Роль гамма-глутамилтранспептидазы в патогенезе Helicobacter суис и Helicobacter Pylori infections

Роль гамма-глутамилтранспептидазы в патогенезе Helicobacter суис
и хеликобактерной
инфекций
Аннотация
Helicobacter
(H.
) суис
могут колонизировать желудок свиней, а также людей, вызывая хронические гастриты и другие желудочно-кишечные патологические изменения, включая язвы желудка и слизистой оболочке-ассоциированной лимфоидной ткани (MALT) лимфома. В последнее время, фактор вирулентности H. суис
, γ-глутамилтранспептидаза (ГГТ), было показано, играют важную роль в индукции желудка человека эпителиальной клеточной гибели и модуляции пролиферации лимфоцитов в зависимости от глутамин и глутатиона катаболизма. В настоящем исследовании была изучена значимость ГГТ в патогенезе H. суис
инфекции у мышей и монгольских песчанок моделей. Кроме того, относительная важность H. суис
ГГТ сравнивали с тем из H. Pylori
ГГТ. Существенным и отличается вклад ГГТ из H. суис
и хеликобактерной
был замечен с точки зрения бактериальной колонизации, воспаления и вызывала иммунного ответа. В отличие от H. Pylori
Δggt
штаммов H. SUIS
Δggt
штаммы были способны колонизировать желудок на уровнях, сопоставимых с штаммов WT, хотя они вызывали значительно меньше общего воспаления желудка у мышей. Это характеризовалось меньшим количеством Т- и В-клеток, а также более низкий уровень пролиферации эпителиальных клеток. В целом, по сравнению с WT-инфекции штамма, ГГТ
мутантных штаммов H. суис
вызвал более низкие уровни экспрессии цитокина подписи Th1 и Th17. Наблюдается выраженная положительная регуляция B-лимфоцитов хемокина CXCL13, как у животных, инфицированных WT и GGT
мутантных штаммов H. суис
. Интересно, что H. суис
ГГТ было показано, что влияет на метаболизм глутамина желудочного эпителия через понижающей глутамина переносчика ASCT2.
Введение
хеликобактером
(H.
) пилори
является грамотрицательная бактерия, которая колонизирует желудок более половины населения земного шара. Заражение этой бактерией может вызвать гастрит, язвенную болезнь, аденокарциномы желудка и слизистой оболочки-ассоциированной лимфоидной ткани (MALT) лимфома [1-3]. К тому же хеликобактерной
, не-H. Pylori
helicobacters (NHPh) также были обнаружены в желудке человека, и эти бактерии вызывают сходные заболевания желудка. Риск развития желудка MALT лимфома выше во время NHPh инфекции по сравнению с инфекцией с H. Pylori
[4-9]. H. суис
является наиболее распространенным желудка NHPh в организме человека. Свиньи являются естественным хозяином этой бактерии, с распространенностью достигает 90% и более [10] и, скорее всего, свиней и, возможно, также свинина являются основными источниками человеческого H. суис
инфекции [4,11-13].
H. суис
инфекция, кажется, сохраняются в течение жизни, по крайней мере, у свиней и грызунов, используемых в качестве моделей для человека инфекций [14]. У свиней, инфекция вызывает развитие гастрита и снижение прироста массы тела. Кроме того, бактерия, кажется, играет определенную роль в развитии изъязвления не-железистых Парс oesophagea [15]. У мышей и монгольских песчанок моделях болезни желудка человека, экспериментальная H. суис
