Rolle γ-glutamyltranspeptidase i patogenesen af ​​Helicobacter suis og Helicobacter pylori-infektioner

Rolle γ-glutamyltranspeptidase i patogenesen af ​​Helicobacter suis
og Helicobacter pylori
infektioner
Abstrakt
Helicobacter
(H.
) suis
kan kolonisere maven af ​​svin som samt mennesker, forårsager kronisk gastritis og andre gastrisk patologiske ændringer, herunder mavesår og mucosa-associeret lymfoidt væv (MALT) lymfom. For nylig er en virulensfaktor af H. suis
, γ-glutamyltranspeptidase (GGT), har vist sig at spille en vigtig rolle i induktionen af ​​human gastrisk epitel celledød og modulering af lymfocytproliferation afhængigt glutamin og glutathion katabolisme. I nærværende undersøgelse blev relevansen af ​​GGT i patogenesen af ​​H. suis
infektion undersøgt i mus og mongolske gerbil modeller. Desuden blev den relative betydning af H. suis
GGT sammenlignet med H. pylori
GGT. En betydelig og anderledes bidrag GGT af H. suis
og H. pylori
blev set i form af bakteriel kolonisering, inflammation og det fremkaldte immunrespons. I modsætning til H. pylori
Δggt
stammer, H. suis
Δggt
stammer var i stand til at kolonisere maven på et niveau svarende til WT stammer, selv om de inducerede betydeligt mindre samlet gastrisk betændelse i mus. Dette blev karakteriseret ved faldende tal for T- og B-celler og et lavere niveau af epitelcelleproliferation. Generelt sammenlignet med WT-stamme infektion, GGT
mutante stammer af H. suis
udløst lavere niveauer af Th1 og Th17 signatur cytokinekspression. En udtalt opregulering af B-lymfocyt kemoattraktant CXCL13 blev observeret, både i dyr inficeret med WT og GGT
mutant stammer af H. suis
. Interessant nok blev H. suis
GGT vist at påvirke glutamin metabolisme af gastrisk epitel gennem nedregulering af glutamin transporter ASCT2.
Introduktion
Helicobacter
(H.
) pylori
er en gram-negativ bakterie, der koloniserer mave mere end halvdelen af ​​verdens befolkning. Infektion med denne bakterie kan forårsage gastritis, mavesår sygdom, gastrisk adenocarcinom og mucosa-associeret lymfoidt væv (MALT) lymfom [1-3]. Udover H. pylori
, ikke-H. pylori
helicobacters (NHPh) er også blevet påvist i maven af ​​mennesker og disse bakterier forårsage lignende gastrisk sygdomme. Risikoen for at udvikle gastrisk MALT lymfom er højere under NHPh infektion sammenlignet med infektion med H. pylori
[4-9]. H. suis
er den mest udbredte gastrisk NHPh hos mennesker. Grise er den naturlige vært for denne bakterie, med prævalens nåede 90% eller mere [10] og sandsynligvis, svin og muligvis også svinekød er de vigtigste kilder til menneskelig H. suis
infektion [4,11-13].
H. suis
infektion synes at vare ved i livet, i det mindste i grise og gnavere, der anvendes som modeller for humane infektioner [14]. Hos svin infektion forårsager udvikling af gastritis og et fald i tilvæksten. Desuden bakterien synes at spille en rolle i udviklingen af ​​ulceration af de ikke-glandulære pars oesophagea [15]. I mus og mongolske gerbil modeller af menneskelig gastrisk sygdom, eksperimenterende H. suis
infektion forårsager alvorlig gastrisk patologi [4,16,17], herunder gastritis, parietalcellens nekrose og udvikling af gastrisk MALT lymfom-lignende læsioner, der ligner den læsioner observeret i H. suis
-inficerede mennesker.
