Roll vun γ-glutamyltranspeptidase an der pathogenesis vun Helicobacter sinn an Helicobacter pylori infections

Roll vun γ-glutamyltranspeptidase an der pathogenesis vun Helicobacter sinn VerfÜgung an Helicobacter pylori VerfÜgung Aids VerfÜgung méiglech VerfÜgung Helicobacter VerfÜgung (H. VerfÜgung) sinn VerfÜgung de Mo vum Schwäin colonize kann och als Mënsch, dauernd chronescher gastritis an aner gastric agebousst Ännerungen dorënner gastric ulceration an mucosa-verbonne lymphoid Otemschwieregkeeten (Malz) lymphoma. Kuerzem, eng virulence Faktor vun H. sinn VerfÜgung, γ-glutamyl transpeptidase (GGT), gouf hien eng wichteg Roll an der Aféierungs- vum Mënsch gastric epithelial Zell Doud an modulation vun lymphocyte Prolifératioun ze spillen je glutamine an glutathione catabolism. Am Moment studéieren, d'Relevanz vun GGT an der pathogenesis vun VerfÜgung Wonn H. ech war am Maus a Persounen gerbil Modeller studéiert. Ausserdeem war d'famill Wichtegkeet vun H. sinn VerfÜgung GGT Verglach mat deem vun der GGT VerfÜgung H. pylori. Eng bedeitend a verschiddene Bäitrag vun der GGT vun H. sinn VerfÜgung an H. pylori VerfÜgung war zu Conditioune vun bakteriell Kolonisatioun, inflammation an der dësen immun Äntwert gesinn. Am Géigesaz zu H. pylori VerfÜgung Δggt VerfÜgung analyséieren, H. sinn VerfÜgung Δggt VerfÜgung analyséieren sech vun dichtege de Mo. um Niveau ähnlecher zu virstellen analyséieren colonizing, obwuel se wesentlech manner globale gastric inflammation zu Mais entschlof. Dëst war déi ënnescht Zuel vun T a B Zellen charakteriséiert, an engem méi nidderegen Niveau vun epithelial Zell Prolifératioun. Am Allgemengen, am Verglach zu virstellen Deformatioun Wonn, ggt VerfÜgung Mann- analyséieren vun H. sinn VerfÜgung nidderegen Niveaue vun Th1 an Th17 Ënnerschrëft cytokine Ausdrock ausgeléist. A ausgeschwat upregulation vu B-lymphocyte chemoattractant CXCL13 war an Déieren Krankheet mat virstellen an ggt VerfÜgung Mann- analyséieren vun H. sinn VerfÜgung observéiert, esouwuel. Spannen, war H. sinn VerfÜgung GGT gewisen der glutamine ukuerbelt vun gastric epithelium duerch downregulation vun der glutamine Fernsehn ASCT2 ze beaflossen. VerfÜgung Erschléisse VerfÜgung Helicobacter VerfÜgung (H. VerfÜgung) pylori VerfÜgung ass engem Gramm-negativ Bakterie datt de Mo vun méi ewéi d'Halschent vun der Welt d'Bevëlkerung bewunnt. Krankheet mat dësem Bakterie kënnen gastritis, peptic oppent Krankheet Ursaach, gastric adenocarcinoma an mucosa-verbonne lymphoid Otemschwieregkeeten (Malz) lymphoma [1-3]. Nieft H. pylori VerfÜgung, Net-H. pylori VerfÜgung helicobacters (NHPH) hunn och an de Mo. vu Mënschen an dës Bakterien Ursaach ähnlechen gastric Krankheete fonnt ginn. De Risiko vun gastric Malz lymphoma Entwécklungslänner ass héich während NHPH Wonn Verglach zu Lombardia mat H. pylori VerfÜgung [4-9]. H. sinn VerfÜgung déi verwandelt gastric NHPH zu Mënsch ass. Schwäin sinn der natierlech Gaaschtland vun dëser Bakterie, mat prevalences Erréchen 90% oder méi [10] an Wahrscheinlechkeet, Schwäin a méiglecherweis och Schwäin sinn d'Haaptsource vun mënschlech H. sinn VerfÜgung Wonn [4,11-13].
