Vaidmuo gama glutamyltranspeptidase į Helicobacter suis ir Helicobacter pylori infekcijos patogenezę

Vaidmuo gama glutamyltranspeptidase į Helicobacter suis
ir Helicobacter pylori
infekcijos patogenezę
Santrauka
Helicobacter
(H.
) suis
gali kolonizuoti kiaulių skrandį, kaip taip pat žmonėms, sukelia chronišką gastritą ir kitus skrandžio patologinių pokyčių, įskaitant skrandžio opų ir gleivinė limfoidinis audinys (SALYKLAS) limfoma. Neseniai virulentiškumo faktorius H. suis
, γ-glutamiltranspeptidazė (GGT), buvo įrodyta, kad svarbų vaidmenį žmogaus skrandžio epitelio ląstelių žūtį ir moduliavimo limfocitų proliferaciją, priklausomai nuo glutamino ir glutationo katabolizmo indukcija. Šioje tyrime GGT aktualumas į H. suis pervežimas infekcijos patogenezę tirtas pele ir mongolų smiltpelės modelių. Be to, santykinė svarba, H. suis pervežimas GGT buvo lyginamas su H. pylori
GGT. Didelė ir skiriasi įnašas H. suis
ir H. pylori GGT
buvo vertinamas pagal bakterinės kolonizacijos, uždegimas ir prisiminė imuninio atsako. Skirtingai H. pylori
Δggt
padermių, H. suis
Δggt
padermės gali apsigyventi su tokiais kiekiais, panašiomis į WT padermių skrandį, nors jie sukeltų žymiai mažiau bendrą skrandžio uždegimas pelėms. Tai buvo būdinga mažesnius numerius T ir B ląstelių, ir žemesnio lygio epitelio ląstelių proliferacijai. Apskritai, palyginti su WT padermės infekcija, GGT
mutantas padermių H. suis
sukėlė mažesnes Th1 ir Th17 parašas citokinų išraiška. buvo pastebėtas ryškus ląstelę B-limfocitų chemoattractant CXCL13, tiek užsikrėtusių WT ir GGT
mutantas padermių H. suis
gyvūnams. Įdomu tai, kad H. suis
GGT buvo įrodyta, turi įtakos glutamino metabolizmą skrandžio epitelio per downregulation iš glutamino transporterio ASCT2.
Įvadas
Helicobacter
(H.
) pylori
yra gramneigiamų bakterijų, kad kolonizuoja daugiau nei pusė pasaulio gyventojų skrandį. Infekcija šios bakterijos gali sukelti gastritas, pepsinė opa, skrandžio adenokarcinoma ir gleivinės limfoidinis audinys (SALYKLAS) limfomos [1-3]. Be H. pylori
, ne-H. pylori
helicobacters (NHPH) taip pat buvo aptikta žmonių skrandžio ir šios bakterijos gali sukelti panašius skrandžio ligas. Besivystančių skrandžio salyklo limfomos rizika yra didesnė NHPH infekcijos metu, palyginti su H. pylori infekcija
[4-9]. H. suis
yra labiausiai paplitusi skrandžio NHPH žmonėms. Kiaulės yra natūrali priimančiosios šios bakterijos, su paplitimo pasiekė 90% ir daugiau [10] ir, greičiausiai, kiaulės ir galbūt taip pat kiaulienos, yra pagrindiniai šaltiniai žmogaus H. suis
infekcija [4,11-13].
H. suis
infekcija atrodo išlieka visam gyvenimui, bent jau kiaulėms ir graužikų naudojami kaip modelių žmonių infekcijos [14]. Kiaulių infekcija sukelia plėtrą gastritas ir kūno svorio padidėjimas sumažėjimas. Be to, bakterijos, atrodo, vaidina vaidmenį išopėjimas ne liaukų pars plėtros oesophagea [15]. Pelėms ir mongolų smiltpelės modelių žmogaus skrandžio ligos, eksperimentinė, H. suis
infekcija sukelia stiprų skrandžio patologija [4,16,17], įskaitant gastritas, Parietal ląstelių nekrozę ir skrandžio salyklo limfomos panašūs pažeidimai plėtrą, primenanti pakitimai pastebėti H. suis
-infected žmones.
Ankstesni tyrimai parodė, kad ši bakterija trūksta homologą keletą virulentiškumo veiksnių H. pylori
, pavyzdžiui, citotoksinas susijęs genų
patogeniškumo sala ( CAG
PAI) ir vacuolating citotoksinas (Vaca) [18]. Mes buvome, tačiau gali nustatyti γ-glutamiltranspeptidazė (GGT aktyvumo) kaip svarbų virulentiškumo faktorius H. suis
. Šis fermentas buvo aprašyta, kad sukelti skrandžio epitelio ląstelių pažeidimą [19] ir moduliavimas limfocitų proliferacijos [20] per fermento sąveikos su dviejų jos substratų, L-glutamino ir redukuoto glutationo, todėl jis yra identifikuotas pirmą kartą ir ištirti H. suis
virulentiškumo veiksnys.
