Role of γ-glutamyltranspeptidase i patogenesen av Helicobacter suis og Helicobacter pylori-infeksjoner

Rollen til γ-glutamyltranspeptidase i patogenesen av Helicobacter suis Hotell og Helicobacter pylori
infeksjoner
Abstract
Helicobacter product: (H.
) suis
kan kolonisere magen av griser som vel som mennesker, forårsaker kronisk gastritt og andre mage patologiske forandringer inkludert magesår og slimhinne-assosiert lymfoid vev (MALT) lymfom. Nylig har en virulens faktor av H. suis
, γ-glutamyltransferase (GGT), har blitt vist å spille en viktig rolle i induksjon av human gastrisk epitelial celledød og modulering av lymfocyttproliferasjon avhengig av glutamin og glutation katabolisme. I denne studien ble relevansen av GGT i patogenesen av H. suis
infeksjon studert i mus og mongolske hamsteren modeller. I tillegg ble den relative betydningen av H. suis
GGT sammenlignet med den av H. pylori
GGT. En betydelig og annerledes bidrag av GGT av H. suis Hotell og H. pylori
ble sett i form av bakteriell kolonisering, betennelse og utløste immunrespons. I motsetning til H. pylori
Δggt
stammer, H. suis
Δggt
stammer var i stand til å kolonisere magen på nivåer tilsvar til WT stammer, selv om de induserte betydelig mindre samlet mage betennelse i mus. Dette ble karakterisert ved lavere antall av T og B-celler, og et lavere nivå av epitelcelleproliferasjon. Generelt, sammenlignet med WT belastning infeksjon, GGT
mutante stammer av H. suis
utløst lavere nivåer av Th1 og Th17 signatur cytokin uttrykk. En markert oppregulering av B-lymfocytter kjemotiltrekkende CXCL13 ble observert både i dyr infisert med WT og GGT
mutante stammer av H. suis
. Interessant nok var H. suis
GGT vist å påvirke glutamin metabolismen av gastrisk epitel gjennom nedregulering av glutamin transporter ASCT2
. Innledning
Helicobacter product: (H.
) pylori
er en Gram-negative bakterien som koloniserer magen av mer enn halvparten av verdens befolkning. Infeksjon med denne bakterien kan forårsake gastritt, magesår sykdom, mage adenokarsinom og slimhinne-assosiert lymfoid vev (MALT) lymfom [1-3]. Foruten H. pylori
, non-H. pylori
helicobacters (NHPh) har også blitt påvist i magen av mennesker og disse bakteriene forårsake lignende mage sykdommer. Risikoen for å utvikle mage MALT lymfom er høyere under NHPh infeksjon i forhold til infeksjon med H. pylori product: [4-9]. H. suis
er den mest utbredte mage NHPh hos mennesker. Griser er naturlig vert for denne bakterien, med forekomst nådde 90% eller mer [10] og mest sannsynlig, griser og muligens også svinekjøtt er de viktigste kildene til menneske H. suis
infeksjon [4,11-13].
H. suis
infeksjon synes å vedvare for liv, i det minste i griser og gnagere brukt som modeller for humane infeksjoner [14]. I griser, forårsaker infeksjon utvikling av gastritt og en reduksjon i kroppsvekt. Videre synes bakterien til å spille en rolle i utviklingen av sårdannelse av de ikke-kjertel pars oesophagea [15]. Hos mus og mongolske hamsteren modeller av menneskelig magesykdom, fører eksperimentell H. suis
infeksjon alvorlig mage patologi [4,16,17], inkludert gastritt, parietalcellen nekrose og utvikling av mage MALT lymfom-lignende lesjoner, ligner lesjoner observert i H. suis
-infected mennesker.
