Szerepe γ-glutamyltranspeptidase patogenezisében Helicobacter suis és Helicobacter pylori infections

szerepe γ-glutamyltranspeptidase patogenezisében Helicobacter suis katalógusa és Helicobacter pylori fertőzés katalógusa katalógusa Abstract katalógusa Helicobacter katalógusa (H.
) suis
lehet megtelepedni a gyomor a sertések, valamint emberekben, ami krónikus gastritis és más gyomor patológiás változások, például a gyomorfekély és a nyálkahártya-asszociált limfoid szövet (MALT) limfóma. Nemrégiben egy virulencia faktor H. suis katalógusa, γ-glutamil-transzpeptidáz (GGT), kimutatták, hogy fontos szerepet játszanak az indukciós humán gyomornyálkahártya sejthalál és a moduláció a limfocita proliferáció függően glutamint és glutation katabolizmust. A jelen vizsgálatban a relevanciáját GGT patogenezisében H. suis katalógusa fertőzés vizsgálták egér és mongol futóegér modellek. Ezen túlmenően, a relatív fontossága H. suis katalógusa GGT összehasonlítottuk a H. pylori
GGT. Jelentős és különböző hozzájárulása a GGT H. suis katalógusa, és a H. pylori
volt látható szempontjából bakteriális kolonizáció, gyulladás és a kiváltott immunválasz. Ezzel szemben a H. pylori
Δggt
törzsek, H. suis
Δggt
törzsek képesek voltak kolonizáló a gyomor összehasonlítható szinten WT törzsek, bár indukált lényegesen kevésbé általános gyomor gyulladás egerekben. Ez volt jellemző alacsonyabb számok a T- és B-sejtek, és egy alacsonyabb szintű epiteliális sejtproliferáció. Általánosságban, szemben a WT törzs fertőzés, GGT
mutáns törzsek H. suis katalógusa kiváltott alacsonyabb Th1 és Th17 aláírás citokin expressziót. Egy kifejezett túlszabályzását B-limfocita kemoattraktáns CXCL13 volt megfigyelhető, mind a fertőzött állatok WT és GGT
mutáns törzsek H. suis katalógusa. Érdekes, H. suis katalógusa GGT kimutatták, hogy befolyásolja a glutamin metabolizmusa a gyomornyálkahártya keresztül downregulációját a glutamin transzporter ASCT2. Katalógusa Bevezetés katalógusa Helicobacter katalógusa (H. katalógusa) pylori katalógusa van egy Gram-negatív baktérium, amely colonizes a gyomorban több mint a fele a világ népességének. Fertőzés ez a baktérium okozhat gyomorhurut, gyomorfekély-betegség, gyomor adenokarcinóma és nyálkahártya-asszociált limfoid szövet (MALT) lymphoma [1-3]. Emellett a H. pylori katalógusa, a nem-H. pylori
helicobacters (NHPh) is kimutatható a gyomorban az emberek és ezek a baktériumok okoznak hasonló gyomor betegségek. Kialakulásának kockázatát gyomor MALT lymphoma során nagyobb NHPh fertőzés képest fertőzés H. pylori katalógusa [4-9]. H. suis
a legelterjedtebb gyomor NHPh emberben. A sertések természetes gazda ennek a baktériumnak, a betegség gyakorisága eléri a 90% vagy több [10], és a legvalószínűbb, sertés és esetleg sertés fő forrásai az emberi H. suis katalógusa fertőzés [4,11-13].
H. suis katalógusa fertőzés tűnik fennállnak az élet, legalábbis a sertések és rágcsálók modellként használhatók emberi fertőzések [14]. Sertéseknél fertőzés okozza a fejlődése gyomorhurut és csökken a testtömeg-gyarapodást. Ezenkívül a baktérium úgy tűnik, hogy szerepet játszanak a fejlesztés a fekélyesedés a nem mirigyes Pars oesophagea [15]. Egereken és mongol futóegér modelljei az emberi gyomor betegség, kísérleti H. suis katalógusa fertőzés okoz súlyos gyomor patológia [4,16,17], beleértve a gyomorhurut, parietális sejt necrosis és a fejlesztés a gyomor MALT lymphoma-szerű elváltozások, hasonlít a elváltozásokat H. suis
-fertőzött emberekben.
