Klinisk betydning av UPA system i magekreft med peritoneal metastase

Klinisk betydning av det uPA-systemet i magekreft med peritoneal metastase
Abstract
Bakgrunn
Det har vist seg at urokinase-type plasminogen aktivator (uPA) er involvert i tumorcellemetastase av nedbrytning av ekstracellulær matriks. Men det er lite direkte bevis for klinisk uPA system uttrykk i peritoneal metastatisk vev av magekreft. Målet med denne studien var å undersøke uPA system uttrykk i peritoneal vev av peritoneal og nonperitoneal metastase pasienter, og å utforske den diagnostiske verdien av uPA system.
Metoder
Uttrykk for uPA, uPAR, og PAI-1 var målt ved hjelp av semi-kvantitativ RT-PCR og ELISA. uPA-aktivitet ble påvist ved anvendelse av et uPA aktivitet kit. Search Results
Det var ingen signifikant forskjell i uPA, uPAR, og PAI-1-ekspresjon i to typer av peritoneal vev i syv pasienter med peritoneal metastasering. Imidlertid, uPA, uPAR, og PAI-1 uttrykk i peritoneal-metastatiske lesjoner var betydelig høyere enn de hos normale peritoneale vev av 24 nonperitoneal metastase pasienter (P
< 0,05). Videre ble ingen statistisk avvik på uPA aktivitet observert i ulike vev.
Konklusjoner
uttrykk for uPA system positivt korrelerer med peritoneal metastasering av magekreft. Dette uttrykket forskjellen i peritoneal eller nonperitoneal metastase pasienter kan gi en referanse for diagnostisering av peritoneal metastaser.
Nøkkelord
Magekreft ELISA Peritoneal metastase RT-PCR UPA system Bakgrunn
Selv om forekomst og dødelighet av magekreft har sunket i Kina i løpet av de siste tiårene, er magekreft fortsatt en stor belastning for den lokale helse-programmet [1]. Viktigere, gjentakelse av magekreft oppstår selv etter potensielt kurativ reseksjon, oftest i form av peritoneal metastaser [2]. Det er derfor et stort behov for å utvikle effektive tidlig diagnose strategier for peritoneal metastasering av magekreft.
Cancer invasjon og metastasering er multifaktorielle prosesser [3] og et viktig skritt innebærer påfølgende ødeleggelse og oppløsning av ekstracellulære matrise og basalmembraner, som i sin tur krever deltagelse av flere proteolytiske enzymsystemer, som for eksempel serin proteaser og metallproteaser [4]. Urokinase-type plasminogen aktivator (uPA) er en av de serinproteinaser og det binder seg til sin reseptor, den uPA-reseptoren (uPAR) på overflaten av tumorcellen. Etter aktivering, er celle-bundet uPA som kan omdanne plasminogen til plasmin, som er i stand til deretter å degradere flere komponenter i den ekstracellulære matriks [5]. Virkningen av den uPA-uPAR-komplekset på plasminogen kan reguleres ved hjelp av proteasehemmere PAI [6, 7]. Således er en balansert produksjon av celle og pericellulær uPA, uPAR, og PAI-1 forutsetning for effektiv brennvidde proteolyse, celleadhesjon, og migrasjon, og følgelig, tumorcelle-invasjon og metastase [8, 9].
Det har blitt observert at den uPA-systemet er godt korrelert med gastrisk kreft, ved å måle ekspresjonsnivået av uPA, uPAR, og PAI-1 i magekreft og normal mucosal vev og analysere deres korrelasjon med forskjellige kliniske patologiske egenskaper. For eksempel Plebani et al
. [10] bestemt uPAR, uPA, og PAI-1 nivåer ved hjelp ELISA i magekreft og normale prøver fra 20 pasienter med magekreft under operasjonen. uPAR Ekspresjonsnivået er vesentlig høyere i magekreft, og lave nivåer av uPAR er forbundet med en bedre overlevelse. Taniguchi et al
. [11] studert forholdet mellom ekspresjonen av uPAR og clinicopathologic parametre ved hjelp av immunhistokjemisk analyse fra 102 primære gastriske karsinomer. uPAR immunoreaktivitet ble observert i 38 tilfeller av 102 (37%). I tillegg er uttrykk for uPA, uPAR, og PAI-1 signifikant korrelert med forskjellige clinicopathological faktorer: tumor størrelse, dybde av tumor invasjon, differensiering, lymfeknutemetastase [12-15], og peritoneum metastase [16, 17].