Tidligere studier har vist at denne bakterien mangler en homolog for flere virulensfaktorer av H. pylori
, slik som cytotoxin forbundet gener
patogenitet island ( CAG
PAI) og vacuolating cytotoxin (Vaca) [18]. Vi var imidlertid i stand til å identifisere den γ-glutamyltransferase (GGT) som en viktig faktor virulensen av H. suis
. Dette enzymet har blitt beskrevet for å forårsake mage epitelial celleskade [19] og modulering av lymfocyttproliferasjon [20] ved samvirkning av enzymet med to av sine substrater, L-glutamin og redusert glutation, slik at det først identifisert og undersøkt H. suis
virulens determinant.
rolle GGT under H. pylori
infeksjon in vivo
har blitt undersøkt hos mus. Motstridende konklusjoner har blitt trukket om betydningen av GGT for kolonisering. Noen grupper har konkludert med at H. pylori
GGT er nødvendig for vedvarende infeksjon hos mus [21], mens andre har gjort i strid konklusjoner [22]. I tillegg er det er vist at Helicobacter
GGT er en avgjørende virulens faktor involvert i immununndragelser og immuntoleranse [23-25].
Foreløpig er det ukjent om og hvordan H. suis
GGT påvirkninger i løpet av H. suis
infeksjon in vivo
. Hensikten med denne studien var å utvide våre tidligere vitro
funn med H. suis
GGT i, og å studere rollen til denne virulens faktor i patogenesen av H. suis
infeksjon in vivo
. Samtidig, vi tar sikte på å sammenligne relative betydning med at av GGT av H. pylori
. De aktuelle forsøkene ble utført i BALB /c-mus og utav mongolske ørkenrotte, siden disse dyremodeller har virkelig vist seg å være verdifulle verktøy for å undersøke rollen av Helicobacter
arter i gastrisk patologi. Vanligvis, i mongolske ørkenrotte, en raskere og mer alvorlig utvikling av mage lesjoner kan observeres i forhold til mus [4,26,27].
Materiale og metode
Animal og bakteriestammer
Sixty 4-uke- gamle, kvinnelige spesifikt patogen-fri (SPF) BALB /c mus ble kjøpt fra Harlan NL (Horst, Nederland). Tjuefem fire uker gamle, kvinnelige SPF utav mongolske ørkenrotte (CRL: Man) ble oppnådd fra Charles River Laboratories (Lille, Frankrike)
For H. suis
infeksjon hos mus og mongolske ørkenrotte, belastning HS5cLP. var brukt. Denne belastningen har vært isolert i 2008 fra magen av et slakteri gris [28]. For eksperimentelle H. pylori-infeksjon
i mongolske gerbiler, stamme PMSS1 [29] ble anvendt, siden denne stamme ikke har noen historie av in vivo
tilpasning i mus, i motsetning til mus tilpasset belastning SS1. I BALB /c-mus, H. pylori
belastning SS1 [29] ble anvendt, ettersom belastningen PMSS1 er tidligere blitt vist ikke å være i stand til å kolonisere magen av BALB /c-mus [29].
Konstruksjon av isogene GGT
mutante stammer av H. suis Hotell og H. pylori
En isogen H. suis GGT
mutant stamme (HS5cLPΔggt
) ble fremstilt som beskrevet tidligere [20]. Den isogene GGT
mutant stamme av H. pylori
ble oppnådd ved anvendelse av samme strategi som for etableringen av H. suis
isogene GGT
mutant, bortsett fra at en kanamycinresistens kassett ble brukt i stedet for en kloramfenikol-resistens kassett [20]. Meget kort, sletting av GGT
i H. pylori
SS1 og PMSS1 ble introdusert av allelisk utveksling hjelp av pBluescript II SK (+) fagemidvektor (Agilent Technologies, California, USA) i hvilken ~ 440 bp av 5'- -end og ~ 430 bp av 3'-enden av mål-genet og kanamycinresistens kassetten fra plasmid pKD4 [30] ble ligert via en PCR-mediert strategi med 2 cykler av invers PCR og fusjons PCR [20]. Alle primerne anvendt for PCR-mediert konstruksjonen av de rekombinante plasmider er vist i tabell 1.