H. sinn VerfÜgung Wonn schéngt fir Liewen ze man, op d'mannst an Schwäin an Nager wéi Modeller fir Mënsch benotzt [14]. An Schwäin, bewierkt Wonn Entwécklung vun gastritis an enger Ofsenkung vu Kierpergewiicht gewannen. Desweideren, schéngt d'Bakterie eng Roll an der Entwécklung vun ulceration vun der Net-glandular pars oesophagea [15] ze spillen. An Mais a Persounen gerbil Modeller vu mënschlechen gastric Krankheet, experimentell H. sinn VerfÜgung Wonn bewierkt schwéieren gastric wirklech [4,16,17], dorënner gastritis, parietal Zell necrosis an der Entwécklung vun gastric Malz lymphoma-wëll lesions, Mooss de lesions zu H. sinn observéiert VerfÜgung -infected Mënschen. VerfÜgung virdrun Etuden hu gewisen, datt dës Bakterie VerfÜgung pathogenicity Insel engem homologue fir verschidden virulence Faktoren vun H. pylori VerfÜgung, wéi d'cytotoxin verbonne Genen Éloquence ( cag VerfÜgung PAI) an der vacuolating cytotoxin (VacA) [18]. Mir waren awer erwisen vun der γ-glutamyl transpeptidase (GGT) als eng wichteg virulence Faktor vun H. sinn VerfÜgung z'identifizéieren. Dës Aktivitéit ass beschriwwe gouf mat zwee vu senge dat heescht de Législateur, L-glutamine a reduzéiert glutathione gastric epithelial Zell Schued [19] an modulation vun lymphocyte Prolifératioun [20] duerch d'Zesummespill vun der Aktivitéit ze féieren, dat d'éischt identifizéiert Mëtt spazéieren an propagéieren H. sinn VerfÜgung virulence Projet. VerfÜgung D'Roll vun GGT während H. pylori VerfÜgung Wonn am VIVO VerfÜgung zu Mais propagéieren gouf. Konflikter Conclusioune gewiescht iwwer d'Wichtegkeet vun GGT fir Kolonisatioun zréckgräifen. Verschidde Gruppen hu Sputnik H. pylori VerfÜgung GGT fir bestänneg Wonn néideg ass am Mais [21], während déi aner Géigendeel Conclusioune gemaach hunn [22]. Zousätzlech, et ass aktueller Beweiser datt Helicobacter VerfÜgung GGT ass e wichtege Faktor virulence zu immun virleien an immun Toleranz Équipe [23-25]. VerfÜgung Moment, ass dat onbekannt ob a wéi H. sinn VerfÜgung GGT Afloss am Laf vum H. sinn VerfÜgung Wonn am VIVO VerfÜgung. D'Zil vun dëser Etude huet eis virdrun an eng kënschtlech VerfÜgung Experienz mat H. sinn VerfÜgung GGT ze verlängeren, an der Roll vun deem virulence Faktor am pathogenesis vun H. ze studéieren sinn VerfÜgung Wonn am VIVO
. An der selwechter Zäit, fir mir op senger relativer Wichtegkeet vergläichen mat deem vun der GGT vun H. pylori VerfÜgung. Déi aktuell Experiment an BALB /c Mais an outbred Persounen gerbils gesuergt, well dës Déier Modeller hunn zwar wäertvoll Mëttel ginn, fir d 'Roll vun Helicobacter VerfÜgung Arten am gastric wirklech gewise gouf. Typesch, kann am Persounen gerbils, eng méi rapid a schwéieren Entwécklung vun gastric lesions zu Mais observéiert ginn Verglach [4,26,27]. VerfÜgung Material a Methoden VerfÜgung Déieren an bakteriell analyséieren VerfÜgung siechzeg 4-week- al, weiblech spezifeschen-pathogen-gratis (SPF) BALB /c Mais sech aus Harlan NL (Horst, Holland) kaaft. Twenty-fënnef 4-Woch-al, weiblech SPF outbred Persounen gerbils (loosen: MON) sech vum Charles River Laboratoiren (Lille, Frankräich) kritt VerfÜgung Fir H. sinn VerfÜgung Wonn am Mais a Persounen gerbils, Deformatioun HS5cLP. benotzt gouf. Dës Efforten gouf 2008 aus dem Mo vun engem Schluechthaus Fierkel [28] isoléiert. Fir experimentell H. pylori VerfÜgung Wonn am Persounen gerbils, Deformatioun PMSS1 [29] war benotzt, well dat Deformatioun keng Geschicht vun am VIVO VerfÜgung Adaptatioun vun Mais huet, am Géigesaz zu den Maus-ugepasst Deformatioun SS1. An BALB /c Mais, H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1 [29] benotzt gouf, huet zanter Deformatioun PMSS1 virdrun net ze kënnen de Mo vun BALB /c Mais Gewise ginn ze colonize [29]. VerfÜgung Bau vun isogenic ggt VerfÜgung Mann- analyséieren vun H. sinn VerfÜgung an H. pylori