Tidligere undersøgelser har vist, at denne bakterie mangler en homolog af flere virulensfaktorer af H. pylori
, såsom cytotoksinet forbundet gener
patogenicitet island ( CAG
PAI) og vakuolerende cytotoksin (VacA) [18]. Vi var dog i stand til at identificere γ-glutamyltranspeptidase (GGT) som en vigtig virulensfaktor af H. suis
. Dette enzym er blevet beskrevet at forårsage gastrisk epitelcelleskade [19] og modulation af lymfocytproliferation [20] gennem interaktion mellem enzymet med to af sine substrater, L-glutamin og reduceret glutathion, hvilket gør det til det første konstateret og undersøgt H. suis
virulensdeterminant.
rolle GGT under H. pylori
infektion in vivo
er blevet undersøgt i mus. Modstridende konklusioner er draget om betydningen af ​​GGT for kolonisering. Nogle grupper har konkluderet, at H. pylori
GGT er nødvendig for vedvarende infektion i mus [21], mens andre har gjort strid konklusioner [22]. Desuden er der er akkumulerende beviser for, at Helicobacter
GGT er en afgørende virulens faktor involveret i immune skatteunddragelse og immun tolerance [23-25].
Øjeblikket er det uvist, om og hvordan H. suis
GGT påvirkninger løbet af H. suis
infektion in vivo
. Formålet med den foreliggende undersøgelse var at udvide vores tidligere in vitro Salg resultater med H. suis
GGT, og at undersøge den rolle, som denne virulensfaktor i patogenesen af ​​H. suis
infektion in vivo
. Samtidig, vi sigter mod at sammenligne dens relative betydning med den GGT af H. pylori
. De nuværende forsøg blev udført i BALB /c mus og udavlede mongolske hoppemus, da disse dyremodeller faktisk har vist sig at være værdifulde værktøjer til undersøgelse af rollen af ​​Helicobacter
arter i gastrisk patologi. Typisk, i mongolske ørkenrotter, en hurtigere og mere alvorlig udvikling af gastriske læsioner kan observeres i forhold til mus [4,26,27].
Materiale og metoder
Animal og bakteriestammer
Sixty 4-uge- gamle, kvindelige specifik-patogen-fri (SPF) BALB /c-mus blev indkøbt fra Harlan NL (Horst, Holland). Femogtyve 4 uger gamle, hunner SPF udavlede mongolske hoppemus (CRL: MON) blev opnået fra Charles River Laboratories (Lille, Frankrig) Hus Til H. suis
infektion i mus og mongolske hoppemus, stamme HS5cLP. var brugt. Denne stamme er blevet isoleret i 2008 fra maven af ​​et slagteri gris [28]. For eksperimentel H. pylori
infektion i mongolske ørkenrotter, stammen PMSS1 [29] blev anvendt, da denne stamme ikke har nogen historie in vivo
tilpasning i mus, i modsætning til muse-tilpassede stamme SS1. I BALB /c-mus, H. pylori
stamme SS1 [29] blev anvendt, da stamme PMSS1 tidligere er blevet påvist ikke at være i stand til at kolonisere mave BALB /c mus [29].
Konstruktion af isogene GGT
mutant stammer af H. suis
og H. pylori
En isogen H. suis GGT
mutant stamme (HS5cLPΔggt
) blev fremstillet som tidligere beskrevet [20]. Den isogen GGT
mutantstamme af H. pylori
blev opnået under anvendelse af samme strategi som for oprettelsen af ​​H. suis
isogene GGT
mutant, bortset fra at en kanamycin-resistente kassette blev anvendt i stedet en chloramphenicol-resistente kassette [20]. Ganske kort blev deletion af GGT
i H. pylori
SS1 og PMSS1 indført ved alleludskiftning hjælp pBluescript II SK (+) fagmidvektor (Agilent Technologies, Californien, USA), hvori ~ 440 bp af 5 ' -enden og ~ 430 bp af 3'-enden af ​​mål-genet og kanamycin-resistente kassette fra plasmid pKD4 [30] blev ligeret via en PCR-medieret strategi med 2 cykler af invers PCR og fusion PCR [20]. Alle primere anvendt til PCR-medieret konstruktion af de rekombinante plasmider er vist i tabel 1.