Korábbi tanulmányok azt mutatták, hogy ez a baktérium hiányzik a homológ több virulencia faktorok a H. pylori katalógusa, mint például a citotoxin asszociált gének
patogenitási sziget ( CAG
PAI), és a vacuolating citotoxin (VacA) [18]. Mi voltunk, azonban képesek azonosítani a γ-glutamil transzpeptidáz (GGT), mint fontos virulencia faktor H. suis katalógusa. Ez az enzim már leírták okoz gyomor epitéliális sejt károsodás [19] és a moduláció a limfocita proliferáció [20] keresztül a kölcsönhatás az enzim annak két szubsztrát, az L-glutamin és a redukált glutation, így ez az első azonosított és vizsgált H. suis katalógusa virulencia meghatározó.
szerepe GGT során H. pylori fertőzés katalógusa in vivo katalógusa vizsgálták egereken. Ütköző következtetéseket levonni, hogy fontos a GGT a gyarmatosítás. Néhány csoport arra a következtetésre jutottak, hogy a H. pylori katalógusa GGT szükséges tartós fertőzést egerekben [21], míg mások tették ellentétes következtetések [22]. Emellett Egyre több bizonyíték, hogy a Helicobacter katalógusa GGT döntő virulencia faktor részt immunrendszer adócsalás és immun-tolerancia [23-25].
Jelenleg nem lehet tudni, és ha igen, hogyan H. suis katalógusa GGT befolyások során H. suis katalógusa fertőzés in vivo katalógusa. A célja az volt, hogy kiterjeszti a korábbi in vitro katalógusa megállapítások H. suis katalógusa GGT, és tanulmányozza a szerepe ennek a virulencia faktor patogenezisében H. suis katalógusa fertőzés in vivo
. Ugyanakkor, mi célzó összehasonlítjuk a viszonylagos jelentőséggel bír, hogy a GGT H. pylori katalógusa. A jelenlegi kísérleteket végeztünk a BALB /c egerekben, és outbred mongol futóegér, mivel ezen állati valóban kimutatták, hogy értékes eszközök, hogy vizsgálja meg a szerepét a Helicobacter katalógusa fajok gyomor patológia. Jellemzően, mongol futóegerek, gyorsabb és súlyos fejlődése gyomor elváltozások figyelhetők képest egerekben [4,26,27].
Anyag és módszer
Állati és baktériumtörzsek
hatvan 4-hét- életkorú nőstény specifikus patogénmentes (SPF) BALB /c egereket szereztünk be a Harlan NL (Horst, Hollandia). Huszonöt 4 hetes nőstény SPF outbred mongol futóegér (CRL: H), amelyeket a Charles River Laboratories (Lille, Franciaország).
H. suis katalógusa fertőzést egerekben és mongol futóegér, törzs HS5cLP használtunk. Ezt a törzset izoláltak 2008-ban a gyomor egy vágóhíd sertés [28]. A kísérleti H. pylori
fertőzés mongol futóegér, törzs PMSS1 [29] használtunk, mivel ez a törzs nem rendelkezik története in vivo katalógusa alkalmazkodás egerekben, szemben az egér-adaptált törzs SS1. BALB /c egerekben, a H. pylori
törzs SS1 [29] alkalmaztuk, mivel a törzs PMSS1 korábban kimutatták, hogy nem képesek megtelepedni a gyomorban BALB /c egerekben [29].
Építése izogén GGT
mutáns törzsek H. suis katalógusa, és a H. pylori Matton An izogén H. suis GGT
mutáns törzs (HS5cLPΔggt
) készítünk a korábban leírtak szerint [20]. Az izogén GGT
mutáns törzset H. pylori katalógusa alkalmazásával kaptuk ugyanazt a stratégiát, mint a létrehozása az H. suis
izogén GGT
mutáns, kivéve, hogy egy kanamicinrezisztencia-kazettát alkalmaztuk helyett kloramfenikol rezisztencia kazetta [20]. Nagyon röviden, törlését GGT katalógusa H. pylori
SS1 és PMSS1 vezette be allélikus csere segítségével pBluescript II SK (+) fagemid vektorba (Agilent Technologies, California, USA), amely ~ 440 bp-5 ' végen és ~ 430 bp, a 3 'végen a cél gén és a kanamicin rezisztencia kazetta plazmid pKD4 [30] ligáljuk egy PCR-közvetített stratégia 2 ciklus inverz PCR és fúziós PCR [20]. Minden alkalmazott primerek a PCR-mediált építése a rekombináns plazmidok az 1. táblázat mutatja.
