Signification clinique du système uPA dans le cancer gastrique avec métastases péritonéales

la signification clinique du système uPA dans le cancer gastrique avec métastases péritonéales
Résumé de l'arrière-plan
Il a été démontré que l'activateur du plasminogène de type urokinase (uPA) est impliqué dans la métastase des cellules tumorales en dégradant la matrice extracellulaire. Cependant, il y a peu de preuves directes de l'expression du système uPA clinique dans les tissus métastatiques péritonéales du cancer gastrique. L'objectif de cette étude était d'étudier l'expression du système uPA dans les tissus péritonéale des patients atteints de métastases péritonéales et nonperitoneal, et d'étudier la valeur diagnostique du système uPA. De l'expression des
Méthodes de uPA, uPAR et PAI-1 ont été mesurée par semi-quantitative par RT-PCR et par ELISA. activité uPA a été détectée en utilisant un kit d'activité uPA.
Résultats
Il n'y avait pas de différence significative dans uPA, uPAR et PAI-1 expression dans deux types de tissu péritonéal chez sept patients avec métastases péritonéales. Cependant, uPA, uPAR et PAI-1 expressions dans les lésions métastatiques péritonéale étaient significativement plus élevés que ceux dans les tissus péritonéale normales de 24 patients atteints de métastases nonperitoneal (P
< 0,05). Par ailleurs, aucune différence statistique de l'activité de uPA a été observée dans divers tissus différents.
Conclusions The expression du système uPA est positivement corrélée à la métastase peritoneale d'un cancer gastrique. Cette différence d'expression chez les patients de métastases péritonéales ou nonperitoneal peut fournir une référence pour le diagnostic de métastases péritonéales.
Mots-clés
cancer gastrique ELISA péritonéale métastase UPA RT-PCR système Contexte
Bien que l'incidence et la mortalité du cancer gastrique ont diminué en Chine au cours des dernières décennies, le cancer gastrique est encore un gros fardeau du programme local de santé [1]. Fait important, la récurrence du cancer gastrique se produit même après résection potentiellement curative, le plus souvent sous la forme de métastases péritonéales [2]. Ainsi, il existe un besoin urgent de développer des stratégies de diagnostic précoce efficaces pour métastases péritonéales du cancer gastrique. Invasion et les métastases du cancer
sont des processus multifactoriel [3] et une étape essentielle implique la destruction consécutive et la reconstitution de la matrice et sous-sol membranes extracellulaires, ce qui nécessite la participation de plusieurs systèmes d'enzymes protéolytiques, telles que les sérine-protéases et métalloprotéases [4]. l'activateur du plasminogène de type urokinase (uPA) est l'un des sérine protéases, et il se lie à son récepteur, le récepteur uPA (uPAR) sur la surface de la cellule tumorale. Après l'activation, uPA lié aux cellules est capable de convertir le plasminogène en plasmine, qui est alors capable de dégrader plusieurs composants de la matrice extracellulaire [5]. L'action du complexe d'uPA-uPAR sur plasminogène peut être contrôlée par les inhibiteurs de la protéase du PAI [6, 7]. Ainsi, une production équilibrée cellulaire et péricellulaire uPA, uPAR, et PAI-1 est la condition sine qua non pour une protéolyse efficace focale, l'adhésion cellulaire et la migration, et donc, l'invasion des cellules tumorales et des métastases [8, 9].
Il a On a observé que le système uPA est bien corrélée avec les cancers gastriques, en mesurant le niveau de l'uPA, uPAR, et PAI-1 expression dans le cancer gastrique et le tissu normal de la muqueuse et l'analyse de leur corrélation avec les différentes caractéristiques pathologiques cliniques. Par exemple, Plebani et al
. [10] déterminer l'uPAR, uPA et de PAI-1 par ELISA dans le cancer gastrique et des échantillons normaux provenant de 20 patients atteints d'un cancer gastrique subissant une intervention chirurgicale. le niveau d'expression d'uPAR est significativement plus élevée dans le cancer gastrique, et de faibles niveaux d'uPAR sont associés à une meilleure survie. Taniguchi et al
. [11] ont étudié la relation entre l'expression de l'uPAR et les paramètres clinico-pathologiques en utilisant une analyse immunohistochimique de 102 carcinomes gastriques primaires. uPAR immunoréactivité a été observée dans 38 cas sur 102 (37%). En outre, les expressions de uPA, uPAR et PAI-1 sont significativement corrélés avec divers facteurs clinicopathologiques: taille de la tumeur, la profondeur de l'invasion tumorale, la différenciation, métastase ganglionnaire [12-15], et métastases péritoine [16, 17].
