 ° C für 2,5 min für CEA; und (iv) Verlängerung bei 72 ° C für 1 min bzw. 2,5 min. Die PCR-Primer verwendet wurden, waren wie folgt: für uPA, A, 5'-AGAATTCACCACCATCGA GA-3 'und B, 5'-ATCAGCTTCACAACAGTCA T-3'; für uPAR, A, 5'-ACA GGAGCTGCCCTCGCGAC-3 'und B, 5'-GAGGGGGATTT CAGGTTT AGG-3'; für PAI-1, A, 5'-CTTTGGTGAAGGGTCTGC-3 'und B, 5'-CTC CACCTCTGAAAAGTCC-3'; für CEA, A, 5'-TCTGGAACTTCTCCTGGTCT CAGCTGG-3 ', B, 5'-TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC-3' und C, 5'-GGGCCACTGTCGGCATCATG ATTGG-3 '; für β-Actin, A, 5'-TTGAAGGTAGTTTC GGGAAT-3 'und B, 5'-GAA AATCTG GCACCACAC CTT-3'; für GAPDH, A, 5'-GAAGGTGAAGGCGGAGT C-3 'und B, 5'-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3'. Die A- und B-Primer von CEA wurden für die erste PCR verwendet, während die B und C-Primer für die zweite Amplifikation verwendet wurden. Das Amplifikationsprodukt war 474 bp, 1046 bp, 409 bp, 131 bp, 591 bp und 230 bp, respectively.
Quantitative ELISA-Analyse
Tris-gepufferter Kochsalzlösung (pH 8,5, 1,8 ml) wurde zu gefrorenem Gewebe hinzugefügt (100 bis 300 mg) und Homogenisation wurde in einem Eisbad durchgeführt. Anschließend wurden 0,2 ml 10% Trixon X-100 zugegeben, um eine Endkonzentration von 1% Trixon X-100 in dem Homogenat zu gewährleisten. Das Homogenat wurde für 16 h geschüttelt und dann in einer Kühlzentrifuge bei 4 ° C für 1 h bei 100.000 g zentrifugiert
. Der Überstand wurde in ein neues Röhrchen überführt und die Proteinkonzentration wurde durch einen Bicinchoninsäure bestimmt. Die Konzentrationen von uPA, uPAR und PAI-1-Antigen wurden unter Verwendung von ELISA-Kits bestimmt nach den Anweisungen des Herstellers (American Diagnostica, Greenwich, USA). Die Reaktion wurde durch die Zugabe von 50 &mgr; l H gestoppt 2SO 4, und die Absorption wurde bei 450 nm an einem ELISA-Plattenlesegerät (EL312e Mikrotiterplatten-Lesegerät, Bio-Tek Instruments, Winooski, USA) gemessen. Werte von uPA, uPAR, und PAI-1-Antigen wurden als ng /mg Protein ausgedrückt. UPA-Aktivitätstest
uPA-Aktivität eine uPA-Aktivitätsassay-Kits (Chemicon) gemessen werden. Kurz gesagt, wurde Gewebeprotein mit Assay-Puffer gemischt und mit einem chromogenen Substrat in 96-Well-Platten bei 37 ° C für 2 bis 24 h inkubiert. Die Absorption wurde bei OD lesen 405, und die Aktivität (Einheiten) wurde aus einer Standardkurve hochgerechnet.
Statistische Analyse
Alle Daten wurden analysiert mit SAS Version 6.12 Software und die Ergebnisse wurden als Mittelwert ± Standard aufgezeichnet Abweichung. Die Signifikanz der Unterschiede zwischen den Gruppen wurde durch Varianzanalyse ausgewertet, durch ein gepaarter t-Test
gefolgt. P
< 0,05 wurde als statistisch signifikant betrachtet.
Ergebnisse
Semi-quantitative RT-PCR-Analyse von CEA, uPA, uPAR, und PAI-1-mRNA-Expression
CEA ein wichtiger Marker für die Magen-Darm-Tumoren ist. Dabei verwendet man eine hohe Empfindlichkeit nested RT-PCR-Methode, die Expression von CEA in Magenkrebsgeweben mit oder ohne peritonealen Metastasierung zu detektieren. Wie erwartet, waren die Ergebnisse alle positiv für CEA in den peritonealen metastatischen Läsionen von sieben peritonealen Metastasierung Patienten (Abbildung 1). Auch durch die Beobachtung mit bloßem Auge von peritonealen Metastasen Patienten, drei Fälle zeigten CEA-positiven Ausdruck in den nonperitoneal metastatischen Geweben. Unter den 24 Patienten mit nonperitoneal Metastasierung, hatte 2 CEA-positive Expression in normalen Peritonealdialyse Geweben. Kein CEA-Expression wurde in der Bauch mesothelial Zelllinie HMrSV5 nachgewiesen. Jedoch uPA, uPAR, PAI-und 1could in HMrSV5 Zellen (2) ausgedrückt werden. Abbildung 1 CEA-mRNA-Expression in sieben Fällen von Magenkrebs mit Peritonealdialyse Metastasen. M: 1000 bp Marker; Bahnen 1, 2, 3, 4, 5, 6 und 7 angedeutet, die sieben peritoneal metastatischen Fällen. &bgr; -Actin wurde für interne Referenz verwendet, um die Expression von CEA zu normieren. Die Amplifikationsprodukte wurden 131 bp von CEA und 591 bp von β-Actin, respectively. CEA, carcinoembryonales Antigen.
