Клиническая значимость системы УАП при раке желудка с метастазами в брюшную

Клиническая значимость системы УАП в рак желудка с метастазами в брюшную
Аннотация
фон
Показано, что активатор плазминогена урокиназного типа (УАП) участвует в метастазов опухолевых клеток путем разрушения внеклеточного матрикса. Тем не менее, существует мало прямых доказательств клинической экспрессии системы УАП в перитонеальных метастатических тканях рака желудка. Целью данного исследования было изучение системы экспрессии уАП в перитонеальных тканях брюшины и nonperitoneal больных метастазирования, а также изучить диагностическую ценность системы УАП.
Методов
Выражения УАП, уАПР и PAI-1 были измеренная с помощью полуколичественной RT-PCR и ELISA. Активность уАП была обнаружена с использованием набора активности уАП.
Результаты
Существовал никаких существенных различий в УАП, уАПР и PAI-1 выражение в двух типах тканей брюшины у семи пациентов с перитонеального метастазирования. Тем не менее, УАП, уАПР и PAI-1 выражения в перитонеальных метастатических поражений, были значительно выше, чем в нормальных тканях брюшины 24 nonperitoneal пациентов с метастазированием (Р
≪ 0,05). Кроме того, не наблюдалось статистическое расхождение активности УАП в различных различных тканях.
Выводы
Экспрессия системы УАП положительно коррелирует с перитонеального метастазирования рака желудка. Это различие выражение в перитонеальных или nonperitoneal пациентов метастазирование может служить основой для диагностики перитонеального метастазирования.
Ключевые слова
Желудочный рак ELISA перитонеального метастазирования RT-PCR УПА системы Фон
Хотя заболеваемость и смертность от рака желудка уменьшились в Китае в течение последних нескольких десятилетий, рак желудка все еще большая нагрузка местной программы в области здравоохранения [1]. Важно отметить, что рецидив рака желудка происходит даже после того, как потенциально лечебной резекцией, чаще всего в виде перитонеального метастазирования [2]. Таким образом, существует острая необходимость в разработке эффективных стратегий ранней диагностики для перитонеального метастазирования рака желудка. Нашествие
рак и метастазы являются многофакторные процессы [3] и существенный шаг включает последовательное разрушение и восстановление внеклеточного матрикса и базальной мембраны, которая, в свою очередь, требует участия нескольких протеолитических ферментных систем, таких как сериновых протеаз и металлопротеиназ [4]. активатор плазминогена урокиназы типа (УАП) является одним из сериновых протеиназ и он связывается с его рецептором, рецептор УАП (уАПР) на поверхности опухолевой клетки. После активации клеток переплете УАП способен преобразовывать плазминоген в плазмин, который затем способен деградировать несколько компонентов внеклеточного матрикса [5]. Действие комплекса UPA-уАПР на плазминогена можно управлять с помощью ингибиторов протеазы PAI [6, 7]. Таким образом, сбалансированное производство клеточного и околоклеточном УАП, уАПР и PAI-1 является необходимым условием для эффективного фокусного протеолиза, клеточной адгезии и миграции, и, следовательно, инвазии опухолевых клеток и метастазирования [8, 9]. Он имеет
наблюдалось, что система уАП хорошо коррелируют с раком желудка, путем измерения уровня экспрессии уАП, уАПР и PAI-1 при раке желудка и нормальной ткани слизистой оболочки и анализа их корреляции с различными клиническими патологическими характеристиками. Например, Plebani и др
. [10] определяется уАПР, UPA и PAI-1 уровни с помощью ELISA при раке желудка и нормальные образцы от 20 пациентов с раком желудка, перенесших операцию. Уровень экспрессии уАПР значительно выше, при раке желудка, а также низкий уровень уАПР связаны с лучшей выживаемостью. Танигучи и др
. [11] изучали связь между выражением уАПР и клиникопатологическими параметров с помощью иммуногистохимического анализа из 102 первичных желудочных карцином. уАПР иммунореактивность наблюдали в 38 случаях из 102 (37%). Кроме того, выражения УПА, уАПР и PAI-1 достоверно коррелировала с различными клинико-патологическими факторами: размер опухоли, глубина инвазии опухоли, дифференциации, метастазов в лимфатических узлах [12-15], и брюшина метастазирования [16, 17].
Тем не менее, было очень мало прямых доказательств, подтверждающих клиническую значимость системы уАП в различении перитонеального метастазирования из нормальных тканей брюшины при раке желудка. По сравнению с регулярным распределением и расположением лимфатических узлов, перитонеального ткани имеет большую площадь, занимая всю брюшную полость, обеспечивая тем самым более хаотичность и непредсказуемость в клетки перитонеального метастазирования при раке желудка. Таким образом, цель данного исследования состояла в том, чтобы далее исследовать разницу экспрессии системы УАП между перитонеального метастатических тканей и нормальных тканей брюшины рака желудка и для подтверждения диагноза значимость системы УАП путем объединения этих результатов с клиническими данными.
Методы клинического образца