инфекция вызывает тяжелую патологию желудка [4,16,17], в том числе гастрита, теменной некроза клеток и развитие желудка MALT лимфомой-подобных поражений, напоминая повреждения, наблюдаемые у H. суис
-infected людей.
Предыдущие исследования показали, что эта бактерия не хватает гомолог нескольких факторов вирулентности H. Pylori
, таких как цитотоксин генов, ассоциированных
острова патогенности ( CAG
PAI) и вакуолизирующий цитотоксин (Вака) [18]. Мы, однако, были способны идентифицировать γ-глутамил транспептидазы (ГГТ) в качестве важного фактора вирулентности H. суис
. Этот фермент был описан, чтобы вызвать эпители желудка повреждения клеток [19] и модуляции пролиферации лимфоцитов [20] через взаимодействие фермента с двумя из его субстратов, L-глутамина и восстановленного глутатиона, что делает его первым идентифицирован и исследован H. SUIS
вирулентности определитель.
роль ГГТ при хеликобактерной
инфекции в естественных условиях
была исследована в мышах. Противоречивые выводы были сделаны в отношении важности ГГТ для колонизации. Некоторые группы пришли к выводу, что H. Pylori
GGT необходим для хронической инфекции у мышей [21], в то время как другие сделали противоположные выводы [22]. Кроме того, есть свидетельства того, что накопление хеликобактером
ГГТ является решающим фактором вирулентности участвует в иммунной уклонения и иммунной толерантности [23-25].
В настоящее время неизвестно, если и как H. суис
ГГТ влияет курс H. суис
инфекции в естественных условиях
. Цель настоящего исследования состояла в том, чтобы расширить наши предыдущие пробирке
результаты с использованием H. суис
ГГТ, а также изучить роль этого фактора вирулентности в патогенезе H. суис
инфекции в естественных условиях <бр>. В то же время, мы с целью сравнения ее относительную важность с тем из GGT антихеликобактерной
. Текущие эксперименты проводились в BALB /с мышей и беспородных монгольских песчанок, так как эти животные модели действительно было показано, что ценным инструментом для изучения роли Helicobacter
видов в желудочной патологии. Как правило, у монгольских песчанок, более быстрое и серьезное развитие желудочных поражений можно наблюдать по сравнению с мышами [4,26,27].
Материалы и методы
животных и бактериальные штаммы
Шестьдесят 4-уик старые, женщины СПФ-ТЕХНОЛОГИИ (SPF) BALB /с мышей были приобретены у Харлан NL (Хорст, Нидерланды). Двадцать пять 4-недельного возраста, женщины SPF беспородных монгольских песчанок (CRL: ПН) были получены из Charles River Laboratories (Лилль, Франция)
Для H. суис
инфекции у мышей и монгольских песчанок, штамм HS5cLP. был использован. Этот штамм был выделен в 2008 году из желудка бойни свиньи [28]. Для экспериментальных H. Pylori
инфекции у монгольских песчанок, штамм PMSS1 [29] был использован, так как этот штамм не имеет истории в естественных условиях
адаптации у мышей, в отличие от мыши адаптированного штамма SS1. В BALB /с мышей, H. Pylori
штамм SS1 [29] был использован, так как штамм PMSS1 ранее было показано, чтобы не быть в состоянии колонизировать желудок мышей BALB /с [29].
Строительство изогенная GGT
получали мутантные штаммы H. суис
и H. Pylori