imidlertid har det vært svært lite direkte bevis for å demonstrere den kliniske betydningen av uPA system i sært peritoneal metastatisk fra normale peritoneal vev i magekreft. Sammenlignet med vanlig distribusjon og arrangement av lymfeknuter, har peritoneal vev et større område, opptar hele bukhulen, og dermed innebærer mer vilkårlighet og uforutsigbarhet i celle peritoneal metastaser i magekreft. Dermed målet med denne studien var å undersøke nærmere uttrykket forskjellen på UPA system mellom peritoneal metastatisk vev og normale peritoneal vev av magekreft og for å bekrefte diagnosen betydningen av UPA-systemet ved å kombinere disse resultatene med kliniske data.
metoder
klinisk prøve
Vi vurderte 31 pasienter (21 menn, 10 kvinner) med en diagnose av magekreft, som hadde vært innlagt på vår avdeling mellom juli 2010 og desember 2010. gjennomsnitts~~POS=TRUNC alderen~~POS=HEADCOMP var 62.58 år (range, 23-85). Pasientene ble diagnostisert med magekreft basert på preoperative eller postoperative patologisk analyse. Blant dem, 7 pasienter hadde peritoneal metastase (patologisk Type: 1 tilfelle av moderat differensiert rørformet adenokarsinom, 1 tilfelle av grad II til III adenokarsinom, 3 tilfeller av dårlig differensiert adenokarsinom og 3 tilfeller av dårlig differensiert adenokarsinom kombinert med signetring cell carcinoma) , mens 24 pasienter hadde nonperitoneal metastase (patologisk type: 3 tilfeller av moderat differensiert rørformet adenokarsinom, 3 tilfeller av klasse II adenokarsinom, 2 tilfeller av grad II til III adenokarsinom, 9 tilfeller av dårlig differensiert adenokarsinom, 3 tilfeller av signetring cellekreft, 1 tilfelle av mucinous karsinom, en sak av grad II adenokarsinom kombinert med signetring cellekreft, 1 tilfelle av grad III adenokarsinom kombinert med signetring cellekreft, og 1 tilfelle av grad II adenokarsinom kombinert med mucinous karsinom).
i pasienter med peritoneal metastaser, skåret vi peritoneal metastase lesjoner, samt en liten mengde av omentum majus, pelveoperitoneum, og magen bukhinne uten peritoneal metastaser. I pasienter med nonperitoneal metastaser, ble noen resections av omentum majus, pelveoperitoneum, og diaphragmatic bukhinne også utført. De innsamlede prøvene ble lagret ved -80 ° C for videre analyse.
Alle pasientene var i live på slutten av forskningen, og vår studie ble godkjent av etisk komité for Shanghai East Hospital, tilknyttet Tongjiuniversitetet.
celle~~POS=TRUNC kultur~~POS=TRUNC
Celler fra en peritoneal mesothelial cellelinje (HMrSV5) ble opprettholdt i DMEM (Sigma, St. Louis, USA) supplert med 10% føtalt bovint serum. Cellene ble dyrket nesten hver dag med 1: 4 eller 1: 5 fortynning i kulturflasker ved 37 ° C under en atmosfære av 5% CO 2
Totalt RNA-ekstraksjon og cDNA-syntese
Total RNA ble. isoleres ved celle nedbør hjelp av en RNeasy ™ RNA ekstraksjon sensoren ved å følge produsentens instruksjoner (Qiagen, Valencia, USA). RNA renhet og konsentrasjon ble bestemt ved spektrofotometrisk absorbans ved 260 og 280 nm, respektivt. Revers transkripsjon ble utført på 1 pg av total RNA ved anvendelse av oligo (dT) primere og AMV revers transkriptase (Promega, Madison, USA). Den 20 ul PCR-reaksjonsblandingen inneholdt 2 ul 10 x RT buffer, 2 ul dNTP, 4 pl MgCl 2, 0,5 mL RNasin, 1 pl oligo (dT) 18, 0,75 mL revers transkriptase, og en mikrogram RNA . PCR tilstand var 70 ° C i 10 min, 42 ° C i 15 min, og 99 ° C i 5 minutter, hvoretter cDNA ble lagret ved 4 ° C (i løpet av 3 måneder).