Мы оценивали 31 пациентов (21 мужчин, 10 женщин) с диагнозом рака желудка, который был допущен к нашим отделом в период с июля 2010 года по декабрь 2010 Их средний возраст составил 62,58 лет (диапазон, 23 до 85). Пациенты были диагностированы с раком желудка на основе предоперационного или послеоперационного патологического анализа. Среди них 7 пациентов имели перитонеальные метастазы (патологический тип: 1 случай умеренно дифференцированной трубчатой ​​аденокарциномы, 1 случай класса II к III аденокарциномы, 3 случая слабо дифференцированной аденокарциномы, а также 3 случая слабо дифференцированной аденокарциномы в сочетании с перстнем-клеточного рака) , в то время как 24 пациентов имели nonperitoneal метастазирование (патологическое тип: 3 случая умеренно дифференцированной трубчатой ​​аденокарциномы, 3 случая II класса аденокарциномы, 2 случая класса II к III аденокарциномы, 9 случаев слабо дифференцированной аденокарциномы, 3 случая карциномы перстневидно клеток, 1 случай коллоидный рак, 1 случай II класса аденокарциномы в сочетании с перстнем-клеточного рака, 1 случай III класса аденокарциномы в сочетании с перстнем-клеточного рака и 1 случай II класса аденокарциномы в сочетании с коллоидный рак).
В у пациентов с перитонеального метастазирования, мы вырезали перитонеальные метастазы поражений, а также небольшое количество Majus, сальника pelveoperitoneum и диафрагмальной брюшины без перитонеального метастазирования. У больных с nonperitoneal метастазирования, а также были проведены несколько резекции Сальник Majus, pelveoperitoneum и диафрагмальных брюшины. Собранные образцы хранили при -80 ° С для дальнейшего анализа.
Все пациенты были живы в конце исследования, и наше исследование было одобрено этическим комитетом Шанхайской Восточной больницы, связанным с Tong Ji университета. <Бр> Клеточная культура
клетки из перитонеального мезотелиальной клеточной линии (HMrSV5) поддерживали в DMEM (Sigma, St. Louis, USA), дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки. Клетки пересевали почти каждый день по 1: 4 или 1: 5 разбавления в колбах с культурой при 37 ° С в атмосфере 5% CO <суб> 2
экстракции суммарной РНК и синтез кДНК
тотальную РНК. выделяли путем осаждения клеток с использованием набора для экстракции РНК RNeasy ™ в соответствии с инструкциями изготовителя (Qiagen, Valencia, США). Чистоту РНК и концентрацию определяли с помощью спектрофотометрического поглощения при 260 и 280 нм, соответственно. Обратную транскрипцию проводили на 1 мкг общей РНК с использованием олиго (дТ) праймеров и AMV обратной транскриптазы (Promega, Madison, USA). 20 мкл ПЦР-реакционная смесь содержала 2 мкл 10 × буфера RT, 2 мкл дНТФ, 4 мкл MgCl <суб> 2, 0,5 мкл Rnasin, 1 мкл олиго (дТ) <суб> 18, 0,75 мкл обратной транскриптазы и 1 мкг РНК , Условием ПЦР была 70 ° С в течение 10 мин, 42 ° С в течение 15 мин, и 99 ° С в течение 5 мин, после чего кДНК хранили при 4 ° С (в течение 3-х месяцев).
Полуколичественный RT- ПЦР
уровни экспрессии гена уАП, уАПР и ИАП-1 определяли по сравнению с бета-актина гена или глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназы (GAPDH). 25 мкл RT-PCR реакционная смесь содержала 1 мкл кДНК, чувство и анти-смысловых праймеров (каждый 0,25 мкл), 2,5 мкл 10 × ПЦР буфера, 2 мкл 25% MgCl <суб> 2, 0,5 мкл Taq-полимеразы, 1 мкл дНТФ и 17,5 мкл РНКазы H <югу> 2O. Гнездовую ПЦР использовали для амплификации раково антигена (СЕА), с 1 мкл первого ПЦР-продукта, используемых для второй ПЦР-матрицы. Условия амплификации были: (I) начальная денатурация при 95 ° С в течение 5 мин; (II) в 30 циклов денатурации при 94 ° С в течение 1 мин; (III), отжиг при 56 ° С в течение 30 с для УПА, 60 ° С в течение 1 мин для уАПР, 55 ° С в течение 1 мин для PAI-1, или 72 ° С в течение 2,5 мин для СЕА; и (IV) удлинение при 72 ° С в течение 1 мин или 2,5 мин. ПЦР-праймеров были использованы следующим образом: для УАП, A, 5'-AGAATTCACCACCATCGA GA-3 'и В, 5'-ATCAGCTTCACAACAGTCA Т-3'; для уАПР, A, 5'-АСА GGAGCTGCCCTCGCGAC-3 'и В, 5'-GAGGGGGATTT CAGGTTT AGG-3'; для PAI-1, А, 5'-CTTTGGTGAAGGGTCTGC-3 'и В, 5'-CTC CACCTCTGAAAAGTCC-3'; СЕА, A, 5'-TCTGGAACTTCTCCTGGTCT CAGCTGG-3 ', В, 5'-TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC-3' и С, 5'-GGGCCACTGTCGGCATCATG ATTGG-3 '; для бета-актина, 5'-TTGAAGGTAGTTTC GGGAAT-3 'и В, 5'-GAA AATCTG GCACCACAC СТТ-3'; для GAPDH, A, 5'-GAAGGTGAAGGCGGAGT C-3 'и В, 5'-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3'. Праймеры А и В CEA использовались для первой ПЦР, в то время как В и С, праймеры использовали для амплификации второго. Продукт амплификации 474 п.н., 1046 п.н., 409 п.н., 131 п.н., 591 п.н. и 230 п.н., соответственно анализ.