изогенного H. суис ГГТ
мутантный штамм (HS5cLPΔggt
), как описано ранее [20]. Изогенная GGT
мутантный штамм антихеликобактерной
была получена с использованием той же стратегии, что и для создания H. суис
изогенная GGT
мутант, за исключением того, что сопротивление канамицину кассеты, использовали вместо устойчивости к хлорамфениколу кассета [20]. Очень кратко, удаление GGT
в хеликобактерной
SS1 и PMSS1 был введен путем обмена аллельного с использованием pBluescript II SK (+) фагмидных вектор (Agilent Technologies, Калифорния, США), в котором ~ 440 п.н. 5 ' -end и ~ 430 п.н. -end 3'-гена-мишени и устойчивости к канамицину кассета из плазмиды pKD4 [30], были лигированы с помощью ПЦР-опосредованный стратегии с 2-х циклов обратной ПЦР и ПЦР слитого [20]. Все праймеры, используемые для ПЦР-опосредованный конструкции рекомбинантных плазмид, показаны в таблице 1.
Полученная плазмида усиливалось в XL1-Blue 'ДПС E. Coli
(Agilent Technologies) и использовали в качестве самоубийства плазмиды в H . пилори
SS1 и PMSS1 (своего рода подарок от Сары Линден и Энн Мюллер, соответственно). H. Pylori
SS1 GGT
мутант (SS1Δggt
) и H. пилори
PMSS1 GGT
мутант (PMSS1Δggt
) были получены electrotransformation [31] или естественной трансформации [32 ], как описано выше. И, наконец, бактерии были выбраны на колумбийского агара пластин (Oxoid, Basingstoke, Великобритания) с Vitox добавки (Oxoid), 5% (об /об) дефибринированной овечьей крови (E &Amp; O Laboratories Ltd, Bonnybridge, Великобритания), и канамицин (25 мкг /мл). Планшеты инкубировали в течение 5-9 дней. Изогенных GGT
мутанты были проверены с помощью анализа активности ГГТ [19], ПЦР и нуклеотид sequencing.Table 1 праймеры, используемые для строительства хеликобактерной GGT изогенных мутантные штаммы
Праймер название