Det resulterende plasmid ble amplifisert i XL1-Blue MRF 'E. coli
(Agilent Technologies) og anvendt som en selvmord plasmid i H . pylori
SS1 og PMSS1 (en slags gave fra Sara Lindén og Anne Muller, henholdsvis). Den H. pylori
SS1 GGT
mutant (SS1Δggt
) og H. pylori
PMSS1 GGT
mutant (PMSS1Δggt
) ble oppnådd ved electrotransformation [31] eller naturlig transformasjon [32 ] som tidligere beskrevet. Til slutt, bakterier ble selektert på Columbia-agar plater (Oxoid, Basingstoke, UK) med Vitox supplement (Oxoid), 5% (volum /volum) defibrinert saueblod (E & O Laboratories Ltd, Bonnybridge, UK) og kanamycin (25 ug /mL). Platene ble inkubert i 5-9 dager. De isogene GGT
mutanter ble bekreftet av en GGT aktivitetsanalyse [19], PCR og nucleotide sequencing.Table 1 Primere som brukes til bygging av H. pylori GGT isogene mutantstammer
Primer navn
Sequence (5'3 ')
Primer bruke
pBlue lineær Fwd en
GGGGATCCACTAGTTCTAGAGCG
Linearisering av plasmid
pBlue lineær Rev1
CGGGCTGCAGGAATTCGATATCAAG
Linearisering av plasmid
HpGGT-flank_fusion1F
CTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGTAACCGGTAAAATCAACACGGACGC
Amplification H. pylori GGT Hotell og delvis opp- og nedstrøms flankerende gener
HpGGT-flank_fusion1R
CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCCGCGCTCTTATAAAAAGAAGCCGC
Amplification H. pylori GGT Hotell og delvis opp- og nedstrøms flankerende gener
pBluelinear_Hpggtflank1F
CCAAGGAAAGAATTTTAATCCTATTTAG
Linearisering av rekombinante plasmidet
pBluelinear_Hpggtflank1R
CTGTTTTCCTTTCAATCAACAATAATC
Linearisering av rekombinante plasmidet
Hpkana_fusion_1F
ATTATTGTTGATTGAAAGGAAAACAGATGATTGAACAAGATGGATTGC
Amplification kanamycinresistensgen
Hpkana_fusion_1R
CTAAATAGGATTAAAATTCTTTCCTTGGTCAGAAGAACTCGTCAAGAAG
Amplification kanamycinresistensgen
T7 prom3
TAATACGACTCACTATAGGG
Sekvense
M13R
CAGGAAACAGCTATGAC
Sekvense
Kultur betingelser for bakteriestammer
Wild-type (WT) H. suis
stamme HS5cLP ble dyrket i 48 timer som tidligere beskrevet [29]. HS5cLPΔggt
bakterier ble dyrket under de samme betingelser som belastning HS5cLP, bortsett fra at dyrknings platene ble supplert med kloramfenikol (30 ug /ml) som tidligere beskrevet [20]. WT H. pylori
stammene SS1 og
PMSS1 ble dyrket i Columbia-agar plater inneholdende 5% (volum /volum) defibrinert saueblod i 48-72 timer ved 37 ° C under microaerobic betingelser som tidligere beskrevet [29]. Deretter kolonier ble plukket opp og dyrket i Brucella buljong supplert med Vitox (Oxoid) og 5% føtalt kalveserum (HyClone) på et rotasjonsristeapparat i henhold til microaerobic betingelser (16 timer, 125 rpm). SS1Δggt Hotell og PMSS1Δggt
stammene ble dyrket under de samme betingelser som de tilsvarende WT stammer på plater supplert med kanamycin (25 mikrogram /ml).