Det resulterende plasmid blev amplificeret i XL1-Blue-MRF 'E. coli
(Agilent Technologies) og anvendt som et selvmord plasmid i H . pylori
SS1 og PMSS1 (en slags gave fra Sara Lindén og Anne Muller, henholdsvis). Den H. pylori
SS1 GGT
mutant (SS1Δggt
) og H. pylori
PMSS1 GGT
mutant (PMSS1Δggt
) blev opnået ved elektrotransformation [31] eller naturlige transformation [32 ] som tidligere beskrevet. Endelig blev bakterier udvalgt på columbia agarplader (Oxoid, Basingstoke, UK) med Vitox supplement (Oxoid), 5% (v /v) defibrineret får blod (E & O Laboratories Ltd, Bonnybridge, UK), og kanamycin (25 ug /ml). Pladerne blev inkuberet i 5-9 dage. De isogene GGT
mutanter blev bekræftet af en GGT aktivitet assay [19], PCR og nukleotid sequencing.Table 1 Primere anvendt til konstruktion af H. pylori GGT isogene mutante stammer
Primer navn
Sequence (5'3 ')
Primer bruge
pBlue lineære Fwd 1
GGGGATCCACTAGTTCTAGAGCG
Linearisering af plasmid
pBlue lineære rev 1
CGGGCTGCAGGAATTCGATATCAAG
Linearisering af plasmid
HpGGT-flank_fusion1F
CTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGTAACCGGTAAAATCAACACGGACGC
Amplification H. pylori GGT
og delvis op- og nedstrøms flankerende gener
HpGGT-flank_fusion1R
CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCCGCGCTCTTATAAAAAGAAGCCGC
Amplification H. pylori GGT
og delvis op- og nedstrøms flankerende gener
pBluelinear_Hpggtflank1F
CCAAGGAAAGAATTTTAATCCTATTTAG
Linearisering af det rekombinante plasmid
pBluelinear_Hpggtflank1R
CTGTTTTCCTTTCAATCAACAATAATC
Linearisering af det rekombinante plasmid
Hpkana_fusion_1F
ATTATTGTTGATTGAAAGGAAAACAGATGATTGAACAAGATGGATTGC
Amplification kanamycinresistensgen
Hpkana_fusion_1R
CTAAATAGGATTAAAATTCTTTCCTTGGTCAGAAGAACTCGTCAAGAAG
Forstærkning kanamycinresistensgen
T7 prom3
TAATACGACTCACTATAGGG
Sekventering
M13R
CAGGAAACAGCTATGAC
Sekventering
kultur betingelser for bakteriestammer
Wild-type (WT) H. suis
stamme HS5cLP blev dyrket i 48 timer som tidligere [29] beskrevne. HS5cLPΔggt
bakterier blev dyrket under de samme betingelser som stammen HS5cLP, bortset fra at dyrknings- pladerne blev suppleret med chloramphenicol (30 pg /ml) som beskrevet tidligere [20].
WT H. pylori
stammer SS1 og PMSS1 blev dyrket på Columbia-agar plader indeholdende 5% (v /v) defibrineret fåreblod i 48-72 timer ved 37 ° C under mikroaerobe betingelser som tidligere [29] beskrevne. Efterfølgende blev kolonier taget op og dyrket i Brucella-bouillon suppleret med Vitox (Oxoid) og 5% føtalt kalveserum (HyClone) på en roterende ryster under mikroaerobe betingelser (16 timer, 125 rpm). SS1Δggt
og PMSS1Δggt
stammer blev dyrket under de samme betingelser som de tilsvarende WT stammer på plader suppleret med kanamycin (25 ug /ml).