Sequence (5'- 3 ')

Праймер использовать

pBlue линейный Fwd 1
GGGGATCCACTAGTTCTAGAGCG
линеаризация плазмиды
pBlue линейного Rev1
CGGGCTGCAGGAATTCGATATCAAG
линеаризация plasmid
HpGGT-flank_fusion1F
CTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGTAACCGGTAAAATCAACACGGACGC
Amplification H. пилори GGT
и частичные вверх и вниз по течению фланговые гены
HpGGT-flank_fusion1R
CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCCGCGCTCTTATAAAAAGAAGCCGC
Amplification H. Pylori GGT
и частичные вверх и вниз по течению фланговые генов
pBluelinear_Hpggtflank1F
CCAAGGAAAGAATTTTAATCCTATTTAG
Линеаризация рекомбинантной плазмиды
pBluelinear_Hpggtflank1R
CTGTTTTCCTTTCAATCAACAATAATC
Линеаризация рекомбинантной плазмиды ген устойчивости
Hpkana_fusion_1F
ATTATTGTTGATTGAAAGGAAAACAGATGATTGAACAAGATGGATTGC
Amplification канамицин
Hpkana_fusion_1R
CTAAATAGGATTAAAATTCTTTCCTTGGTCAGAAGAACTCGTCAAGAAG
Amplification канамицину ген устойчивости
T7 prom3
TAATACGACTCACTATAGGG
Секвенирование
M13R
CAGGAAACAGCTATGAC
Секвенирование
условия культивирования бактериальных штаммов
дикого типа (WT) H. SUIS
штамм HS5cLP выращивали в течение 48 часов, как описано ранее [29]. HS5cLPΔggt
Бактерии выращивали в тех же самых условиях, что и штамм HS5cLP, за исключением того, что культивирование пластины были дополнены хлорамфеникол (30 мкг /мл), как описано ранее [20].
WT Г. пилори
штаммы SS1 и PMSS1 выращивали на колумбийского агара чашки, содержащие 5% (об /об) дефибринированная овечьей крови в течение 48-72 ч при 37 ° с в условиях микроаэробных, как описано ранее [29]. Впоследствии колонии собирали и культивировали в Brucella в бульоне с добавлением Vitox (Oxoid) и 5% фетальной сыворотки теленка (Hyclone) на ротационной мешалке в условиях микроаэробных (16 ч, 125 оборотов в минуту). SS1Δggt
и PMSS1Δggt
штаммы культивировали при тех же условиях, что и соответствующие WT штаммов на пластинах с добавлением канамицина (25 мкг /мл).
Экспериментальный дизайн
По прибытии шестьдесят BALB /C мышей и двадцать пять монгольских песчанок были разделены на 5 групп, и животные давали акклиматизироваться в новой среде в течение 1 недели. Животные были привиты внутрижелудочно 3 раза в течение 48 ч интервалами. Животные из группы 1 и 2 (мышей и монгольских песчанок) были привиты с Brucella бульона, содержащего 8 × 10 7 жизнеспособных бактерий штаммов HS5cLP и HS5cLPΔggt
соответственно. Животные в группе 3 и 4 были привиты с Brucella бульона, содержащего 3 × 10 8 жизнеспособных бактерий штаммов SS1 и SS1Δggt
(мыши) или 1 × 10 9 жизнеспособных бактерий штаммов PMSS1 и PMSS1Δggt
(песчанки). Животные в пятой группе были привиты с Brucella бульон и служил в качестве неинфицированных контроля. Для мышей, в течение 4 недель, 9 недель и 6 месяцев после инфицирования (PI), 4 животных из каждой группы подвергали эвтаназии путем цервикальной дислокации под изофлуран анестезией. Для монгольских песчанок, все животные были умерщвлены на 9 недель пи. В желудках животных резецировали для дальнейшей обработки, как описано ранее [27,29].
Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике факультета ветеринарной медицины, Университет Гента, Бельгия (EC2013 /29) с помощью.
Гистопатологические исследования и иммуногистохимии (IHC)
Три продольные полоски ткани желудка у мышей и монгольских песчанок были вырезаны из пищевода в двенадцатиперстную кишку вдоль большой кривизны. Ткань фиксировали в 4% фосфатно-буферном растворе формальдегида, обрабатываются с помощью стандартных методов и заливали в парафин для световой микроскопии. Через пять последовательных секций 5 мкм были вырезаны. Первый раздел окрашивали гематоксилином /эозином (H &Amp; E), чтобы набрать степень гастрита в соответствии с обновленной Сиднейской системы с некоторыми изменениями [33]. После депарафинизации и повторной гидратации для остальных участков, поиска антигена термически индуцированные проводили в цитратном буфере (рН 6,0). Для того, чтобы блокировать эндогенной активности пероксидазы и неспецифические реакции, все предметные стекла инкубировали с 3% Н <суб> 2O <суб> 2 в метаноле (5 мин) и 30% сыворотки козьего (30 мин), соответственно. Для дифференциации между Т и В-лимфоцитов, CD3 и CD20 антигены окрашивали на участках два и три, с использованием поликлональной кроличьей анти-CD3 антитела (1/100; DakoCytomation, Glostrup, Дания) и поликлональной кроличьей анти-CD20-антитела (1 /25; Thermo Scientific, Fremont, США), соответственно. Эти секции были дополнительно обработаны с Envision + System-HPR (DAB) (DakoCytomation) для использования