Klinikai jelentősége uPA rendszer gyomorrák peritoneális áttétek

Klinikai jelentősége uPA rendszer gyomorrák peritoneális áttétek
Abstract
alapon
Bebizonyosodott, hogy az urokináz-típusú plazminogén aktivátor (uPA) részt vesz a tumor-metasztázis által lebontására az extracelluláris mátrixban. Azonban kevés közvetlen bizonyíték klinikai uPA rendszer expressziója peritoneális metasztázisos szövet gyomorrák. A cél az volt, hogy vizsgálja uPA rendszer kifejezést peritoneális szövetekben peritonealis és nonperitoneal metasztázis betegek, és fedezze fel a diagnosztikus értékét uPA rendszer. Katalógusa módszerei katalógusa kifejezések uPA, uPAR, és a PAI-1 volt mért fél-kvantitatív RT-PCR és ELISA-val. uPA aktivitást detektáltuk uPA aktivitásának kit.
eredménye
Nem volt szignifikáns különbség a uPA, uPAR, és a PAI-1 expressziót két típusú peritoneális szövet hét betegek peritoneális áttétek. Azonban, uPA, uPAR, és a PAI-1 kifejezések peritoneális metasztázisos károsodások szignifikánsan magasabbak, mint a normál peritoneális szöveteiben 24 nonperitoneal metasztázis betegeknél (p
< 0,05). Ezenkívül, nincs statisztikai eltérés uPA aktivitást figyeltünk meg különböző szövetekben.
Következtetések
a kifejezés az uPA rendszer pozitívan korrelál a peritoneális áttétek gyomorrák. Ez a kifejezés a különbség a peritoneális vagy nonperitoneal áttét betegek egy referencia diagnosztizálásához hashártya áttét. Katalógusa Kulcsszavak katalógusa Gyomorrák ELISA peritoneális áttét RT-PCR UPA rendszer Background katalógusa Bár a megbetegedési és elhalálozási gyomorrák csökkent Kínában az elmúlt néhány évtizedben, a gyomorrák még mindig nagy teher a helyi egészségügyi program [1]. Fontos, hogy a kiújulás gyomorrák jelentkezik még azután is, potenciálisan kuratív rezekció, leggyakrabban formájában peritoneális áttétek [2]. Így van sürgősen szükség, hogy dolgozzon ki hatékony korai diagnózis stratégiák hashártya áttét gyomorrák. Katalógusa Cancer invázió és metasztázis multifaktoriális eljárások [3], és nélkülözhetetlen a lépésben egymást követő pusztítás és feloldás az extracelluláris mátrix és a bazális membránok, ami viszont részvételét igényli számos proteolitikus enzim rendszerek, mint például szerin-proteázok és a metalloproteázok [4]. Urokináz típusú plazminogén aktivátor (uPA) egyike a szerin proteinázok és kötődik a receptorához, az uPA-receptor (uPAR) felületén a tumorsejt. Az aktiválás után, sejthez kötött uPA képes átalakítani a plazminogént plazminná, amely azután képes lebontani több összetevőt az extracelluláris mátrix [5]. Az akció az uPA-uPAR komplexum plazminogén vezérelhető a proteáz inhibitorok PAI [6, 7]. Így egy kiegyensúlyozott termelés a celluláris és pericelluláris uPA, uPAR, és a PAI-1 a előfeltétele hatékony fokális proteolízis, sejtadhézió, valamint a migráció, és így, a tumorsejtek invázióját és metasztázis [8, 9].
Azt megfigyelték, hogy az uPA rendszer jól korrelál gyomor rák, mérésével expressziós szintjének uPA, uPAR, és a PAI-1 a gyomorrák és a normál nyálkahártya szövet és elemezve korreláció a különböző klinikai patológiai jellemzőket. Például Plebani munkatársai katalógusa. [10] határozza uPAR, UPA és PAI-1 szint ELISA gyomorrákban és normál minták 20 gyomorrákos betegeknél műtéten átesett. uPAR expressziós szintje szignifikánsan magasabb, a gyomorrák, és alacsony a uPAR társított jobb túlélési. Stem Cells katalógusa. [11] tanulmányozták a kapcsolat a kifejezése uPAR és klinikopatológiai paraméterek immunhisztokémiai analízis 102 primer gastricus karcinómák. uPAR immunreaktivitást figyeltünk meg 38 esetből 102 (37%). Ezen túlmenően, a kifejezések uPA, uPAR, és a PAI-1 szignifikánsan korrelál különböző klinikopatológiai faktorok: a daganat mérete, mélysége a tumor invázió, a differenciálódás, nyirokcsomó-metasztázis [12-15], és a hashártya metasztázis [16, 17].