2 uPA-System-mRNA-Expression in HMrSV5 Zelle Abbildung. M, 1000 bp Marker; Spur 1, uPA; Spur 2, uPAR; Spur 3, PAI-1; Spur 4, β-Actin. β-Actin wurde für die interne Referenz verwendet. Die Amplifikationsprodukte wurden 474 bp von uPA, uPAR 1046 bp, 409 bp von PAI-1, und 591 bp von β-Actin, respectively.
UPA-System-Protein-Expression in Magenkrebsgeweben mit oder ohne Metastasen peritoneal
Eine quantitative ELISA-Methode wurde verwendet, um die uPA, uPAR, PAI-1 und Proteingehalte in peritoneal metastatischen Läsionen und CEA-negativen nonperitoneal metastatic Geweben von peritonealen 7 Metastasierung Patienten bestimmt und CEA-negativen Normalgewebe von peritonealen 24 nonperitoneal Metastasierung Patienten. Die Ergebnisse (Tabelle 1) zeigten, dass es in uPA, uPAR, PAI-1-Expression in zwei Arten von peritonealen Gewebes von sieben peritonealen Metastasierung Patienten wurden keine signifikanten Unterschiede. Jedoch uPA, uPAR, PAI-1-Expression waren signifikant höher in peritoneal metastatischen Läsionen als die normale peritoneale Geweben von 24 nonperitoneal Metastasierung Patienten (P
< 0,05) .Tabelle 1 uPA-System-Protein-Expression in Magenkrebsgeweben mit oder ohne Peritonealdialyse Metastasierung
Protein
Peritoneal Metastasierung (7 Fälle)
Nonperitoneal Metastasierung
(24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

uPA
3.312
2.488
0.408
0.784
0.640
3.088
1.664
0.280
0.632
0.488
2.952
0.648
0.672
0.664
0.224
0.712
0.504
0.280
0.800
0.424
0.520
0.488
0.440
0.656
0.328
0.480
0.128
0.440
0.256
0.384
0.376
1.440
0.512
0.440
0.848
0.312
0.464
0.168
uPAR
3.664
4.936
1.432
0.345
1.034
2.720
2.304
0.640
1.256
0.532
2.744
2.192
1.536
0.239
0.479
1.432
1.808
0.704
0.671
0.561
0.912
1.280
0.792
0.845
0.390
1.184
0.480
0.272
0.432
0.633
1.064
2.728
1.280
0.467
0.291
1.120
0,968
0.776
PAI-1 | 1,511
4,204
0.568
3,665
Keine Erkennung
3,872
1.725
0.262
1.426
0.071
2,782
0.876
0.488
3,598
Keine Erkennung
0.369
0.745
0.662
0.488
Keine Erkennung
1.315
3,023
0.894
0,127
0.289
1.041
0.262
0.963
Keine Erkennung
0.195
1,181
0,977
0,041
0.329
0.395
0.085
0.316
0.382
uPA Aktivitätserkennung
Wir auch Peritonealdialyse Metastasen nachgewiesen uPA-Aktivität in peritonealen Metastasen und CEA-negativen nonperitoneal metastatischen Gewebe von 7 Patienten und CEA-negativen Normalgewebe von peritonealen 24 nonperitoneal Metastasierung Patienten. zeigten die Ergebnisse, dass keine statistische Abweichung in verschiedenen Geweben (Tabelle 2) .Tabelle 2 uPA-Aktivität im Magenkrebsgeweben mit oder ohne Metastasen peritoneal
Peritoneal beobachtet Metastasierung (7 Fälle)
Nonperitoneal Metastasierung (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

19.936
16.536
3.914
4.510
5.635
0.846
3.091
1.942
5.407
4.151
1.417
8.725
3.117
4.702
0.899
2.352
16.170
2.142
10.046
2.419
2.820
4.799
1.302
3.730
2.828
2.123
3.310
5.299
7.287
1.233
6.066
6.533
7.922
6.485
8.150
7,802
4.466
3,468
Diskussion
in der frühen Phase der Peritonealdialyse Metastasen in ihrem Mangel an spezifischen klinischen Manifestationen Durch die optimale Behandlung Gelegenheit hat immer in Patienten mit Magenkrebs verfehlt. Das Auftreten von Aszites, Abdominaltumoren und intestinale Obstruktionen zeigt ein fortgeschrittenes Stadium von Magenkrebs. Daher ist die effektive Diagnose von Magenkrebs mit Peritonealdialyse Metastasen immer noch eine Herausforderung in Kliniken ist. Derzeit umfasst die wichtigsten Diagnoseverfahren für Magenkrebs mit Peritonealdialyse Metastasierung Peritonealspülung und zytologische Untersuchung [18, 19]. jedoch positive Ergebnisse nur subklinische