с первичными антителами кролика. На четвертом и пятом разделе, пролиферации эпителиальных клеток и количества париетальных клеток определяли с помощью IHC окрашивания, с использованием мышиных моноклональных анти-Ki67 антитела (1/25; МЕНАРИНИ Diagnostics, Завентем, Бельгия) и мышиное моноклональное анти-водородную АТФазы калия β-субъединица (H + /K + АТФазы) антитела (1/25 000; Abcam Ltd, Кембридж, Великобритания), соответственно. Последующая визуализация была сделана с Envision + System-HPR (DAB) (DakoCytomation) для использования с первичными антителами мыши. Количественное Т-клеток, В-клеток и эпителиальных клеток проводили, как описано ранее [4]. Если коротко, то число клеток, принадлежащих к определенным популяций клеток (Т-клетки, В-клетки и эпителиальные клетки) определяли путем подсчета положительных клеток в пяти случайно выбранных больших полей мощности (увеличение: × 400), и в антральном и мозолистого область .
для оценки возможного развития pseudopyloric метаплазии, вызванной Helicobacter
инфекции, альциан сине-периодической кислотно-Шифф пятно окрашивания (AB /PAS) была выполнена.
квантификации колонизировать бактерий в желудке мышей и монгольских песчанок
полоски желудочной ткани, содержащей все регионы для мышей и отдельных частей (Антрум и корпуса) для монгольских песчанок хранили в 0,5 мл раствора RNAlater
(Амбион, Остин, TE, США) при -70 ° С до РНК и ДНК экстракции. Количественная ПЦР в реальном времени (QRT-ПЦР) использовали для определения количества колонизировать бактерий в желудочной ткани, как было описано ранее [29,34].
Выделение РНК и обратной транскрипции
QRT-PCR использовали для определения экспрессия генов в желудочном ткани у мышей и монгольских песчанок. Суммарную РНК экстрагировали с помощью Mini Kit RNeasy (Qiagen, Hilden, Germany) в соответствии с инструкциями изготовителя. Концентрация РНК измеряли с использованием спектрофотометра NanoDrop (Isogen Life Science, PW De Meern, Утрехт, Нидерланды). Чистота РНК оценивали с помощью автоматизированной системы электрофореза Experion с использованием StdSens РНК чипов (Bio-Rad, Hercules CA, USA). Концентрацию РНК из всех образцов доводили до концентрации 1 мкг /мкл и кДНК синтезировали сразу после очистки РНК с использованием набора iScript ™ для синтеза кДНК (Bio-Rad).
Дизайн и проверка праймеров и определение экспрессии гена
в ведение домашнего хозяйства гены H2afz, PPIA
и HPRT
были включены в качестве эталонных генов для мышей [29]. Для монгольских песчанок, набор эталонных генов тестировали основано на том, что они широко используются в других видах животных. Праймеры были разработаны на основе консервативных областей ACTB, бета-актина, RPS18
, GAPDH
, HPRT1
, SDHA
и UBC
полных или частичных последовательностей, кодирующих доступных для людей, свиней, мышей и крыс.
уровни экспрессии мРНК различных цитокинов (IFN-gamma, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-17, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-10), как было показано ранее дифференцированно выражены во время Х. суис
инфекции, а также другие гены (Foxp3, CXCL13, ASCT2, ATP4a и ATP4b) были определены количественно с помощью системы SYBR Green RT-PCR с IQ ™ SYBR Green Supermix. Реакции проводили с использованием ПЦР-системы CFX96 RT в амплификатор C1000 (Bio-Rad), как описано ранее [29]. Все реакции проводили в 12 мкл объемы, содержащего 0,05 мкл каждого праймера (1,25 пмоль /мкл), 6 мкл Iq ™ SYBR Green Supermix, 3,9 мкл ВЭЖХ воды и 2 мкл кДНК. Экспериментальная программа состояла из 95 ° С в течение 15 мин, затем 40 циклов денатурации при 95 ° С в течение 20 с, отжиг при 60 ° С в течение 30 секунд и удлинение при 72 ° С в течение 30 сек. Значения порогового цикла (Ct) были нормированы на средних геометрических эталонных генов и нормированных уровней мРНК всех генов-мишеней были рассчитаны с использованием метода 2 -ΔΔCt [35].
Из-за отсутствия информация ген Forkhead /крылатого фактора спиралью транскрипции (Foxp3) и хемокинов СХС лиганда 13 (CXCL13) из монгольских песчанок, праймеры конструировали на основе консервативных областей Foxp3 и CXCL13 полных или частичных последовательностей, кодирующих доступных для людей, свиней, мышей и крысы с той же стратегии, как описано выше. Уровни экспрессии мРНК Foxp3 и CXCL13 были определены с использованием того же метода, как описано выше. Информация о последовательности всех праймеров для мышей и для монгольских песчанок показано в таблицах 2 и 3.Table 2 Список генов и праймеров, используемых для QRT-PCR в монгольских песчанок
Gene