an isogenic H. sinn ggt VerfÜgung Mann- Deformatioun (HS5cLPΔggt VerfÜgung) war virdrun ëmschriwwen bereet [20]. D'isogenic ggt VerfÜgung Mann- Deformatioun vum H. pylori VerfÜgung war mat der selwechter Strategie kritt wéi fir Kreatioun vum H. sinn VerfÜgung isogenic ggt VerfÜgung Mann-, ausser datt eng kanamycin Resistenz Kassett amplaz vun engem benotzt gouf chloramphenicol Resistenz Kassett [20]. Ganz kuerz, Läsche vun ggt VerfÜgung zu H. pylori VerfÜgung SS1 an PMSS1 war vun allelic Austausch mat pBluescript II SK (+) phagemid Vecteure (Agilent Technologies, Kalifornien, USA) zu deem ~ 440 BP vun de 5 "agefouert -end an ~ 430 BP vun der -end vun der Zil- Gene '3 an der kanamycin Resistenz Kassett aus plasmid pKD4 [30] huet sech duerch e Hinnen alleguer-mediated Strategie mat 2 Zykle vun ëmgedréit, et gesäit Hinnen alleguer an Fusioun Hinnen alleguer [20] Jonglenster. All primers fir Hinnen alleguer-mediated Bau vun der recombinant plasmids benotzt ginn an Table 1 gewisen. D'entstoent plasmid VerfÜgung war zu XL1-Blue MRF 'E. Implikatioune belaascht VerfÜgung (Agilent Technologies) a wéi engem Taux plasmid zu H benotzt . VerfÜgung SS1 an PMSS1 (eng Zort Cadeau vum Sara LINDEN an Anne Muller, bzw.) pylori. Den H. pylori VerfÜgung SS1 ggt VerfÜgung Mann- (SS1Δggt VerfÜgung) an H. pylori VerfÜgung PMSS1 ggt VerfÜgung Mann- (PMSS1Δggt VerfÜgung) vun electrotransformation kritt huet [31] oder natierleche Wandel [32 ] virdrun ëmschriwwen. Endlech, sech Bakterien Agar Placken op Columbia ausgewielt (Oxoid, Basingstoke, UK) mat Vitox Zousaz (Oxoid), 5% (v /v) defibrinated Schof Blutt (E & O Laboratoiren Ltd, Bonnybridge, UK), an kanamycin (25 μg /mL). D'Placke waren fir 5-9 Deeg incubated. D'isogenic ggt VerfÜgung mutants vun engem GGT Aktivitéit assay Fra sech [19], Hinnen alleguer an Nukleotid sequencing.Table 1 Primers fir de Bau vun der H. benotzt pylori ggt isogenic Mann- analyséieren VerfÜgung Primer Numm
liichtkraaftarm (5'- 3 ')
Primer benotzen
pBlue linear Fwd 1 VerfÜgung GGGGATCCACTAGTTCTAGAGCG VerfÜgung Linearization vun plasmid VerfÜgung pBlue linear Rev1 VerfÜgung CGGGCTGCAGGAATTCGATATCAAG VerfÜgung Linearization vun plasmid
HpGGT-flank_fusion1F
CTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGTAACCGGTAAAATCAACACGGACGC
Amplification H. pylori ggt VerfÜgung deelweiser Bastelen a matgeholl Reliefsailen Genen VerfÜgung HpGGT-flank_fusion1R VerfÜgung CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCCGCGCTCTTATAAAAAGAAGCCGC VerfÜgung Amplification H. pylori ggt VerfÜgung deelweiser Bastelen a matgeholl Reliefsailen Genen VerfÜgung pBluelinear_Hpggtflank1F
CCAAGGAAAGAATTTTAATCCTATTTAG VerfÜgung Linearization vun der recombinant plasmid VerfÜgung pBluelinear_Hpggtflank1R VerfÜgung CTGTTTTCCTTTCAATCAACAATAATC VerfÜgung Linearization vun der recombinant plasmid VerfÜgung Hpkana_fusion_1F VerfÜgung ATTATTGTTGATTGAAAGGAAAACAGATGATTGAACAAGATGGATTGC VerfÜgung Amplification kanamycin Resistenzgen VerfÜgung Hpkana_fusion_1R VerfÜgung CTAAATAGGATTAAAATTCTTTCCTTGGTCAGAAGAACTCGTCAAGAAG
Amplification kanamycin Resistenzgen VerfÜgung T7 prom3 VerfÜgung TAATACGACTCACTATAGGG VerfÜgung Sequencing VerfÜgung M13R VerfÜgung CAGGAAACAGCTATGAC VerfÜgung Sequencing VerfÜgung Kultur Konditiounen vun bakteriell analyséieren VerfÜgung Wild-Typ (virstellen) H. sinn VerfÜgung Deformatioun HS5cLP war fir 48 h ugebaut wéi virdru beschriwwen [29]. HS5cLPΔggt VerfÜgung Bakterien ënnert de selwechte Bedingungen wéi Deformatioun HS5cLP ugebaut goufen, ausser dass d'ubauen Placke mat chloramphenicol (30 μg /ml) séchert sech wéi virdrun beschriwwen [20]. VerfÜgung virstellen H. pylori VerfÜgung analyséieren SS1 an PMSS1 sech op Columbia Agar Placke ugebaut mat 5% (v /v) defibrinated Schof Blutt fir 48-72 h op 37 ° C ënner microaerobic Konditiounen wéi virdru beschriwwen [29]. Duerno, huet ofgeholl Kolonien an cultured zu Brucella läschen ergänzt mat Vitox (Oxoid) a 5% An et Kallef serum (HyClone) op engem Rotatiounsachs Shaker ënner