Az így létrejött plazmidot amplifikáltuk XL1-Blue MRF 'E. coli katalógusa (Agilent Technologies), és használni, mint egy öngyilkos plazmid H . pylori katalógusa SS1 és PMSS1 (egyfajta ajándéka Sara Linden és Anne Müller -kal). A H. pylori katalógusa SS1 GGT katalógusa mutáns (SS1Δggt katalógusa) és a H. pylori katalógusa PMSS1 GGT katalógusa mutáns (PMSS1Δggt katalógusa) kaptuk electrotransformation [31] vagy a természetes átalakulás [32 ] a korábban leírtak szerint. Végül a baktériumokat szelektáltuk Columbia agar lemezeken (Oxoid, Basingstoke, UK) Vitox Supplement (Oxoid), 5% (v /v) defibrinált Sheep Blood (E & O Laboratories Ltd, Bonnybridge, Egyesült Királyság), és a kanamicin (25 ng /ml). A lemezeket inkubáltuk 5-9 napig. A izogén GGT katalógusa mutánsokat ellenőrizte egy GGT-aktivitás assay [19], PCR és nukleotid sequencing.Table 1 alapozók használt építőiparban a H. pylori GGT izogén mutáns törzsek katalógusa Primer név Matton Sequence (5'-3 ') Matton Primer használata Matton pBlue lineáris Fwd 1 katalógusa GGGGATCCACTAGTTCTAGAGCG katalógusa Linearizáció plazmid katalógusa pBlue lineáris Rev1
CGGGCTGCAGGAATTCGATATCAAG katalógusa linearizálása plasmid
HpGGT-flank_fusion1F
CTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGTAACCGGTAAAATCAACACGGACGC
Amplification H. pylori GGT katalógusa és részleges felfelé és lefelé szegélyező gének katalógusa HpGGT-flank_fusion1R katalógusa CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCCGCGCTCTTATAAAAAGAAGCCGC katalógusa Erősítés H. pylori GGT katalógusa és részleges felfelé és lefelé szegélyező gének katalógusa pBluelinear_Hpggtflank1F
CCAAGGAAAGAATTTTAATCCTATTTAG
linearizálás a rekombináns plazmid
pBluelinear_Hpggtflank1R
CTGTTTTCCTTTCAATCAACAATAATC
linearizálás a rekombináns plazmid
Hpkana_fusion_1F
ATTATTGTTGATTGAAAGGAAAACAGATGATTGAACAAGATGGATTGC
Amplification kanamicinrezisztencia-gént
Hpkana_fusion_1R
CTAAATAGGATTAAAATTCTTTCCTTGGTCAGAAGAACTCGTCAAGAAG
Amplification kanamicinrezisztencia-gént
T7 prom3
TAATACGACTCACTATAGGG
Sequencing
M13R
CAGGAAACAGCTATGAC
Sequencing
tenyésztési körülmények között baktériumtörzsek katalógusa Vad típusú (WT) H. suis
törzset HS5cLP növesztettünk 48 órán korábban leírtak szerint [29]. HS5cLPΔggt
baktériumokat szaporítottunk ugyanilyen körülmények között, mint a törzs HS5cLP, kivéve, hogy tenyésztési lemezeket kiegészített kloramfenikolt (30 ng /ml), a korábban leírtak szerint [20].
WT a H. pylori
törzsek SS1 és PMSS1 növesztjük Columbia agar lemezekre, amelyek 5% -os (v /v) defibrinált sheep Blood 48-72 órán át 37 ° C-on mikroaerob feltételek mellett, mint a korábban leírt [29]. Ezt követően, telepeket felvette, és tenyésztjük Brucella táplevesben kiegészített Vitox (Oxoid) és 5% magzati borjúszérumot (Hyclone), egy rotációs rázógépen alatt mikroaerob körülmények között (16 óra, 125 rpm). SS1Δggt
és PMSS1Δggt
törzseket tenyésztettük ugyanolyan feltételek mellett, mint a megfelelő vad típusú törzsek lemezeken kanamicinnel kiegészített (25 ng /ml).