Праймер

Последовательность (5'- 3 ') завод
Ссылки

Foxp3

смысл
GCCCCTMGTCATGGTGGCA
это исследование
антисмысловой
CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA <бр> CXCL13

смысл
GAATGGCTGCCCCAAAACTGAA
Данное исследование
антисмысловой
TCACTGGAGCTTGGGGAGTTGAA
GAPDH

смысл
AACGGGAAGCTCACTGGCATG
Это исследование
антисмысловая
CTGCTTCACCACCTTCTTGATGTCA
HPRT1

смысл
GCCCCAAAATGGTTAAGGTTGCA
Данное исследование
антисмысловой
TCAAGGGCATATCCAACAACAAAC
RPS18

смысл
CGAGTACTCAACACCAACATCGATGG
Это исследование
антисмысловой
ATGTCTGCTTTCCTCAACACCACATG
IL-1β

смысл
GGCAGGTGGTATCGCTCATC
[64]
антисмысловой
CACCTTGGATTTGACTTCTA
IFN-γ

смысл
CCATGAACGCTACACACTGCATC
[65]
антисмысловой
GAAGTAGAAAGAGACAATCTGG
IL-5
смысл
AGAGAAGTGTGGCGAGGAGAGACG
[27]
антисмысловой
ACAGGGCAATCCCTTCATCGG
IL-6

смысл
GAGGTGAAGGATCCAGGTCA
[66]
антисмысловой
GAGGAATGTCCTCAGCTTGG
IL-10

смысл
GGTTGCCAAGCCTTATCAGA
[27]
антисмысловой
GCTGCATTCTGAGGGTCTTC
IL-17

смысл
AGCTCCAGAGGCCCTCGGAC
[64]
антисмысловой
AGGACCAGGATCTCTTGCTG
ATP4b

смысл
GGGGGTAACCTTGAGACCTGATG
[27]
антисмысловой
AAGAAGTACCTTTCCGACGTGCAG
β-актина

смысл
TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA
[66] <бр> антисмысловой
CCAGACAGCACTGTGTTGGC
Таблица 3 Список генов и праймеров, используемых для QRT-PCR у мышей
Gene

Primer

Sequence (5'- 3 ') <бр>
Ссылки

IL-1β

смысл
GGGCCTCAA AGGAAAGAATC
[29]
антисмысловой
TACCAGTTGGGGAACTCTGC
IFN-γ
<бр> смысл
GCGTCATTGAATCACACCTG
[29]
антисмысловой
TGAGCTCATTGAATGCTTGG
IL-4

смысл
ACTCTTTCGGGCTTTTCGAT
[29]
антисмысловой <бр> AAAAATTCATAAGTTAAAGCATGGTG
IL-10

смысл
ATCGATTTCTCCCCTGTGAA
[29]
антисмысловой
CACACTGCAGGTGTTTTAGCTT
IL-17

смысл
TTTAACTCCCTTGGCGCAAAA
[29]
антисмысловой
CTTTCCCTCCGCATTGACAC
Foxp3

смысл
GCCCCTMGTCATGGTGGCA
Данное исследование
антисмысловой
CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13
<бр> смысл
CTCTCCAGGCCACGGTATT
[67]
антисмысловой
TAACCATTTGGCACGAGGAT
ATP4a