į GGT vaidmenį metu H. pylori
infekcijos in vivo
buvo tirtas su pelėmis. Prieštaringos išvados buvo padarytos, susijusią su GGT svarbą kolonizacijos. Kai kurios grupės padarė išvadą, kad H. pylori
GGT reikalingas nuolatinės infekcijos pelėms [21], o kiti, prieštaraujant išvadas [22]. Be to, yra įrodymų, kad kaupti Helicobacter
GGT yra esminis virulentiškumo faktorius dalyvauja imuninės vengimu ir imuninės tolerancijos [23-25].
Šiuo metu nežinoma, ar ir kaip H. suis
GGT įtaka iš H. Žinoma suis
infekcija in vivo
. Šio tyrimo tikslas buvo išplėsti mūsų Ankstesnis vitro
išvadas H. suis pervežimas GGT, ir studijuoti šio virulentiškumo faktorius į H. patogenezėje svarbų vaidmenį suis
infekcija in vivo
. Tuo pačiu metu, mes siekiama palyginti jų santykinę svarbą, su ta, kurioje H. pylori
GGT. Dabartiniai eksperimentai buvo atliekami BALB /c pelių ir genčių tėvų mongolų smiltpelėms, nes šie gyvūnų modeliai iš tiesų buvo įrodyta, kad būti vertingi įrankiai ištirti Helicobacter
rūšių vaidmenį skrandžio patologijos. Paprastai į mongolų smiltpelės, spartesnis ir skaudesnis plėtra skrandžio pakitimų galima pastebėti lyginant su pelėmis [4,26,27].
Medžiaga ir metodai
Gyvūnų ir bakterijų štamai
Šešiasdešimt 4-week- seni, moterų specifinės patogenais neužkrėsti (SPF) BALB /c pelių buvo įsigytas iš Harlan NL (Horst, Nyderlandai). Dvidešimt penkeri 4 savaičių amžiaus, moterys SPF genčių tėvų Mongolijos smiltpelės (CRL: MON) buvo gauti iš Charles River Laboratories (Lille, Prancūzija)
Dėl H. suis
infekcija pelėms ir smiltpelėms mongolų, kamienas HS5cLP. buvo naudojamas. Ši padermė buvo išskirtas 2008 metais iš skerdyklos kiaulių [28] skrandį. Eksperimentiniais H. pylori
infekcijos mongolų smiltpelėms, kamienas PMSS1 [29] buvo naudojamas, nes ši veislė neturi in vivo pervežimas pritaikymo istorija pelėms, priešingai nei pelės pritaikyti kamieno SS1. BALB /c pelių H. pylori
padermės SS1 [29] buvo naudojamas, nes kamienas PMSS1 anksčiau buvo įrodyta, kad negali kolonizuoti BALB /c pelių skrandžio [29].
Statybos izogeninių GGT
mutantas padermių H. suis
ir H. pylori
An izogeninių H. suis GGT
mutavęs štamas (HS5cLPΔggt pervežimas) buvo paruoštas kaip aprašyta anksčiau [20]. Izogeninių GGT
mutavęs štamas H. pylori
buvo gautas naudojant tą pačią strategiją, kaip kuriant H. suis
izogeninių GGT
mutantas, išskyrus tai, kad atsparumas kanamicino kasetė buvo naudojamas o ne kaip atsparumas chloramfenikolio kasetė [20]. Labai trumpai, išbraukta iš GGT
H. pylori pervežimas SS1 ir PMSS1 pristatė alelių keistis naudojant pBluescript II SK (+) phagemid vektorių (Agilent Technologies, Kalifornija, JAV), kurioje ~ 440 bp 5 ' -end ir ~ 430 bp 3 '-end iš taikinio geno ir atsparumas kanamicino kasetė iš plazmidės pKD4 [30] liguojami per PGR medijuojamo strategijos su 2 ciklų atgalinės PGR ir sintezės PGR [20]. Visi gruntai naudojami PGR tarpininkaujant statybos rekombinantinių plazmidžių yra parodyta 1 lentelėje.