peritonealen Metastasierung zeigen, weil die peritoneale Metastasierung ist emergent auch nicht, selbst wenn Tumorzellen vorhanden sind, in der Peritonealflüssigkeit. Somit Detektions in peritoneal Geweben scheint direkter und genau sein. Bemerkenswert ist, peritoneal Gewebe decken die gesamte Bauchhöhle, während Tumorzellimplantation zufällig ist, so den direkten Nachweis von Tumorzellen in peritonealen Gewebe ist sehr schwierig. Molekularbiologen glauben, dass es einige molekulare Veränderungen in Selbsttumorzellen und ihre betroffenen Geweben, und diese Veränderungen in Geweben kann eingeleitet werden, bevor die Tumorzellen ihnen in Verbindung [9]. Basierend auf diesem Konzept wurde untersucht, molekulare Veränderungen in Geweben peritoneal das Potential Diagnose von peritonealen Metastasen zu untersuchen.
CEA ist ein gemeinsames Tumor-assoziiertes Antigen und ist international als die Tumormarker gastroenteric akzeptiert [20, 21]. Daher detektiert wir die Expression von CEA in peritoneal Geweben. Positive CEA-Expression Ergebnisse zeigen, dass Tumorzellen in peritonealen Gewebe vorhanden sind. Wie erwartet, zeigten unsere Ergebnisse, dass CEA wurde in allen Peritonealdialyse Metastasen von sieben Peritonealdialyse Metastasen Patienten zum Ausdruck gebracht. Interessanterweise gab es drei Patienten mit peritonealer Metastasierung in dem CEA positiv in den nonperitoneal metastatischem Gewebe und zwei Patienten mit nonperitoneal Metastasen exprimiert wurde, die in normalen Geweben peritoneal positive CEA-Expression hatte. Dies deutet darauf hin, dass diese Patienten für die Entwicklung von peritonealen Metastasierung ein Potential hatte
Da es wichtig proteolytischen Enzymen enthält, hat das uPA-System in Tumorzellen nachgewiesen wurde mit der extrazellulären Matrix zu interagieren, die Mikroumgebung der Metastasenbildung zu erleichtern. Somit können die uPA-System kann in dem Verfahren der Peritonealdialyse Metastasierung [22] beteiligt. Die Expression des uPA-Systems findet sich in implantierten Tumor und Wirtsgewebe erhöht werden [23, 24]. Die uPA-System besteht aus der Serinprotease-uPA, die Glykolipid-verankerte Rezeptor, uPAR, und dem Serpin-Inhibitor, PAI-1, [25]. Daher wollten wir umfassend in diesen drei Faktoren bei der Peritonealdialyse Gewebe mit oder ohne Metastasen verändert zu untersuchen
Das uPA-System weit verbreitet in verschiedenen Zellen verteilt wird. unseren RT-PCR zeigte, dass uPA, uPAR, PAI-1 und auch in mesothelialen Zellen exprimiert werden konnte. Um unspezifische Ergebnisse, weitere quantitative vermeiden wurde ELISA verwendet Expression der uPA-Systems zum Nachweis von Proteinen. Wir fanden, dass uPA, uPAR, PAI-1 und Proteingehalte in CEA-positive Läsionen oder CEA-negativen peritoneal Geweben von peritonealen Metastasierung Patienten signifikant höher waren im Vergleich zu normalen Geweben von peritonealen nonperitoneal Metastasierung Patienten (P
< 0,05) . Bemerkenswert ist, kann es eine größere klinische Bedeutung sein in der erhöhten uPA-System Proteingehalt in CEA-negativen Peritonealdialyse Geweben von peritonealen Metastasen Patienten. Dieses Ergebnis zeigte, dass diese CEA-negativen peritoneal Gewebe in einem Zustand der subklinischen peritonealen Metastasierung sein könnte und dass das Fortschreiten dieser Krankheit könnte peritonealen Metastasierung führen. Obwohl uPA-System Änderungen in Peritonealdialyse Gewebe noch nicht definitiv in Tumorzellen nachgewiesen wurde, stellt die Veränderungen in der Peritonealdialyse Gewebe zumindest einen Referenzwert für Peritonealdialyse Metastasierung Diagnose [26]. Heiss et al
