Vloga y-glutamyltranspeptidase v patogenezo Helicobacter suis in Helicobacter pylori infections

vlogi y-glutamyltranspeptidase v patogenezo Helicobacter suis
in Helicobacter pylori
okužb
Abstract
Helicobacter
(H.
) suis
lahko kolonizirajo želodec prašičev, kot tudi ljudje, ki povzroča kronično gastritis in drugih želodčnih patoloških sprememb, vključno razjede želodca in-sluznica povezana limfatičnega tkiva (MALT) limfoma. Pred kratkim je virulentnost faktor H. suis
, γ-glutamil transpeptidaze (GGT), je bilo dokazano, da igrajo pomembno vlogo pri indukciji človeške želodčne epitela celične smrti in modulacije proliferacijo limfocitov odvisno od glutamina in glutation katabolizma. V tej študiji je pomembnost GGT v patogenezo okužb s H. suis
preučevali pri miših in mongolskih modelov gerbil. Poleg tega je bil relativni pomen H. suis
GGT v primerjavi s tisto v H. pylori
GGT. Pomemben in drugačna prispevek GGT od H. suis
in H. pylori
opazili v smislu bakterijske kolonizacije, vnetje in izzvan imunski odziv. V nasprotju s H. pylori
Δggt
sevi so bili sposoben kolonizacije želodec na raven, primerljivo z sevov WT H. suis
Δggt
sevi, čeprav povzroča bistveno manj splošno vnetje želodca pri miših. To je bila značilna nižje število celic T in B ter nižjo stopnjo proliferacije epitelijskega. Na splošno, v primerjavi z okužbo sev WT, GGT
mutiranih sevov H. suis
sprožil nižje nivoje Th1 in Th17 podpis izražanje citokinov. Opazili so izrazitejše Povecanje od B-limfocitov chemoattractant CXCL13, tako pri živalih, okuženih z WT in GGT
mutiranih sevov H. suis
. Zanimivo je, da je bil H. suis
GGT dokazano, da vpliva na presnovo glutamin želodčnega epitela s downregulation za glutamin transporterja ASCT2 je.
Uvod
Helicobacter
(H.
) pylori
je Gramu negativna bakterija, ki colonizes želodec več kot polovica svetovnega prebivalstva. Okužba s to bakterijo lahko povzročijo gastritis, peptični ulkus, želodčne adenokarcinom in-sluznica povezana limfatičnega tkiva (MALT) limfom [1-3]. Poleg H. pylori
, non-H. pylori
helicobacters (NHPh) so zaznali tudi v želodcu ljudi in te bakterije povzročajo podobne želodčne bolezni. Tveganje za nastanek želodčne sladu limfoma je višja med okužbo NHPh primerjavi z okužbo s H. pylori
[4-9]. H. suis
je najbolj razširjena želodca NHPh pri ljudeh. Prašiči so naravni gostitelj te bakterije, s prevalenco dosegajo 90% ali več [10] in najbolj verjetno, prašičev in po možnosti tudi svinjina so glavni viri človek H. suis
okužbe [4,11-13].
okužba H. suis
zdi, da še vedno obstajajo za življenje, vsaj pri prašičih in glodalci uporabljajo kot modeli za okužbe pri ljudeh [14]. Pri prašičih, okužba povzroči razvoj gastritisa in zmanjšanje telesne mase. Poleg tega je bakterija se zdi, da igrajo pomembno vlogo pri razvoju razjede na ne-žleznega pars oesophagea [15]. Pri miših in mongolskih modelov gerbil želodčne bolezni ljudi, eksperimentalni okužba H. suis
povzroči hudo patologijo v želodcu [4,16,17], vključno z gastritisom, parietalnih celic nekroze in razvoj želodca slada limfoma podobnih poškodb, ki spominja na poškodbe, opažene pri H. suis
okuženimi ljudi.