Susidariusiame plazmidės buvo sustiprina XL1 mėlyna MRF "E. coli
(Agilent Technologies) ir naudojamas kaip savižudžio plazmidžių H . pylori
SS1 ir PMSS1 (natūra dovana Sara Linden ir Anne Muller, atitinkamai). H. pylori
SS1 GGT
mutantas (SS1Δggt
) ir H. pylori
PMSS1 GGT
mutantas (PMSS1Δggt
) buvo gautas electrotransformation [31] arba fizinio transformacijos [32 ], kaip aprašyta anksčiau. Galiausiai, bakterijos buvo atrinkti Kolumbijos agaras plokštės (Oxoid, Basingstoke, Jungtinė Karalystė) su Vitox papildas (OXOID), 5% (v /v) defibrinated avių kraujo (E & P LABORATORIES LTD, Bonnybridge, Jungtinė Karalystė) ir kanamicino (25 mikrogramų /ml). Plokštelės buvo inkubuojamos 5-9 dienų. Į izogeninių GGT
mutantai buvo patikrinti pagal GGT aktyvumo tyrimu [19], PGR ir nukleotidų sequencing.Table 1 Gruntai naudojami statybos H. pylori GGT izogeninių mutantas padermių
Gruntas vardas
seka (5'-3 ')
Gruntas naudoti
pBlue linijinis FWD 1
GGGGATCCACTAGTTCTAGAGCG
Linearizacija plazmidės
pBlue linijinis rev1
CGGGCTGCAGGAATTCGATATCAAG
linearizavus plasmid
HpGGT-flank_fusion1F
CTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGTAACCGGTAAAATCAACACGGACGC
Amplification H.pylori GGT parsisiųsti ir daliniai tiekėjų ir vartotojų gretutines genai
HpGGT-flank_fusion1R
CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCCGCGCTCTTATAAAAAGAAGCCGC
stiprinimas H.pylori GGT parsisiųsti ir dalinius tiekėjų ir vartotojų gretutinių genus
pBluelinear_Hpggtflank1F
CCAAGGAAAGAATTTTAATCCTATTTAG
Linearizacija iš rekombinantinės plazmidės
pBluelinear_Hpggtflank1R
CTGTTTTCCTTTCAATCAACAATAATC
Linearizacija iš rekombinantinės plazmidės
Hpkana_fusion_1F
ATTATTGTTGATTGAAAGGAAAACAGATGATTGAACAAGATGGATTGC
stiprinimas kanamicino atsparumas genas
Hpkana_fusion_1R
CTAAATAGGATTAAAATTCTTTCCTTGGTCAGAAGAACTCGTCAAGAAG
atsparumas stiprinimas kanamicino genas
T7 prom3
TAATACGACTCACTATAGGG
sekos
M13R
CAGGAAACAGCTATGAC
sekos
kultūros sąlygomis bakterijų padermių
laukinio tipo (WT), H. suis
padermės HS5cLP buvo auginama 48 h, kaip aprašyta anksčiau [29]. HS5cLPΔggt
bakterijos buvo auginamos tomis pačiomis sąlygomis, kaip ir deformacijų HS5cLP, išskyrus tai, kad auginimo plokštelės buvo papildytas chloramfenikolio (30 mikrogramai /ml), kaip aprašyta anksčiau [20].
WT H.pylori
padermių SS1 ir PMSS1 buvo auginamos Kolumbija agaro lėkštelėse, turinčiose 5% (v /v) defibrinated avių kraujo 48-72 h, esant 37 ° C temperatūroje, esant microaerobic sąlygomis, kaip aprašyta anksčiau [29]. Vėliau, kolonijos buvo įlaipinami ir kultivuojamos Brucella sultinio papildyta Vitox (OXOID) ir 5% serumas iš veršiuko embriono (HyClone) rotacijos purtyklė pagal microaerobic sąlygų (16 H, 125 rpm). SS1Δggt parsisiųsti ir PMSS1Δggt
kamienai buvo auginami tokiomis pačiomis sąlygomis, kaip ir atitinkamų WT padermių ant lėkštelių papildytas kanamicino (25 mikrogramų /ml).
Eksperimentinio projektavimo
atvykus, šešiasdešimt BALB /c pelių ir dvidešimt penkerių Mongolijos smiltpelės buvo suskirstytos į 5 grupes, o gyvūnai buvo leista Aklimatizuojama prie naujos aplinkos 1 savaitę. Gyvūnai buvo intragastrically užsėti 3 kartus po 48 h intervalu. Gyvūnai iš 1 ir 2 (abu su pelėmis ir Mongolijos smiltpelės) grupei buvo pasėta Brucella sultinio, kuriame 8 × 10 7 gyvybingų bakterijų padermių HS5cLP ir HS5cLPΔggt
, atitinkamai. Gyvūnai, esanti 3 ir 4 grupės buvo pasėta Brucella sultinio, kuriame 3 × 10 8 gyvybingų bakterijų padermių SS1 and SS1Δggt
(pelių) arba 1 × 10 9 gyvybingų bakterijų padermių PMSS1 ir PMSS1Δggt
(smiltpelės). Gyvūnai, esanti penktą grupės buvo pasėta Brucella sultinio ir tarnavo kaip sveikų kontrolės. Pelėms, bent 4 savaites, 9 savaites ir 6 mėnesius po infekcijos (PI), 4 gyvūnai iš kiekvienos grupės buvo numarinti gimdos kaklelio dislokacija pagal izoflurano anesteziją. Mongolų smiltpelėms, visi gyvūnai buvo numarinti 9 savaites pi. Gyvūnų skrandžiai buvo rezekcijos tolesniam perdirbimui, kaip aprašyta anksčiau [27,29].