Количественный ИФА
Трис-буферном солевом растворе (рН 8,5, 1,8 мл) добавляли к замороженным тканей (от 100 до 300 мг), и гомогенизацию проводили в ледяной бане. Затем 0,2 мл 10% Trixon Х-100 был добавлен, чтобы обеспечить конечную концентрацию 1% Trixon Х-100 в гомогенате. Гомогенат встряхивали в течение 16 ч, а затем центрифугируют в центрифуге с охлаждением при температуре 4 ° С в течение 1 ч при 100000 г
. Супернатант переносили в новую пробирку и концентрацию белка определяли с помощью анализа с применением бицинхониновой кислоты. Концентрации УАП, уАПР и PAI-1 антигена определяли с использованием наборов ELISA в соответствии с инструкциями производителя (American диагностикумы, Гринвич, США). Реакцию останавливали добавлением 50 мкл H <суб> 2sO <суб> 4, и поглощение измеряли при 450 нм на планшет-ридере ELISA (EL312e планшет-ридере, Bio-Tek Instruments, Winooski, США). выражались значения УАП, уАПР и PAI-1 антигена в нг /мг белка.
анализ активности уАП
активности УАП измеряли с использованием анализа активности набора уАП (Chemicon). Вкратце, тканевого белка смешивают с буфером для анализа и инкубировали с хромогенного субстрата в 96-луночные планшеты при 37 ° С в течение от 2 до 24 ч. Оптическую плотность считывали при OD <суб> 405, а активность (единиц) экстраполировали из стандартной кривой.
Статистический анализ
Все данные были проанализированы с использованием версии 6.12 SAS программное обеспечение и результаты были записаны как средний уровень ± отклонение. Значимость различий между группами оценивали с помощью дисперсионного анализа, с последующим парным т
. P
&л; 0,05 считали статистически значимыми.
Результаты
полуколичественный анализ RT-PCR СЕА, УАП, уАПР и экспрессию мРНК PAI-1
CEA является важным маркером для желудочно-кишечных опухолей. Таким образом, мы использовали высокую чувствительность, вложенное метод ОТ-ПЦР для определения экспрессии СЕА в желудочном раковых тканей с или без перитонеальные метастазы. Как и ожидалось, результаты были положительны для CEA в перитонеальных метастатических поражений семи перитонеальных метастазов у ​​пациентов (рисунок 1). Кроме того, при рассматривании невооруженным глазом перитонеальных пациентов с метастазированием, три случая показали CEA-положительное выражение в nonperitoneal метастатических тканях. Среди 24 пациентов с nonperitoneal метастазирования, 2 имел CEA-положительное выражение в нормальных тканях брюшины. Нет экспрессии СЕА не был обнаружен в брюшную мезотелиальной клеточной линии HMrSV5. Тем не менее, УАП, уАПР и PAI-1could быть выражены в клетках HMrSV5 (рисунок 2). Рисунок 1 экспрессию CEA мРНК в семи случаях рака желудка с перитонеального метастазирования. М: 1000 пар оснований маркер; Дорожки 1, 2, 3, 4, 5, 6, и 7 показано семь перитонеальные метастатические случаев. b-актин был использован для внутреннего эталона для нормализации экспрессии СЕА. Продукты амплификации 131 п.н. CEA и 591 п.н. бета-актина, соответственно. CEA, раково антигена.
Рисунок 2 экспрессии мРНК системы уАП в HMrSV5 клетке. М, 1000 пар оснований маркер; дорожка 1, уАП; дорожка 2, уАПР; полоса 3, PAI-1; дорожка 4, β-актина. β-актин был использован для внутренней справки. Продукты амплификации 474 п.н. УАП, 1046 п.о. уАПР, 409 п.н. PAI-1, и 591 п.о. -актина соответственно.
Система экспрессии белка уАП в желудочном раковых тканей с или без перитонеальные метастазы
количественный метод ELISA использовали детерминированным Упа, уАПР и PAI-1 содержание белка в перитонеальных метастатических поражений и CEA-отрицательных nonperitoneal метастатических тканей 7 больных на перитонеальном метастазирования и CEA-отрицательных нормальных тканей брюшины 24 nonperitoneal больных метастазирования. Результаты (таблица 1) показали, что не было никаких существенных различий в УАП, уАПР, и PAI-1 выражение в двух типах тканей брюшины семи больных на перитонеальном метастаз. Тем не менее, УАП, уАПР и PAI-1 экспрессии были значительно выше в перитонеальной метастатических поражений, чем те нормальные перитонеальных тканей 24 nonperitoneal метастаз больных (Р
≪ 0,05) система экспрессии белка .table 1 УАП в желудочном раковых тканей с или без перитонеального метастазирования
Белок

