Significato clinico del sistema uPA nel cancro gastrico con metastasi peritoneali

Significato clinico del sistema uPA nel cancro gastrico con metastasi peritoneali
Abstract
sfondo
E 'stato dimostrato che l'attivatore del plasminogeno urochinasi-tipo (UPA) è coinvolto nella metastasi delle cellule tumorali dal degradare la matrice extracellulare. Tuttavia, ci sono poche prove dirette di clinica espressione del sistema uPA in peritoneali tessuti metastatici di cancro gastrico. L'obiettivo di questo studio è stato quello di indagare l'espressione del sistema uPA in tessuti peritoneale di pazienti metastasi peritoneali e nonperitoneal, e di esplorare il valore diagnostico del sistema uPA.
Metodi
Espressioni di uPA, uPAR, e PAI-1 sono stati misurata dal semi-quantitativa RT-PCR ed ELISA. attività uPA è stato rilevato utilizzando un kit di attività uPA.
Risultati
era alcuna differenza significativa nel uPA, uPAR, e PAI-1 espressione in due tipi di tessuto peritoneale in sette pazienti con metastasi peritoneali. Tuttavia, uPA, uPAR, e PAI-1 espressioni in lesioni metastatiche peritoneali erano significativamente più alti rispetto a quelli normali tessuti peritoneale di 24 pazienti metastasi nonperitoneal (P
< 0,05). Inoltre, nessuna discrepanza statistica di attività uPA è stata osservata in vari tessuti differenti.
Conclusioni
L'espressione del sistema uPA correla positivamente con metastasi peritoneali di cancro gastrico. Questa differenza di espressione in pazienti metastasi peritoneali o nonperitoneal può fornire un punto di riferimento per la diagnosi di metastasi peritoneale.
Parole
cancro gastrico ELISA peritoneale metastasi del sistema RT-PCR UPA Sfondo
Sebbene l'incidenza e la mortalità del cancro gastrico sono diminuiti in Cina nel corso degli ultimi decenni, il cancro gastrico è ancora un grande onere del programma sanitario locale [1]. È importante sottolineare che il ripetersi di cancro gastrico si verifica anche dopo resezione potenzialmente curativa, più frequentemente sotto forma di metastasi peritoneale [2]. Quindi, vi è un urgente bisogno di sviluppare strategie di diagnosi precoce efficaci per la metastasi peritoneale del cancro gastrico.
Cancro invasione e metastasi sono processi multifattoriali [3] e un passo essenziale comporta la distruzione consecutiva e la ricostituzione delle membrane extracellulare matrice e seminterrato, che a sua volta richiede la partecipazione di numerosi sistemi enzimatici proteolitici, come la serina proteasi e metalloproteasi [4]. Urokinase del plasminogeno (uPA) è una delle proteasi serina e si lega al suo recettore, il recettore uPA (uPAR) sulla superficie della cellula tumorale. Dopo l'attivazione, cellule-bound uPA è in grado di convertire il plasminogeno in plasmina, che è quindi in grado di degradare diversi componenti della matrice extracellulare [5]. L'azione del complesso uPA-uPAR sulla plasminogeno può essere controllato dal inibitori della proteasi PAI [6, 7]. Così, una produzione equilibrata di cellulare e pericellulare uPA, uPAR, e PAI-1 è il presupposto per la proteolisi efficiente focale, adesione cellulare, e la migrazione, e, di conseguenza, l'invasione delle cellule tumorali e metastasi [8, 9].