Kísérleti terv
Érkezéskor hatvan BALB /c egerekben és huszonöt mongol futóegér osztottuk 5 csoport, és az állatokat hagyjuk akklimatizálódni, hogy az új környezetben 1 hétig. Az állatokat oltottunk intragasztrikusan 3-szor 48 óra időközönként. Csoport állatai 1 és 2 (mind egerek és mongol futóegér) beoltottuk Brucella táplevesben tartalmazó 8 × 10 7 életképes baktérium törzsek HS5cLP és HS5cLPΔggt katalógusa, ill. Állatok csoportban a 3. és 4. beoltjuk Brucella húsleves, amely 3 × 10 8 életképes baktérium törzsek SS1 és SS1Δggt katalógusa (egerek) vagy 1 × 10 9 életképes baktérium törzsek PMSS1 és PMSS1Δggt katalógusa (futóegér). Állatok az ötödik csoportban oltottuk Brucella húsleves és szolgált fertőzött kontroll. Az egerek, 4 héttel, 9 hetes és 6 hónapos fertőzés után (PI), 4 állatok minden csoportban leöltük nyaki diszlokáció alatt izoflurán érzéstelenítésben. A mongol futóegér, valamennyi állatot leöltük 9 héten pi. A gyomor az állatok eltávolított további feldolgozásra a korábban leírtak szerint [27,29]. Katalógusa Állatkísérletek hagyta jóvá Etikai Bizottságának Faculty of Veterinary Medicine, Genti Egyetem, Belgium (EC2013 /29). Katalógusa Kórszövettani vizsgálatok és immunhisztokémiai (IHC)
Három hosszanti csíkokra gyomor szövetet egerek és mongol futóegér vágtunk a nyelőcső a nyombélbe a nagyobb görbület mentén. Tissue rögzítették 4% foszfáttal pufferolt formaldehid, feldolgozott szabványos módszerekkel, és paraffinba ágyaztuk a fénymikroszkóppal. Öt metszeteket 5 um vágták. Az első rész festettük hematoxilin /eozin (H &E) a pontszám a fokát gyomorhurut szerint a frissített Sydney rendszer bizonyos módosításokkal [33]. Miután deparaffinization és rehidratálás a fennmaradó szakaszok, hővel indukált antigén-visszanyerés végeztünk citrát-pufferben (pH = 6,0). Annak érdekében, hogy blokkolja az endogén peroxidáz aktivitás és a nem-specifikus reakciók, mind a lemezeket inkubáltuk 3% H 2 O 2 metanolban (5 perc), és 30% -os kecske szérummal (30 perc), ill. A differenciálódás között a T és B limfociták, CD3 és CD20 antigéneket megfestjük a szakaszok két és három, egy poliklonális nyúl anti-CD3 antitest (1/100; DakoCytomation, Glostrup, Dánia) és egy poliklonális nyúl anti-CD20 ellenanyag (1 /25; Thermo Scientific, Fremont, USA), ill. Ezek a szakaszok tovább feldolgozott Képzeljétek + Rendszer-HPR (DAB) (DakoCytomation) használható nyúl primer antitestekkel. A negyedik és ötödik szakasz, az epiteliális sejtek proliferációját és a szám a parietális sejtekben határoztuk meg az IHC festést, egy egér monoklonális anti-Ki67 antitest (1/25; Menarini Diagnostics, Zaventem, Belgium) és egér monoklonális anti-hidrogén kálium ATP-áz β-alegység (H + /K + ATP-áz) antitest (1/25 000; ABCAM Ltd, Cambridge, UK), ill. Későbbi vizualizációs végeztük Képzeljétek + Rendszer-HPR (DAB) (DakoCytomation) használható egér primer antitestekkel. Számszerűsítése a T-sejtek, B-sejtek és hámsejtek végeztük a korábban leírtak szerint [4]. Röviden, a számok a sejtek tartozó meghatározott sejtpopulációk (T-sejtek, B-sejtek, és epithelialis sejtek) számlálásával határoztuk meg pozitív sejtek öt, véletlenszerűen kiválasztott High Power Fields (nagyítás: × 400), mind a antrum, és corpus régió .
Annak érdekében, hogy felmérje a lehetséges fejlesztési pseudo metaplasia okozta Helicobacter katalógusa fertőzés, alcián kék perjódsav--Schiff festési festés (AB /PAS) végeztük. katalógusa számszerűsítése megtelepedett baktériumok a gyomorban egerek és mongol futóegér
Csík gyomor szövet tartalmazó összes régiók egerek és különálló darabok (antrum és corpus) a mongol futóegér tároltuk 0,5 ml RNAlater
oldatot (Ambion, Austin, TE, USA) -70 ° C-ig RNS-t és DNS-extrakció. Kvantitatív, valós idejű PCR (QRT-PCR) alkalmaztunk számának meghatározásához kolonizáló baktériumok a gyomor szövetben a korábban ismertetett módon [29,34].
RNS extrakció és reverz transzkripció
QRT-PCR-t használták, hogy meghatározzák génexpressziót azokban a gyomor szövetet egerek és mongol futóegér. Teljes RNS-t extraháltunk az RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. Az RNS koncentrációját mértük NanoDrop spektrofotométerrel (Isogen Life Science, PW De Meern, Utrecht, Hollandia). A tisztaságot az RNS értékeltük a Experion automatizált elektroforézis rendszer használatával StdSens RNS-chipek (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Az RNS-koncentrációt az összes mintából-ját 1 ug /ul, és cDNS-t szintetizáltunk után azonnal RNS tisztítási eljárással a iScript ™ cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad).