Eksperimentel design
Ved ankomsten, tres BALB /C-mus og femogtyve mongolske hoppemus blev opdelt i 5 grupper, og dyrene fik lov til at akklimatisere sig til det nye miljø i 1 uge. Dyr blev inokuleret intragastrisk 3 gange ved 48 timers intervaller. Dyr fra gruppe 1 og 2 (både mus og mongolske hoppemus) blev inokuleret med Brucella-bouillon indeholdende 8 × 10 7 levedygtige bakterier af stammerne HS5cLP og HS5cLPΔggt
hhv. Dyr i gruppe 3 og 4 blev podet med Brucella medium indeholdende 3 × 10 8 levedygtige bakterier af stammerne SS1 og SS1Δggt
(mus) eller 1 x 10 9 levedygtige bakterier af stammerne PMSS1 og PMSS1Δggt
(hoppemus). Dyr i den femte gruppe blev podet med Brucella bouillon og tjente som inficerede kontroller. For mus, ved 4 uger, 9 uger og 6 måneder efter infektion (pi) blev 4 dyr fra hver gruppe aflivet ved cervikal dislokation under isofluran-narkose. For mongolske hoppemus blev alle dyr aflivet 9 uger pi. De maver af dyrene blev resektion til yderligere behandling som beskrevet tidligere [27,29].
Dyreforsøg blev godkendt af Etisk Komité veterinærmedicinske fakultet, Ghent Universitet, Belgien (EC2013 /29).
histopatologisk undersøgelse og immunhistokemi (IHC)
Tre langsgående strimler af gastrisk væv fra mus og mongolske hoppemus blev skåret fra spiserøret til tolvfingertarmen langs den store krumning. Væv blev fikseret i 4% phosphatbufret formaldehyd, behandlet ved standardmetoder og indlejret i paraffin til lysmikroskopi. Fem serielle sektioner af 5 um blev skåret. Det første afsnit blev farvet med hæmatoxylin /eosin (H &E) for at score graden af ​​gastritis efter den Opdateret Sydney System med visse ændringer [33]. Efter afparaffinering og rehydrering for de resterende sektioner blev varmeinduceret antigen hentning udført i citratbuffer (pH = 6,0). For at blokere endogen peroxidaseaktivitet og ikke-specifikke reaktioner, blev alle objektglas inkuberet med 3% H 2O 2 i methanol (5 min) og 30% gedeserum (30 min), hhv. For differentieringen mellem T- og B-lymfocytter, blev CD3 og CD20-antigener farves på Section to og tre, anvendelse af et polyklonalt kanin-anti-CD3-antistof (1/100; DakoCytomation, Glostrup, Danmark) og et polyklonalt kanin-anti-CD20-antistof (1 /25, Thermo Scientific, Fremont, USA), hhv. Disse sektioner blev yderligere behandlet med Envision + System-HPR (DAB) (DakoCytomation) til brug med kanin primære antistoffer. På fjerde og femte sektion, epitelcelleproliferation og antallet af parietalcellerne blev bestemt ved IHC-farvning ved anvendelse af et muse-monoklonalt anti-Ki67-antistof (1/25; Menarini Diagnostics, Zaventem, Belgien) og muse monoklonale anti-hydrogen kalium ATPase β-subunit (H + /K + ATPase) antistof (1/25 000 Abcam Ltd, Cambridge, UK), hhv. Efterfølgende visualisering blev udført med Envision + System-HPR (DAB) (DakoCytomation) til brug med mus primære antistoffer. Kvantificering af T-celler, B-celler og epitelceller blev udført som tidligere beskrevet [4]. Kort fortalt blev antallet af celler, der tilhører definerede cellepopulationer (T-celler, B-celler og epitelceller) bestemt ved at tælle de positive celler i fem tilfældigt valgt High Power Fields (forstørrelse: x 400), både i antrum og corpus region .
for at vurdere den mulige udvikling af pseudopyloric metaplasi fremkaldt af Helicobacter
infektion, alcian blå-periodisk syre-Schiff plet farvning (AB /PAS) blev udført.
Kvantificering af koloniserende bakterier i maven af mus og mongolske ørkenrotter
Strimler af gastrisk væv, der indeholder alle regioner for mus og separate stykker (antrum og corpus) for mongolske ørkenrotter blev opbevaret i 0,5 ml RNAlater
løsning (Ambion, Austin, TE, USA) ved -70 ° C indtil RNA og DNA-ekstraktion. Kvantitativ realtids-PCR (QRT-PCR) blev anvendt til at bestemme antallet af koloniserende bakterier i gastriske væv som beskrevet tidligere [29,34].