Semi-kvantitativ RT- PCR
Den genuttrykk nivåene av uPA, uPAR, og PAI-1 ble bestemt ved sammenligning med β-aktin-gen eller glyceraldehyd-3-fosfat dehydrogenase (GAPDH). Den 25 pl RT-PCR-reaksjonsblanding inneholdt 1 ul cDNA, sense og anti-sense primerne (hver 0,25 ul), 2,5 ul 10 x PCR-buffer, 2 pl 25% MgCl 2, 0,5 ul Taq-polymerase, en ul dNTP og 17,5 mL RNase-fritt H 2o. Nestet PCR ble anvendt for amplifikasjon av carcinoembryonic antigen (CEA) med 1 pl av første PCR-produkt som benyttes for den andre PCR-templat. Forsterkerbetingelsene var: (i) opprinnelig denaturering ved 95 ° C i 5 min; (Ii) 30 sykluser med denaturering ved 94 ° C i 1 min; (Iii) annealing ved 56 ° C i 30 s for uPA, 60 ° C i 1 min for uPAR, 55 ° C i 1 min for PAI-1, eller 72 ° C i 2,5 min for CEA; og (iv) forlengelse ved 72 ° C i 1 min og 2,5 min. PCR-primere som ble anvendt var som følger: for uPA, A, 5'-AGAATTCACCACCATCGA GA-3 'og B, 5'-ATCAGCTTCACAACAGTCA T-3'; for uPAR, A, 5'-ACA GGAGCTGCCCTCGCGAC-3 'og B, 5'-GAGGGGGATTT CAGGTTT AGG-3'; for PAI-1, A, 5'-CTTTGGTGAAGGGTCTGC-3 'og B, 5'-CTC CACCTCTGAAAAGTCC-3'; for CEA, A, 5'-TCTGGAACTTCTCCTGGTCT CAGCTGG-3 ', B, 5'-TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC-3', og C, 5'-GGGCCACTGTCGGCATCATG ATTGG-3 '; for β-aktin, A, 5'-TTGAAGGTAGTTTC GGGAAT-3 'og B, 5'-GAA AATCTG GCACCACAC CTT-3'; for GAPDH, A, 5'-GAAGGTGAAGGCGGAGT C-3 'og B, 5'-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3'. A- og B-primere for CEA ble anvendt for den første PCR, mens B og C primere ble anvendt for den annen forsterker. Amplifikasjonsproduktet var 474 bp, 1046 bp, 409 bp, 131 bp, 591 bp og 230 bp, respektivt kvantitative ELISA.
Analyse
Tris-bufret saltløsning (pH 8,5, 1,8 ml) ble tilsatt til frosne vev (100 til 300 mg) og homogeniseringen ble utført i et is-bad. Deretter ble 0,2 ml 10% Trixon X-100 tilsatt for å sikre en endelig konsentrasjon på 1% Trixon X-100 i homogenatet. Homogenatet ble rystet i 16 timer og deretter sentrifugert i en avkjølt sentrifuge ved 4 ° C i 1 time ved 100.000 g
. Supernatanten ble overført til et nytt rør, og proteinkonsentrasjonen ble bestemt ved en bicinchoninic syre assay. Konsentrasjoner av uPA, uPAR, og PAI-1 antigen ble bestemt ved hjelp av ELISA kits i henhold til produsentens instruksjoner (American Diagnostica, Greenwich, USA). Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 50 ul H 2SO 4, og absorpsjonen ble målt ved 450 nm på en ELISA-plateleser (EL312e mikroplateleser, Bio-Tek Instruments, Winooski, USA). Verdier for uPA, uPAR, og PAI-1-antigenet ble uttrykt som ng /mg protein.
UPA aktivitetsanalyse
uPA-aktivitet ble målt ved anvendelse av en uPA aktivitet analysesett (Chemicon). I korte trekk ble vev-protein blandet med analysebuffer og inkubert med et kromogent substrat i 96-brønners plater ved 37 ° C i 2 til 24 timer. Absorbansen ble avlest ved OD 405, og de aktivitet (enheter) ble ekstrapolert fra en standardkurve.