Tervezés és validálása primerek és meghatározása a génexpresszió katalógusa a háztartási gént H2afz, PPIA katalógusa és HPRT katalógusa vontak referencia gének egerekben [29]. A mongol futóegér, egy sor referencia gének teszteltük a tényen alapul, hogy azokat széles körben használják a más állatfajok. A primereket alapján terveztük konzervált régióiból ACTB, β-aktin, RPS18
, GAPDH
, HPRT1
, SDHA
és UBC
teljes vagy részleges kódoló szekvenciákat állnak rendelkezésre humán, sertés, egerek és patkányok.
A mRNS expressziós szintek különböző citokinek (IFN-γ, IL-4, IL-5, IL-17, IL-1β, IL-6, IL-10), a korábban kimutatták, hogy differenciálisán expresszált közben H. suis
fertőzés, valamint más gének (Foxp3, CXCL13, ASCT2, ATP4a, és ATP4b) mennyiségi meghatározását SYBR Green alapú RT-PCR iQ ™ SYBR Green Supermix. Reakciót végeztünk egy CFX96 RT PCR System egy C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad) a korábban leírtak szerint [29]. Minden reakciót végeztünk 12 pl térfogatokban, amely 0,05 jil mindegyik primerből (1,25 pmol /ul), 6 ul iQ ™ SYBR Green Supermix, 3,9 | il HPLC vizet és 2 | il cDNS-t. A kísérleti program állt: 95 ° C-on 15 percig, majd 40 ciklus követett denaturálással 95 ° C-on 20 s, illesztés 60 ° C-on 30 másodpercig és 72 ° C-on 30 másodpercig. A küszöb ciklus érték (Ct) normalizáltuk a mértani a referencia gének és a normalizált mRNS-szintje az összes megcélzott gének módszerrel kiszámított 2 -ΔΔCt [35].
Hiánya miatt a gén információ Forkhead /szárnyas hélix transzkripciós faktor (Foxp3), és a kemokin CXC ligandum 13 (CXCL13) származó mongol futóegér, primereket terveztünk alapuló konzervált régiókat Foxp3 és CXCL13 teljes vagy részleges kódoló szekvenciákat állnak rendelkezésre humán, sertés, egér és patkányok ugyanazt a stratégiát, mint fent leírtuk. Az mRNS expressziós szintek Foxp3 és CXCL13 határoztuk ugyanazzal a módszerrel, mint fentebb leírtuk. Sequence információkat az összes primerek egerek és a mongol futóegér látható a 2. táblázatban és 3.Table 2 listája gének és primerek használhatók QRT-PCR mongol futóegerek
Gene
Primer

Sequence (5'-3 ') Matton Referenciák Matton Foxp3 Matton értelemben katalógusa GCCCCTMGTCATGGTGGCA katalógusa Ez a tanulmány katalógusa antiszensz katalógusa CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13 Matton értelemben katalógusa GAATGGCTGCCCCAAAACTGAA katalógusa Ez a tanulmány katalógusa antiszensz katalógusa TCACTGGAGCTTGGGGAGTTGAA katalógusa GAPDH Matton értelemben katalógusa AACGGGAAGCTCACTGGCATG katalógusa Ez a tanulmány katalógusa antiszensz
CTGCTTCACCACCTTCTTGATGTCA
HPRT1 Matton értelemben katalógusa GCCCCAAAATGGTTAAGGTTGCA katalógusa Ez a tanulmány katalógusa antiszensz katalógusa TCAAGGGCATATCCAACAACAAAC katalógusa RPS18 Matton értelemben katalógusa CGAGTACTCAACACCAACATCGATGG katalógusa Ez a tanulmány katalógusa antiszensz katalógusa ATGTCTGCTTTCCTCAACACCACATG katalógusa IL-1β Matton értelemben katalógusa GGCAGGTGGTATCGCTCATC katalógusa [64] katalógusa antiszensz katalógusa CACCTTGGATTTGACTTCTA katalógusa IFN-γ katalógusa
értelemben
CCATGAACGCTACACACTGCATC katalógusa [65] katalógusa antiszensz katalógusa GAAGTAGAAAGAGACAATCTGG katalógusa IL-5 Matton értelemben katalógusa AGAGAAGTGTGGCGAGGAGAGACG katalógusa [27] katalógusa antiszensz