перитонеального метастазирования (7 случаев) завод
Nonperitoneal метастазирование (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

uPA
3.312
2.488
0.408
0.784
0.640
3.088
1.664
0.280
0.632
0.488
2.952
0.648
0.672
0.664
0.224
0.712
0.504
0.280
0.800
0.424
0.520
0.488
0.440
0.656
0.328
0.480
0.128
0.440
0.256
0.384
0.376
1.440
0.512
0.440
0.848
0.312
0.464
0.168
uPAR
3.664
4.936
1.432
0.345
1.034
2.720
2.304
0.640
1.256
0.532
2.744
2.192
1.536
0.239
0.479
1.432
1.808
0.704
0.671
0.561
0.912
1.280
0.792
0.845
0.390
1.184
0.480
0.272
0.432
0.633
1.064
2.728
1.280
0.467
0.291
1,120
0,968
0,776
PAI-1
1,511
4,204
0,568
3,665
Нет обнаружения
3.872
1,725 ​​
0,262 <бр> 1,426
0,071
2,782
0,876
0,488
3,598
нет обнаружения
0,369
0,745
0,662
0,488
нет обнаружения <бр> 1,315
3,023
0,894
0,127
0,289
1,041
0,262
0,963
нет обнаружения
0,195
1,181
0,977
0,041
0,329
0,395
0,085
0,316
0,382
уАП обнаружение активности
Мы также обнаружили активность уАП в перитонеальных метастатических поражений и CEA-отрицательных nonperitoneal метастатических тканей 7 перитонеального метастазирования пациенты, и СЕА-отрицательные нормальные перитонеальные ткани 24 nonperitoneal пациентов с метастазированием. результаты показали, что ни один статистическое расхождение не наблюдалось в различных различных тканях (таблица 2) .table 2 активности уАП в желудочном раковых тканей с или без перитонеального метастазирования
перитонеальном метастаз (7 случаев)