microaerobic Konditiounen (16 h, 125 Ziichter). SS1Δggt VerfÜgung an PMSS1Δggt VerfÜgung analyséieren goufen ënner de selwechte Konditiounen wéi déi entspriechend virstellen analyséieren op Placke mat kanamycin (25 μg /ML). VerfÜgung hun Design VerfÜgung Afall Arrivée, siechzeg BALB /C Mais nà cultured an zwanzeg-fënnef Persounen gerbils sech an 5 Gruppen agedeelt, an d'Déieren sech fir 1 Woch un der neier Ëmwelt ze acclimate erlaabt. Déieren sech intragastrically 3 Mol um 48 h Intervalle inoculated. Déieren aus Grupp 1 an 2 (zwou Mais a Persounen gerbils) sech mat Brucella läschen inoculated mat 8 × 10 7 Statiounen Bakterien vun analyséieren HS5cLP an HS5cLPΔggt VerfÜgung, bzw.. Déieren am Grupp 3 a 4 huet mat Brucella läschen inoculated mat 3 × 10 8 liewensfäeg Bakterien vun analyséieren SS1 an SS1Δggt VerfÜgung (Mais) oder 1 × 10 9 liewensfäeg Bakterien vun analyséieren PMSS1 an PMSS1Δggt VerfÜgung (gerbils). Déieren an der fënnefter Grupp sech mat Brucella läschen inoculated an als uninfected Kontrollen. Fir Mais, bei 4 Wochen, 9 Wochen a 6 Méint Post Wonn (PI), 4 Déieren aus all Grupp sech duerch cervical dislocation ënner isoflurane Anästhesie euthanized. Fir Persounen gerbils, waren all Déieren um 9 Wochen PI geaffert. D'Mamm vun den Déieren huet fir weider Ofwécklung resected wéi virdru beschriwwen [27,29]. VerfÜgung Déieren Experiment vun der ethneschen Comité vun der Fakultéit vun Veterinary Medezin guttgeheescht goufen, Gent University, Belsch (EC2013 /29). VerfÜgung Histopathological Examen an immunohistochemistry (IHC) VerfÜgung Dräi longitudinal Strips vun gastric Otemschwieregkeeten vu Mais a Persounen gerbils sech aus der esophagus fir d'Ausléiser laanscht de gréissere curvature geschnidde. Ray war déi Norm Methoden zu 4% phosphate gefiermt formaldehyde, Filteren fix a fir Liicht microscopy zu paraffin Ënnerbewosstsinn. Fënnef Serien Rubriken vun 5 μm sech gelooss. Déi éischt Sektioun war mat haematoxylin /eosin (H & E) Kierchefënster laut den Ofschloss vun gastritis zu stoung op der Aktualiséiert Sydney System mat e puer Ännerungen [33]. No deparaffinization an abordablel fir de Rescht Rubriken, Hëtzt-entschlof antigen retrieval war zu citrate Prellbock (pH = 6.0) gesuergt. Fir endogenous peroxidase Aktivitéit an Net-spezifesch Reaktioune ze blockéieren, all waren der drënner mat 3% H 2O incubated 2 zu methanol (5 min) an 30% Geess serum (30 min), bzw.. Fir de dat tëscht T a B lymphocytes, CD3 an CD20 antigens sech op Rubriken zwee an dräi Glasfënsteren, engem polyclonal Kanéngchen anti-CD3 antibody benotzt (1/100; DakoCytomation, Glostrup, Dänemark) an engem polyclonal Kanéngchen anti-CD20 antibody (1 /25; Thermo wëssenschaftlech, Frémont, USA), bzw.. Dës Rubriken huet Filteren weider mat Stellt + System-HPR (botzt) (DakoCytomation) fir benotzen mat Kanéngchen Primärschoul antibodies. Op der véierter an fënneften Rubrik, epithelial Zell Verbreedung an d'Zuel vun parietal Zellen sech duerch IHC staining alles, eng Maus monoclonal anti-Ki67 antibody (1/25; Menarini kinnt, Zaventem, Belsch) benotzt an Maus monoclonal anti-Waasserstoff KaliumiodidPëlle ATPase β-subunit (H + /K + ATPase) antibody (1/25 000; Abcam Ltd, Cambridge, UK), bzw.. Kierzunge visualization war mat Stellt + System-HPR (botzt) (DakoCytomation) fir benotzen mat Maus Primärschoul antibodies gemaach. Quantification vun T Zellen, B Zellen an epithelial Zellen sech wéi virdrun beschriwwen standing [4]. Kuerz, goufen d'Zuelen vun Zellen Zougehéieregkeet zu definéiert Zell Populatiounen (T Zellen, B Zellen, an epithelial Zellen) vun Zielen de positive Zellen zu fënnef per Zoufall ausgewielt High Power Fields alles (Vergréisserung: × 400), souwuel an der antrum an Corpus Regioun . VerfÜgung fir d'méiglech Entwécklung vun pseudopyloric metaplasia entschlof vun Helicobacter VerfÜgung Wonn, alcian blo-periodesch Seier-Schiff stain staining (AB /Pas) war ze bewäerten