ACAGGGCAATCCCTTCATCGG katalógusa IL-6 Matton értelemben katalógusa GAGGTGAAGGATCCAGGTCA katalógusa [66] katalógusa antiszensz katalógusa GAGGAATGTCCTCAGCTTGG katalógusa IL-10 Matton értelemben katalógusa GGTTGCCAAGCCTTATCAGA katalógusa [27] katalógusa antiszensz katalógusa GCTGCATTCTGAGGGTCTTC katalógusa IL-17 Matton értelemben katalógusa AGCTCCAGAGGCCCTCGGAC katalógusa [64] katalógusa antiszensz katalógusa AGGACCAGGATCTCTTGCTG katalógusa ATP4b Matton értelemben katalógusa GGGGGTAACCTTGAGACCTGATG katalógusa [27] katalógusa antiszensz katalógusa AAGAAGTACCTTTCCGACGTGCAG katalógusa β-aktin Matton értelemben katalógusa TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA katalógusa [66]
antiszensz katalógusa CCAGACAGCACTGTGTTGGC katalógusa 3. táblázat listája gének és alkalmazott primerek qRT-PCR egerekben katalógusa Gene Matton Primer Matton Sequence (5'-3 ')
katalógusa Referenciák
IL-1β Matton értelemben katalógusa GGGCCTCAA AGGAAAGAATC katalógusa [29] katalógusa antiszensz katalógusa TACCAGTTGGGGAACTCTGC katalógusa IFN-γ katalógusa
értelme katalógusa GCGTCATTGAATCACACCTG katalógusa [29] katalógusa antiszensz katalógusa TGAGCTCATTGAATGCTTGG katalógusa IL-4 Matton értelemben katalógusa ACTCTTTCGGGCTTTTCGAT katalógusa [29] katalógusa antiszensz
AAAAATTCATAAGTTAAAGCATGGTG katalógusa IL-10 Matton értelemben katalógusa ATCGATTTCTCCCCTGTGAA katalógusa [29] katalógusa antiszensz katalógusa CACACTGCAGGTGTTTTAGCTT katalógusa IL-17 Matton értelemben katalógusa TTTAACTCCCTTGGCGCAAAA katalógusa [29] katalógusa antiszensz katalógusa CTTTCCCTCCGCATTGACAC katalógusa Foxp3 Matton értelemben katalógusa GCCCCTMGTCATGGTGGCA katalógusa Ez a tanulmány katalógusa antiszensz katalógusa CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA katalógusa CXCL13 katalógusa
értelme katalógusa CTCTCCAGGCCACGGTATT katalógusa [67] katalógusa antiszensz katalógusa TAACCATTTGGCACGAGGAT katalógusa ATP4a Matton értelemben katalógusa TGCTGCTATCTGCCTCATTG katalógusa [68] katalógusa antiszensz katalógusa GTGCTCTTGAACTCCTGGTAG
ATP4b Matton értelemben katalógusa AACAGAATTGTCAAGTTCCTC katalógusa [68] katalógusa antiszensz katalógusa AGACTGAAGGTGCCATTG katalógusa HPRT Matton értelemben katalógusa CAGGCCAGACTTTGTTGGAT katalógusa [29]
antiszensz
TTGCGCTCATCTTAGGCTTT katalógusa PPIA Matton értelemben katalógusa AGCATACAGGTCCTGGCATC katalógusa [29] katalógusa antiszensz katalógusa TTCACCTTCCCAAAGACCAC katalógusa H2afz Matton értelemben
CGTATCACCCCTCGTCACTT
[29]
antiszensz
TCAGCGATTTGTGGATGTGT
Statisztikai analízis
különbségek kolonizáció kapacitás segítségével analizáltuk, egy nem paraméteres Mann-Whitney U
teszt. Különbségek a lymphocytás infiltráció, citokin expresszió és IHC analízis értékelték egyutas ANOVA, majd Bonferroni post hoc teszt. A statisztikai elemzéseket végeztünk SPSS Statistics 20 szoftvereket (IBM). Páronkénti összehasonlításokat végeztünk minden egyes időpontban és az összevont adatokat időben rétegződés tényező. P katalógusa értékek 0,05-nél kisebb tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Minden adatot átlag ± SD. Minden adat jött létre GraphPad Prism5 szoftver (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Katalógusa Eredmények katalógusa kolonizáció sűrűségű Tanuld az összes kontroll állatok negatívak voltak Helicobacter katalógusa. Eredmények a fertőzött állatok kimutatta, hogy a WT H. suis katalógusa lehet tartósan megtelepedni az egér gyomor kolonizáció szintje olyan magas, mint 5,42 × 10 4 (± 1,46 × 10 4) baktérium /mg gyomor szöveti még 6 hónappal pi (1C). A H. pylori