Gyvūnų eksperimentai patvirtino Etikos komiteto Veterinarinės medicinos fakultetas, Gento universitetas, Belgija (EC2013 /29).
Histopatologinis ištyrimas ir imunohistocheminis (IHC)
Trys išilginių juostelių skrandžio audinio nuo pelių ir mongolų smiltpelės buvo sumažinti iš stemplės į dvylikapirštę žarną palei didesnio kreivumo. Audinių buvo nustatyta 4% fosfatinio buferio formaldehido, perdirbama standartiniais metodais ir įdėta į parafino šviesos mikroskopu. Penki serijos skyriai 5 pm buvo sumažinti. Pirmajame skyriuje buvo tamsintas hematoksilinu /eozinu (H & E) rezultatą gastritas laipsnį pagal atnaujintą Sidnėjaus sistemos su tam tikrais pakeitimais [33]. Po to, kai deparaffinization ir Rehidratacija dėl likusių skyrių, šilumos sukelta antigenas paieška buvo atlikta citrato buferio (pH = 6,0). , Kad būtų užkirstas endogeninis peroksidazės aktyvumo ir nespecifinės reakcijos, visi skaidres buvo inkubuojamos su 3% O 2O 2 metanolyje (5 min) ir 30% ožkos serumas (30 min), atitinkamai. Dėl tarp T ir B limfocitų diferenciacija, CD3 ir CD20 antigenai buvo tamsintas du ir tris sekcijas, naudojant polikloninis triušio anti-CD3 antikūno (1/100; DakoCytomation, Glostrup, Danija) ir polikloninį triušio prieš CD20 antikūnas (1 /25; "Thermo Scientific", Frimontas, JAV), atitinkamai. Šios sekcijos buvo toliau apdorojami įsivaizduoti + sistemos HPR (DAB) (DakoCytomation) skirtas naudoti su triušio pirminių antikūnų. Ketvirtą ir penktą skyrių, epitelio ląstelių proliferaciją ir pakauškaulio ląstelių skaičius buvo nustatomas pagal IHC dažymą, naudojant pelės monokloninis anti-KI67 antikūnas (1/25; Menarini Diagnostics ", Zaventem, Belgija) ir pelės monokloninis anti-vandenilio kalio ATPazės β-subvieneto (O + /K + ATPazės) antikūnas (1/25 000; Abcam Ltd ", Kembridžas, Jungtinė Karalystė), atitinkamai. Po vizualizacija buvo padaryta su Įsivaizduoti + sistemos HPR (DAB) (DakoCytomation) skirtas naudoti su pele pirminių antikūnų. Kiekybinis įvertinimas T ląstelių, B ląstelių ir epitelinių ląstelių buvo vykdomi, kaip aprašyta anksčiau [4]. Trumpai tariant, priklausančių apibrėžtiems ląstelių populiacijų ląstelių skaičius (T ląstelės, B ląstelių, ir epitelinės ląstelės), buvo nustatytas suskaičiavus teigiamus ląsteles penkių atsitiktinai pasirinktą High Power laukai (priartinimas: × 400), tiek Ertmė ir corpus regione .
siekiant įvertinti galimą plėtrą pseudopyloric metaplazijos sukeltos Helicobacter
infekcija, alcian mėlyna periodiškai rūgšties Schiff dėmių dažymo (AB "/PAS) buvo atliktas.
kiekybinio kolonizavimo bakterijų skrandžio pelės ir mongolų smiltpelės
juostelės skrandžio audinio, kurio sudėtyje yra visi regionai pelėms ir atskirų vienetų (Ertmė ir tekstynų) Mongolų smiltpelėms buvo saugomi 0,5 ml RNAlater
tirpalo (Ambion, Ostinas, TE, JAV) už -70 ° C temperatūroje iki RNR ir DNR ekstrakcijai. Kiekybinis Realaus laiko PGR (KRL-PGR) buvo naudojamas siekiant nustatyti kolonizavimo bakterijų skaičius skrandžio audinio, kaip aprašyta anksčiau [29,34].