gesuergt. VerfÜgung Quantification vun colonizing Bakterien am Mo vun Mais a Persounen gerbils VerfÜgung Strips vun gastric Otemschwieregkeeten all Regioune fir Mais a separat Stécker (antrum an lénken) fir Persounen gerbils wouvun am gespäichert goufen 0,5 ml RNAlater VerfÜgung Léisung (Ambion, Austin, TE, USA) bei -70 ° C bis RNS an DNA erauszéien. Chemeschen Real-Time Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) benotzt gouf d'Zuel vun colonizing Bakterien am gastric Otemschwieregkeeten ze bestëmmen, wéi virdru beschriwwen [29,34]. VerfÜgung RNS erauszéien an ëmgedréint Transkriptiouns VerfÜgung qRT-Hinnen alleguer gouf benotzt, fir festzestellen, Gene Ausdrock vun der gastric Otemschwieregkeeten vu Mais a Persounen gerbils. Total RNS war mat der RNeasy Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Däitschland) ofgebaut laut den Hiersteller d'Uweisungen. D'Konzentratioun vun RNS war mat engem NanoDrop spectrophotometer (Isogen Life Science, PW De Meern, Utrecht, Holland) gemooss. De Rengheet vum RNS war mat der Experion automatiséiert electrophoresis System bewäert benotzt StdSens RNS Fritten (Bio-Rad, Hercules CA, USA). D'RNS Konzentratioun vun all Echantillon bis 1 μg ugepasst war /μL an cDNA gouf direkt no RNS Offäll Wierderbuch der iScript ™ cDNA Synthes Kit benotzt (Bio-Rad). VerfÜgung Design a validéiert primers an Determinatioun vun der Gentherapie Ausdrock VerfÜgung d'housekeeping Genen H2afz, PPIA VerfÜgung an HPRT VerfÜgung als Referenz Genen fir Mais abegraff waren [29]. Fir Persounen gerbils, war eng Sammlung vu Referenzmaterial Genen baséiert op de Fait getest datt si extensiv an aner Déierenaarten benotzt ginn. Primers baséieren op der conserved Regioune vun ACTB, β-actin, RPS18 VerfÜgung, GAPDH VerfÜgung, HPRT1 VerfÜgung entworf, SDHA VerfÜgung an heescht VerfÜgung komplett oder deelweis coding sinn Message fir Mënschen, Schwäin, Mais an deër. D'mRNA Ausdrock Niveau vun verschiddenen cytokines (IFN-γ, IL-4, IL-5, IL-17, IL-1β, IL-6, IL-10) VerfÜgung, gewise gin virdrun differentially ausgedréckt während H. sinn VerfÜgung Wonn, wéi och aner Genen (Foxp3, CXCL13, ASCT2, ATP4a, an ATP4b) benotzt SYBR Green baséiert RT-Hinnen alleguer mat IQ ™ SYBR Green Supermix laachen. Reaktioune waren e CFX96 RT Hinnen alleguer System mat Hëllef vun engem C1000 sideresch LS (Bio-Rad) standing wéi virdru beschriwwen [29]. All Reaktioune waren zu 12 μL Bänn wouvun 0,05 μL vun all primer (1.25 pmol /μL), 6 μL IQ ™ SYBR Green Supermix, 3,9 μL HPLC Waasser an 2 μL cDNA gesuergt. D'experimentell Programm bestoung vun 95 ° C fir 15 min, gefollegt vun 40 Zykle vun denaturation bei 95 ° C fir 20 Spiller, annealing bei 60 ° C fir 30 ass, a lues op 72 ° C fir 30 ass. D'loung Zyklus Wäerter (Kosovo) sech un dem geometreschen heescht vun der Referenz Genen normalized an der normalized mRNA Niveau vun all Zil- Genen sech mat der Method vun 2 berechent -ΔΔCt [35]. VerfÜgung Durch d'Bestellung fannen vun Gene Informatioune fir Forkhead /Drorakéit Wendel Transkriptiouns Faktor (Foxp3) an der chemokine CXC ligand 13 (CXCL13) vu Persounen gerbils, goufen primers op der conserved Regioune vun Foxp3 an CXCL13 komplett oder deelweis coding Message sinn fir Mënschen, Schwäin, Mais entworf baséiert a deër mat der selwechter Strategie wéi uewe beschriwwen. D'mRNA Ausdrock Niveau vun Foxp3 an CXCL13 benotzt déi selwecht Method alles wéi uewen beschriwwen. Haaptrei Informatioune vun all de primers fir Mais a fir Persounen gerbils ass an Bedeitung 2 an 3.Table 2 Lëscht vun de Genen an primers fir qRT-Hinnen alleguer zu Persounen gerbils VerfÜgung Gene
Primer VerfÜgung benotzt dës
liichtkraaftarm (5'- 3 ')
Foussballtraineren
Foxp3
Sënn VerfÜgung GCCCCTMGTCATGGTGGCA VerfÜgung Dës Etude VerfÜgung antisense VerfÜgung CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13
Sënn VerfÜgung GAATGGCTGCCCCAAAACTGAA VerfÜgung Dës Etude VerfÜgung antisense VerfÜgung TCACTGGAGCTTGGGGAGTTGAA VerfÜgung GAPDH