смысл
TGCTGCTATCTGCCTCATTG
[68]
антисмысловой
GTGCTCTTGAACTCCTGGTAG
ATP4b

смысл
AACAGAATTGTCAAGTTCCTC
[68]
антисмысловой
AGACTGAAGGTGCCATTG
HPRT

смысл
CAGGCCAGACTTTGTTGGAT
[29]
антисмысловой
TTGCGCTCATCTTAGGCTTT
PPIA

смысл
AGCATACAGGTCCTGGCATC
[29]
антисмысловой
TTCACCTTCCCAAAGACCAC
H2afz

чувство <бр> CGTATCACCCCTCGTCACTT
[29]
антисмысловые
TCAGCGATTTGTGGATGTGT
Статистический анализ
Различия в способности колонизации были проанализированы с использованием непараметрического Манна-Уитни
тест. Различия в лимфоцитарной инфильтрации, экспрессии цитокинов и анализ IHC оценивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим постфактум тест Бонферрони. Статистический анализ проводили с помощью программы SPSS Statistics 20 программного обеспечения (IBM). Парного сравнения были сделаны для каждого отдельного момента времени и на объединенных данных с использованием времени в качестве фактора стратификации. P
значения менее 0,05 считались статистически значимыми. Все данные выражены как среднее ± стандартное отклонение. Все фигуры были созданы с помощью программного обеспечения GraphPad Prism5 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA).
Результаты
плотности Колонизация
Все контрольные животные были отрицательными для Helicobacter
. Результаты зараженных животных показали, что WT H. суис
настойчиво могут колонизировать желудок мыши с уровнями колонизации столь же высоко как 5,42 × 10 4 (± 1,46 × 10 4) бактерии /мг ткани желудка даже при 6 месяцев пи (рис 1C). H. Pylori
штамма SS1 было показано колонизировать желудок мыши на гораздо более низкой бактериальной плотностью, будучи 1,68 × 10 3 (± 1,73 × 10 3) бактерии /мг ткани через 6 месяцев пи (рис 1C, р
≪ 0,05). Рисунок 1 корреляция между бактериальной колонизации и способности воспаления счет в желудке мышей и монгольских песчанок. Мощность колонизация показана как log10 значений H. суис
или хеликобактерной
на мг ткани, определяемой с QRT-PCR в своде мышей (А-С) и антральном монгольских песчанок (D). 0, не инфильтрация с одноядерных и /или полиморфноядерных клеток; 1, очень мягкий диффузная инфильтрация с одноядерных и /или полиморфно-клеток или наличие одного небольшого (20-50 клеток) совокупность воспалительных клеток; 2, мягкий диффузная инфильтрация с одноядерных и /или полиморфно-клеток или наличие одного небольшого (50-200 клеток) совокупность воспалительных клеток; 3, умеренная диффузная инфильтрация с одноядерных и /или полиморфно-клеток и /или при наличии 2-4 воспалительных агрегатов; 4, отмеченные диффузная инфильтрация с одноядерных и /или полиморфно-клеток и /или в присутствии, по меньшей мере пяти воспалительных агрегатов. HS vs. HSM: Колонизация: р
> 0,05; Воспаление: р
&л; 0.05. SS1 vs. SS1m: Колонизация: р
&л; 0,05; Воспаление: р
&л; 0.05. PMSS1 vs. PMSS1m: Колонизация: р
> 0,05; Воспаление: р
&л; 0.05. HS: животные, инфицированные H. WT суис
srain HS5cLP; HSm: животные, инфицированные H. суис
штамм HS5cLPΔggt
; SS1: животные, инфицированные WT хеликобактерной
SS1; SS1m: животные, инфицированные H. Pylori
SS1Δggt
; PMSS1: животные, инфицированные WT хеликобактерной
PMSS1; PMSS1m: животных, инфицированных H. Pylori
PMSS1Δggt