Statistisk analyse
Alle data ble analysert ved anvendelse av SAS software versjon 6.12, og resultatene ble registrert som gjennomsnittlig ± standard avvik. Signifikansen av forskjellene mellom grupper ble evaluert ved analyse av varians, etterfulgt av en paret t
test. P
< 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
Semi-kvantitativ RT-PCR analyse av CEA, uPA, uPAR, og PAI-1 mRNA uttrykk
CEA er en viktig markør for gastroenteriske svulster. Derved ble det benyttet en høy følsomhet nestet RT-PCR-metoden for å påvise ekspresjon av CEA i magekreft vev med eller uten peritoneal metastase. Som forventet, var resultatene alle positive for CEA i peritoneal metastatiske lesjoner av syv peritoneal metastase pasienter (figur 1). Også ved å blotte øye observasjon av peritoneal metastase pasienter, tre tilfeller viste CEA-positive uttrykk i nonperitoneal metastatisk vev. Blant de 24 pasientene med nonperitoneal metastaser, 2 hadde CEA-positive uttrykk i normale peritoneal vev. Ingen CEA uttrykk ble påvist i peritoneal mesothelial cellelinje HMrSV5. Imidlertid, uPA, uPAR, og PAI-1could bli uttrykt i HMrSV5-celler (figur 2). Figur 1 CEA mRNA uttrykk i syv tilfeller av magekreft med peritoneal metastaser. M: 1000 bp markør; Baner 1, 2, 3, 4, 5, 6, og 7 angitte syv peritoneale metastatiske tilfeller. p-aktin ble benyttet for intern referanse for å normalisere ekspresjon av CEA. Amplifiseringsproduktene ble 131 bp av CEA og 591 bp av β-aktin, respektivt. CEA, carcinoembryonic antigen.
Figur 2 uPA system mRNA uttrykk i HMrSV5 celle. M, 1000 bp markør; lane 1, uPA; lane 2, uPAR; felt 3, PAI-1; spor 4, β-aktin. β-aktin ble benyttet for intern referanse. Amplifiseringsproduktene ble 474 bp av uPA, 1046 bp av uPAR, 409 bp av PAI-1, og 591 bp av β-aktin, respektivt.
UPA system protein ekspresjon i magekreft vev med eller uten metastase peritoneal
En kvantitativ ELISA-metoden ble brukt til å determinate uPA, uPAR, og PAI-1 proteininnholdet i peritoneal metastatiske lesjoner og CEA-negative nonperitoneal metastatisk vev av 7 peritoneal metastase pasienter, og CEA-negative normale peritoneal vev av 24 nonperitoneal metastase pasienter. Resultatene (tabell 1) viste at det ikke var noen signifikante forskjeller i uPA, uPAR, og PAI-1-ekspresjon i to typer av peritoneal vev av syv pasienter metastase peritoneale. Imidlertid, uPA, uPAR, og PAI-1-ekspresjonen var signifikant høyere i peritoneale metastatiske lesjoner enn de normale peritoneale vev av 24 nonperitoneal metastase pasienter (P
< 0,05) .table en uPA system protein ekspresjon i magekreft vev med eller uten peritoneal metastaser
Protein
peritoneal metastase (7 tilfeller)
Nonperitoneal metastaser (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

uPA
3.312
2.488
0.408
0.784
0.640
3.088
1.664
0.280
0.632
0.488
2.952
0.648
0.672
0.664
0.224
0.712
0.504
0.280
0.800
0.424
0.520
0.488
0.440
0.656
0.328
0.480
0.128
0.440
0.256
0.384
0.376
1.440
0.512
0.440
0.848
0.312
0.464
0.168
uPAR
3.664
4.936
1.432
0.345
1.034
2.720
2.304
0.640
1.256
0.532
2.744
2.192
1.536
0.239
0.479
1.432
1.808
0.704
0.671
0.561
0.912
1.280
0.792
0.845
0.390
1.184
0.480
0.272
0.432
0.633
1.064
2.728
1.280
0.467
0.291
1.120
0,968
0,776
PAI-1
1,511
4,204
0,568
3,665
Ingen deteksjon
3,872
1,725 ​​
0,262
1,426
0,071
2,782
0,876
0,488
3,598
Ingen deteksjon
0,369
0,745
0,662
0,488
Ingen deteksjon
1,315
3,023
0,894
0,127
0,289
1,041
0,262
0,963
Ingen deteksjon
0,195
1,181
0,977
0.041
0,329
0,395
0,085
0,316
0,382
uPA aktivitetsregistrering
Vi oppdaget også uPA aktivitet i peritoneal metastatiske lesjoner og CEA-negative nonperitoneal metastatisk vev av 7 peritoneal metastase pasienter, og CEA-negative normale peritoneale vev av 24 nonperitoneal metastase pasienter. resultatene viste at ingen statistisk forskjell ble observert i en rekke forskjellige vev (tabell 2) .table to uPA-aktivitet i magekreftvevet med eller uten metastase peritoneal
peritoneal metastase (7 tilfeller)
Nonperitoneal metastaser (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

19.936
16.536
3.914
4.510
5.635
0.846
3.091
1.942
5.407
4.151
1.417
8.725
3.117
4.702
0.899
2.352
16.170
2.142
10.046
2.419
2.820
4.799
1.302
3.730
2.828
2.123
3.310
5.299
7.287
1.233
6.066
6.533
7.922
6.485
8.150
7,802
4,466
3,468