Cependant, il a été très peu de preuves directes pour démontrer l'importance clinique du système uPA dans métastatique péritonéale distinctif des tissus péritonéale normaux dans le cancer gastrique. Par rapport à la répartition régulière et la disposition des ganglions lymphatiques, du tissu peritoneal a une plus grande surface, qui occupe la totalité de la cavité péritonéale, ainsi impliquant plus aléatoire et imprévisible dans la cellule de métastases dans le cancer gastrique péritonéale. Ainsi, l'objectif de cette étude était d'étudier plus avant la différence d'expression du système uPA entre les tissus métastatiques péritonéale et les tissus péritonéale normales de cancer de l'estomac et de confirmer l'importance de diagnostic du système uPA en combinant ces résultats avec les données cliniques.
Méthodes
échantillon clinique
Nous avons évalué 31 patients (21 hommes, 10 femmes) avec un diagnostic de cancer de l'estomac, qui avait été admis dans notre département entre Juillet 2010 et Décembre 2010. Leur âge moyen était de 62,58 ans (extrêmes, 23-85). Les patients ont été diagnostiqués avec un cancer gastrique basé sur l'analyse pathologique préopératoire ou postopératoire. Parmi eux, 7 patients avaient péritonéale métastases (type pathologique: 1 cas d'adénocarcinome tubulaire modérément différencié, 1 cas de grade II à III adénocarcinome, 3 cas d'adénocarcinome peu différencié, et 3 cas d'adénocarcinome peu différencié combiné avec carcinome chevalière) , tandis que 24 patients avaient des métastases nonperitoneal (type pathologique: 3 cas d'adénocarcinome tubulaire modérément différencié, 3 cas de grade II adénocarcinome, 2 cas de grade II à III adénocarcinome, 9 cas d'adénocarcinome peu différencié, 3 cas de carcinome chevalière, 1 cas de carcinome mucineux, 1 cas de grade II adénocarcinome combiné avec carcinome chevalière, 1 cas de grade III adénocarcinome combiné avec carcinome chevalière, et 1 cas de grade II adénocarcinome combiné avec le carcinome mucineux).
Dans le les patients atteints de métastases péritonéales, on a excisé les lésions de métastases peritoneales, ainsi que d'une petite quantité de épiploon majus, pelveoperitoneum et le péritoine diaphragmatique sans métastase peritoneale. Chez les patients avec métastases nonperitoneal, quelques résections du majus épiploon, pelveoperitoneum, et le péritoine diaphragmatique ont également été réalisées. Les échantillons prélevés ont été stockés à -80 ° C pour analyse ultérieure.
Tous les patients étaient en vie à la fin de la recherche, et notre étude a été approuvée par le comité d'éthique de l'Hôpital Est de Shanghai, affilié à l'Université Tong Ji.
cellules de culture cellulaire provenant d'une lignée de cellules mésothéliales péritonéale (HMrSV5) ont été maintenues dans DMEM (Sigma, St. Louis, USA) supplémenté avec du sérum de veau fœtal à 10%. Les cellules ont été repiquées presque tous les jours de 1: 4 ou 1: 5 dilution dans des flacons de culture à 37 ° C sous une atmosphère de 5% de CO 2
extraction de l'ARN total et synthèse d'ADNc de l'ARN total a été. isolé par précipitation cellulaire en utilisant un kit d'extraction d'ARN RNeasy ™ en suivant les instructions du fabricant (Qiagen, Valencia, États-Unis). La pureté et la concentration de l'ARN ont été déterminées par spectrophotométrie l'absorbance à 260 et 280 nm, respectivement. Une transcription inverse a été réalisée sur 1 ug d'ARN total en utilisant oligo (dT) et des amorces transcriptase inverse AMV (Promega, Madison, USA). Le mélange réactionnel de PCR de 20 ul contenait 2 ul de 10 x tampon RT, 2 dNTP ul, 4 ul MgCl 2, 0,5 ul de RNasin, 1 pi d'oligo (dT) 18, 0,75 ul de transcriptase inverse et l'ARN 1 pg . La condition de PCR était de 70 ° C pendant 10 min, 42 ° C pendant 15 min et 99 ° C pendant 5 min, après quoi, l'ADNc a été stocké à 4 ° C (dans les 3 mois).