RNA-ekstraktion og revers transkription
QRT-PCR blev anvendt til at bestemme genekspression i det gastriske væv fra mus og mongolske hoppemus. Totalt RNA blev ekstraheret under anvendelse af RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland) ifølge producentens instruktioner. Koncentrationen af ​​RNA blev målt ved hjælp af en NanoDrop spektrofotometer (Isogen Life Science, PW De Meern, Utrecht, Holland). Renheden af ​​RNA blev vurderet med Experion automatiseret elektroforese system ved hjælp StdSens RNA chips (Bio-Rad, Hercules CA, USA). RNA koncentration fra alle prøver blev justeret til 1 ug /uL og cDNA blev syntetiseret umiddelbart efter RNA oprensning under anvendelse af iScript ™ cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad).
Design og validering af primere og bestemmelse af genekspression
husholdning generne H2afz, PPIA
og HPRT
indgik som reference- gener for mus [29]. For mongolske hoppemus blev et sæt referenceværdier gener undersøges fra den kendsgerning, at de i udstrakt grad anvendes i andre dyrearter. Primere blev udformet på grundlag af de bevarede dele af ACTB, β-actin, RPS18
, GAPDH
, HPRT1
, SDHA
og UBC
komplette eller delvise kodende sekvenser til rådighed for mennesker, svin, mus og rotter.
mRNA ekspressionsniveauer af forskellige cytokiner (IFN-y, IL-4, IL-5, IL-17, IL-1β, IL-6, IL-10), tidligere vist at være differentielt udtrykte under H. suis
infektion, samt andre gener (Foxp3, CXCL13, ASCT2, ATP4a, og ATP4b) blev kvantificeret ved anvendelse af SYBR Green baserede RT-PCR med iQ ™ SYBR Green Supermix. Reaktioner blev udført ved anvendelse af en CFX96 RT-PCR System i en C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad) som tidligere [29] beskrevne. Alle reaktioner blev udført i 12 pi volumener indeholdende 0,05 pi af hver primer (1,25 pmol /pl), 6 pi iQ ™ SYBR Green Supermix, 3,9 pi HPLC vand og 2 pi cDNA. Den eksperimentelle program bestod af 95 ° C i 15 minutter, efterfulgt af 40 cykler af denaturering ved 95 ° C i 20 s, annealing ved 60 ° C i 30 s og ekstension ved 72 ° C i 30 s. De tærskel cyklus værdier (Ct) blev normaliseret til de geometriske middelværdier for reference- generne og de normaliserede mRNA-niveauer for alle målgener blev beregnet ved hjælp af den metode 2 -ΔΔCt [35].
Grund af den manglende adgang til gen om Forkhead /winged helix transkriptionsfaktor (Foxp3) og kemokin CXC ligand 13 (CXCL13) fra mongolske hoppemus blev primere designet baseret på de konserverede regioner i Foxp3 og CXCL13 hele eller delvise kodende sekvenser tilgængelige for mennesker, svin, mus og rotter med samme strategi som beskrevet ovenfor. MRNA ekspressionsniveauer af Foxp3 og CXCL13 blev bestemt ved anvendelse af den samme fremgangsmåde som beskrevet ovenfor. Sekvensinformation af alle primerne til mus og til mongolske hoppemus, er vist i tabel 2 og 3.Table 2 Liste over gener og primere anvendt til QRT-PCR i mongolske hoppemus