Интересно, что H. суис
штамм HS5cLPΔggt
смог колонизировать сводом желудка мышей в такой же степени, что и. WT штамм, и это наблюдалось для всех временных точках (1А-1С). В противоположность этому, H. Pylori
штамм SS1Δggt
было показано, что нарушенный способность колонизации у мышей на всех трех временных точках (1А-1С, р
&л; 0,05). Аналогичные данные колонизация были продемонстрированы в антральном хеликобактерной
инфицированной-мышей во всех трех временных точках (данные не показаны).
И HS5cLP и HS5cLPΔggt
штамм успешно колонизировали антральном и тела желудка монгольских песчанок , хотя темпы колонизации были значительно ниже в корпусе по сравнению с антрума. Никаких статистически не наблюдалось существенных различий между обоими штаммами (рис 1D, р
> 0,05). H. Pylori
штамм PMSS1Δggt
смог колонизировать Антрум и тела желудка на том же уровне по сравнению с PMSS1 (рис 1D, р
≫ 0,05), хотя 2 из 5 монгольских песчанок были отрицательными наличие PMSS1Δggt
в своде желудка (данные не показаны).
инфекционно-индуцированное воспаление
Все контрольные мыши и песчанки показали нормальные желудка histomorphology во всех временных точках. Корреляция между воспалением оценки и бактериальной колонизации отображается на рисунке 1. По сравнению с
мышей с WT-инфекции штамма, инфекции H. суис
штамма HS5cLPΔggt
как правило, вызывали значительно меньше общего воспаления как в антральном (р
&л; 0,01) и корпус (р
&л; 0,01), тогда как только в области мозолистого (р
< 0,01), инфекции с H. Pylori
штамма SS1Δggt
индуцируется меньше воспаление, по сравнению с таковой в WT штамма инфицированных мышей. Через 6 месяцев пи, область корпуса в 2-х из 4 мышей с HS5cLP инфекции содержали крупные лимфоидные агрегаты или лимфоидные фолликулы сопровождающихся разрушением нормальной архитектуры слизистых оболочек (рис 2А), чего не наблюдалось у животных из других групп. Рисунок 2 H &Amp; E окрашивание срезов желудка от Helicobacter -infected мышей и монгольских песчанок. Представитель микрофотографии H &Amp; E окрашенные срезы, показанные здесь, были взяты из мышей устно привитых H. суис
HS5cLP (A), H. суис
HS5cLPΔggt
(B), H. Pylori
SS1 ( C) и H. пилори
SS1Δggt
(D) через 6 месяцев после инокуляции и монгольских песчанок устно оспорены с H. суис
HS5cLP (E), H. суис
HS5cLPΔggt
(F ), H. Pylori
PMSS1 (G) и H. пилори
PMSS1Δggt
(H) на 9 недель после прививки. Стрелки указывают на присутствие воспалительных клеток, воспалительных агрегатов, лимфоцитарной инфильтрацией или лимфоцитарный фолликулов. HS: животные, инфицированные WT H. суис
штамма HS5cLP; HSm: животные, инфицированные H. суис
штамм HS5cLPΔggt
; SS1: животные, инфицированные WT хеликобактерной
SS1; SS1m: животные, инфицированные H. Pylori
SS1Δggt
; PMSS1: животные, инфицированные WT хеликобактерной
PMSS1; PMSS1m: животные, инфицированные H. Pylori
PMSS1Δggt
; WT: дикого типа. Оригинальное увеличение:. 100 ×
Для монгольских песчанок, инфекция с HS5cLP или PMSS1 индуцированных тяжелой Антрум-доминантному гастрит с образованием агрегатов лимфоцитарными в собственной пластинке слизистой оболочки и /или к югу от слизистой оболочки желудка (рис 1D, 2E и 2G ). Не было обнаружено существенных различий между WT и мутантного штамма H. суис
по отношению к воспалительной реакции, индуцированной в песчанок (рис 1D, 2E и 2 F), хотя у всех животных, зараженных штаммом HS5cLP показало воспаление в области мозолистого , в то время как это было только в случае некоторых животных, инфицированных HS5cLPΔggt
(данные не показаны). В одном из песчанки, инфецированных Г. суис
штамма HS5cLP, наблюдали выраженный воспалительный ответ, в котором более 65% площади в собственной пластинке слизистой оболочки и подслизистой антральном был плотно инфильтрирована воспалительными клетками, плавленый лимфоидные агрегаты и . лимфоидные фолликулы (дополнительный файл 1)
Воспаление, индуцированное хеликобактерной
штамма PMSS1Δggt
в антральном песчанок оказался менее серьезным по сравнению с таковой в WT инфицированных животных (р &
ЛТ; 0,05) . (Цифры 1D, 2G и 2H)
инфильтрация воспалительных клеток
в целом, наблюдалось увеличение численности Т-клеток в корпусе (рис 3А, р
&ЛТ; 0,05) мышей, зараженных H. SUIS
штамм HS5cLP и H. Pylori
штамм SS1 на всех трех временных точках. По сравнению с мышей, инфицированных H. WT суис
, HS5cLPΔggt
индуцированное нижний ответ Т-клеток в корпус через 6 месяцев пи (р
&л; 0,01). H. пилори
штамма SS1Δggt
индуцированных пониженный ответ Т-клеток в области желтого (р
&л; 0,01) по сравнению с WT инфицированных животных, в обоих 9 недель и 6 месяцев пи (рис 3А). Аналогичные результаты наблюдались в антральном мышей (данные не показаны).

• Администрация триметоприм-сульфадимидина не улучшает заживление язв желудка железистой у лошадей, получающ…
• Сканирующая электронная микроскопия наблюдения ежа червем желудка, Physaloptera clausa (Spirurida: Physalopteridae)