Ha stato osservato che il sistema uPA è ben correlata con tumori gastrici, misurando il livello di espressione di uPA, uPAR e PAI-1 nel cancro gastrico e normale tessuto mucoso e analizzando la loro correlazione con varie caratteristiche cliniche patologiche. Ad esempio, Plebani et al
. [10] determinato uPAR, uPA e PAI-1 livelli utilizzando ELISA a cancro gastrico e campioni normali da 20 pazienti con cancro gastrico sottoposti a intervento chirurgico. livello di espressione uPAR è significativamente maggiore nel cancro gastrico, e bassi livelli di uPAR sono associati con una migliore sopravvivenza. Taniguchi et al
. [11] hanno studiato la relazione tra l'espressione di uPAR e parametri clinicopatologici mediante analisi immunoistochimica da 102 carcinomi gastrici primari. uPAR immunoreattività è stata osservata in 38 casi su 102 (37%). Inoltre, le espressioni di uPA, uPAR, e PAI-1 sono significativamente correlati con diversi fattori clinico-patologici: dimensioni del tumore, profondità di invasione del tumore, differenziazione, metastasi linfonodali [12-15], e metastasi del peritoneo [16, 17].
Tuttavia, non vi è stato molto poche prove dirette a dimostrare l'importanza clinica del sistema uPA nel distinguere metastatico peritoneale da normali tessuti peritoneale nel cancro gastrico. Rispetto alla distribuzione regolare e disposizione dei linfonodi, tessuto peritoneale ha una superficie maggiore, che occupa l'intera cavità peritoneale, quindi comportando casualità e imprevedibilità nella cella di metastasi peritoneale nel cancro gastrico. Così, l'obiettivo di questo studio è stato quello di approfondire la differenza espressione del sistema uPA tra tessuti metastatici peritoneale e tessuti normali peritoneali di cancro gastrico e per confermare il significato diagnosi del sistema uPA combinando questi risultati con i dati clinici.
metodi
campione clinico
Abbiamo valutato 31 pazienti (21 uomini, 10 donne) con una diagnosi di cancro gastrico, che era stato ammesso al nostro reparto tra luglio 2010 e dicembre 2010. la loro età media era di 62.58 anni (range, 23 al 85). I pazienti sono stati diagnosticati con cancro gastrico sulla base dell'analisi patologica preoperatoria o postoperatoria. Tra questi, 7 pazienti avevano metastasi peritoneali (tipo patologico: 1 caso di adenocarcinoma tubolare moderatamente differenziato, 1 caso di grado II a III adenocarcinoma, 3 casi di adenocarcinoma scarsamente differenziato, e 3 casi di adenocarcinoma scarsamente differenziato in combinazione con carcinoma a cellule anello con sigillo) , mentre 24 pazienti hanno avuto metastasi nonperitoneal (tipo patologico: 3 casi di adenocarcinoma tubolare moderatamente differenziato, 3 casi di II grado adenocarcinoma, 2 casi di grado II a III adenocarcinoma, 9 casi di adenocarcinoma scarsamente differenziato, 3 casi di carcinoma a cellule anello con sigillo, 1 caso di carcinoma mucinoso, 1 caso di adenocarcinoma di grado II in combinazione con carcinoma a cellule anello con sigillo, 1 caso di adenocarcinoma di grado III in combinazione con carcinoma a cellule anello con sigillo, e 1 caso di adenocarcinoma di grado II in combinazione con carcinoma mucinoso).
Nel pazienti con metastasi peritoneale, abbiamo asportato le lesioni metastasi peritoneali, e anche una piccola quantità di omento majus, pelveoperitoneum, e del peritoneo diaframmatico senza metastasi peritoneale. Nei pazienti con metastasi nonperitoneal, sono stati eseguiti anche alcuni resezioni del majus omento, pelveoperitoneum, e del peritoneo diaframmatica. I campioni raccolti sono stati conservati a -80 ° C per ulteriori analisi.