RNR gavybos ir atvirkštinę transkripciją
KRL-PGR buvo siekiama nustatyti genų ekspresija skrandžio audinio nuo pelių ir mongolų smiltpelėms. Iš viso RNR išskirta naudojant RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Vokietija) pagal gamintojo instrukcijas. RNR koncentracija buvo matuojama naudojant NanoDrop spektrofotometru (Isogen gyvybės mokslai, PW De Meern, Utrecht, Nyderlandai). Iš RNR grynumas buvo įvertinta Experion automatizuota elektroforezės sistemą, naudojant StdSens RNR žetonų (Bio-Rad, Hercules CA, USA). RNR koncentracija iš visų mėginių buvo pakoreguotas iki 1 g /pL ir kDNR buvo susintetintas iš karto po RNR valymo naudojant iScript ™ sintezei komplektas (Bio-Rad).
Dizainas ir įteisinimą gruntų ir ryžto genų ekspresiją
į namų ruošos genai H2afz, PPIA parsisiųsti ir KFRT
buvo įtrauktos kaip pamatiniai genų pelėms [29]. Mongolų smiltpelėms, buvo išbandytas atskaitos genų rinkinys, remiantis tuo, kad jie yra plačiai naudojami kitoms gyvūnų rūšims. Gruntai buvo sukurta remiantis užkonservuotas ACTB, beta-aktino, RPS18
, GAPDH
, HPRT1
, SDHA
ir UBC pervežimas Visiškas arba dalinis kodavimo sekos turimą žmonėms, kiaulių, pelės ir žiurkės.
mRNR ekspresijos lygi įvairių citokinų (IFN-gama, IL-4, IL-5, IL-17, IL-1β, IL-6, IL-10), anksčiau įrodyta, kad būti skirtingai išreikštas metu, H. suis
infekcija, taip pat kitus genus (Foxp3, CXCL13, ASCT2, ATP4a ir ATP4b) buvo kiekybiškai naudojant SYBR Žalioji PGR su "iQ ™ SYBR Green SUPERMIX. Reakcijos buvo atliekama naudojant CFX96 RT PGR sistema per C1000 termocikleriu (Bio-Rad), kaip aprašyta anksčiau [29]. Visos nepageidaujamos reakcijos buvo atlikta 12 iL apimčių, kurių sudėtyje yra 0,05 įxL kiekvieno pradmens (1,25 pmol /pl), 6 iL IQ ™ SYBR Green SUPERMIX, 3,9 pL HPLC vandens ir 2 mikrol kDNR. Eksperimento programa sudarė 95 ° C temperatūroje 15 min, po to 40 ciklų denatūruojant 95 ° C temperatūroje 20 S, atkaitinimo esant 60 ° C temperatūroje 30 s, ir išplėtimas 72 ° C temperatūroje 30 s. Slenkstinis ciklas vertės (CT) buvo normalizuotas geometrinių priemonėmis atskaitos genų ir normalizuotą mRNR lygių visoms tikslinėms genų buvo apskaičiuotos naudojant metodą 2 -ΔΔCt [35].
Dėl negalėjimo genų informacija Forkhead /sparnuotas Helix transkripcijos faktorius (Foxp3) ir chemokino CXC ligando 13 (CXCL13) nuo mongolų smiltpelės, gruntai buvo sukurta remiantis užkonservuotas Foxp3 ir CXCL13 Visiškas arba dalinis kodavimo sekos turimų žmonių, kiaulių, pelėms ir turinčios žiurkės tos pačios strategijos, kaip aprašyta aukščiau. MRNR ekspresijos lygis Foxp3 ir CXCL13 buvo nustatoma naudojant tą patį metodą, kaip aprašyta aukščiau. Seka informacija apie visų tos peles ir mongolų smiltpelėms gruntų parodyta 2 lentelėse ir 3.Table 2 Sąrašas genų ir gruntai naudojami KRL-PGR Mongolų smiltpelėms
Genų
Gruntas

sekos (5'-3 ')

Nuorodos
Foxp3
jausmas
GCCCCTMGTCATGGTGGCA
šio tyrimo metu
Priešprasminis
CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13
jausmas
GAATGGCTGCCCCAAAACTGAA
Šis tyrimas
Priešprasminis
TCACTGGAGCTTGGGGAGTTGAA
GAPDH
jausmas
AACGGGAAGCTCACTGGCATG
Šis tyrimas
Priešprasminis
CTGCTTCACCACCTTCTTGATGTCA
HPRT1
jausmas
GCCCCAAAATGGTTAAGGTTGCA
Šis tyrimas
Priešprasminis
TCAAGGGCATATCCAACAACAAAC
RPS18
jausmas
CGAGTACTCAACACCAACATCGATGG
Šis tyrimas
Priešprasminis
ATGTCTGCTTTCCTCAACACCACATG
IL-1β
jausmas
GGCAGGTGGTATCGCTCATC
[64]
Priešprasminis
CACCTTGGATTTGACTTCTA
IFN-γ

jausmas
CCATGAACGCTACACACTGCATC
[65]
Priešprasminis
GAAGTAGAAAGAGACAATCTGG
IL-5
jausmas
AGAGAAGTGTGGCGAGGAGAGACG
[27]
Priešprasminis
ACAGGGCAATCCCTTCATCGG
IL-6
jausmas
GAGGTGAAGGATCCAGGTCA
[66]
Priešprasminis
GAGGAATGTCCTCAGCTTGG
IL-10
jausmas
GGTTGCCAAGCCTTATCAGA
[27]
Priešprasminis
GCTGCATTCTGAGGGTCTTC
IL-17
jausmas
AGCTCCAGAGGCCCTCGGAC
[64]
Priešprasminis
AGGACCAGGATCTCTTGCTG
ATP4b
jausmas
GGGGGTAACCTTGAGACCTGATG
[27]
Priešprasminis
AAGAAGTACCTTTCCGACGTGCAG
β-aktino
jausmas
TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA
[66]
Priešprasminis
CCAGACAGCACTGTGTTGGC
3 lentelė genų ir gruntai naudojami KRL-PGR pelėms
Gene pervežimas pervežimas Primer pervežimas pervežimas seka (5'-3 ')

Nuorodos

IL-1β
jausmas
GGGCCTCAA AGGAAAGAATC
[29]
Priešprasminis
TACCAGTTGGGGAACTCTGC
IFN-γ

jausmas
GCGTCATTGAATCACACCTG
[29]
Priešprasminis
TGAGCTCATTGAATGCTTGG
IL-4
jausmas
ACTCTTTCGGGCTTTTCGAT
[29]
Priešprasminis
AAAAATTCATAAGTTAAAGCATGGTG
IL-10
jausmas
ATCGATTTCTCCCCTGTGAA
[29]
Priešprasminis
CACACTGCAGGTGTTTTAGCTT
IL-17
jausmas
TTTAACTCCCTTGGCGCAAAA
[29]
Priešprasminis
CTTTCCCTCCGCATTGACAC
Foxp3
jausmas
GCCCCTMGTCATGGTGGCA
šio tyrimo metu
Priešprasminis
CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13

jausmas
CTCTCCAGGCCACGGTATT
[67]
Priešprasminis
TAACCATTTGGCACGAGGAT
ATP4a
jausmas
TGCTGCTATCTGCCTCATTG
[68]
Priešprasminis
GTGCTCTTGAACTCCTGGTAG
ATP4b
jausmas
AACAGAATTGTCAAGTTCCTC
[68]
Priešprasminis
AGACTGAAGGTGCCATTG
HFRT
jausmas
CAGGCCAGACTTTGTTGGAT
[29]
Priešprasminis
TTGCGCTCATCTTAGGCTTT
PPIA
jausmas
AGCATACAGGTCCTGGCATC
[29]
Priešprasminis
TTCACCTTCCCAAAGACCAC
H2afz
jausmas
CGTATCACCCCTCGTCACTT
[29]
antiprasmq
TCAGCGATTTGTGGATGTGT
statistinė analizė
skirtumai kolonizacijos pajėgumas buvo analizuojami naudojant neparametriniai Mann-Whitney U
testą. Skirtumai limfocitų infiltracija, citokinų saviraiškos ir IHC analizės buvo įvertintas vieną pusę ANOVA po to Bonferroni post hoc testą. Statistinė duomenų analizė atlikta naudojant SPSS Statistics 20 "programinę įrangą (IBM). Pora-protingas palyginimai buvo atlikti kiekvienos atskiros laiko taške ir sukauptais duomenimis, naudojant laiko, kaip stratifikacijos veiksniu. P
vertės mažesnis nei 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas. Visi duomenys yra išreikštas vidurkis ± SD. Visi skaičiai buvo sukurtas naudojant GraphPad Prism5 Programinė įranga (GraphPad Software Inc., San Diegas, CA, JAV).