törzs SS1 kimutatták, hogy megtelepedni az egér gyomor sokkal alacsonyabb bakteriális sűrűség, lévén 1,68 × 10 3 (± 1,73 × 10 3) baktérium /mg szövet 6 hónapos PI (ábra 1C, p
< 0,05). 1. ábra közötti korreláció bakteriális kolonizáció kapacitás és gyulladás pontszám a gyomorban az egerek és a mongol futóegér. A kolonizáció kapacitás mutatjuk log10 értékek H. suis katalógusa vagy a H. pylori
per mg szövet, határoztuk QRT-PCR a corpus egerek (A-C) és az antrum mongol futóegér (D). 0, nincs infiltráció mononukleáris és /vagy polimorfonukleáris sejtek; 1, nagyon enyhe, diffúz infiltráció mononukleáris és /vagy polimorfonukleáris sejtek, vagy a jelenléte egy kis (20-50 sejt) aggregált gyulladásos sejt; 2, enyhe diffúz infiltráció mononukleáris és /vagy polimorfonukleáris sejtek, vagy a jelenléte egy kis (50-200 sejt) aggregált gyulladásos sejt; 3, a mérsékelt diffúz infiltráció mononukleáris és /vagy polimorfonukleáris sejtek, és /vagy jelenlétének 2-4 gyulladásos aggregátumok; 4, jelzett diffúz infiltráció mononukleáris és /vagy polimorfonukleáris sejtek, és /vagy a jelenléte legalább öt gyulladásos aggregátumok. HS vs. HSM: Colonization: p katalógusa > 0,05; Gyulladás: p katalógusa < 0.05. SS1 vs. SS1m: Colonization: p katalógusa < 0,05; Gyulladás: p katalógusa < 0.05. PMSS1 vs. PMSS1m: Colonization: p katalógusa > 0,05; Gyulladás: p katalógusa < 0.05. HS: fertőzött állatok WT H. suis katalógusa Nyúlásmérő HS5cLP; HSM: fertőzött állatok H. suis katalógusa törzs HS5cLPΔggt katalógusa; SS1: fertőzött állatok WT H. pylori katalógusa SS1; SS1m: fertőzött állatok H. pylori katalógusa SS1Δggt katalógusa; PMSS1: fertőzött állatok WT H. pylori katalógusa PMSS1; PMSS1m: fertőzött állatok H. pylori katalógusa PMSS1Δggt katalógusa.
Érdekes, H. suis katalógusa törzs HS5cLPΔggt katalógusa tudott megtelepedni a corpus a gyomor az egerek hasonló mértékben, mint a WT törzs, és ez a volt megfigyelhető minden időpontban (1A-1C). Ezzel szemben a H. pylori
törzset SS1Δggt
Kimutatták, hogy van egy károsodott kolonizáció kapacitás egerekben mindhárom időpontokban (1A-1C, p
< 0,05). Hasonló kolonizációs adatokat mutattak az antrumban Helicobacter katalógusa fertőzött egerek mindhárom időpontokban (az adatokat nem mutatjuk be).
Mind a HS5cLP és HS5cLPΔggt
törzs sikeresen gyarmatosították az antrum és corpus a gyomor mongol futóegér bár kolonizáció arányok sokkal alacsonyabbak voltak a corpus képest antrum. Nem volt statisztikailag szignifikáns különbség volt megfigyelhető a két törzs (1D, p katalógusa > 0,05). A H. pylori
törzs PMSS1Δggt
képes volt megtelepedni a antrum és corpus a gyomor hasonló szinten összehasonlítva PMSS1 (1D ábra, p
&0,05), bár a 2 kivéve 5 mongol futóegér negatívak voltak jelenlétében PMSS1Δggt
corpus a gyomor (az adatokat nem mutatjuk be).