Eksperimentell design
Ved ankomst, seksti BALB /C mus og tjuefem mongolske ørkenrotte ble delt inn i 5 grupper, og dyrene ble tillatt å akklimatisere seg til det nye miljøet for en uke. Dyrene ble inokulert intragastrisk 3 ganger med 48 timers mellomrom. Dyr fra gruppe 1 og 2 (både mus og mongolske ørkenrotter) ble inokulert med Brucella buljong som inneholdt 8 x 10 7 levedyktige bakterier av stammene HS5cLP og HS5cLPΔggt
, respektivt. Dyr i gruppe 3 og 4 ble inokulert med Brucella buljong inneholder 3 × 10 8 levedyktige bakterier av stammer SS1 og SS1Δggt plakater (mus) eller 1 x 10 9 levedyktige bakterier av stammer PMSS1 og PMSS1Δggt
(ørkenrotter). Dyr i den femte gruppen ble inokulert med Brucella buljong og tjente som friske kontroller. For mus, i 4 uker 9 uker og 6 måneder etter infeksjon (pi), ble 4 dyr fra hver gruppe avlivet ved cervikal dislokasjon etter isofluran anestesi. For mongolske ørkenrotte, ble alle dyrene avlivet på 9 uker pi. Magen på dyrene ble resected for videre behandling som beskrevet tidligere [27,29].
Dyreforsøk ble godkjent av etisk komité ved Fakultet for veterinærmedisin, Ghent University, Belgia (EC2013 /29).
histopatologisk undersøkelse og immunhistokjemi (IHC)
tre langsgående strimler av gastrisk vev fra mus og mongolske ørkenrotter ble skåret fra spiserøret til tolvfingertarmen langs den store kurvatur. Vevet ble fiksert i 4% fosfatbufret formaldehyd, behandles ved hjelp av standardmetoder og innstøpt i parafin for lysmikroskopi. Fem seriesnitt på 5 mikrometer ble kuttet. Den første delen ble farget med hematoksylin /eosin (H & E) å score graden av gastritt ifølge Oppdatert Sydney System med noen endringer [33]. Etter deparaffinization og rehydratisering for de gjenværende delene, ble varme-induserte antigen gjenfinning utføres i citrat-buffer (pH = 6,0). For å blokkere endogen peroksidase aktivitet og ikke-spesifikke reaksjoner, ble alle objektglassene inkubert med 3% H 2o 2 i metanol (5 min) og 30% geiteserum (30 min), respektivt. For differensiering mellom T- og B-lymfocytter, ble CD3 og CD20-antigenene flekker på seksjoner to og tre, ved hjelp av et polyklonalt kanin-anti-CD3-antistoff (1/100; DakoCytomation, Glostrup, Danmark) og et polyklonalt kanin-anti-CD20-antistoff (1 /25; Thermo Scientific, Fremont, USA), henholdsvis. Disse snitt ble ytterligere behandlet med seg + System-HPR (DAB) (DakoCytomation) for bruk sammen med kanin primære antistoffer. På den fjerde og femte avsnitt, epitelcelleproliferasjon og antall parietalceller ble bestemt ved IHC flekker, ved å bruke en mus monoklonalt anti-Ki67 antistoff (1/25; Menarini Diagnostics, Zaventem, Belgia) og mus monoklonalt anti-hydrogen kalium ATPase β-subenheten (H + /K + ATPase) antistoff (1/25 000; Abcam Ltd., Cambridge, UK), henholdsvis. Påfølgende visualisering ble utført med seg + System-HPR (DAB) (DakoCytomation) for bruk med mus primære antistoffer. Kvantifisering av T-celler, B-celler og epitelceller ble utført som beskrevet tidligere [4]. I korthet, ble antall celler som tilhører definerte cellepopulasjoner (T-celler, B-celler og epitelceller), fastlagt ved å telle positive celler i fem tilfeldig valgt High Power Fields (forstørrelse: x 400), både i antrum og corpus region .
for å vurdere mulig utvikling av pseudopyloric metaplasi indusert av Helicobacter
infeksjon, Alcian blå-periodisk syre-Schiff flekken flekker (AB /PAS) ble utført
. Kvantifisering av koloniserende bakterier i magen av mus og mongolske ørkenrotte
strimler av mage vev som inneholder alle regioner for mus og separate stykker (antrum og korpus) for mongolske ørkenrotte ble lagret i 0,5 ml RNAlater
løsning (Ambion, Austin, TE, USA) ved -70 ° C til RNA og DNA-ekstraksjon. Kvantitativ Real-Time PCR (QRT-PCR) ble benyttet for å bestemme antall koloniserende bakterier i mage vev som beskrevet tidligere [29,34].