Tutti i pazienti erano vivi alla fine della ricerca, e il nostro studio è stato approvato dal Comitato Etico di Shanghai Ospedale Oriente, affiliata alla Università Tongji.
cell cultura
cellule da un peritoneale linea di cellule mesoteliali (HMrSV5) sono stati mantenuti in DMEM (Sigma, St. Louis, USA) supplementato con 10% di siero fetale bovino. Le cellule sono state sottocoltura quasi ogni giorno da 1: 4 o diluizione 1: 5 in fiasche di coltura a 37 ° C in atmosfera di 5% CO 2
estrazione di RNA totale e cDNA sintesi
RNA totale è stato. isolato per precipitazione delle cellule utilizzando un kit di estrazione di RNA RNeasy ™ seguendo le istruzioni del produttore (Qiagen, Valencia, Stati Uniti d'America). La purezza e la concentrazione di RNA sono stati determinati mediante assorbimento spettrofotometrica a 260 e 280 nm, rispettivamente. La trascrizione inversa è stata eseguita su 1 mg di RNA totale usando oligo primer (dt) e AMV trascrittasi inversa (Promega, Madison, Stati Uniti d'America). La miscela di reazione di PCR 20 ml contiene 2 ml 10 × tampone RT, 2 dNTP microlitri, 4 ml MgCl 2, 0.5 ml RNasin, 1 ml oligo (dt) 18, 0,75 ml trascrittasi inversa, e RNA 1 mg . La condizione PCR è stata di 70 ° C per 10 min, 42 ° C per 15 minuti, e 99 ° C per 5 min, dopo di che il cDNA è stato conservato a 4 ° C (entro 3 mesi).
RT semiquantitativa PCR
I livelli di espressione genica di uPA, uPAR, e PAI-1 sono stati determinati dal confronto con gene β-actina o gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi (GAPDH). La miscela di reazione RT-PCR 25 ml contiene 1 ml di cDNA, senso e anti-senso primer (ogni 0,25 mL), 2,5 ml 10 × tampone PCR, 2 ml 25% MgCl 2, 0,5 ml di Taq polimerasi, 1 ml dNTP e 17,5 ml RNase-free H 2O. Nested PCR è stato utilizzato per l'amplificazione di antigene carcinoembrionario (CEA) con 1 ml di primo prodotto di PCR utilizzati per il secondo modello PCR. Le condizioni di amplificazione sono: (i) denaturazione iniziale a 95 ° C per 5 min; (Ii) 30 cicli di denaturazione a 94 ° C per 1 min; (Iii) ricottura a 56 ° C per 30 s per uPA, 60 ° C per 1 min per uPAR, 55 ° C per 1 min per PAI-1, o 72 ° C per 2,5 minuti per CEA; e (iv) estensione a 72 ° C per 1 min o 2,5 min. I primer PCR utilizzati sono i seguenti: per uPA, A, 5'-AGAATTCACCACCATCGA GA-3 'e B, 5'-ATCAGCTTCACAACAGTCA T-3'; per uPAR, A, 5'-ACA GGAGCTGCCCTCGCGAC-3 'e B, 5'-GAGGGGGATTT CAGGTTT AGG-3'; per PAI-1, A, 5'-CTTTGGTGAAGGGTCTGC-3 'e B, 5'-CTC CACCTCTGAAAAGTCC-3'; per CEA, A, 5'-TCTGGAACTTCTCCTGGTCT CAGCTGG-3 ', B, 5'-TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC-3', e C, 5'-GGGCCACTGTCGGCATCATG ATTGG-3 '; per β-actina, A, 5'-TTGAAGGTAGTTTC GGGAAT-3 'e B, 5'-GAA AATCTG GCACCACAC CTT-3'; per GAPDH, A, 5'-GAAGGTGAAGGCGGAGT C-3 'e B, 5'-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3'. I primers A e B del CEA sono stati utilizzati per la prima PCR, mentre i primer B e C sono stati utilizzati per la seconda amplificazione. Il prodotto di amplificazione era 474 bp 1046 bp, 409 bp, 131 bp, 591 bp e 230 bp, rispettivamente analisi
. Quantitativa ELISA
soluzione salina tamponata con Tris (pH 8,5, 1,8 ml) è stato aggiunto ai tessuti congelati (da 100 a 300 mg) e omogeneizzazione è stata eseguita in un bagno di ghiaccio. Successivamente, 0,2 ml 10% Trixon X-100 è stato aggiunto per garantire una concentrazione finale di 1% Trixon X-100 nel omogeneizzato. L'omogenato è stato agitato per 16 ore e poi centrifugato in una centrifuga refrigerata a 4 ° C per 1 ora a 100.000 g
. Il surnatante è stato trasferito in una nuova provetta e la concentrazione proteica è stata determinata mediante saggio dell'acido bicinconinico. Le concentrazioni di uPA, uPAR, e PAI-1 antigene sono stati determinati utilizzando kit ELISA in base alle istruzioni del fabbricante (American Diagnostica, Greenwich, Stati Uniti d'America). La reazione è stata bloccata con l'aggiunta di 50 ml H 2SO 4, e l'assorbimento è stata misurata a 450 nm su un lettore di piastre ELISA (lettore di micropiastre EL312e, Bio-Tek Instruments, Winooski, USA). I valori di uPA, uPAR, e PAI-1 antigene sono stati espressi come ng /mg di proteina.