diskusjon
På grunn av sin mangel på spesifikke kliniske manifestasjoner i den tidlige fasen av peritoneal metastaser, har den optimale behandlingen muligheten alltid vært savnet i mage kreftpasienter. Forekomsten av ascites, abdominal svulster, og tarmobstruksjoner indikerer et avansert stadium av magekreft. Derfor er effektiv diagnose av magekreft med peritoneal metastase fortsatt en utfordring i klinikker. Foreløpig hoved diagnostiske metoden for magekreft med peritoneal metastase omfatter peritoneal lavage og cytologisk undersøkelse [18, 19]. imidlertid positive resultater bare indikere subklinisk peritoneal metastasering fordi det peritoneale metastasering er heller ikke emergent selv om tumorceller er til stede i peritoneal væske. Dermed synes deteksjon i peritoneal-vev for å være mer direkte og nøyaktig. Bemerkelsesverdig peritoneal vev dekke hele bukhulen, mens tumorcelle implantasjon er tilfeldig, er meget vanskelig så direkte påvisning av tumorceller i peritoneal vev. Molekylærbiologer å tro at det er noen molekylære forandringer i selv-tumorceller og deres berørte vev, og disse endringene i vevene kan startes før tumorcellene kontakte dem [9]. Basert på dette konsept, undersøkte vi molekylære forandringer i peritoneal-vev for å undersøke mulighetene diagnostisering av peritoneal metastasering.
CEA er en vanlig tumor-assosiert antigen, og er akseptert internasjonalt som gastroenteriske tumor markør på [20, 21]. Derfor har vi oppdaget at ekspresjonen av CEA i peritoneal vev. Positive CEA-ekspresjon tyder resultatene på at tumorceller er til stede i peritoneal vev. Som forventet, våre resultater viste at CEA ble uttrykt i alle peritoneal metastatiske lesjoner av syv metastase pasienter peritoneal. Interessant var det tre pasienter med peritoneal metastaser i hvem CEA ble positivt uttrykt i nonperitoneal metastatisk vev og to pasienter med nonperitoneal metastaser som hadde positiv CEA uttrykk i normale peritoneal vev. Dette tyder på at disse pasientene hadde et potensial for å utvikle peritoneal metastase
Som det inneholder viktige proteolytiske enzymer, den uPA-systemet i tumorceller er blitt vist å interagere med den ekstracellulære matriks for å lette dannelsen av mikrometastaser.; således kan den uPA-systemet være involvert i prosessen med peritoneal metastase [22]. Ekspresjon av uPA-system er funnet å være økt i implanterte tumor og vertsvev [23, 24]. Den uPA Systemet består av en serin protease uPA, glykolipidet-forankret reseptoren, uPAR, og den serpin-inhibitor, PAI-1, [25]. Derfor ønsket vi å undersøke omfattende endringer i disse tre faktorene i peritoneal vev med eller uten metastaser
uPA systemet er utbredt i forskjellige celler.; vår RT-PCR vist at uPA, uPAR, og PAI-1 kan også bli uttrykt i mesothelial celler. For å unngå uspesifikke resultater, ble ytterligere kvantitative ELISA anvendt for å detektere ekspresjon av uPA systemet proteiner. Vi fant at uPA, uPAR, og PAI-1-protein-innhold var signifikant høyere i CEA-positive lesjoner eller CEA-negative peritoneal vev i peritoneal-metastase hos pasienter sammenlignet med normale peritoneale vev nonperitoneal metastase pasienter (P
< 0,05) . Spesielt kan det være større klinisk betydning i den økede uPA system proteininnholdet i CEA-negative peritoneal vev av peritoneale metastase pasienter. Dette funnet indikerer at disse CEA-negativ peritoneal vev kan være i en tilstand av subklinisk peritoneal metastaser, og at utviklingen av denne sykdommen kan føre til peritoneal metastaser. Selv om uPA systemendringer i peritoneal-vev har ennå ikke definitivt er vist i tumorceller, endringene i peritoneale vevene i det minste gir en referanseverdi for diagnostisering av metastase peritoneal [26]. Heiss et al
. [27] finner at uPAR kan anses som en avhengig indeks for prediksjon av magekreft benmargs micrometastasis sammenlignet med cytokeratin (CK18). I denne studien uPAR proteininnholdet var også signifikant høyere i CEA-negative peritoneal vev i peritoneal-metastase pasientene enn i CEA-negative peritoneal vev av nonperitoneal metastase pasienter (P
< 0,05). I korte trekk, foreslår vi at økt uPAR og PAI-1 uttrykk i peritoneal-vev av nonperitoneal metastase pasienter kan betraktes som et referanseindikator for peritoneal metastasering.