Prejšnje študije so pokazale, da je ta bakterija nima homolog več dejavnikov virulence H. pylori
, kot citotoksin povezana genov
patogenost otoških ( OAS
PAI) in vacuolating citotoksin (vaca) [18]. Bili smo pa mogoče identificirati γ-glutamil transpeptidaze je (GGT) kot pomemben virulentni dejavnik H. suis
. Ta encim je bilo opisano, da povzroči želodčne epitelne okvare celic [19] in diferenciacijo limfocitov proliferacije [20] skozi interakcijo encima z dvema od svojih substratov, L-glutamin in zmanjšano glutation, zaradi česar je prva identificira in raziskali H. suis
virulence dejavnik.
vlogo GGT med H. pylori
okužbe in vivo je bil
preiskati pri miših. Nasprotujoče sklepi so bili pripravljeni o pomenu GGT za kolonizacijo. Nekatere skupine so pokazale, da je potrebno H. pylori
GGT za trdovratne okužbe pri miših [21], medtem ko so se v nasprotju sklepe [22]. Poleg tega, da je kopičijo dokazi, da je Helicobacter
GGT ključni virulence dejavnik vključen v imunskem utaj in imunske tolerance [23-25].
Trenutno ni znano, ali in kako H. suis
GGT vplivi potek H. suis
okužbe in vivo
. Namen raziskave je bil razširiti naše prejšnje in vitro
ugotovitve s H. suis
GGT, in preučiti vlogo te virulentni dejavnik pri patogenezi H. suis
okužbe in vivo
. Hkrati smo namenjen primerjanju njen relativni pomen s tisto GGT H. pylori
. Sedanji poskusi so bili izvedeni v BALB /c miši in outbred mongolski peščene podgane, ker so ti modeli živali dejansko izkazalo kot pomembno orodje, da razišče vlogo Helicobacter
vrst v želodcu patologije. Značilno je, da v mongolski peščene podgane, bolj hitro in hudo razvoj želodca lezij lahko opazili v primerjavi z miši [4,26,27].
Material in metode
živali in bakterij
Sixty 4-week- stari, ženska specifična patogenom brez (SPF) BALB /c miši smo jih kupili pri Harlan NL (Horst, Nizozemska). Petindvajset 4 tednov stari, ženske SPF outbred Mongolski peščene (CRL: po) smo dobili iz Charles River Laboratories (Lille, Francija)
Za H. suis
okužba pri miših in mongolskih peščene podgane, sev HS5cLP. je bila uporabljena. Ta sev je bil izoliran leta 2008 iz želodca v klavnici prašičev [28]. Za poskusne H. pylori
okužbe v mongolski peščene podgane, sev PMSS1 [29] je bil uporabljen, saj je ta sev nima zgodovine in vivo
prilagajanja pri miših, v nasprotju z mišjim prilagoditi seva SS1. V BALB /c miši, H. pylori
sev SS1 [29] je bil uporabljen, saj je sev PMSS1 že bilo dokazano, da niso mogli kolonizirajo želodec za BALB /c miši [29].
Gradnja izogenimi GGT
mutirane seve H. suis
in H. pylori
An izogenimi H. suis GGT
mutant (HS5cLPΔggt
) je bila pripravljena kot je opisano prej [20]. Izogenimi GGT
mutant H. pylori
bila pridobljena z uporabo enake strategije kot za ustvarjanje od H. suis
izogenimi GGT
mutanta, razen da je kaseta odpornost na kanamicin uporabijo namesto kaseta odpornost kloramfenikol [20]. Zelo na kratko, je bil izbris GGT
v H. pylori
SS1 in PMSS1 uvedla izmenjavo alelov uporabo pBluescript II SK (+) phagemid vektor (Agilent Technologies, California, ZDA), v katerem ~ 440 bp v 5 ' -koncu in ~ 430 bp-koncu 3 'ciljnega gena in kaseta za odpornost na kanamicin iz plazmida pKD4 [30] smo ligirali s PCR posredovano strategije z 2 ciklov inverzne PCR in fuzijskega PCR [20]. Vsi oligonukleotidi uporabljeni za PCR-posredovana gradnjo rekombinantnih plazmidov so prikazane v tabeli 1.