RNA ekstraksjon og revers transkripsjon
QRT-PCR ble benyttet for å bestemme genuttrykk i mage vev fra mus og mongolske ørkenrotte. Total RNA ble ekstrahert ved bruk av RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland) i henhold til produsentens instruksjoner. Konsentrasjonen av RNA ble målt ved hjelp av en Nanodrop spektrofotometer (Isogen Life Science, PW De Meern, Utrecht, Nederland). Renheten av RNA ble evaluert med den Experion® automatisert system ved hjelp av elektroforese StdSens RNA-chips (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). RNA-konsentrasjonen fra alle prøvene ble justert til 1 pg /pl og cDNA ble syntetisert RNA umiddelbart etter rensing ved anvendelse av iScript ™ cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad).
Design og validering av primere og bestemmelse av genekspresjon
renhold gener H2afz, PPIA Kjøpe og hprt
ble inkludert som referanse gener for mus [29]. For mongolske ørkenrotter, ble et sett med referansegener testet basert på det faktum at de er i utstrakt bruk i andre dyrearter. Primere ble utviklet basert på de konserverte regioner av ACTB, β-aktin, RPS18
, GAPDH
, HPRT1
, SDHA Hotell og UBC
fullstendige eller delvise sekvenser tilgjengelig for mennesker, griser, mus og rotter.
Den mRNA ekspresjonsnivåer av forskjellige cytokiner (IFN-y, IL-4, IL-5, IL-17, IL-1β, IL-6, IL-10), tidligere vist å være uttrykt forskjellig under H. suis
infeksjon, samt andre gener (foxp3, CXCL13, ASCT2, ATP4a, og ATP4b) ble kvantifisert ved hjelp av SYBR Green basert RT-PCR med iQ ™ SYBR Grønn Supermix. Reaksjoner ble utført ved anvendelse av en CFX96 RT PCR System i en C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad) som tidligere beskrevet [29]. Alle reaksjoner ble utført i 12 pl volum inneholdende 0,05 ul av hver primer (1,25 pmol /ul), 6 ul iQ ™ SYBR grønn Supermix, 3,9 pl HPLC-vann og 2 ul cDNA. Den eksperimentelle program besto av 95 ° C i 15 minutter, etterfulgt av 40 sykluser med denaturering ved 95 ° C i 20 sekunder, annealing ved 60 ° C i 30 s, og forlengelse ved 72 ° C i 30 sek. Den terskel syklusverdier (CT) ble normalisert til den geometriske gjennomsnittsverdien av referanse genene og de normaliserte mRNA-nivåene av alle målgener ble beregnet ved hjelp av metoden til 2 -ΔΔCt [35].
Grunn av utilgjengelighet genet informasjon for gaffelhode /winged helix transkripsjonsfaktor (foxp3) og chemokin CXC ligand 13 (CXCL13) fra mongolske ørkenrotte, primere ble utviklet basert på de konserverte regioner av foxp3 og CXCL13 fullstendige eller delvise sekvenser tilgjengelige for mennesker, griser, mus og rotter med den samme strategien som beskrevet ovenfor. De mRNA ekspresjonsnivåer av foxp3 og CXCL13 ble bestemt ved å bruke den samme fremgangsmåte som beskrevet ovenfor. Sekvensinformasjon fra alle primere for mus og for mongolske ørkenrotte er vist i tabell 2 og 3.Table 2 Liste over gener og primere som brukes for QRT-PCR i mongolske ørkenrotte