Semi-quantitative RT-
PCR Les taux d'uPA, uPAR d'expression génique, et de PAI-1 ont été déterminées par comparaison avec le gène de la β-actine ou la glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH). Le mélange réactionnel RT-PCR de 25 pi contenait 1 ul d'ADNc, le sens et antisens amorces (chacun 0,25 pi), du tampon de PCR 2,5 ul de 10 x, 2 ul de 25% de MgCl 2, 0,5 pi de Taq polymerase, 1 ul de dNTP et 17,5 ul Rnase-free H 2O. Nested PCR a été utilisée pour l'amplification de l'antigène carcinoembryonnaire (CEA) avec 1 ul de premier produit de PCR utilisées pour la deuxième matrice de PCR. Les conditions d'amplification étaient les suivantes: (i) dénaturation initiale à 95 ° C pendant 5 min; (Ii) 30 cycles de dénaturation à 94 ° C pendant 1 min; (Iii) un recuit à 56 ° C pendant 30 s pour l'uPA, 60 ° C pendant 1 min pour les uPAR, 55 ° C pendant 1 min pour le PAI-1, ou 72 ° C pendant 2,5 min pour le CEA; et (iv) allongement à 72 ° C pendant 1 min ou 2,5 min. Les amorces de PCR utilisées sont les suivantes: pour l'uPA, A, 5'-AGAATTCACCACCATCGA GA-3 'et B, 5'-ATCAGCTTCACAACAGTCA T-3'; pour uPAR, A, 5'-ACA GGAGCTGCCCTCGCGAC-3 'et B 5' GAGGGGGATTT CAGGTTT AGG-3 '; PAI-1, A, 5'-CTTTGGTGAAGGGTCTGC-3 'et B, 5'-CTC CACCTCTGAAAAGTCC-3'; pour le CEA, A, 5'-TCTGGAACTTCTCCTGGTCT CAGCTGG-3 ', B 5' TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC-3 'et C-5' GGGCCACTGTCGGCATCATG ATTGG-3 '; pour la β-actine, A, 5'-TTGAAGGTAGTTTC GGGAAT-3 'et B, 5'-GAA AATCTG GCACCACAC CTT-3'; pour GAPDH, A, 5'-GAAGGTGAAGGCGGAGT C-3 'et B, 5'-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3'. Les amorces A et B du CEA ont été utilisées pour la première PCR, alors que les amorces B et C ont été utilisées pour la deuxième amplification. Le produit d'amplification était de 474 pb, 1046 pb, 409 pb, 131 pb, 591 pb et 230 pb, respectivement analyse quantitative ELISA.
Une solution saline tamponnée au Tris (pH 8,5, 1,8 ml) a été ajouté aux tissus congelés (100 à 300 mg) et de l'homogénéisation a été effectuée dans un bain de glace. Par la suite, 0,2 ml de 10% de Triton X-100 a été ajouté pour assurer une concentration finale de 1% de Triton X-100 dans l'homogénat. L'homogénat a été agité par secousses pendant 16 heures puis centrifugée dans une centrifugeuse réfrigérée à 4 ° C pendant 1 heure à 100 000 g
. Le surnageant a été transféré dans un nouveau tube et la concentration en protéine a été déterminée par un dosage de l'acide bicinchoninique. Les concentrations de uPA, uPAR, et PAI-1 antigène ont été déterminées en utilisant des kits ELISA selon les instructions du fabricant (American Diagnostica, Greenwich, États-Unis). La réaction a été arrêtée par l'addition de 50 ul H 2SO 4, et l'absorption a été mesurée à 450 nm sur un lecteur de plaque ELISA (EL312e lecteur de microplaques, Bio-Tek Instruments, Winooski, États-Unis). Les valeurs de uPA, uPAR et PAI-1 antigène ont été exprimés en ng /mg de protéine.
Dosage de l'activité uPA
activité uPA a été mesurée en utilisant un kit de dosage activité uPA (Chemicon). En bref, une protéine de tissu a été mélangé avec du tampon d'essai et on a incubé avec un substrat chromogène dans des plaques à 96 puits à 37 ° C pendant 2 à 24 h. L'absorbance a été lue à OD 405, et l'activité (unités) a été extrapolée à partir d'une courbe standard.