Nastalega plazmida smo pomnožili v XL1-Blue MRF 'E. coli
(Agilent Technologies) in se uporablja kot samomorilski plazmida v H . pylori
SS1 in PMSS1 (neke vrste darilo Sara Linden in Anne Muller, v tem zaporedju). H. pylori
SS1 GGT
mutant (SS1Δggt
) in H. pylori
PMSS1 GGT
mutant (PMSS1Δggt
) so bili pridobljeni z electrotransformation [31] ali fizične preobrazbe [32 ] kot je opisano prej. Na koncu so bakterije, izbrani na Columbia agar plošče (Oxoid, Basingstoke, Velika Britanija) s Vitox dodatka (Oxoid), 5% (v /v) defibrinated ovce krvi (E & O Laboratories Ltd, Bonnybridge, UK), in kanamicin- (25 ig /ml). Plošče inkubiramo 5-9 dni. V izogenimi GGT
mutanti smo preverili s testom za GGT aktivnosti [19], PCR in nukleotidov sequencing.Table 1 premazi, ki se uporabljajo za gradnjo H. pylori GGT izogenimi mutirane seve
Primer ime
Sequence (5 '3')
Primer uporabiti
pBlue linearno FWD 1
GGGGATCCACTAGTTCTAGAGCG
linearizacija plazmida
pBlue linearna Rev1
CGGGCTGCAGGAATTCGATATCAAG
linearizacija plasmid
HpGGT-flank_fusion1F
CTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGTAACCGGTAAAATCAACACGGACGC
Amplification H. pylori GGT
in delni navzgor in navzdol spremljajočimi geni
HpGGT-flank_fusion1R
CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCCGCGCTCTTATAAAAAGAAGCCGC
Amplification H. pylori GGT
in delnih navzgor in navzdol spremljajočih gene
pBluelinear_Hpggtflank1F
CCAAGGAAAGAATTTTAATCCTATTTAG
Linearizacija rekombinantnega plazmida
pBluelinear_Hpggtflank1R
CTGTTTTCCTTTCAATCAACAATAATC
Linearizacija rekombinantnega plazmida
Hpkana_fusion_1F
ATTATTGTTGATTGAAAGGAAAACAGATGATTGAACAAGATGGATTGC
Amplification kanamicin- gen za odpornost
Hpkana_fusion_1R
CTAAATAGGATTAAAATTCTTTCCTTGGTCAGAAGAACTCGTCAAGAAG
Amplification kanamicin- odpornost gene
T7 prom3
TAATACGACTCACTATAGGG
zaporedja
M13R
CAGGAAACAGCTATGAC
zaporedja
kultura pogoji bakterijskih sevov
Wild tipa (WT) H. suis
sev HS5cLP je zrasla za 48 ur, kot prej [29] opisano. HS5cLPΔggt
bakterije smo gojili pod enakimi pogoji kot seva HS5cLP, razen da so gojenja plošče dopolni z kloramfenikol (30 ug /ml), kot je opisano predhodno [20].
WT H. pylori
sevov SS1 in PMSS1 gojimo na Columbia agar ploščah, ki vsebujejo 5% (v /v) defibrinated ovce krvi za 48-72 ur pri 37 ° C pod microaerobic pogoji, kot smo že prej [29] opisano. Nato so bile kolonije pobrali in kultiviramo v Brucella brozgi z dodatkom Vitox (Oxoid) in 5% fetalnega telečjega seruma (Hyclone) na rotacijsko stresalniku pod pogoji microaerobic (16 h, 125 rpm). SS1Δggt
in PMSS1Δggt
sevi so gojili pod enakimi pogoji kot ustreznih sevov WT na ploščah, dopolnjenih z kanamicin- (25 pg /ml).
Eksperimentalno zasnovo
Ob prihodu šestdeset BALB /C miši in petindvajset Mongolski peščene smo razdelili v 5 skupin in živali je bilo dovoljeno, da prilagodi na novo okolje za 1 teden. Živali smo cepili intragastrically 3-krat v 48-urnih intervalih. Živali iz skupine 1 in 2 (obe miši in mongolska puščavska podgana) smo inokulirali z Brucella juho, ki vsebuje 8 × 10 7 živih bakterij sevov HS5cLP in HS5cLPΔggt
oz. Živali v skupini 3 in 4 smo inokulirali z Brucella juho, ki vsebuje 3 x 10 8 živih bakterij sevov SS1 and SS1Δggt
(miši) ali 1 x 10 9 živih bakterij sevov PMSS1 in PMSS1Δggt
(peščene). Živali v peti skupini smo inokulirali z Brucella juho in je služil kot neokuženih kontrole. Pri miših, po 4 tednih, 9 tednov in 6 mesecev po okužbi (PI), so bili 4 živali iz vsake skupine evtanazirali s cervikalno dislokacijo pod Izofluran anestezijo. Za mongolski peščene podgane, so bile vse živali žrtvujejo ob 9 tednov pi. V želodci živali so resekcija za nadaljnjo predelavo, kot je opisano zgoraj [27,29].