Gene
Primer

Sequence (5'3 ')
Referanser
foxp3
følelse
GCCCCTMGTCATGGTGGCA
Denne studien
anti
CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13
følelse
GAATGGCTGCCCCAAAACTGAA
Denne studien
anti
TCACTGGAGCTTGGGGAGTTGAA
GAPDH
følelse
AACGGGAAGCTCACTGGCATG
Denne studien
anti
CTGCTTCACCACCTTCTTGATGTCA
HPRT1
følelse
GCCCCAAAATGGTTAAGGTTGCA
Denne studien
anti
TCAAGGGCATATCCAACAACAAAC
RPS18
følelse
CGAGTACTCAACACCAACATCGATGG
denne studien
anti
ATGTCTGCTTTCCTCAACACCACATG
IL-1β
følelse
GGCAGGTGGTATCGCTCATC product: [64]
anti
CACCTTGGATTTGACTTCTA
IFN-γ

følelse
CCATGAACGCTACACACTGCATC product: [65]
anti
GAAGTAGAAAGAGACAATCTGG
IL-5
følelse
AGAGAAGTGTGGCGAGGAGAGACG product: [27]
anti
ACAGGGCAATCCCTTCATCGG
IL-6
følelse
GAGGTGAAGGATCCAGGTCA product: [66]
anti
GAGGAATGTCCTCAGCTTGG
IL-10
forstand
GGTTGCCAAGCCTTATCAGA product: [27]
anti
GCTGCATTCTGAGGGTCTTC
IL-17
følelse
AGCTCCAGAGGCCCTCGGAC product: [64]
anti
AGGACCAGGATCTCTTGCTG
ATP4b
følelse
GGGGGTAACCTTGAGACCTGATG product: [27]
anti
AAGAAGTACCTTTCCGACGTGCAG
β-aktin
følelse
TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA product: [66]
anti
CCAGACAGCACTGTGTTGGC
Tabell 3 Liste over gener og primere som brukes for QRT-PCR i mus
Gene
Primer
Sequence (5'3 ')

Referanser
IL-1β
følelse
GGGCCTCAA AGGAAAGAATC product: [29]
anti
TACCAGTTGGGGAACTCTGC
IFN-γ

følelse
GCGTCATTGAATCACACCTG product: [29]
anti
TGAGCTCATTGAATGCTTGG
IL-4
følelse
ACTCTTTCGGGCTTTTCGAT product: [29]
anti
AAAAATTCATAAGTTAAAGCATGGTG
IL-10
følelse
ATCGATTTCTCCCCTGTGAA product: [29]
anti
CACACTGCAGGTGTTTTAGCTT
IL-17
forstand
TTTAACTCCCTTGGCGCAAAA product: [29]
anti
CTTTCCCTCCGCATTGACAC
foxp3
følelse
GCCCCTMGTCATGGTGGCA
Denne studien
anti
CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13

følelse
CTCTCCAGGCCACGGTATT product: [67]
anti
TAACCATTTGGCACGAGGAT
ATP4a
følelse
TGCTGCTATCTGCCTCATTG product: [68]
anti
GTGCTCTTGAACTCCTGGTAG
ATP4b
følelse
AACAGAATTGTCAAGTTCCTC product: [68]
anti
AGACTGAAGGTGCCATTG
HPRT
følelse
CAGGCCAGACTTTGTTGGAT product: [29]
anti
TTGCGCTCATCTTAGGCTTT
PPIA
følelse
AGCATACAGGTCCTGGCATC product: [29]
anti
TTCACCTTCCCAAAGACCAC
H2afz
forstand
CGTATCACCCCTCGTCACTT product: [29] Hotell antisensprimere
TCAGCGATTTGTGGATGTGT
statistisk analyse
Forskjeller i kolonisering kapasitet ble analysert ved hjelp av en ikke-parametrisk Mann-Whitney U
test. Forskjeller i lymfatisk infiltrasjon, cytokin uttrykk og IHC analyse ble vurdert med enveis ANOVA etterfulgt av en Bonferroni post hoc test. Statistiske analyser ble utført ved hjelp av SPSS statistikk 20 software (IBM). Parvise sammenligninger ble gjort for hver enkelt gang-punkt og på samlede data ved hjelp av tid som stratifisering faktor. P
verdier som er mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikant. Alle data er uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Alle tallene ble opprettet ved hjelp GraphPad Prism5 programvare (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA).