Rezultatai
kolonizacijos tankio
Visi kontroliniai gyvūnai buvo neigiami Helicobacter
. Rezultatai infekuotų gyvūnų parodė, kad WT H. suis
gali nuolat kolonizuoti pelės skrandį su kolonizacijos lygio kaip aukštas, kaip 5,42 × 10 4 (± 1,46 × 10 4) bakterijos /mg skrandžio audinių net 6 mėnesių Pi (1c pav). H. pylori
padermės SS1 buvo parodyta kolonizuoti pelės skrandį daug mažesnę bakterijų tankį, yra 1,68 × 10 3 (± 1,73 × 10 3) bakterijos /mg audinio po 6 mėnesių pi (paveikslas 1C, p
< 0,05). 1 pav Koreliacija tarp bakterijų kolonizacijos pajėgumų ir uždegimas partitūros pelių ir mongolų smiltpelėms skrandį. Kolonizacija talpa rodoma kaip log10 vertybių H. suis
arba H. pylori pervežimas vienam mg audinio, nustatytą su KRL-PGR pelių (A-C) ir antralinėje dalyje mongolų smiltpelėms (D) corpus. 0, ne infiltracija vienabranduolių ir /arba polimorfonuklearinių ląstelių; 1, labai lengvas difuzinis infiltracija mononukleininėje ir /ar polimorfonuklearinių ląstelių arba vieną mažą (20-50 ląstelės) bendra uždegiminių ląstelių buvimą; 2, švelnus difuzinis infiltracija mononukleininėje ir /ar polimorfonuklearinių ląstelių arba vienas mažas (50-200 ląstelės) bendra uždegiminių ląstelių buvimą; 3, vidutinio sunkumo difuzinis infiltracija vienabranduolių ir /arba polimorfonuklearinių ląstelių ir /arba 2-4 uždegiminių užpildų buvimo; 4, pažymėtas išsklaidytų infiltracija su vienabranduolių ir /arba polimorfonuklearinių ląstelių ir /arba ne mažiau kaip penkių uždegiminių užpildų buvimo. SS vs HSM: kolonizacija: P
> 0,05; Uždegimas: P
< 0,05. SS1 vs SS1m: kolonizacija: P
< 0,05; Uždegimas: P
< 0,05. PMSS1 vs PMSS1m: kolonizacija: P
> 0,05; Uždegimas: P
< 0,05. SS: užsikrėtusiems WT H. suis
srain HS5cLP gyvūnai; HSM: infekuoti H. suis
padermės HS5cLPΔggt
gyvūnai; SS1: gyvūnai užsikrėtę WT H. pylori pervežimas SS1; SS1m: gyvūnai užsikrėtę H. pylori
SS1Δggt pervežimas; PMSS1: gyvūnai užsikrėtę WT H. pylori pervežimas PMSS1; PMSS1m: gyvūnai užsikrėtę H. pylori
PMSS1Δggt

Įdomu H. suis
padermės HS5cLPΔggt
galėjo kolonizuoti nuo pelių skrandžio corpus panašiu mastu kaip ir. WT padermė, ir tai buvo nustatytas visiems skirtingiems laiko tarpams (skaičiai 1A-1c). Priešingai, H. pylori,
padermės SS1Δggt
buvo įrodyta, kad sutrikusi kolonizuojamą gebėjimus pelių visuose trijuose laiko momentų (Skaičiai 1A-1C, P.
< 0,05). Panašūs kolonizacija duomenys buvo įrodyta Helicobacter
užsikrėtę-pelių antralinėje dalyje visuose trijuose laiko momentų (duomenys neparodyti).
Tiek HS5cLP ir HS5cLPΔggt
padermė sėkmingai kolonizavo Ertmė ir sąvadą iš mongolų smiltpelėms skrandžio , nors kolonizacijos dažnis buvo žymiai mažesnis tekstyno palyginti su antralinėje dalyje. Statistiškai reikšmingų skirtumų tarp abiejų atmainų (pav 1D, P.
> 0,05). H. pylori
padermės PMSS1Δggt
galėjo kolonizuoti Ertmė ir sąvadą dėl panašaus lygio, palyginti su PMSS1 (1d figūra, p pervežimas > 0,05), skrandžio, nors 2 iš 5 Mongolijos smiltpelės buvo neigiami iš PMSS1Δggt
skrandžio corpus buvimas (duomenys neparodyti).