Ved analyse av det uPA-aktivitet i magekreft vev og deres ekstracellulære matriks, Okusa et al
. [28] rapporterer at jo høyere uPA aktivitet er signifikant assosiert med tumorer med peritoneal metastaser og tumorer med dypere invasjon inn i den gastriske vegg. uPA produseres av stromale celler kan regulere kreftcelle invasjon [29]. Men resultatene viste at det ikke var noen signifikant forskjell i aktivitet mellom uPA forskjellige vev. Dette kan tilskrives den dynamiske aktiviteten av uPA, som synes å være avhengig av de spesielle cellulære miljøer og slår fast at den møter [30].
Konklusjoner
Vår studie viser at uPA system uttrykk er vesentlig høyere i peritoneal vev av peritoneal metastase pasienter enn i nonperitoneal metastase pasienter. Dette uttrykket forskjellen kan gi en referanse for diagnostisering av peritoneal metastaser. Men det er fortsatt noen begrensninger i denne studien. Antallet saker som inngår i denne studien var ganske små, hovedsakelig fordi få pasienter med peritoneal metastaser ble innlagt i sykehuset mellom juli 2010 og desember 2010. Vi prøvde å fjerne påvirkning av dette problemet ved å inkludere vev (inkludert omentum majus, pelveoperitoneum, og magen peritoneum) i denne studien. Videre studier med høyere antall pasienter er fortsatt behov for å få klarere og mer overbevisende resultater
Forkortelser
CEA.
Carcinoembryonic antigen
DMEM:
Dulbeccos modifiserte Eagles medium
ELISA:
Enzyme-linked immunsorbent analyse
GAPDH:
glyseraldehyd-3-fosfat dehydrogenase
PCR:
Polymerase kjedereaksjon
RT:
Revers transkriptase
RT-PCR:
Revers transkriptase polymerase chain reaction
uPA:
Urokinase-type plasminogen aktivator
uPAR:
Urokinase-type plasminogen aktivator reseptoren
Erklæringer
Takk
Vi erkjenner følgende personer takknemlig:. Xuehua Chen, som deltok i sekvensen innretting og bidro i utarbeidelsen av manuskriptet. Vi erkjenner også Yubao Ji, Yi Zhang, og Bin LV, som har bidratt til denne studien.
Forfatternes opprinnelige innsendte filer for Images Nedenfor er linkene til forfatternes originale innsendte filer for bilder. 40001_2012_56_MOESM1_ESM.tif Forfatteroriginalfilen for figur 1 40001_2012_56_MOESM2_ESM.tif Forfatteroriginalfilen for figur 2 konkurrerende interesser
Forfatterne hevder at de ikke har noen finansielle eller ikke-finansielle konkurrerende interesser.
Forfatternes bidrag
YD og ZZ designet studien, og utført RT-PCR, ELISA, og aktivitetsregistrering med HZ og ZZhou. YD, MZ, og XW deltok i sekvensen justering og utarbeidet manuskriptet. ZZ bidratt til å gjennomføre statistisk analyse. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• FOLFIRI som andrelinjebehandling hos pasienter med docetaxel-forbehandlet magekreft: en historisk kohort
• Påvisning av arrangøren hypermethylation av CpG øya E-cadherin i mage hjerte adenocarcinoma