Saggio di attività uPA
attività uPA è stata misurata utilizzando un kit di saggio di attività uPA (Chemicon). Brevemente, proteine ​​tessuto è stato mescolato con tampone e incubata con un substrato cromogenico in piastre da 96 pozzetti a 37 ° C per 2 a 24 h. L'assorbanza è stata letta a OD 405, e l'attività (unità) è stato estrapolato da una curva standard. Analisi statistica

Tutti i dati sono stati analizzati utilizzando la versione SAS software 6.12 ed i risultati sono stati registrati come standard media ± deviazione. La significatività delle differenze tra i gruppi è stata valutata mediante analisi della varianza, seguito da un test t
appaiati. P
< 0.05 è stato
considerato statisticamente significativo. Risultati
semi-quantitativa RT-PCR di CEA, uPA, uPAR, e PAI-1 espressione di mRNA
CEA è un indicatore importante per i tumori gastroenterici. In tal modo, abbiamo usato una elevata sensibilità annidato metodo RT-PCR per rilevare l'espressione di CEA nei tessuti cancro gastrico con o senza metastasi peritoneale. Come previsto, i risultati erano positivi per CEA nelle lesioni metastatiche peritoneali di sette pazienti metastasi peritoneali (Figura 1). Inoltre, attraverso l'osservazione ad occhio nudo dei pazienti metastasi peritoneali, tre casi hanno mostrato espressione CEA-positivi nei tessuti metastatici nonperitoneal. Tra i 24 pazienti con metastasi nonperitoneal, 2 avevano espressione CEA-positivo in tessuti normali peritoneali. Nessuna espressione CEA è stato rilevato nella peritoneale linea di cellule mesoteliali HMrSV5. Tuttavia, uPA, uPAR, e PAI-1could essere espressi nelle cellule HMrSV5 (Figura 2). Figura 1 CEA mRNA espressione in sette casi di cancro gastrico con metastasi peritoneali. M: 1000 marcatore bp; Corsie 1, 2, 3, 4, 5, 6, e 7 indicate le sette casi metastatici peritoneali. ß-actina è stata utilizzata per riferimento interno per normalizzare l'espressione di CEA. I prodotti di amplificazione sono stati 131 bp di CEA e 591 bp di β-actina, rispettivamente. CEA, l'antigene carcinoembrionario.
Figura 2 uPA espressione di mRNA sistema nella cella HMrSV5. M, 1000 marcatore bp; corsia 1, uPA; corsia 2, uPAR; corsia 3, PAI-1; corsia 4, β-actina. β-actina è stata utilizzata per riferimento interno. I prodotti di amplificazione sono stati 474 bp di uPA 1046 bp di uPAR, 409 bp del PAI-1, e 591 bp di β-actina, rispettivamente.