Gene
Primer

Sequence (5'3 ')
Referencer
Foxp3
fornuft
GCCCCTMGTCATGGTGGCA
Denne undersøgelse
antisense
CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13
fornuft
GAATGGCTGCCCCAAAACTGAA
Denne undersøgelse
antisense
TCACTGGAGCTTGGGGAGTTGAA
GAPDH
fornuft
AACGGGAAGCTCACTGGCATG
Denne undersøgelse
antisense
CTGCTTCACCACCTTCTTGATGTCA
HPRT1
fornuft
GCCCCAAAATGGTTAAGGTTGCA
Denne undersøgelse
antisense
TCAAGGGCATATCCAACAACAAAC
RPS18
fornuft
CGAGTACTCAACACCAACATCGATGG
Denne undersøgelse
antisense
ATGTCTGCTTTCCTCAACACCACATG
IL-1β
fornuft
GGCAGGTGGTATCGCTCATC
[64]
antisense
CACCTTGGATTTGACTTCTA
IFN-γ

fornuft
CCATGAACGCTACACACTGCATC
[65]
antisense
GAAGTAGAAAGAGACAATCTGG
IL-5
fornuft
AGAGAAGTGTGGCGAGGAGAGACG
[27]
antisense
ACAGGGCAATCCCTTCATCGG
IL-6
fornuft
GAGGTGAAGGATCCAGGTCA
[66]
antisense
GAGGAATGTCCTCAGCTTGG
IL-10
fornuft
GGTTGCCAAGCCTTATCAGA
[27]
antisense
GCTGCATTCTGAGGGTCTTC
IL-17
fornuft
AGCTCCAGAGGCCCTCGGAC
[64]
antisense
AGGACCAGGATCTCTTGCTG
ATP4b
fornuft
GGGGGTAACCTTGAGACCTGATG
[27]
antisense
AAGAAGTACCTTTCCGACGTGCAG
β-actin
fornuft
TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA
[66]
antisense
CCAGACAGCACTGTGTTGGC
tabel 3 Liste over gener og primere anvendt for QRT-PCR i mus
Gene
Primer
Sequence (5'3 ')

Referencer
IL-1β
fornuft
GGGCCTCAA AGGAAAGAATC
[29]
antisense
TACCAGTTGGGGAACTCTGC
IFN-γ

fornuft
GCGTCATTGAATCACACCTG
[29]
antisense
TGAGCTCATTGAATGCTTGG
IL-4
fornuft
ACTCTTTCGGGCTTTTCGAT
[29]
antisense
AAAAATTCATAAGTTAAAGCATGGTG
IL-10
fornuft
ATCGATTTCTCCCCTGTGAA
[29]
antisense
CACACTGCAGGTGTTTTAGCTT
IL-17
fornuft
TTTAACTCCCTTGGCGCAAAA
[29]
antisense
CTTTCCCTCCGCATTGACAC
Foxp3
fornuft
GCCCCTMGTCATGGTGGCA
Denne undersøgelse
antisense
CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13

fornuft
CTCTCCAGGCCACGGTATT
[67]
antisense
TAACCATTTGGCACGAGGAT
ATP4a
fornuft
TGCTGCTATCTGCCTCATTG
[68]
antisense
GTGCTCTTGAACTCCTGGTAG
ATP4b
fornuft
AACAGAATTGTCAAGTTCCTC
[68]
antisense
AGACTGAAGGTGCCATTG
HPRT
fornuft
CAGGCCAGACTTTGTTGGAT
[29]
antisense
TTGCGCTCATCTTAGGCTTT
PPIA
fornuft
AGCATACAGGTCCTGGCATC
[29]
antisense
TTCACCTTCCCAAAGACCAC
H2afz
fornuft
CGTATCACCCCTCGTCACTT
[29] Salg antisense Salg TCAGCGATTTGTGGATGTGT Salg Statistiske analyser
Forskelle i kolonisering kapacitet blev analyseret ved anvendelse af en ikke-parametrisk Mann-Whitney U
test. Forskelle i lymfocytisk infiltration, cytokinekspression og IHC-analyse blev bedømt med én-vejs ANOVA efterfulgt af en Bonferroni post hoc test. Statistiske analyser blev udført ved anvendelse SPSS Statistics 20 software (IBM). Parvise sammenligninger blev foretaget for hver enkelt gang-point og på poolede data ved hjælp af tid som lagdeling faktor. P
værdier mindre end 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Alle data er udtrykt som middelværdi ± SD. Alle tallene blev oprettet ved hjælp af GraphPad Prism5 software (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA).