Analyse statistique
Toutes les données ont été analysées en utilisant la version logiciel SAS 6.12 et les résultats ont été enregistrés en tant que norme moyenne ± déviation. La signification des différences entre les groupes a été évaluée par une analyse de variance suivie d'un test de t apparié
. P
< Résultats de 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
analyse par RT-PCR semi-quantitative de la CEA, uPA, uPAR et PAI-1 expression de l'ARNm
CEA est un marqueur important pour les tumeurs gastro-intestinales. De ce fait, nous avons utilisé une grande sensibilité emboîtée méthode RT-PCR pour détecter l'expression du CEA dans les tissus de cancer gastrique avec ou sans métastases péritonéales. Comme on s'y attendait, les résultats étaient tous positifs pour le CEA dans les lésions métastatiques péritonéaux de sept patients atteints de métastases peritoneales (figure 1). En outre, par l'observation à l'œil nu des patients atteints de métastases péritonéales, trois cas ont montré l'expression CEA-positif dans les tissus métastatiques nonperitoneal. Parmi les 24 patients atteints de métastases nonperitoneal, 2 avaient expression CEA-positif dans les tissus péritonéale normaux. Aucune expression du CEA a été détectée dans la lignée cellulaire mésothéliale peritoneale HMrSV5. Cependant, l'uPA, uPAR, et PAI-1could être exprimés dans des cellules HMrSV5 (figure 2). Figure 1 CEA expression de l'ARNm dans sept cas de cancer gastrique avec métastases péritonéales. M: 1000 marqueur de pb; Les pistes 1, 2, 3, 4, 5, 6 et 7 indiquent les sept cas métastases peritoneales. ß-actine a été utilisée pour référence interne pour normaliser l'expression du CEA. Les produits d'amplification était de 131 pb du CEA et 591 pb de β-actine, respectivement. CEA, l'antigène carcinoembryonnaire.
Figure 2 uPA expression de l'ARNm du système dans la cellule HMrSV5. M, 1000 marqueur de pb; voie 1, l'uPA; piste 2, uPAR; piste 3, PAI-1; piste 4, β-actine. β-actine a été utilisée pour référence interne. Les produits d'amplification ont été 474 pb de l'uPA, 1046 pb de l'uPAR, 409 pb de PAI-1 et de 591 pb de β-actine, respectivement. Le plus uPA expression de la protéine du système dans les tissus de cancer gastrique avec ou sans peritoneale métastases
Une méthode quantitative ELISA a été utilisée pour fixer l'uPA, uPAR et PAI-1 teneur en protéines dans les lésions métastatiques péritonéale et les tissus métastatiques nonperitoneal CEA-négatifs de 7 patients atteints de métastases péritonéales, et les tissus péritonéale normaux CEA-négatifs de 24 patients atteints de métastases nonperitoneal. Les résultats (tableau 1) a indiqué qu'il n'y avait pas de différences significatives dans l'uPA, uPAR, et PAI-1 expression dans deux types de tissu peritoneal de sept patients atteints de métastases peritoneales. Cependant, l'uPA, uPAR, et PAI-1 expression étaient significativement plus élevés dans les lésions métastatiques péritonéaux que les tissus péritonéaux normaux de 24 patients atteints de métastases nonperitoneal (P
< 0,05) .Tableau 1 uPA protéine du système d'expression dans les tissus de cancer gastrique avec ou sans métastases péritonéales
Protein
métastase péritonéale (7 cas)
Nonperitoneal métastase (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

uPA
3.312
2.488
0.408
0.784
0.640
3.088
1.664
0.280
0.632
0.488
2.952
0.648
0.672
0.664
0.224
0.712
0.504
0.280
0.800
0.424
0.520
0.488
0.440
0.656
0.328
0.480
0.128
0.440
0.256
0.384
0.376
1.440
0.512
0.440
0.848
0.312
0.464
0.168
uPAR
3.664
4.936
1.432
0.345
1.034
2.720
2.304
0.640
1.256
0.532
2.744
2.192
1.536
0.239
0.479
1.432
1.808
0.704
0.671
0.561
0.912
1.280
0.792
0.845
0.390
1.184
0.480
0.272
0.432
0.633
1.064
2.728
1.280
0.467
0.291
1.120
0,968
0,776
PAI-1
1.511
4.204
0,568
3.665
Pas de détection
3.872
1.725
0,262
1.426
0,071
2.782
0,876
0,488
3.598
Pas de détection
0,369
0,745
0,662
0,488
Pas de détection
1.315
3.023
0,894
0,127
0,289
1.041
0,262
0,963
Pas de détection
0,195
1.181
0,977
0,041
0,329
0,395
0,085
0,316
0,382
uPA détection d'activité
Nous avons également détecté une activité uPA dans les lésions métastatiques péritonéale et les tissus métastatiques nonperitoneal CEA-négatifs de 7 métastases péritonéales les patients et les tissus péritonéale normaux CEA-négatifs de 24 patients atteints de métastases nonperitoneal. Les résultats indiquent qu'aucune différence statistique n'a été observée dans divers tissus différents (tableau 2) .Table 2 activité uPA dans les tissus de cancer gastrique avec ou sans métastases péritonéales