Sënn VerfÜgung AACGGGAAGCTCACTGGCATG VerfÜgung Dës Etude VerfÜgung antisense VerfÜgung CTGCTTCACCACCTTCTTGATGTCA VerfÜgung HPRT1
Sënn VerfÜgung GCCCCAAAATGGTTAAGGTTGCA VerfÜgung Dës Etude VerfÜgung antisense VerfÜgung TCAAGGGCATATCCAACAACAAAC VerfÜgung RPS18
Sënn VerfÜgung CGAGTACTCAACACCAACATCGATGG VerfÜgung dës Etude VerfÜgung antisense VerfÜgung ATGTCTGCTTTCCTCAACACCACATG VerfÜgung IL-1β
Sënn VerfÜgung GGCAGGTGGTATCGCTCATC VerfÜgung [64] zu antisense VerfÜgung CACCTTGGATTTGACTTCTA VerfÜgung IFN-γ VerfÜgung VerfÜgung Sënn VerfÜgung CCATGAACGCTACACACTGCATC VerfÜgung [65] zu antisense VerfÜgung GAAGTAGAAAGAGACAATCTGG VerfÜgung IL-5
Sënn VerfÜgung AGAGAAGTGTGGCGAGGAGAGACG VerfÜgung [27] zu antisense
ACAGGGCAATCCCTTCATCGG VerfÜgung IL-6
Sënn VerfÜgung GAGGTGAAGGATCCAGGTCA VerfÜgung [66] zu antisense VerfÜgung GAGGAATGTCCTCAGCTTGG VerfÜgung IL-10
Sënn VerfÜgung GGTTGCCAAGCCTTATCAGA VerfÜgung [27] zu antisense VerfÜgung GCTGCATTCTGAGGGTCTTC VerfÜgung IL-17
Sënn VerfÜgung AGCTCCAGAGGCCCTCGGAC VerfÜgung [64] zu antisense VerfÜgung AGGACCAGGATCTCTTGCTG VerfÜgung ATP4b
Sënn VerfÜgung GGGGGTAACCTTGAGACCTGATG VerfÜgung [27] zu antisense VerfÜgung AAGAAGTACCTTTCCGACGTGCAG VerfÜgung β-actin
Sënn VerfÜgung TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA VerfÜgung [66]
antisense VerfÜgung CCAGACAGCACTGTGTTGGC VerfÜgung Table 3 Lëscht vun de Genen an VerfÜgung Gene
Primer zu Mais fir qRT-Hinnen alleguer benotzt primers
liichtkraaftarm (5'- 3 ')
zu Foussballtraineren
IL-1β
Sënn VerfÜgung GGGCCTCAA AGGAAAGAATC VerfÜgung [29] zu antisense VerfÜgung TACCAGTTGGGGAACTCTGC VerfÜgung IFN-γ VerfÜgung
Sënn VerfÜgung GCGTCATTGAATCACACCTG VerfÜgung [29] zu antisense VerfÜgung TGAGCTCATTGAATGCTTGG VerfÜgung IL-4
Sënn VerfÜgung ACTCTTTCGGGCTTTTCGAT VerfÜgung [29] zu antisense
AAAAATTCATAAGTTAAAGCATGGTG VerfÜgung IL-10
Sënn VerfÜgung ATCGATTTCTCCCCTGTGAA VerfÜgung [29] zu antisense VerfÜgung CACACTGCAGGTGTTTTAGCTT VerfÜgung IL-17
Sënn VerfÜgung TTTAACTCCCTTGGCGCAAAA VerfÜgung [29] zu antisense VerfÜgung CTTTCCCTCCGCATTGACAC VerfÜgung Foxp3
Sënn VerfÜgung GCCCCTMGTCATGGTGGCA VerfÜgung Dës Etude VerfÜgung antisense VerfÜgung CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA VerfÜgung CXCL13 VerfÜgung
Sënn VerfÜgung CTCTCCAGGCCACGGTATT VerfÜgung [67] zu antisense VerfÜgung TAACCATTTGGCACGAGGAT VerfÜgung ATP4a
Sënn VerfÜgung TGCTGCTATCTGCCTCATTG VerfÜgung [68] zu antisense VerfÜgung GTGCTCTTGAACTCCTGGTAG VerfÜgung ATP4b
Sënn VerfÜgung AACAGAATTGTCAAGTTCCTC VerfÜgung [68] zu antisense VerfÜgung AGACTGAAGGTGCCATTG VerfÜgung HPRT
Sënn VerfÜgung CAGGCCAGACTTTGTTGGAT VerfÜgung [29] VerfÜgung antisense VerfÜgung TTGCGCTCATCTTAGGCTTT VerfÜgung PPIA
Sënn VerfÜgung AGCATACAGGTCCTGGCATC VerfÜgung [29] zu antisense VerfÜgung TTCACCTTCCCAAAGACCAC VerfÜgung H2afz
Sënn
CGTATCACCCCTCGTCACTT VerfÜgung [29] zu antisense VerfÜgung TCAGCGATTTGTGGATGTGT VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung Oneenegkeet Kolonisatioun Muecht analyséiert goufen eng Net-parametric Mann-Whitney U VerfÜgung Test mat. Differenzen an Rezepter einfach, cytokine Ausdrock an IHC Analyse huet mat eent-Manéier ANOVA vun engem Bonferroni Post hoc Test duerno évaluéieren. Statistique analyséiert goufen benotzt standing SPSS Statistics 20 Software (IBM). Pair-schlau Vergläicher sech fir all eenzelne Zäit-Punkt gemaach an op hinzeginn Daten wéi stratification Faktor mat Zäit. P VerfÜgung Wäerter manner wéi 0,05 waren statistesch relevant considéréiert. All Donnéeën ginn als mengen ± Fils ausgedréckt. All waren d'Figuren hunn benotzt GraphPad Prism5 Software (GraphPad Software Galaxy San Diego, CA, USA). VerfÜgung Resultater VerfÜgung Kolonisatioun Dicht VerfÜgung All Kontroll Déiere fir Helicobacter VerfÜgung negativ waren. Resultater vun Krankheet Déieren zougedréckt datt H. sinn VerfÜgung virstellen erneieren der Maus Mo mat Kolonisatioun