Resultater
kolonisering tæthed
Alle kontroldyr var negative for Helicobacter
. Resultater af inficerede dyr viste, at WT H. suis
vedvarende kan kolonisere mus maven med kolonisering niveauer så høje som 5,42 × 10 4 (± 1,46 × 10 4) bakterier /mg gastrisk væv selv på 6 måneder pi (figur 1C). H. pylori
stamme SS1 blev vist at kolonisere mus maven ved en meget lavere bakteriel densitet, er 1,68 × 10 3 (± 1,73 × 10 3) bakterier /mg væv ved 6 måneder PI (fig 1C, s
< 0,05). Figur 1 Sammenhængen mellem bakteriel kolonisering kapacitet og inflammation score i maven på mus og mongolske hoppemus. Koloniseringen kapacitet er vist som log10-værdierne af H. suis
eller H. pylori
per mg væv, bestemt med QRT-PCR i corpus af mus (A-C) og antrum af mongolske hoppemus (D). 0, ingen infiltration med mononukleære og /eller polymorfonukleære celler; 1, meget mild diffus infiltration med mononukleære og /eller polymorfonukleære celler eller tilstedeværelse af en lille (20-50 celler) aggregat af inflammatoriske celler; 2, mild diffus infiltration med mononukleære og /eller polymorfonukleære celler eller tilstedeværelse af en lille (50-200 celler) aggregat af inflammatoriske celler; 3, moderat diffus infiltration med mononukleære og /eller polymorfonukleære celler og /eller tilstedeværelse af 2-4 inflammatoriske aggregater; 4, markeret diffus infiltration med mononukleære og /eller polymorfonukleære celler og /eller tilstedeværelsen af ​​mindst fem inflammatoriske aggregater. HS vs HSM: Colonization: p
> 0,05; Inflammation: p
< 0,05. SS1 vs SS1m: Colonization: p
< 0,05; Inflammation: p
< 0,05. PMSS1 vs PMSS1m: Colonization: p
> 0,05; Inflammation: p
< 0,05. HS: dyr inficeret med WT H. suis
srain HS5cLP; HSM: dyr inficeret med H. suis
stammen HS5cLPΔggt
; SS1: dyr inficeret med WT H. pylori
SS1; SS1m: dyr inficeret med H. pylori
SS1Δggt
; PMSS1: dyr inficeret med WT H. pylori
PMSS1; PMSS1m: dyr inficeret med H. pylori
PMSS1Δggt
Interessant, H. suis
stammen HS5cLPΔggt
var i stand til at kolonisere corpus i maven af ​​musene i samme grad som den. WT-stamme, og dette blev observeret for alle tidspunkter (figur 1A-1C). I modsætning hertil blev H. pylori
stammen SS1Δggt
vist sig at have en svækket kolonisering kapacitet i mus på alle tre tidspunkter (figur 1A-1C, s
< 0,05). Lignende kolonisering data blev påvist i antrum af Helicobacter
inficeret-mus på alle tre tidspunkter (data ikke vist).
Både HS5cLP og HS5cLPΔggt
stamme held koloniseret antrum og corpus i maven af ​​mongolske hoppemus Selv om kolonisering satser var meget lavere i corpus forhold til antrum. Ingen statistisk signifikante forskelle blev observeret mellem de to stammer (figur 1D, s
> 0,05). H. pylori
stamme PMSS1Δggt
var i stand til at kolonisere antrum og corpus i maven på samme niveau i forhold til PMSS1 (Figur 1D, s
> 0,05), selv om 2 ud 5 mongolske ørkenrotter var negative for tilstedeværelsen af ​​PMSS1Δggt
i corpus i maven (data ikke vist).
Infektion-induceret inflammation
alle kontrol mus og ørkenrotter udviste normal gastrisk histomorphology på alle tidspunkter. Korrelationen mellem betændelse scores og bakteriel kolonisering er vist i figur 1.