Nonperitoneal метастаз (24 cases)

CEA(+)

CEA(−)

CEA(−)

19.936
16.536
3.914
4.510
5.635
0.846
3.091
1.942
5.407
4.151
1.417
8.725
3.117
4.702
0.899
2.352
16.170
2.142
10.046
2.419
2.820
4.799
1.302
3.730
2.828
2.123
3.310
5.299
7.287
1.233
6.066
6.533
7.922
6.485
8.150
7,802
4,466
3,468
Обсуждение
Благодаря своим отсутствием специфических клинических проявлений в ранней стадии перитонеального метастазирования, оптимальная возможность лечения всегда была упущена в больных раком желудка. Возникновение асцита, брюшные опухоли, а также кишечные обструкции указывает на продвинутой стадии рака желудка. Таким образом, эффективная диагностика рака желудка с перитонеального метастазирования по-прежнему является проблемой в клиниках. в настоящее время основным методом диагностики рака желудка с перитонеального метастазирования включает перитонеального лаважа и цитологическое исследование [18, 19]. Тем не менее, положительные результаты указывают только субклинический перитонеальный метастаз, так как перитонеальный метастаз также не столетий, возвышающиеся даже если опухолевые клетки присутствуют в перитонеальной жидкости. Таким образом, обнаружение в перитонеальных тканях представляется более прямым и точным. Примечательно, перитонеальные ткани покрывают всю брюшную полость, в то время как имплантации опухолевых клеток является случайным, так что прямое обнаружение опухолевых клеток в перитонеальных тканях очень трудно. Молекулярные биологи считают, что существуют некоторые молекулярные изменения в самовольном опухолевых клеток и их пораженных тканей, и эти изменения в тканях могут быть начаты до того, как опухолевые клетки связаться с ними [9]. Исходя из этой концепции, мы исследовали молекулярные изменения в тканях брюшины, чтобы исследовать потенциальный диагноз перитонеального метастазирования.
CEA является общим антигеном ассоциированный с опухолью, и принята на международном уровне в качестве маркера опухоли желудочно-кишечные [20, 21]. Таким образом, мы обнаружили экспрессию CEA в перитонеальных тканях. Положительные результаты СЕА-экспрессии показывают, что опухолевые клетки присутствуют в тканях брюшины. Как и следовало ожидать, наши результаты показали, что было выражено CEA во всех перитонеальных метастатических поражений семи больных на перитонеальном метастазирования. Интересно, что было три пациентов с перитонеального метастазирования, в которых положительно выраженные CEA в nonperitoneal метастатических тканях и двух пациентов с nonperitoneal метастаза, которые имели положительную экспрессию CEA в нормальных тканях брюшины. Это говорит о том, что эти пациенты имели потенциал для развития перитонеальный метастаз
Как включает в себя важные протеолитические ферменты, система УАП в опухолевых клетках было продемонстрировано, чтобы взаимодействовать с внеклеточным матриксом, чтобы облегчить образование микросреде метастазов. Таким образом, система УАП может быть вовлечен в процесс перитонеального метастазирования [22]. Экспрессия системы УАП оказывается быть увеличена в имплантированных опухолей и тканей хозяина [23, 24]. Система УАП состоит из серин-протеазы, УАП гликолипида-якорь рецептора, уАПР, и ингибитор серпинов, PAI-1, [25]. Таким образом, мы с целью изучить всесторонне изменения в этих трех факторов в перитонеальных тканей с или без метастаз
Система УАП широко распространен в различных клетках. наша ОТ-ПЦР показал, что УАП, уАПР, и PAI-1 может даже быть выражено в мезотелиальной клетках. Чтобы избежать неспецифических результатов, дальнейшее количественное ELISA использовали для выявления экспрессии белков системы UPA. Мы обнаружили, что УАП, уАПР, и PAI-1 содержание белка были значительно выше у СЕА-дисплазий или СЕА-отрицательные перитонеальных тканей брюшины у пациентов с метастазированием, по сравнению с нормальными тканями перитонеальных nonperitoneal пациентов с метастазированием (Р
≪ 0,05) , Следует отметить, что может быть больше, клиническое значение в повышенном содержании белков системы УАП в СЕА-отрицательных перитонеальных тканей брюшины у пациентов с метастазированием. Эти данные показали, что эти CEA-отрицательными перитонеальные ткани может быть в состоянии субклинического перитонеального метастазирования и что прогрессирование этого заболевания может привести к перитонеального метастазирования. Хотя система УАП изменения в перитонеальных тканях еще не определенно была продемонстрирована в опухолевых клетках, изменения в перитонеальных тканях по меньшей мере, обеспечивает опорное значение для диагностики перитонеального метастазирования [26]. Хайс и др
. [27] считают, что уАПР можно было бы рассматривать в качестве зависимого индекса для прогнозирования рака желудка микрометастазами костного мозга по сравнению с цитокератина (CK18). В этом исследовании, содержание белка уАПР был также в СЕА-отрицательных перитонеальных тканей брюшины у пациентов с метастазированием, значительно выше, чем у СЕА-отрицательных перитонеальных тканей nonperitoneal пациентов с метастазированием (Р
≪ 0,05). Короче говоря, мы предполагаем, что увеличение уАПР и PAI-1 выражения в перитонеальных тканях nonperitoneal пациентов с метастазированием, можно рассматривать в качестве эталонного индикатора для перитонеального метастазирования.
Показал количественный анализ активности УАП в желудочном раковых тканей и их внеклеточного матрикса, Okusa и др
. [28] сообщают, что более высокая активность уАП в значительной степени связано с опухолями с перитонеальных метастазов и опухолей с более глубоким вторжением в стенку желудка. уАП производства стромальных клеток может регулировать инвазии раковых клеток [29]. Тем не менее, наши результаты показали, что не было никаких существенных различий в активности УАП между различными тканями. Это может быть связано с динамической активности УАП, который, как представляется, зависит от конкретных клеточных сред и заявляет, что он сталкивается с [30].
Выводы
Наше исследование показывает, что система экспрессии уАП значительно выше в тканях брюшины перитонеальных пациентов метастаз, чем у пациентов с метастазами nonperitoneal. Это различие выражение может служить основой для диагностики перитонеального метастазирования. Тем не менее, все еще существуют некоторые ограничения в данном исследовании. Число случаев, включенных в это исследование было довольно мало, в основном потому, что некоторые пациенты с перитонеального метастазирования были допущены в нашей больнице в период с июля 2010 по декабрь 2010 г. Мы попытались устранить влияние этой проблемы, в том числе тканей (в том числе, Majus сальника pelveoperitoneum, и диафрагмальной брюшины) в данном исследовании. Дальнейшие исследования с более высоким числом субъектов по-прежнему необходимо, чтобы получить более четкие и более убедительные результаты
Сокращения
CEA:.
Карциноэмбриональный антиген