Resultater
Colonization tetthet
Alle kontroll dyr var negative for Helicobacter
. Resultater av infiserte dyr viste at WT H. suis
kan vedvarende kolon musen magen med kolonisering nivå så høyt som 5,42 × 10 4 (± 1.46 × 10 4) bakterier /mg mage vev selv på 6 måneder pi (figur 1C). H. pylori stamme
SS1 ble vist å kolonisere mus magen til en mye lavere bakterietetthet, som er 1,68 x 10 3 (± 1,73 x 10 3) bakterier /mg vev ved 6 måneder pi (figur 1C, p
< 0,05). Figur 1 Sammenheng mellom bakteriell kolonisering kapasitet og betennelse score i magen av mus og mongolske ørkenrotte. Kolonisering kapasitet er vist som log10 verdier av H. suis
eller H. pylori
per mg vev, bestemt med QRT-PCR i corpus av mus (A-C) og antrum av mongolske ørkenrotter (D). 0, ingen infiltrering med mononukleær og /eller polymorfonukleære celler; 1, meget mild diffus infiltrering med mononukleær og /eller polymorfonukleære celler eller tilstedeværelsen av en liten (20-50 celler) summen av inflammatoriske celler; 2, mild diffus infiltrering med mononukleær og /eller polymorfonukleære celler eller tilstedeværelsen av en liten (50-200 celler) summen av inflammatoriske celler; 3, moderat diffus infiltrering med mononukleær og /eller polymorfonukleære celler og /eller tilstedeværelse av 2-4 inflammatoriske aggregater; 4, merket diffus infiltrering med mononukleær og /eller polymorfonukleære celler og /eller nærværet av minst fem inflammatoriske aggregater. HS vs. HSM: Colonization: p
> 0,05; Betennelse: p
< 0,05. SS1 vs. SS1m: Colonization: p
< 0,05; Betennelse: p
< 0,05. PMSS1 vs. PMSS1m: Colonization: p
> 0,05; Betennelse: p
< 0,05. HS: dyr som er infisert med WT H. suis
srain HS5cLP; HSM: dyr som er infisert med H. suis
belastning HS5cLPΔggt
; SS1: dyr som er infisert med WT H. pylori
SS1; SS1m: dyr som er infisert med H. pylori
SS1Δggt
; PMSS1: dyr som er infisert med WT H. pylori
PMSS1; PMSS1m: dyr infisert med H. pylori
PMSS1Δggt
Interessant, H. suis
belastning HS5cLPΔggt
var i stand til å kolonisere korpus av magen hos mus i en lignende grad som den. WT belastning, og dette ble observert for alle tidspunkter (figur 1A-1C). I motsetning til dette ble H.pylori
belastning SS1Δggt
vist seg å ha en svekket kolonisering kapasitet hos mus ved alle tre tidspunkter (figur 1A-1C, p
< 0,05). Lignende kolonisering data ble demonstrert i antrum av Helicobacter
smittet-mus i alle tre tidspunkter (data ikke vist).
Både HS5cLP og HS5cLPΔggt
belastningen vellykket kolonis antrum og corpus av magen av mongolske ørkenrotte selv om kolonisering ratene var mye lavere i corpus forhold til antrum. Ingen statistisk ble observert signifikante forskjeller mellom de to stammene (figur 1D, p
> 0,05). H. pylori
belastning PMSS1Δggt
var i stand til å kolonisere antrum og corpus av magen på samme nivå i forhold til PMSS1 (figur 1D, p
> 0,05), selv om 2 ut fem mongolske ørkenrotte var negative for tilstedeværelsen av PMSS1Δggt
i corpus av magen
Infeksjon-indusert betennelser
alle kontroll mus og ørkenrotte viste normal mage histomorphology på alle tidspunkter (data ikke vist).. Korrelasjonen mellom betennelse score og bakteriell kolonisering vises i figur 1.