Poskusi na živalih so bili potrjeni s etični odbor Fakultete za veterinarsko medicino, Univerza v Gentu, Belgija (EC2013 /29).
histopatološka preiskava in imunohistokemija (IHK)
tri vzdolžne trakove želodčnega tkiva miši in mongolskem peščene smo izrezali iz požiralnika na dvanajstniku ob večji ukrivljenosti. Tkivo je bilo določeno v 4% fosfatom zapufrana formaldehida, predelane s standardnimi metodami in vdelali v parafin za svetlobno mikroskopijo. smo razrezali pet zaporednih odsekov 5 um. V prvem delu smo obarvali s hematoksilinom /eozinom (H & E), da bi dosegel stopnjo gastritis po Posodobljeno Sydney sistem z nekaj spremembami [33]. Po deparaffinization in rehidraciji za preostale odseke, so toplotno inducirano pridobivanje antigena izvedemo v citratnem pufru (pH = 6,0). Da se blokirajo endogene peroksidaze aktivnosti in nespecifične reakcije, so bili vsi drsi inkubirana z 3%, H 2O 2 v metanolu (5 min) in 30% seruma kozjega (30 min), v tem zaporedju. Za razlikovanje med limfociti T in B, so bili CD3 in CD20 antigeni obarvajo na odsekih dve in tri, z uporabo poliklonalna zajec anti-CD3 protitelesa (1/100, DakoCytomation, Glostrup, Danska) in poliklonsko zajec anti-CD20 protitelesa (1 /25, Thermo Scientific, Fremont, ZDA), oz. Ti oddelki so nadalje obdelani z predstavljate + System-HPR (DAB) (DakoCytomation) za uporabo z zajec primarnih protiteles. Na četrtem in petem poglavju, proliferacijo epitelijskih celic in število parietalnih celic, so bile določene z IHC barvanjem, z uporabo monoklonsko Mouse anti-Ki67 protitelesa (1/25; Menarini Diagnostics, Zaventem, Belgija) in miško monoklonsko anti-vodikov kalijev ATPase β-podenote (H + /K + -ATPaze) protitelesa (25/1 000; Abcam Ltd, Cambridge, Velika Britanija), oz. Kasnejše vizualizacija je bilo storjeno z predstavljate + System-HPR (DAB) (DakoCytomation) za uporabo z miško primarnimi protitelesi. Količinsko celic T, celic B in epitelijskih celic so bile izvedene kot je bilo predhodno opisano [4]. Na kratko smo število celic, ki pripadajo definiranih celične populacije (celice T, celice B in epitelijskih celic) določi s štetjem pozitivnih celic v petih naključno izbrane visoke moči Fields (povečava: x 400), sta v antruma in corpus regijo .
da bi ocenili možnosti razvoja pseudopyloric metaplazijo s Helicobacter
okužbe inducirano, alcian blue periodična kislina-Schiff madež barvanja (AB /PAS) je bil opravljen.
količinska kolonizacijo bakterij v želodcu miši in mongolskem peščene
so Trakove želodčnega tkiva, ki vsebuje vse regije za miši in samostojnih delov (antruma in corpus) za mongolske peščene shranjeni v 0,5 ml RNAlater
raztopine (Ambion, Austin, TE, ZDA) pri -70 ° C C do RNK in DNK ekstrakcijo. Kvantitativni PCR v realnem času (QRT-PCR) smo uporabili za določitev števila kolonizacijo bakterij v želodčni tkivu kot je opisano predhodno [29,34].