fertőzés által kiváltott gyulladás
minden kontroll egerek és versenyegereknél esetében normál gyomor histomorphology minden időpontban. A korreláció gyulladás pontszámok és a bakteriális kolonizáció jelenik meg az 1. ábrán
Összehasonlítva egerek WT törzs fertőzés, fertőzés a H. suis
törzs HS5cLPΔggt
általában indukált jelentősen kisebb általános gyulladás mind az antrum (p
< 0,01) és corpus (p katalógusa < 0,01), míg csak a corpus régió (p katalógusa < 0,01), fertőzés H. pylori katalógusa törzs SS1Δggt
indukált kevesebb gyulladás, összehasonlítva a látható WT törzset fertőzött egerekben. A 6. hónapban Pi, a corpus régió 2-ből 4 egerek HS5cLP fertőzés tartalmazott nagy limfoid aggregátumok vagy nyiroktüszőkben kísért pusztulása normál nyálkahártya Architecture (2A ábra), amely nem volt megfigyelhető állatok más csoportok. 2. ábra H &E festése, gyomor metszetek Helicobacter-fertőzött egerek és mongol futóegér. Reprezentatív felvételei H &E festett szekciókban itt bemutatott vettünk egerek orálisan inokulált H. suis
HS5cLP (A), a H. suis
HS5cLPΔggt
(B), a H. pylori
SS1 ( C) és a H. pylori katalógusa SS1Δggt katalógusa (D) 6 hónapos oltás után és mongol futóegér orálisan megtámadni H. suis katalógusa HS5cLP (E), H. suis katalógusa HS5cLPΔggt katalógusa (F ), a H. pylori
PMSS1 (G) és a H. pylori
PMSS1Δggt
(H) a 9 héttel a beoltás. Nyilak jelzik a jelenlétét a gyulladásos sejtek, a gyulladásos aggregátumok, limfocitás infiltráció, vagy lymphocytás tüsző. HS: fertőzött állatok WT H. suis katalógusa törzs HS5cLP; HSM: fertőzött állatok H. suis katalógusa törzs HS5cLPΔggt katalógusa; SS1: fertőzött állatok WT H. pylori katalógusa SS1; SS1m: fertőzött állatok H. pylori katalógusa SS1Δggt katalógusa; PMSS1: fertőzött állatok WT H. pylori katalógusa PMSS1; PMSS1m: fertőzött állatok H. pylori katalógusa PMSS1Δggt katalógusa; WT: vad típusú. Az eredeti nagyítás: 100 ×.
A mongol futóegér, fertőzés HS5cLP vagy PMSS1 által kiváltott súlyos antrumból domináns gyomorhurut kialakulásához limfoid aggregátumok a lamina propria és /vagy al-nyálkahártya a gyomor (ábra 1D 2E, és 2G ). Nem volt szignifikáns különbség a WT és a mutáns törzs a H. suis katalógusa tekintetében a gyulladásos választ indukált versenyegereknél (ábrák 1D 2E és 2 F), bár minden állat törzzsel fertőzött HS5cLP gyulladást mutat a corpus régió , mivel ez csak az néhány fertőzött állatok HS5cLPΔggt katalógusa (az adatokat nem mutatjuk be). Az egyik futóegér fertőzött H. suis
törzs HS5cLP, egy hangsúlyos gyulladásos válasz volt megfigyelhető, amely több mint 65% -a az a terület, a lamina propria és nyálkahártya alatti az antrum-t sűrűn átszőtt gyulladásos sejtek, fuzionált limfoid aggregátumok és nyiroktüszők (Plusz fájl 1). katalógusa gyulladás által indukált H. pylori katalógusa törzs PMSS1Δggt katalógusa az antrumban futóegér kevésbé volt súlyos, mint ahhoz, ami a WT fertőzött állatok (p katalógusa < 0,05) (ábrák 1D, 2G és 2H).
gyulladásos sejtes infiltráció
általában, a növekedés T-sejt-szám volt megfigyelhető a corpus (3A, p
< 0,05) fertőzött egerek H. suis katalógusa törzs HS5cLP és H. pylori katalógusa törzs SS1 mindhárom időpontokban. Összehasonlítva a fertőzött egerek WT H. suis katalógusa, HS5cLPΔggt
indukált egy alsó T-sejt-választ a corpus 6 hónapos PI (p
< 0,01). H. pylori katalógusa törzs SS1Δggt
kiváltott csökkent T sejt válasz a corpus régió (p katalógusa < 0,01), mint a WT fertőzött állatok, mind 9 hetes és 6 hónapos pi (3A). Hasonló eredményeket figyeltünk meg az antrumban egerek (az adatokat nem mutatjuk be).

• A trimetoprim-szulfadimidint nem javítja a gyógyulás a mirigyes gyomor fekély lovak részesülő omeprazol: egy randomizált, vak klinikai vizsgálatban
• Scanning elektronmikroszkópos megfigyelések a sündisznó gyomor féreg, Physaloptera clausa (Spirurida: Physalopteridae)