azonban már nagyon kevés közvetlen bizonyíték, hogy bizonyítsa a klinikai jelentősége uPA rendszer megkülönböztető peritoneális áttétes normális peritoneális szövetekben a gyomorrák. Összehasonlítva a hagyományos forgalmazási és elrendezése nyirokcsomók, peritoneális szövet egy nagyobb területet elfoglaló egész hasüregben, ezért járó több véletlenszerű és kiszámíthatatlan a sejtek hashártya áttét gyomorrák. A cél tehát az volt, hogy tovább vizsgálják a kifejezés különbsége uPA rendszer között peritoneális áttétes szövetek és a normális szövetek peritoneális gyomorrák és a diagnózis megerősítésére jelentőségét uPA rendszer kombinálásával ezeket az eredményeket a klinikai adatok. Katalógusa módszerek
klinikai minta katalógusa Megvizsgáltuk 31 beteg (21 férfi, 10 nő) a diagnózis gyomorrák, aki elismerte, hogy a részleg között 2010. július 2010. december átlagéletkora 62,58 év volt (tartomány, 23-85). A betegnél a gyomorrák alapján preoperatív és posztoperatív patológiai elemzése. Közülük 7 betegnél peritonealis metasztázis (kóros típusa: 1 esetben közepesen differenciált csöves adenokarcinóma, 1 esetben grade II-III-adenokarcinóma, 3 esetben a rosszul differenciált adenocarcinoma, és 3 esetben rosszul differenciált adenocarcinoma együtt pecsétgyűrű sejtes karcinóma) , míg 24 betegnél nonperitoneal metasztázis (kóros típusa: 3 esetben közepesen differenciált csöves adenokarcinóma, 3 esetben másodfokban adenokarcinóma, 2 esetben grade II-III-adenokarcinóma, 9 esetben rosszul differenciált adenocarcinoma, 3 esetben pecsétgyűrű sejtes karcinóma, 1 esetben mucinosus carcinoma, 1 esetben másodfokban adenocarcinoma együtt pecsétgyűrű sejtes karcinóma, 1 esetben grade III adenocarcinoma együtt pecsétgyűrű sejtes carcinoma, és 1 esetben másodfokban adenocarcinoma kombinált mucinosus carcinoma).
a betegek peritoneális áttétek, azt kivágjuk a peritoneális metasztázis elváltozások, valamint a kis mennyiségű cseplesz majus, pelveoperitoneum, és rekeszsérv hashártya nélkül peritoneális áttétek. A betegek nonperitoneal áttétek, néhány reszekció a cseplesz majus, pelveoperitoneum és rekeszizom a hashártya is végeztünk. Az összegyűjtött mintákat -80 ° C-on további elemzés céljából.
Minden beteg életben volt, a végén a kutatás, és a mi jóváhagyta a vizsgálatot az etikai bizottság a Shanghai East Hospital, kapcsolt Tong Ji Egyetemen.
Sejtkultúra
származó sejteket peritoneális mesothelialis sejtvonal (HMrSV5) tartottunk fenn DMEM-ben (Sigma, St. Louis, USA), kiegészítve 10% magzati borjúszérummal. A sejteket átoltjuk szinte minden nap 1: 4 vagy 1: 5 hígítás tenyésztőedényekben 37 ° C-atmoszférában, 5% CO 2.
Teljes RNS extrakció és cDNS-szintézis
teljes RNS-t izoláljuk sejt alkalmazásával kicsapással egy RNeasy ™ RNS extrakciós kit követően a gyártó utasításai (Qiagen, Valencia, USA). Az RNS tisztaságát és koncentrációját úgy határoztuk meg spektrofotometriás abszorbancia 260 és 280 nm-en, ill. A reverz transzkripciót végeztünk 1 ng teljes RNS oligo (dT) primereket és AMV reverz transzkriptáz (Promega, Madison, USA). A 20 ul PCR-reakcióelegy 2 ul 10 × RT-puffert, 2 pl dNTP-k, 4 ul MgCI 2, 0,5 nl RNasin, 1 ul oligo (dT) 18, 0,75 ul reverz transzkriptáz, és 1 ng RNS . A PCR-feltétel volt 70 ° C-on 10 percig, 42 ° C-on 15 percig, és 99 ° C-on 5 percig, ami után a cDNS-t 4 ° C-on (3 hónapon belül).
Félig kvantitatív RT- PCR
A gén expressziós szintjének uPA, uPAR, és a PAI-1 összevetve határoztuk meg, a β-aktin gén vagy gliceraldehid-3-foszfát-dehidrogenáz (GAPDH). A 25 ul RT-PCR-reakcióelegy 1 ul cDNS-t, szensz és anti-szensz-primereket (egyenként 0,25 ul), 2,5 ul 10 × PCR puffert, 2

• FOLFIRI mint második vonalbeli kezelés betegek docetaxel-előkezelt gyomorrák: történelmi cohort
• Kimutatása promoter hipermetiláció CpG sziget E-cadherin a gyomor szív adenocarcinoma