DMEM:
модифицированная среда Игла Дульбекко


ELISA:
энзимов иммуноферментный анализ


GAPDH:
глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназа


ПЦР:
полимеразной цепной реакции


RT:
ревертазам


RT-PCR:
ПЦР с обратной транскрипцией


уАП:
урокиназы типа активатора плазминогена


уАПР:
урокиназы типа активатора плазминогена рецептора


декларациях
Благодарности
Мы выражаем глубокую признательность следующим лицам:. Xuehua Чен, принимавшие участие в выравнивании последовательностей и помогли при подготовке рукописи. Мы также признаем Yubao Джи, Yi Чжан, и бен Л.В., кто принимал участие в этом исследовании. Оригинальные файлы, представленные для изображений, изображения Ниже приведены ссылки на авторов
АВТОРЫ оригинальных представленных файлов для изображений. "Исходный файл для фигурного 1 40001_2012_56_MOESM2_ESM.tif Авторского 40001_2012_56_MOESM1_ESM.tif авторов исходного файла для фигурного 2 конкурирующими интересами
Авторы заявляют, что у них нет никаких финансовых или нефинансовых конкурирующих интересов. Вклад
Авторского
YD и ZZ разработал исследование, и проводили оТ-ПЦР, ИФА, и обнаружение активности с ГЦ и ZZhou. Ю.Д., MZ и XW участвовал в выравнивании последовательности и подготовил рукопись. ZZ помог провести статистический анализ. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• FOLFIRI в качестве второй линии терапии у пациентов с доцетакселом предварительно обработанных рака желудка: ис…
• Обнаружение гиперметилированием промотора острова CpG Е-кадгерина в желудочном сердца adenocarcinoma