. [27] finden, dass uPAR als abhängige Index für die Vorhersage von Magenkrebs Knochenmark Mikrometastasierung in Betracht gezogen werden könnte, verglichen mit Zytokeratin (CK18). In dieser Studie wurde auch uPAR Proteingehalt signifikant höher in CEA-negativen peritoneal Geweben von peritonealen Metastase-Patienten als in CEA-negativen Geweben von peritonealen nonperitoneal Metastasierung Patienten (P
< 0,05). Kurz gesagt, schlagen wir vor, dass uPAR und PAI-1 Ausdrücke in peritonealen Gewebe von nonperitoneal Metastasierung Patienten erhöht als Referenzindikator angesehen werden kann, für die Peritonealdialyse Metastasierung. Videos Test des uPA-Aktivität bei Magenkrebs Gewebe und deren extrazelluläre Matrix, OKUSA et al
. [28] berichten, dass die höhere uPA-Aktivität signifikant mit Tumoren mit Peritonealmetastasen und Tumoren mit tieferen Eindringen in die Magenwand verbunden ist. uPA durch stromale Zellen erzeugt wird, kann Invasion von Krebszellen [29] regulieren. Jedoch zeigten unsere Ergebnisse, dass es keinen signifikanten Unterschied in uPA-Aktivität zwischen verschiedenen Geweben wurde. Dies kann auf die dynamische Aktivität von uPA zurückgeführt werden, die auf den bestimmten zellulären Umgebungen abhängig zu sein scheint, und stellt fest, dass es antrifft [30].
Schlussfolgerungen
Unsere Studie zeigt, dass uPA-System-Expression signifikant höher in peritoneal Geweben peritonealer Metastasierung Patienten als bei nonperitoneal Metastasierung Patienten. Dieser Ausdruck Unterschied kann eine Referenz für die Diagnose von peritonealen Metastasierung bieten. Allerdings gibt es immer noch einige Einschränkungen in dieser Studie. Die Zahl der Fälle in dieser Studie war eher klein, vor allem, weil einige Patienten mit Peritonealdialyse Metastasen wurden in unserer Klinik zwischen Juli 2010 und Dezember 2010 zugelassen Wir haben versucht, indem Gewebe den Einfluss dieses Problem zu beseitigen (einschließlich Omentum majus, pelveoperitoneum, und Zwerchfell Peritoneum) in dieser Studie. Weitere Studien mit einer höheren Anzahl von Probanden benötigt noch klarer und überzeugende Ergebnisse zu erhalten
Abkürzungen
CEA.
Carcinoembryonic Antigen
DMEM:
Dulbecco-modifiziertem Eagle-Medium
ELISA: CONTACT: Enzyme Linked Immuno Assay
GAPDH:
Glyceraldehyd-3-Phosphat Dehydrogenase
PCR: Polymerase-Kettenreaktion

RT:
-Reverse-Transkriptase
RT-PCR:
Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion umkehren
uPA: CONTACT Urokinase-Typ Plasminogen-Aktivator
uPAR:
Urokinase-Typ Plasminogen-Aktivator-Rezeptor
Erklärungen
Danksagung
wir folgende Personen dankbar anerkennen. Xuehua Chen, der in der Folge Ausrichtung teilgenommen und dazu beigetragen, das Manuskript in Vorbereitung. Wir erkennen Yubao Ji, Yi Zhang, und Bin LV, die zu dieser Studie beigetragen.
Autoren Original vorgelegt Dateien für Bilder
Im Folgenden sind die Links zu den Autoren ursprünglich eingereichten Dateien für Bilder. 40001_2012_56_MOESM1_ESM.tif Autoren Originaldatei für Abbildung 1 40001_2012_56_MOESM2_ESM.tif Autoren Originaldatei für Abbildung 2 Konkurrierende Interessen
Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen oder nicht-finanziellen konkurrierenden Interessen haben.
Beiträge der Autoren
YD und ZZ die Studie konzipiert und durchgeführt RT-PCR, ELISA und Aktivitätserkennung mit HZ und ZZhou. YD, MZ, und XW nahmen an der Sequenz-Alignment und entwarf das Manuskript. ZZ half statistische Analysen durchzuführen. Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.

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