Ekstrakcijo RNA in obratno transkripcijo
QRT-PCR smo uporabili za določitev izražanje genov v želodčni tkiva iz miši in mongolskih peščene. Total RNA je bila vzeta z RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Nemčija), v skladu z navodili proizvajalca. Koncentracija RNA smo izmerili s pomočjo NanoDrop spektrofotometer (Isogen Life Science, PW De Meern, Utrecht, Nizozemska). Čistost RNA je bila ocenjena z avtomatizirano elektroforeznem sistemu Experion uporabo StdSens RNA čipov (Bio-Rad, Hercules CA, ZDA). Koncentracija RNA iz vseh vzorcih je bila prilagojena za 1 g /xl in cDNA smo sintetizirali takoj po čiščenju RNA uporabo iScript ™ cDNA zbirno Kit (Bio-Rad).
Oblikovanje in potrjevanje primerji in določanje genske ekspresije
v gospodinjstvu geni H2afz, PPIA
in HPRT
so bili vključeni kot referenčnih genov pri miših [29]. Za mongolske peščene je niz referenčnih genov testirana temelji na dejstvu, da se v veliki meri uporabljajo v drugih živalskih vrstah. Temeljni premazi so bili oblikovani na podlagi konzerviranih regij ACTB P-aktina, RPS18
, GAPDH
, HPRT1
, SDHA
in UBC
popolne ali delne kodiranje zaporedij na voljo za ljudi, prašičev, miši in podgan.
nivoje mRNA izražanja različnih citokinov (IFN-y, IL-4, IL-5, IL-17, IL-1β, IL-6, IL-10), pred tem dokazano, da je različno izražena med H. suis
okužbe, kot tudi drugih genov (foxP3, CXCL13, ASCT2, ATP4a in ATP4b) so količinsko, z uporabo SYBR Green temelji RT-PCR z iQ ™ SYBR Green Supermix. Reakcije so bile izvedene z uporabo CFX96 RT PCR sistem v C1000 Thermal ciklerja (Bio-Rad) kot smo že prej [29] opisano. Vse reakcije smo izvedli v 12 ml volumnih vsebujejo 0,05 J.l vsake primerjem (1,25 pmol /ul), 6 ul iQ ™ SYBR Green Supermix, 3.9 xl HPLC z vodo in 2 ul cDNA. Eksperimentalno Program je sestavljalo 95 ° C za 15 minut, čemur sledi 40 ciklov denaturacijo pri 95 ° C za 20 sekund, žarjenje pri 60 ° C za 30 sekund, in podaljšanje pri 72 ° C za 30 sekund. Vrednosti praga cikel (CT), so bili normalizirani na geometrijskih pomočjo referenčnih genov in normiranih mRNA vseh ciljnih genov so bile izračunane z uporabo metode 2 -ΔΔCt [35].
Zaradi nedostopnosti gen informacije Forkhead /krilatega vijačnica transkripcijskega faktorja (foxP3) in kemokinski CXC ligand 13 (CXCL13) iz mongolske peščene, primerji so bili izdelani na osnovi konzerviranih regij foxP3 in CXCL13 popolne ali delne kodirajo zaporedja na voljo za ljudi, prašiče, miši in podgane z istim strategije, kot je opisano zgoraj. Nivoji mRNA ekspresijski FoxP3 in CXCL13 smo določili po isti metodi, kot je opisano zgoraj. Zaporedje informacije o vseh primerji za miši in za mongolske peščene je prikazan v tabelah 2 in 3.Table 2 Seznam genov in oligonukleotidov, ki se uporabljajo za QRT-PCR v mongolskih peščene
Gene
Primer

Zaporedje (5 '3')
Reference
foxP3
občutek
GCCCCTMGTCATGGTGGCA