Niveauen esou héich wéi 5,42 × 10 4 (± 1,46 × 10 4) Bakterien /mg gastric Otemschwieregkeeten och um 6 colonize kann Méint PI (Dorënner 1c). H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1 huet dës Distanz an der Maus Mo op eng vill méi déif bakteriell Dicht zu colonize, gëtt 1,68 × 10 3 (± 1,73 × 10 3) Bakterien /mg Otemschwieregkeeten um 6 Méint PI (Dorënner 1c, p VerfÜgung &Si besteet; 0,05). Figur 1 Korrelatioun tëscht bakteriell Kolonisatioun Muecht an inflammation stoung am Mo. vu Mais a Persounen gerbils. D'Kolonisatioun Muecht ass wéi log10 Wäerter vun H. sinn VerfÜgung oder H. pylori VerfÜgung pro mg Otemschwieregkeeten gewisen, sech mat qRT-Hinnen alleguer am lénken vun Mais (A-C) an antrum vu Persounen gerbils (D). 0, keng einfach mat mononuclear an /oder polymorphonuclear Zellen; 1, ganz mëll diffusen einfach mat mononuclear an /oder polymorphonuclear Zellen oder d'Präsenz vun enger klenger (20-50 Zellen) ugesammelt vun demagogesch Zellen; 2, mëll diffusen einfach mat mononuclear an /oder polymorphonuclear Zellen oder d'Präsenz vun enger klenger (50-200 Zellen) ugesammelt vun demagogesch Zellen; 3, moderéiert diffusen einfach mat mononuclear an /oder polymorphonuclear Zellen an /oder d'Präsenz vun 2-4 demagogesch Bodrum; 4, markéiert diffusen einfach mat mononuclear an /oder polymorphonuclear Zellen an /oder d'Präsenz vun op d'mannst fënnef demagogesch Bodrum. T vs. HSm: Kolonisatioun: p VerfÜgung > 0,05; Inflammation: p VerfÜgung &Si besteet; 0,05. SS1 vs. SS1m: Kolonisatioun: p VerfÜgung &Si besteet; 0,05; Inflammation: p VerfÜgung &Si besteet; 0,05. PMSS1 vs. PMSS1m: Kolonisatioun: p VerfÜgung > 0,05; Inflammation: p VerfÜgung &Si besteet; 0,05. T: Déieren Krankheet mat virstellen H. sinn VerfÜgung Srain HS5cLP; HSm: Déieren Krankheet mat H. sinn VerfÜgung Deformatioun HS5cLPΔggt VerfÜgung; SS1: Déieren Krankheet mat virstellen H. pylori VerfÜgung SS1; SS1m: Déieren mat H. Krankheet pylori VerfÜgung SS1Δggt VerfÜgung; PMSS1: Déieren Krankheet mat virstellen H. pylori VerfÜgung PMSS1; PMSS1m: Déieren mat H. Krankheet pylori VerfÜgung PMSS1Δggt
Spannen, H. sinn VerfÜgung Deformatioun HS5cLPΔggt VerfÜgung konnt de Corpus vun de Mo vun der Mais un engem ähnleche Mooss wéi d'zu colonize. virstellen Klischee, an dat war fir all timepoints (Sauerdall 1A-1c) observéiert. Am Géigesaz, H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1Δggt VerfÜgung war op all dräi timepoints (Sauerdall 1A-1c, p VerfÜgung &Si besteet; 0,05) en leider Kolonisatioun Muecht an Mais hun gewisen. Ähnlech Kolonisatioun Date goufen an der antrum vun Helicobacter VerfÜgung Krankheet-Mais bei all dräi timepoints (Donnéeën net gewisen) bewisen. VerfÜgung Béid der HS5cLP an HS5cLPΔggt VerfÜgung Deformatioun koloniséiert erfollegräich antrum an Corpus vun de Mo. vu Persounen gerbils , obwuel Kolonisatioun Tariffer sech vill manner an der Corpus zu der antrum Verglach. Nee statistesch Differenze waren tëscht béide analyséieren (Dorënner 1D, p VerfÜgung > 0,05) observéiert. H. pylori VerfÜgung Deformatioun PMSS1Δggt VerfÜgung konnt de antrum an Corpus vun de Moo bei ähnlechen Niveau ze PMSS1 (Dorënner 1D, p VerfÜgung > 0,05) am Verglach zu colonize, obwuel 2 aus 5 Persounen gerbils negativ sech fir der Presenz vun PMSS1Δggt VerfÜgung am lénken vun de Mo. (Daten dës net). VerfÜgung Wonn-entschlof inflammation VerfÜgung all Kontroll Mais an gerbils bei all timepoints normal gastric histomorphology gewisen. D'Korrelatioun tëscht inflammation Fändelen an bakteriell Kolonisatioun ass 1. VerfÜgung mat virstellen Deformatioun Wonn ze Mais Verglach zu Dorënner ugewisen, Wonn mat H. sinn VerfÜgung Deformatioun HS5cLPΔggt VerfÜgung allgemeng vill manner globale inflammation souwuel am antrum (p entschlof VerfÜgung &Si besteet; 0.01) an Corpus (p VerfÜgung &Si besteet; 0.01) hierkommen nëmmen am lénken Regioun (p VerfÜgung &Si besteet; 0.01), Wonn mat