Espressione proteica sistema uPA nei tessuti cancro gastrico con o senza metastasi peritoneale
Un metodo ELISA quantitativa è stata utilizzata per determinare il uPA, uPAR, e PAI-1 tenore proteico di lesioni metastatiche peritoneale e CEA-negativi nonperitoneal tessuti metastatici di 7 pazienti metastasi peritoneali, e CEA-negativi tessuti normali peritoneali di 24 pazienti metastasi nonperitoneal. I risultati (Tabella 1) ha indicato che non vi erano differenze significative nella uPA, uPAR, e PAI-1 espressione in due tipi di tessuto peritoneale di sette pazienti metastasi peritoneali. Tuttavia, uPA, uPAR, e PAI-1 erano significativamente più alti nelle lesioni metastatiche peritoneali di quelle normali tessuti peritoneali di 24 pazienti metastasi nonperitoneal (P
< 0,05) .table 1 di espressione proteica sistema uPA nei tessuti di cancro gastrico con o senza metastasi peritoneali
proteico
metastasi peritoneale (7 casi)
Nonperitoneal metastasi (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

uPA
3.312
2.488
0.408
0.784
0.640
3.088
1.664
0.280
0.632
0.488
2.952
0.648
0.672
0.664
0.224
0.712
0.504
0.280
0.800
0.424
0.520
0.488
0.440
0.656
0.328
0.480
0.128
0.440
0.256
0.384
0.376
1.440
0.512
0.440
0.848
0.312
0.464
0.168
uPAR
3.664
4.936
1.432
0.345
1.034
2.720
2.304
0.640
1.256
0.532
2.744
2.192
1.536
0.239
0.479
1.432
1.808
0.704
0.671
0.561
0.912
1.280
0.792
0.845
0.390
1.184
0.480
0.272
0.432
0.633
1.064
2.728
1.280
0.467
0.291
1.120
0,968 0,776

PAI-1
1.511
4.204
0,568
3.665
Nessun rilevamento
3.872
1.725
0,262
1.426
0,071
2.782
0,876 0,488

3.598
Nessun rilevamento
0,369 0,745

0,662 0,488

Nessun rilevamento
1.315
3.023
0,894 0,127

0,289
1.041
0,262 0,963

Nessun rilevamento
0.195
1.181
0,977
0.041
0,329 0,395

0,085 0,316

0.382
uPA rilevamento di attività
Abbiamo inoltre rilevato l'attività uPA nelle lesioni metastatiche peritoneale e CEA-negativi nonperitoneal tessuti metastatici di 7 metastasi peritoneali pazienti, e CEA-negativi tessuti normali peritoneali di 24 pazienti metastasi nonperitoneal. I risultati hanno indicato che nessuna discrepanza statistica è stata osservata in vari tessuti differenti (tabella 2) .table 2 attività uPA nei tessuti di cancro gastrico con o senza metastasi peritoneali
peritoneale metastasi (7 casi)
metastasi Nonperitoneal (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

19.936
16.536
3.914
4.510
5.635
0.846
3.091
1.942
5.407
4.151
1.417
8.725
3.117
4.702
0.899
2.352
16.170
2.142
10.046
2.419
2.820
4.799
1.302
3.730
2.828
2.123
3.310
5.299
7.287
1.233
6.066
6.533
7.922
6.485
8.150
7,802
4.466
3.468
Discussione
Grazie alla sua mancanza di specifiche manifestazioni cliniche nella fase iniziale di metastasi peritoneale, l'opportunità trattamento ottimale è sempre stata persa in pazienti affetti da cancro gastrico. Il verificarsi di ascite, tumori addominali, e ostruzioni intestinali indica una fase avanzata del cancro gastrico. Pertanto, la diagnosi efficace del cancro gastrico con metastasi peritoneale è ancora una sfida nelle cliniche. Attualmente, il metodo diagnostico principale per cancro gastrico con metastasi peritoneali comprende lavaggio peritoneale e di indagine citologica [18, 19]. Tuttavia, i risultati positivi indicano solo subclinica metastasi peritoneale poiché la metastasi peritoneale è, inoltre, non emergenti anche se le cellule tumorali sono presenti nel fluido peritoneale. Così, rilevamento nei tessuti peritoneale sembra essere più diretto e preciso. Sorprendentemente, tessuti peritoneali coprono tutta la cavità peritoneale, mentre l'impianto di cellule tumorali è casuale, così rilevamento diretto delle cellule tumorali nei tessuti peritoneali è molto difficile. I biologi molecolari credono che ci sono alcuni cambiamenti molecolari in cellule tumorali di sé e dei loro tessuti colpiti, e questi cambiamenti nei tessuti può essere avviata prima che le cellule tumorali contatto con loro [9]. Sulla base di questo concetto, abbiamo studiato i cambiamenti molecolari nei tessuti peritoneali per esplorare il potenziale diagnosi di metastasi peritoneale.