péritonéale métastases (7 cas)
métastases Nonperitoneal (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

19.936
16.536
3.914
4.510
5.635
0.846
3.091
1.942
5.407
4.151
1.417
8.725
3.117
4.702
0.899
2.352
16.170
2.142
10.046
2.419
2.820
4.799
1.302
3.730
2.828
2.123
3.310
5.299
7.287
1.233
6.066
6.533
7.922
6.485
8.150
7.802
4.466
3.468
Discussion
En raison de son manque de manifestations cliniques spécifiques dans le stade précoce de métastases péritonéales, la possibilité d'un traitement optimal a toujours été manquée chez les patients atteints de cancer gastrique. La survenue d'une ascite, tumeurs abdominales, et les obstructions intestinales indique un stade avancé de cancer de l'estomac. par conséquent, le diagnostic efficace du cancer gastrique avec métastases péritonéales est encore un défi dans les cliniques. à l'heure actuelle, la méthode de diagnostic principal pour le cancer gastrique avec métastases péritonéales comprend un lavage péritonéal et enquête cytologique [18, 19]. Cependant, les résultats positifs n'indiquent métastases péritonéales subclinique parce que la métastase péritonéale est pas non plus émergente, même si les cellules tumorales sont présentes dans le liquide péritonéal. Ainsi, la détection dans les tissus péritonéale semble être plus directe et précise. Remarquablement, les tissus du péritoine couvrent la totalité de la cavité peritoneale, tandis que l'implantation des cellules tumorales est aléatoire, la détection si directe de cellules tumorales dans les tissus du péritoine est très difficile. Les biologistes moléculaires croient qu'il ya des changements moléculaires dans les cellules auto-tumorales et leurs tissus affectés, et ces changements dans les tissus peuvent être engagées avant que les cellules tumorales contact avec eux [9]. Sur la base de cette notion, nous avons étudié les changements moléculaires dans les tissus du péritoine pour explorer le diagnostic potentiel de métastase peritoneale.
CEA est un antigène associé à une tumeur commune, et il est accepté internationalement comme marqueur de tumeur gastro-intestinale [20, 21]. Par conséquent, nous avons détecté l'expression du CEA dans les tissus péritonéale. Résultats CEA-expression positive indiquent que les cellules tumorales sont présentes dans les tissus du péritoine. Comme prévu, nos résultats ont montré que le CEA a été exprimé dans toutes les lésions métastatiques péritonéale de sept patients atteints de métastases péritonéales. Fait intéressant, il y avait trois patients avec métastases péritonéales chez lesquels le CEA a été exprimée de façon positive dans les tissus métastatiques nonperitoneal et deux patients avec métastases nonperitoneal qui avaient l'expression de CEA positif dans les tissus péritonéale normaux. Ceci suggère que ces patients avaient un potentiel de développement d'une métastase peritoneale
Comme il comprend des enzymes protéolytiques importantes, le système uPA dans des cellules tumorales a été démontrée pour interagir avec la matrice extracellulaire pour faciliter la formation de micro-métastases. Ainsi, le système uPA peut être impliquée dans le processus de métastase péritonéale [22]. Expression du système uPA se trouve être augmentée dans les tissus tumoraux et de l'hôte implantés [23, 24]. Le système uPA se compose de la sérine-protéase uPA, le récepteur glycolipidique ancré, uPAR, et l'inhibiteur de serpine PAI-1 [25]. Par conséquent, nous avons cherché à étudier les changements en détail dans ces trois facteurs dans les tissus péritonéale avec ou sans métastases
Le système uPA est largement distribué dans diverses cellules. notre RT-PCR a montré que uPA, uPAR et PAI-1 pourraient même être exprimés dans des cellules mésothéliales. Pour éviter des résultats non spécifiques, en outre ELISA quantitative a été utilisée pour détecter l'expression des protéines du système uPA. Nous avons constaté que uPA, uPAR et PAI-1 les teneurs en protéines étaient significativement plus élevés dans les lésions ou les tissus péritonéale CEA-négatives des patients atteints de métastases péritonéales CEA-positif par rapport aux tissus péritonéale normaux des patients atteints de métastases nonperitoneal (P