Ta študija
protismiselna
CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13
občutek
GAATGGCTGCCCCAAAACTGAA
Ta študija
protismiselna
TCACTGGAGCTTGGGGAGTTGAA
GAPDH
občutek
AACGGGAAGCTCACTGGCATG
Ta študija
antisense
CTGCTTCACCACCTTCTTGATGTCA
HPRT1
občutek
GCCCCAAAATGGTTAAGGTTGCA
Ta študija
protismiselna
TCAAGGGCATATCCAACAACAAAC
RPS18
občutek
CGAGTACTCAACACCAACATCGATGG
Ta študija
protismiselna
ATGTCTGCTTTCCTCAACACCACATG
IL-1β
občutek
GGCAGGTGGTATCGCTCATC
[64]
protismiselna
CACCTTGGATTTGACTTCTA
IFN-γ

občutek
CCATGAACGCTACACACTGCATC
[65]
protismiselna
GAAGTAGAAAGAGACAATCTGG
IL-5
občutek
AGAGAAGTGTGGCGAGGAGAGACG
[27]
antisense
ACAGGGCAATCCCTTCATCGG
IL-6
občutek
GAGGTGAAGGATCCAGGTCA
[66]
protismiselna
GAGGAATGTCCTCAGCTTGG
IL-10
občutek
GGTTGCCAAGCCTTATCAGA
[27]
protismiselna
GCTGCATTCTGAGGGTCTTC
IL-17
občutek
AGCTCCAGAGGCCCTCGGAC
[64]
protismiselna
AGGACCAGGATCTCTTGCTG
ATP4b
občutek
GGGGGTAACCTTGAGACCTGATG
[27]
protismiselna
AAGAAGTACCTTTCCGACGTGCAG
β-aktina
občutek
TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA
[66]
antisense
CCAGACAGCACTGTGTTGGC
Tabela 3 Seznam genov in oligonukleotidov, ki se uporabljajo za QRT-PCR pri miših
gene
Primer
Sequence (5 '3')

Reference
IL-1β
občutek
GGGCCTCAA AGGAAAGAATC
[29]
protismiselna
TACCAGTTGGGGAACTCTGC
IFN-γ

občutek
GCGTCATTGAATCACACCTG
[29]
protismiselna
TGAGCTCATTGAATGCTTGG
IL-4
občutek
ACTCTTTCGGGCTTTTCGAT
[29]
antisense
AAAAATTCATAAGTTAAAGCATGGTG
IL-10
občutek
ATCGATTTCTCCCCTGTGAA
[29]
protismiselna
CACACTGCAGGTGTTTTAGCTT
IL-17
občutek
TTTAACTCCCTTGGCGCAAAA
[29]
protismiselna
CTTTCCCTCCGCATTGACAC
foxP3
občutek
GCCCCTMGTCATGGTGGCA
Ta študija
protismiselna
CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13

občutek
CTCTCCAGGCCACGGTATT
[67]
protismiselna
TAACCATTTGGCACGAGGAT
ATP4a
občutek
TGCTGCTATCTGCCTCATTG
[68]
antisense
GTGCTCTTGAACTCCTGGTAG
ATP4b
občutek
AACAGAATTGTCAAGTTCCTC
[68]
protismiselna
AGACTGAAGGTGCCATTG
HPRT
občutek
CAGGCCAGACTTTGTTGGAT
[29]
antisense
TTGCGCTCATCTTAGGCTTT
PPIA
občutek
AGCATACAGGTCCTGGCATC
[29]
protismiselna
TTCACCTTCCCAAAGACCAC
H2afz
občutek
CGTATCACCCCTCGTCACTT
[29]
protismiselne
TCAGCGATTTGTGGATGTGT
statistične analize
Razlike v kolonizacija zmogljivosti smo analizirali s neparametrska Mann-Whitney U
test. Razlike v limfocitno infiltracijo, izražanje citokinov in analizo IHC so bile ocenjene z enosmerno ANOVA sledi Bonferroni po hoc test. Statistične analize so bile izvedene s pomočjo SPSS Statistics 20 programske opreme (IBM). Par-pametno primerjave so bile narejene za vsako posamezno časovno točko in zbranih podatkov z uporabo časa kot dejavnik stratifikacije. P
vrednosti manj kot 0,05, so bile obravnavane statistično značilne. Vsi podatki so izraženi kot povprečje ± SD. Vsi podatki so bili ustvarjeni z GraphPad Prism5 programske opreme (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, ZDA).