CEA è un antigene comune associata al tumore, ed è accettata a livello internazionale come il marcatore tumorale gastroenterico [20, 21]. Pertanto, abbiamo rilevato l'espressione di CEA nei tessuti peritoneali. Positivi risultati CEA-espressione indicano che le cellule tumorali sono presenti nei tessuti peritoneale. Come previsto, i nostri risultati hanno mostrato che CEA era espresso in tutte le lesioni metastatiche peritoneali di sette pazienti metastasi peritoneali. È interessante notare, ci sono stati tre pazienti con metastasi peritoneali nei quali CEA è stato espresso positivamente nei tessuti metastatici nonperitoneal e due pazienti con metastasi nonperitoneal che avevano espressione CEA positivo nelle normali tessuti peritoneali. Questo suggerisce che questi pazienti avevano un potenziale di sviluppo di metastasi peritoneale
AS comprende importanti enzimi proteolitici, il sistema uPA nelle cellule tumorali è stata dimostrata per interagire con la matrice extracellulare per facilitare la formazione di metastasi microambiente.; Così, il sistema uPA può essere coinvolto nel processo di metastasi peritoneale [22]. L'espressione del sistema uPA si trova ad essere aumentata in tumore e di accoglienza tessuti impiantati [23, 24]. Il sistema uPA è costituito dal serina proteasi uPA, il recettore glycolipid-ancorato, uPAR, e l'inibitore serpina, PAI-1, [25]. Pertanto, abbiamo voluto indagare variazioni complessivamente in questi tre fattori in tessuti peritoneali con o senza metastasi
Il sistema uPA è ampiamente distribuito in varie cellule.; la nostra RT-PCR ha dimostrato che uPA, uPAR, e PAI-1 potrebbe anche essere espresse in cellule mesoteliali. Per evitare risultati aspecifici, ulteriormente ELISA quantitativa è stata utilizzata per rilevare l'espressione delle proteine ​​del sistema uPA. Abbiamo scoperto che uPA, uPAR, e PAI-1 contenuto di proteine ​​erano significativamente più alti nelle lesioni o tessuti peritoneali CEA-negativi dei pazienti metastasi peritoneali CEA-positivo se confrontato con i tessuti normali peritoneale di pazienti metastasi nonperitoneal (P
< 0,05) . In particolare, ci può essere una maggiore rilevanza clinica in aumento del contenuto proteico sistema uPA nei tessuti peritoneale CEA-negativi dei pazienti metastasi peritoneali. Questa scoperta ha indicato che questi tessuti peritoneali CEA-negativo potrebbe essere in uno stato di subclinica metastasi peritoneale e che la progressione di questa malattia potrebbe portare a metastasi peritoneali. Sebbene le modifiche al sistema uPA nei tessuti peritoneali non sono ancora definitivamente state dimostrate in cellule tumorali, le variazioni di tessuti peritoneali almeno fornisce un valore di riferimento per la diagnosi di metastasi peritoneale [26]. Heiss et al
. [27] trovano che uPAR potrebbe essere considerato come un indice di carico per la previsione di cancro allo stomaco midollo osseo micrometastasi rispetto al citocheratina (CK18). In questo studio, il contenuto proteico uPAR è risultata significativamente maggiore nei CEA-negativo tessuti peritoneale di pazienti metastasi peritoneali che nei tessuti peritoneale CEA-negativi dei pazienti metastasi nonperitoneal (P
< 0,05). In breve, si suggerisce che l'aumento uPAR e PAI-1 nei tessuti espressioni peritoneali dei pazienti metastasi nonperitoneal può essere considerata come un indicatore di riferimento per le metastasi peritoneali.