< 0,05) . Notamment, il peut y avoir une plus grande importance clinique dans le uPA teneur accrue en protéines dans les tissus du système péritonéal CEA-négatives des patients atteints de métastases peritoneales. Cette constatation indique que ces tissus péritonéale CEA-négatives peuvent être dans un état de métastases péritonéales subclinique et que la progression de cette maladie peut conduire à des métastases péritonéales. Bien que les modifications du système uPA dans les tissus du péritoine n'a pas encore été définitivement démontré dans les cellules tumorales, les changements dans les tissus peritoneales au moins fournit une valeur de référence pour le diagnostic de métastases péritonéale [26]. Heiss et al
. [27] constatent que uPAR peut être considéré comme dépendant d'un indice pour la prédiction du cancer de l'estomac micrométastase de moelle osseuse par rapport à la cytokératine (CK18). Dans cette étude, uPAR teneur en protéines était également significativement plus élevée dans les tissus péritonéale CEA-négative des patients atteints de métastases péritonéales que dans les tissus péritonéale CEA-négatives des patients atteints de métastases nonperitoneal (P
< 0,05). En bref, nous suggérons que l'augmentation de uPAR et PAI-1 expressions dans les tissus péritonéale des patients atteints de métastases nonperitoneal peut être considéré comme un indicateur de référence pour les métastases péritonéales.
Par dosage de l'activité uPA dans les tissus de cancer gastrique et de leur matrice extracellulaire, Okusa et al
. [28] Rapport que l'activité uPA supérieur est significativement associée à des tumeurs avec métastases péritonéales et les tumeurs avec envahissement plus profondément dans la paroi gastrique. uPA produite par les cellules stromales peuvent réguler l'invasion des cellules cancéreuses [29]. Cependant, nos résultats ont montré qu'il n'y avait pas de différence significative de l'activité de uPA entre les différents tissus. Cela peut être attribué à l'activité dynamique de uPA, qui semble dépendre des environnements cellulaires particuliers et déclare qu'il rencontre [30] Conclusions
Notre étude. Montre que l'expression du système uPA est significativement plus élevé dans les tissus péritonéale des patients atteints de métastases péritonéales que chez les patients atteints de métastases nonperitoneal. Cette différence d'expression peut fournir une référence pour le diagnostic de métastases péritonéales. Cependant, il y a encore quelques limitations dans cette étude. Le nombre de cas inclus dans cette étude était assez petite, principalement parce que quelques patients atteints de métastases péritonéales ont été admis dans notre hôpital entre Juillet 2010 et Décembre 2010. Nous avons essayé de supprimer l'influence de ce problème en incluant les tissus (y compris épiploon majus, pelveoperitoneum, et le péritoine diaphragmatique) dans cette étude. Une étude plus poussée avec un plus grand nombre de sujets est encore nécessaire pour obtenir des résultats plus clairs et plus convaincants
abréviations
CEA:. Antigène carcino
DMEM:
milieu d'Eagle modifié par Dulbecco
ELISA:
Enzyme-linked immunosorbent assay
GAPDH:
glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase
PCR:
réaction en chaîne par polymérase
RT:
transcriptase inverse
RT-PCR:
transcriptase inverse réaction en chaîne par polymérase
uPA:
activateur de type urokinase plasminogène
uPAR:
urokinase-récepteur de type activateur du plasminogène
Déclarations de les Remerciements
Nous tenons à remercier les personnes suivantes:. Xuehua Chen, qui ont participé à l'alignement de séquences et ont aidé à la préparation du manuscrit. Nous reconnaissons également Yubao Ji, Yi Zhang, et Bin LV, qui ont contribué à cette étude. Des fichiers soumis originaux pour les images
Voici les liens vers les auteurs
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Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun intérêt financier ou non financières concurrentes. Les contributions de
Auteurs
YD et ZZ conçu l'étude, et réalisée par RT-PCR, ELISA, et la détection de l'activité avec HZ et ZZhou. YD, MZ et XW ont participé à l'alignement de séquences et rédigé le manuscrit. ZZ a aidé à mener une analyse statistique. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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