Rezultati
gostote kolonizacije
so vse kontrolne živali negativen Helicobacter
. Rezultati okuženih živali, so pokazali, da WT H. suis
vztrajno lahko kolonizirajo želodec miške z ravnmi kolonizacija visok kot 5,42 × 10 4 (± 1,46 × 10 4) bakterije /mg želodčnega tkiva tudi pri 6 meseci pi (slika 1C). H. pylori
sev SS1 bilo dokazano, da kolonizirajo želodec miške na veliko nižji bakterijske gostote, pri čemer je 1,68 × 10 3 (± 1,73 × 10 3) bakterije /mg tkiva na 6 mesecev pi (Slika 1C, str
< 0,05). Slika 1 Korelacija med bakterijske sposobnosti kolonizacije in rezultat vnetje v želodcu miši in mongolskih peščene. Zmogljivost kolonizacija je prikazana kot log10 vrednosti H. suis
ali H. pylori
na mg tkiva, določena s QRT-PCR v korpusu miši (A-C) in antruma od mongolskih peščene (D). 0 nobena infiltracija z mononuklearnimi in /ali polimorfonuklearnih celic; 1, zelo blag difuzna infiltracija z mononuklearnimi in /ali polimorfonuklearnih celic ali prisotnosti en majhen (20-50 celice) agregat vnetnih celic; 2, blago difuzna infiltracija z mononuklearnimi in /ali polimorfonuklearnih celic ali prisotnosti eno majhno (50-200 celic) agregat vnetnih celic; 3, zmerna difuzna infiltracija z mononuklearnimi in /ali polimorfonuklearnih celic in /ali prisotnost 2-4 vnetnih agregatov; 4, označene razpršeno infiltracijo z mononuklearnimi in /ali polimorfonuklearnih celic in /ali prisotnosti vsaj pet vnetnih agregatov. HS vs. HSM: Kolonizacija: p
> 0,05; Vnetje: p
< 0,05. SS1 vs. SS1m: Kolonizacija: p
< 0,05; Vnetje: p
< 0,05. PMSS1 vs. PMSS1m: Kolonizacija: p
> 0,05; Vnetje: p
< 0,05. HS: živali, okužene z WT H. suis
srain HS5cLP; HSM: živali, okužene s H. suis
sev HS5cLPΔggt
; SS1: živali, okužene z WT H. pylori
SS1; SS1m: živali, okužene s H. pylori
SS1Δggt
; PMSS1: živali, okužene z WT H. pylori
PMSS1; PMSS1m: živali okužene s H. pylori
PMSS1Δggt
Zanimivo je, H. suis
sev HS5cLPΔggt
je lahko kolonizirajo korpus želodcu miši v podobnem obsegu kot EU. WT sev, in to je bilo opaziti pri vseh časovnih točkah (sliki 1A-1C). V nasprotju s tem pa je H. pylori
sev SS1Δggt
pokazalo, da imajo oslabljeno kolonizacija zmogljivosti pri miših v vseh treh časovnih točkah (sliki 1A-1C, str
< 0,05). Podobne podatke Kolonizacija so dokazali v antruma Helicobacter
okužene-miši na vseh treh časovnih točkah (podatki niso prikazani).
Tako HS5cLP in HS5cLPΔggt
sev uspešno kolonizirali antruma in korpus želodcu mongolskih peščene so bile čeprav stopnje Kolonizacija precej nižja v korpusu v primerjavi z antruma. med obema sevov (0,05 Slika 1D, str
>) ni bilo statistično značilnih razlik. H. pylori
sev PMSS1Δggt
je lahko kolonizirajo antruma in korpusa želodca na podobni ravni v primerjavi z PMSS1 (slika 1D, p
> 0,05), čeprav je bilo 2 od 5 Mongolski peščene negativni prisotnost PMSS1Δggt
v korpusu želodca (podatki niso prikazani).
okužba povzroča vnetje
Vse kontrolne miši in peščene pokazala normalno želodčne Histomorfologija na vseh časovnih točkah. Korelacija med vnetje rezultati in bakterijske kolonizacije je prikazano na sliki 1.