H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1Δggt VerfÜgung manner entschlof inflammation, am Verglach zu deem zu virstellen Deformatioun Krankheet Mais gesinn. Um 6 Méint PI, Corpus Regioun an 2 aus 4 Mais mat HS5cLP Wonn enthale grouss lymphoid Bodrum oder lymphoid vun Zerstéierung vun der normal mucosal Architektur begleet follicles (Dorënner 2A), déi net an Déieren aus anere Gruppen observéiert gouf. Figur 2 H & E staining vun Mo. Sektiounen aus Helicobacter -infected Mais a Persounen gerbils. Vertrieder micrographs vun H & E grousst Rubriken hei waren aus Mais mëndlech inoculated mat H. sinn VerfÜgung HS5cLP (A), H. sinn VerfÜgung HS5cLPΔggt VerfÜgung (B), H. pylori VerfÜgung SS1 geholl gewisen ( C) an H. pylori VerfÜgung SS1Δggt VerfÜgung (d) op 6 Méint Post inoculation a Persounen gerbils mëndlech mat H. sinn erausgefuerdert VerfÜgung HS5cLP (E), H. sinn VerfÜgung HS5cLPΔggt VerfÜgung (F ), H. pylori VerfÜgung PMSS1 (G) an H. pylori VerfÜgung PMSS1Δggt VerfÜgung (H) um 9 Wochen Post inoculation. Feiler weg d'Präsenz vun demagogesch Zellen, demagogesch Bodrum, Rezepter einfach, oder Rezepter follicles. T: Déieren Krankheet mat virstellen H. sinn VerfÜgung Deformatioun HS5cLP; HSm: Déieren Krankheet mat H. sinn VerfÜgung Deformatioun HS5cLPΔggt VerfÜgung; SS1: Déieren Krankheet mat virstellen H. pylori VerfÜgung SS1; SS1m: Déieren mat H. Krankheet pylori VerfÜgung SS1Δggt VerfÜgung; PMSS1: Déieren Krankheet mat virstellen H. pylori VerfÜgung PMSS1; PMSS1m: Déieren mat H. Krankheet pylori VerfÜgung PMSS1Δggt VerfÜgung; Virstellen: Wildwest-Typ. Original Vergréisserung:. 100 × VerfÜgung Fir Persounen gerbils, Wonn mat HS5cLP oder PMSS1 entschlof schwéieren antrum-dominant gastritis mat Équipe vun Rezepter Bodrum an der lamina propria an /oder sub-mucosa vun de Mo. (Sauerdall 1D, 2E, an 2G ). Keng Differenze waren tëscht der virstellen an Mann- Deformatioun vum H. sinn VerfÜgung mat Respekt fir den demagogesch Äntwert entschlof zu gerbils (Sauerdall 1D, 2E an 2 F) observéiert, obwuel all Déiere mat Deformatioun HS5cLP Krankheet inflammation am lénken Regioun zougedréckt hierkommen, dëst just de Fall fir e puer Déieren Krankheet mat HS5cLPΔggt VerfÜgung (Donnéeën net gewisen) war. An eent gerbil mat H. sinn VerfÜgung Deformatioun HS5cLP Krankheet, eng ausgeschwat demagogesch Äntwert observéiert war, an déi méi wéi 65% vun der Fläch vun der lamina propria an submucosa vun der antrum déckst mat demagogesch Zellen communal war, lymphoid Bodrum Method an . lymphoid follicles (Zousätzleche Fichier 1) VerfÜgung Inflammation entschlof vum H. pylori VerfÜgung Deformatioun PMSS1Δggt VerfÜgung an der antrum vun gerbils war manner schwéieren Verglach zu deem zu virstellen Krankheet Déiere gesinn (p VerfÜgung &Si besteet; 0,05) . (Sauerdall 1D, 2G an 2H) entgoe Zell einfach VerfÜgung am Allgemengen VerfÜgung, eng Hausse vun T Zell Zuelen war am lénken (Dorënner 3A, p VerfÜgung &Si besteet; 0,05) observéiert vu Mais mat H. Krankheet sinn VerfÜgung Deformatioun HS5cLP an H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1 op all dräi timepoints. Verglach zu der Krankheet Mais mat sinn VerfÜgung virstellen H., VerfÜgung HS5cLPΔggt engem nidderegen T Zell Äntwert am lénken entschlof um 6 Méint PI (p VerfÜgung &Si besteet; 0.01). H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1Δggt zu engem reduzéierten T Zell Äntwert am lénken Regioun entschlof (p VerfÜgung &Si besteet; 0.01) am Verglach zu virstellen Krankheet Déieren, souwuel 9 Wochen a 6 Méint PI (Dorënner 3A). Ähnlech Resultater goufen am antrum vun Mais observéiert (Donnéeën net gewisen).

• Administration vun trimethoprim-sulphadimidine net verbesseren Heelung vun glandular gastric ulceration zu Päerd omeprazole feieren: eng zoufälleg blinded, Medeziner Etude
• Scannen Elektronen microscopy Observatioune vun de Kéiseker Mo. Blannschlécher, Physaloptera clausa (Spirurida: Physalopteridae)