Da saggio dell'attività uPA nei tessuti di cancro gastrico e la loro matrice extracellulare, Okusa et al
. [28] Relazione che l'attività uPA superiore è significativamente associata a tumori con metastasi peritoneali e tumori con l'invasione più in profondità nella parete gastrica. uPA prodotto dalle cellule stromali possono disciplinare l'invasione delle cellule tumorali [29]. Tuttavia, i nostri risultati hanno dimostrato che non vi era alcuna differenza significativa nell'attività uPA tra i diversi tessuti. Ciò può essere attribuito all'attività dinamica di uPA, che sembra essere dipendente da particolari ambienti cellulari e afferma che incontra [30]
. Conclusioni
Il nostro studio dimostra che l'espressione del sistema uPA è significativamente più alta nei tessuti peritoneali dei pazienti metastasi peritoneali rispetto ai pazienti metastasi nonperitoneal. Questa differenza espressione può costituire un riferimento per la diagnosi di metastasi peritoneale. Tuttavia, vi sono ancora alcune limitazioni in questo studio. Il numero di casi inclusi in questo studio era piuttosto piccola, soprattutto perché alcuni pazienti con metastasi peritoneali sono stati ricoverati nel nostro ospedale tra luglio 2010 e dicembre 2010. Abbiamo cercato di rimuovere l'influenza di questo problema includendo tessuti (tra cui omento majus, pelveoperitoneum, e del peritoneo diaframmatico) in questo studio. Ulteriori studi con un numero maggiore di soggetti è ancora necessaria per ottenere risultati più chiari e convincenti
Abbreviazioni
CEA:.
Dell'antigene carcinoembrionario
DMEM:
modificata mezzo di Eagle Dulbecco
ELISA:
Enzyme-linked immunosorbent assay
GAPDH:
Glyceraldehyde-3-fosfato deidrogenasi
PCR:
reazione a catena della polimerasi
RT:
trascrittasi inversa
RT-PCR:
trascrittasi inversa reazione a catena della polimerasi
uPA:
Urokinase-tipo plasminogeno
uPAR:
Urokinase-tipo plasminogeno recettore
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Noi riconosciamo con gratitudine le seguenti persone:. Xuehua Chen, che hanno partecipato alla allineamento di sequenze e ci ha aiutato nella preparazione del manoscritto. Riconosciamo anche Yubao Ji, Yi Zhang, e Bin LV, che hanno contribuito a questo studio. 'File inviati originali per le immagini
Di seguito sono riportati i link agli autori'
Autori fascicoli presentati originali per immagini. 'file originale per la figura 1 40001_2012_56_MOESM2_ESM.tif Autori 40001_2012_56_MOESM1_ESM.tif autori file originale per la figura 2 interessi in competizione
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari o non finanziari concorrenti.
contributi degli autori
YD e ZZ progettato lo studio, ed eseguito RT-PCR, ELISA, e rilevamento di attività con HZ e ZZhou. YD, MZ, e XW partecipato alla allineamento di sequenze e redatto il manoscritto. ZZ ha contribuito a condurre l'analisi statistica. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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