Sammenlignet med mus med WT stamme infektion, infektion med H. suis
stamme HS5cLPΔggt
generelt inducerede signifikant mindre samlet inflammation både i antrum (p
< 0,01) og korpus (p
< 0,01), mens kun i corpus region (p
< 0,01), infektion med H. pylori
stammen SS1Δggt
induceret mindre inflammation, sammenlignet med den, der ses i WT stamme inficerede mus. Efter 6 måneder pi, corpus region i 2 ud af 4 mus med HS5cLP infektion indeholdt store lymfoide aggregater eller lymfoide follikler ledsaget af ødelæggelse af den normale slimhinde-arkitektur (figur 2A), som ikke blev observeret i dyr fra andre grupper. Figur 2 H &E-farvning af mave snit fra Helicobacter-inficerede mus og mongolske hoppemus. Repræsentative mikrografer af H &E-farvede sektioner vist her blev taget fra mus oralt inokuleret med H. suis
HS5cLP (A), H. suis
HS5cLPΔggt
(B), H. pylori
SS1 ( C) og H. pylori
SS1Δggt
(D) ved 6 måneder efter inokulering og mongolske ørkenrotter oralt udfordret med H. suis
HS5cLP (E), H. suis
HS5cLPΔggt
(F ), H. pylori
PMSS1 (G) og H. pylori
PMSS1Δggt
(H) ved 9 uger efter inokulering. Pile indikerer tilstedeværelsen af ​​inflammatoriske celler, inflammatoriske aggregater, lymfocytisk infiltration eller lymfocytiske follikler. HS: dyr inficeret med WT H. suis
stammen HS5cLP; HSM: dyr inficeret med H. suis
stammen HS5cLPΔggt
; SS1: dyr inficeret med WT H. pylori
SS1; SS1m: dyr inficeret med H. pylori
SS1Δggt
; PMSS1: dyr inficeret med WT H. pylori
PMSS1; PMSS1m: dyr inficeret med H. pylori
PMSS1Δggt
; WT: vildtype. Original forstørrelse:. 100 ×
For mongolske ørkenrotter, infektion med HS5cLP eller PMSS1 induceret alvorlig antrum-dominerende gastritis med dannelse af lymfocytiske aggregater i lamina propria og /eller sub-slimhinde i maven (figur 1D, 2E, og 2G ). Der blev ikke observeret nogen væsentlige forskelle mellem WT og mutant stamme af H. suis
med hensyn til det inflammatoriske respons induceret i hoppemus (figur 1D, 2E og 2 F), selv om alle dyr inficeret med stamme HS5cLP viste inflammation i corpus region , mens dette kun var tilfældet for nogle dyr inficeret med HS5cLPΔggt
(data ikke vist). I en gerbil inficeret med H. suis
stammen HS5cLP, blev der observeret en udtalt inflammatorisk respons, hvor mere end 65% af arealet i lamina propria og submucosa af antrum blev tæt infiltreret med inflammatoriske celler, smeltet lymfoide aggregater og . lymfoide follikler (Ekstra file 1)
Inflammation fremkaldt af H. pylori
stammen PMSS1Δggt
i antrum af ørkenrotter var mindre alvorlig end den, der ses i WT inficerede dyr (p
< 0,05) . (figurerne 1D, 2G og 2H)
Inflammatorisk celleinfiltration
generelt blev en stigning af T-celle numre observeret i corpus (figur 3A, s
< 0,05) hos mus inficeret med H. suis
stamme HS5cLP og H. pylori
stamme SS1 på alle tre tidspunkter. Sammenlignet med musene inficeret med WT H. suis

HS5cLPΔggt induceret en lavere T celle respons i corpus ved 6 måneder pi (p Restaurant < 0,01). H. pylori
stamme SS1Δggt
inducerede en reduceret T-cellerespons i corpus-området (p
< 0,01) sammenlignet med WT-inficerede dyr, både 9 uger og 6 måneder pi (figur 3A). Lignende resultater blev observeret i antrum af mus (data ikke vist). Figur 3 Kvantitativ analyse af definerede cellepopulationer med immunhistokemi.

• Administration af trimethoprim-sulfadimidin ikke forbedrer heling af glandulær mavesår hos heste, der fik omeprazol: et randomiseret, blindet, klinisk study
• Scanning elektron mikroskopi observationer af pindsvin mave orm, Physaloptera ClausA (Spirurida: Physalopteridae)