primerjavi z miših, okuženih z virusom sev WT, okužbe s H. suis
sev PODJETJA
HS5cLPΔggt splošno inducirane bistveno manj splošno vnetje tako v antruma (p
< 0,01) in korpus (p
< 0,01), medtem ko je samo v korpusu regiji (p
< 0,01), okužbe s H. pylori
seva SS1Δggt PODJETJA
povzroča manj vnetje, v primerjavi s tistim pri lističi okuženih WT miši. Na 6 mesecev pi, korpus regija 2 od 4 miših, okuženih z virusom HS5cLP vsebuje velike limfoidnem agregate ali limfoidnem foliklov skupaj z uničenjem normalne sluznice arhitekture (slika 2A), ki pa ni bilo opaziti pri živalih iz drugih skupin. Slika 2 H &E obarvanje odsekov želodčne s Helicobacter okuženimi miših in mongolske peščene. Reprezentativni posnetki H & E obarvajo sekcije prikazane tukaj so bili odvzeti iz miši oralno, cepljenih z H. suis
HS5cLP (A), H. suis
HS5cLPΔggt
(B), H. pylori
SS1 ( C) in H. pylori
SS1Δggt
(D), po 6 mesecih objavili inokulacije in mongolska puščavska podgana oralno izpodbija s H. suis
HS5cLP (E), H. suis
HS5cLPΔggt
(F ), H. pylori
PMSS1 (G) in H. pylori
PMSS1Δggt
(H) na 9 tedna po okužbi. Puščice kažejo na prisotnost vnetnih celic, vnetnih agregatov, limfocitno infiltracijo ali limfocitnih foliklov. HS: živali, okužene z WT H. suis
seva HS5cLP; HSM: živali, okužene s H. suis
sev HS5cLPΔggt
; SS1: živali, okužene z WT H. pylori
SS1; SS1m: živali, okužene s H. pylori
SS1Δggt
; PMSS1: živali, okužene z WT H. pylori
PMSS1; PMSS1m: živali, okužene s H. pylori
PMSS1Δggt
; WT: divjega tipa. Original povečava:. 100 ×
Za mongolski peščene podgane, okužba z HS5cLP ali PMSS1 povzroča hudo antruma prevladujoča gastritis z nastankom limfocitnih agregatov v lamine proprie in /ali nadaljnjega sluznici želodca (slike 1D, 2E, in 2G ). med WT in mutirani sevi H. suis
niso opazili bistvenih razlik glede na vnetnega odziva inducira v peščene (slikah 1D, 2E in 2 F), čeprav so vse živali, okužene s sevom HS5cLP pokazala vnetje v corpus regiji , ker je to le v primeru nekaterih živali, okuženih s HS5cLPΔggt
(podatki niso prikazani). V enem gerbil okuženi s H. suis
sev HS5cLP opazili izrazit vnetni odziv, v katerem je več kot 65% površine v lamine proprie in submucosa v antruma gosto prepojena z vnetnimi celicami, ki je zlit limfoidnem agregatov in . limfatičnih foliklov (Dodatni datotek 1)
vnetje H. pylori
seva PMSS1Δggt
povzročene v antruma od peščene bilo manj hudo v primerjavi s tisto pri WT okuženimi živalmi (str
< 0,05) . (številke 1D, 2G in 2H)
vnetnih celic infiltracijo
na splošno so opazili povečanje števila T-celic v korpusu (slika 3A, str
< 0,05) miši, okužene s H. suis
sev HS5cLP in H. pylori
sev SS1 na vseh treh časovnih točkah. V primerjavi z miših, okuženih z WT H. suis
, HS5cLPΔggt PODJETJA
povzroča nižjo T odziv celic v korpusu po 6 mesecih pi (p
< 0,01). H. pylori
sev SS1Δggt PODJETJA
povzroča nižjo T odziv celic v corpus regiji (p
< 0,01) v primerjavi z WT okuženih živali, tako na 9 tednov in 6 mesecev pi (slika 3A). Podobni rezultati so bili pri antruma miših opazili (podatki niso prikazani).

• Uprava trimetoprima-sulphadimidine ne izboljša celjenje žleznega razjede želodca pri konjih, ki so prejemali omeprazol: randomizirani, slepi, klinične študije
• Vrstična elektronska mikroskopija stališča jež želodcu črva, Physaloptera clausa (Spirurida: Physalopteridae)