infekcijos sukeltas uždegimas
Visi valdymo pelės ir smiltpelės parodė normalią skrandžio histomorphology visuose laiko momentų. Tarp uždegimo rezultatus ir bakterinės kolonizacijos koreliacija rodoma 1 pav
Palyginti su pelėmis su WT padermės infekcija, infekcijos H. suis
padermės HS5cLPΔggt
paprastai sukeltas žymiai mažiau bendrą uždegimą tiek antralinėje dalyje (p
< 0,01) ir korpuso (psl
< 0,01), o tik corpus regione (psl pervežimas < 0,01), H. pylori infekcija
padermės SS1Δggt
sukelta mažiau uždegimas, palyginti su, kad matyti WT deformacijų užkrėstas pelių. 6 mėnesių pi, geltonasis regionas 2 iš 4 pelių su HS5cLP infekcijos esančius didelius limfoidinio agregatus ar limfoidinio folikulai lydi sunaikinimo normalios gleivinės architektūra (2a pav), kuri nebuvo pastebėta gyvūnų iš kitų grupiu. 2 pav H & El dažymo skrandžio skyriuose Helicobacter -infected pelėms ir smiltpelėms mongolų. Reprezentacinės mikrografijos H & El tamsintas skyriai parodyta čia buvo paimti iš pelių žodžiu užkrėstų H. suis
HS5cLP (A), H. suis
HS5cLPΔggt
(B), H. pylori pervežimas SS1 ( C) ir H. pylori
SS1Δggt
(D), po 6 mėnesių rašyti Sėjimas ir mongolų smiltpelės žodžiu juslėmis H. suis
HS5cLP (E), H. suis
HS5cLPΔggt pervežimas (F ), Helicobacter pylori
PMSS1 (G) ir H. pylori
PMSS1Δggt
(h) 9 savaitėms po užkrėtimo. Rodyklės žymi uždegiminių ląstelių, uždegiminių junginius, limfocitinės infiltracija, ar limfocitinį folikulų buvimą. SS: užsikrėtusiems WT H. suis
padermės HS5cLP gyvūnai; HSM: infekuoti H. suis
padermės HS5cLPΔggt
gyvūnai; SS1: gyvūnai užsikrėtę WT H. pylori pervežimas SS1; SS1m: gyvūnai užsikrėtę H. pylori
SS1Δggt pervežimas; PMSS1: gyvūnai užsikrėtę WT H. pylori pervežimas PMSS1; PMSS1m: gyvūnai užsikrėtę H. pylori
PMSS1Δggt pervežimas; WT: laukinio tipo. Originalus Didinimas:. 100 ×
Mongolų smiltpelėms, infekcija HS5cLP ar PMSS1 sukeltas sunkus Ertmė dominuojantis gastritas su formavimo Limfocitinio suvestinius rodiklius plonų sluoksnių Propria ir /ar sub-gleivinę, skrandį (duomenys 1D, 2E ir 2G ). nepastebėta jokių reikšmingų skirtumų tarp WT ir mutavęs štamas H. suis
atsižvelgiant į uždegiminę reakciją, sukeltas į smiltpelėms (duomenys 1D, 2E ir 2 F), nors visi užsikrėtę padermės HS5cLP gyvūnai parodė uždegimą corpus regione , kadangi tai buvo tik kai užsikrėtusių HS5cLPΔggt
gyvūnų atveju (duomenys neparodyti). Vienu smiltpelės užsikrėtę H. suis
padermės HS5cLP, buvo stebimas ryškus uždegiminis atsakas, kurioje daugiau nei 65% nuo plonų sluoksnių Propria ir submucosa iš antralinėje dalyje srityje buvo tankiai infiltruotų su uždegiminių ląstelių, lydyto limfoidinio agregatus ir . limfinę folikulai (Papildoma failų 1)
uždegimas sukeltas H. pylori pervežimas padermės PMSS1Δggt
į smiltpelėms antralinėje dalyje buvo švelnesnė lyginant su matoma WT infekuotų gyvūnų (p
< 0,05) . (duomenys 1D, 2G ir 2H)
uždegiminių ląstelių infiltracija
apskritai, T ląstelių skaičių augo tekstyno (3A pav, P. pervežimas < 0,05) pelių užsikrėtę H. suis
padermės HS5cLP ir H. pylori
padermės SS1 visuose trijuose laiko momentų. Palyginti su pelėmis užsikrėtusių WT H. suis
, HS5cLPΔggt
sukeltas mažesnę T ląstelių atsaką tekstyno po 6 mėnesių pi (psl
< 0,01). H.pylori
padermės SS1Δggt
sukeltas sumažintą T ląstelių atsaką corpus regione (psl
< 0,01), palyginti su WT infekuotų gyvūnų, tiek 9 savaites ir 6 mėnesių Pi (3a pav.) Panašūs rezultatai buvo pastebėta, kad pelių antralinėje dalyje (duomenų neparodyta). 3 pav kiekybinė analizė apibrėžtų ląstelių populiacijų imunohistocheminiu.

• Trimetoprimas-sulphadimidine nepagerėja gijimą liaukų skrandžio opų arklių gaunančių omeprazolas: atsitiktinių imčių, apakinti, klinikinė study
• Skenavimo elektronų mikroskopijos stebėjimai ežys skrandžio kirminas, Physaloptera clausa (spirurida: Physalopteridae)