Sammenlignet med mus med WT belastning infeksjon, infeksjon med H. suis
belastning HS5cLPΔggt
generelt indusert betydelig mindre samlet betennelse både i antrum (p
< 0,01) og corpus (p
< 0,01), mens bare i corpus regionen (p
< 0,01), infeksjon med H. pylori
belastning SS1Δggt
indusert mindre inflammasjon, sammenlignet med det man ser i WT strekk infiserte mus. Ved 6 måneder pi, corpus region i to av fire mus med HS5cLP infeksjon inneholdt store lymfoide aggregater eller lymfoide follikler ledsaget av ødeleggelse av den normale slimhinne-arkitektur (figur 2A), som ikke ble observert i dyr fra andre grupper. Figur 2 H & E farging av mage seksjoner fra Helicobacter -infected mus og mongolske ørkenrotte. Representative mikrografer av H & E farget seksjoner som vises her er hentet fra mus oralt inokulert med H. suis
HS5cLP (A), H. suis
HS5cLPΔggt product: (B), H. pylori
SS1 ( C) og H. pylori
SS1Δggt product: (D) på 6 måneder etter inokulasjon og mongolske ørkenrotte muntlig utfordret med H. suis
HS5cLP (E), H. suis
HS5cLPΔggt product: (F ), H. pylori
PMSS1 (G) og H. pylori
PMSS1Δggt product: (H) på 9 uker etter vaksinasjon. Piler indikerer tilstedeværelse av inflammatoriske celler, inflammatoriske aggregater, lymfocyttisk infiltrasjon, eller lymfatisk follikler. HS: dyr som er infisert med WT H. suis
belastning HS5cLP; HSM: dyr som er infisert med H. suis
belastning HS5cLPΔggt
; SS1: dyr som er infisert med WT H. pylori
SS1; SS1m: dyr som er infisert med H. pylori
SS1Δggt
; PMSS1: dyr som er infisert med WT H. pylori
PMSS1; PMSS1m: dyr som er infisert med H. pylori
PMSS1Δggt
; WT: vill-type. Original forstørrelse. 100 ×
For mongolske ørkenrotte, infeksjon med HS5cLP eller PMSS1 indusert alvorlig antrum dominerende gastritt med dannelsen av lymfatisk aggregater i lamina propria og /eller under slimhinnene i magen (figur 1D, 2E, og 2G ). Det ble ikke observert noen signifikante forskjeller mellom de WT og mutant stamme av H. suis
i forhold til den inflammatoriske respons indusert i ørkenrotter (figurene 1D, 2E og 2F), men alle dyr som er infisert med stamme HS5cLP viste betennelse i corpus region , mens dette bare var tilfelle for noen dyr infisert med HS5cLPΔggt plakater (data ikke vist). I en ørkenrotte infisert med H. suis
belastning HS5cLP ble det uttalt betennelsesreaksjon observert, der mer enn 65% av arealet i lamina propria og submucosa av antrum ble tett infiltrert med betennelsesceller, smeltet lymfoide aggregater og . lymfoide follikler (Tilleggs fil 1)
Inflammasjon indusert av H. pylori
belastning PMSS1Δggt
i antrum av ørkenrotte var mindre alvorlig enn det man ser i WT infiserte dyr (p
< 0,05) . (tall 1D, 2G og 2H)
inflammatorisk celleinfiltrasjon
generelt ble det observert en økning av T-celle tall i corpus (figur 3A, p
< 0,05) hos mus infisert med H. suis
belastning HS5cLP og H. pylori
belastning SS1 på alle tre tidspunkter. Sammenlignet med mus infisert med WT H. suis
, etter HS5cLPΔggt induserte en lavere T celle respons i corpus på seks måneder pi (p
< 0,01). H. pylori
belastning SS1Δggt
induserte en redusert T-cellerespons i corpus region (p
< 0,01) sammenlignet med WT infiserte dyr, både på 9 uker og 6 måneder pi (figur 3A). Lignende resultater ble observert i antrum av mus (data ikke vist). Figur 3 Kvantitativ analyse av definerte cellepopulasjoner med immunhistokjemi.

• Administrasjon av trimetoprim-sulfadimidin ikke blir bedre heling av kjertel magesår hos hester som får omeprazol: en randomisert, blindet klinisk studie
• Scanning elektronmikros observasjoner av pinnsvinet magen ormen, Physaloptera clausa (Spirurida: Physalopteridae)