Imunohistokemični študija udarci spontanih želodčnih polipov

Imunohistokemični študija udarci spontanih želodca polipov
Abstract
Ozadje
želodčni polipi (GP), za katere je značilna luminalno overgrowths štrlijo nad ravnino površino sluznice, ki jih je mogoče opredeliti kot ne-neoplastične in neoplastične lezije. Pri ljudeh, ki so nedavne študije opozorili na maligni potencial nekaterih od teh poškodb. Vendar želodčne polipi so občasni poškodbe pri psih.
Ugotovitve
V tej študiji, prisotnost Helicobacter
spp., Celična proliferativna aktivnost, potencialnih fenotipske spremembe, COX-2 in p53 izražanje v pasje spontano želodca polipi so raziskovali. Izraz teh molekul so preučevali tudi v normalnem pasji želodčne sluznice, da bi pridobili dodatno znanje o pomenu njihove izgube ali prekomerno v želodcu lezij.
Sklepe
normalno izražanje skoraj vseh dejavnikov, ki so ocenili, skupaj z znižana proliferativni dejavnost, jasno kaže, da je spontani želodčni polipi so pri psih ni le redko ugotovitev, ampak tudi benigne narave
Virtualni Tobogani
Virtualni drsnik (e) za ta članek lahko najdete tukaj. http ... //www diagnosticpathol vili diagnomx eu /vs /13000_ 2014_ 166
Ključne besede
Pasja želodčni polipi COX-2 CDX2 Helicobacter spp Ki67 p53 Uvod
želodčni polipi (GPS) štejejo heterogena entiteta široko definirano kot luminalne lezij štrlijo nad ravnino površino sluznice, ki se lahko biološko opredeliti kot ne-neoplastične in neoplastične lezije. Pri ljudeh, dodatna klasifikacija temelji na oceni histogeneze in neoplastične potencial teh poškodb [1]. Zato je med ne-neoplastične epitelijskih želodca polipov, so trije podtipi prepoznani: fundic polipi žleze; hiperplastične polipi (in variante) in nevroendokrini tumorji polipi Fundic žleze (NET).
predstavljajo najpogostejšo vrsto in so histološko značilna cistically dilatacionih žlez fundic tipa s sploščenimi parietalnih celicah, obložene s stopnjo arhitekturne popačenja. Površina obsega foveolar vrsto epitela, ki se lahko pojavijo atrofični [1]. V hiperplastične polipi so navadno opazili v antruma in histološko sestavlja hiperplastični, podolgovati in razvejane foveolae postavljena v bogato vodenični in vneto strome. Cistična dilatacija jame skoraj nespremenljiv prisotna v globljih odsekov in površina je obložena z enojno plast foveolar tipa epitela [1]. Hiperplastični polipi pojavi na ozadju gastritis in njegov razvoj je posledica pretiranega odziva sluznice na poškodbe. Ti so povezani s Helicobacter pylori
(H. pylori
) okužb in nekateri avtorji zaključili, da je H. pylori
izkoreninjenje vzrok popolne regresije ali bistveno zmanjšanje njegove velikosti. Pomembno je, da se zavedamo, da se žarišča displazije ali intramucosal karcinom lahko pojavljajo v teh lezij [1], [2]. Nazadnje so NET ali tako imenovane "karcinoidni" tumorji histološko sestavljen iz gnezd, vrvi, tubulov in grozdov celic, ki pretežno vrinjene med foveolar podlagi, ne da bi motili celoten polip arhitekture [3].
Nasprotju z dokumentirano napredovanje v človeški kolorektalnega raka, združenje zdravnikov z razvojem raka želodca se še ni dokončno ugotovljeno, ampak študije poudarjajo maligni potencial teh poškodb. Zdravniki so redki pri psih in občasne priložnostne ugotovitve med endoskopijo ali Obdukcija preiskav [4]. Občasnih udarci zdravniki so redki in ustrezne literature je malo. Šele pred kratkim Taulescu et al. [5] opisal histopatološke značilnosti 15 poškodb. Glede ne-neoplastične polypoid izrastki, Svetovna zdravstvena organizacija (WHO) za razvrščanje tumorjev pri domačih živalih predstavlja najenostavnejši sistem, kjer sta le dva subjekti priznano: The hiperplastični (regenerativno) in vnetne (benigne limfatičnega) polipi. Prvi so histološko identična človeški istoimenski lezije in zlatega standarda zadnjega je prisotnost normalnega epitela pokriva jedro granulacijskega tkiva z različnimi vnetnih celic prepojena včasih spremlja limfnih agregatov vidnih germinalnih središči [4].
Številne študije poskušajo vključiti nekaj označevalcev za maligno transformacijo in človeške želodčne hiperplastičnih polipov pa so bile izvedene, posebne molekule, ki bi lahko ugotovili, katera polip, opraviti maligno transformacijo še ni bilo mogoče najti. Pri psih, ni veliko znanega v zvezi s tem.
Ciklooksigenaze (COX) je encim, ki omogoča sintezo prostaglandinov in drugih eikozanoidov iz arahidonske kisline. COX-2 izooblika igra pomembno vlogo pri razvoju raka želodca z inhibicijo apoptoze in povečano proliferacijo celic. Čeprav malo študij poročajo povečano izražanje COX-2 v pasjih raka podatki niso na voljo v zvezi s COX-2 izražanja v pasjih želodčnega tkiva [6].
Cellular kinetiko je mislil, da sodeluje pri napredovanju proti raku želodca. Ki-67 protitelesa se uporablja za merjenje indeksa proliferacije določenega tkiva ob predpostavki, da je višje Ki-67 kaže aktivnost tumorskih celic in napoveduje nadaljnje obnašanje posebne patologije [7].
Maligno transformacijo človeškega hiperplastični zdravnikov je povezana z displazija, s p53 igrajo ključno vlogo v procesu [8]. Čezmerno mutiranega p53 je povezana s patološkimi parametrov tumorja agresivnosti in slabo prognozo pri karcinomu človeške želodčne [9].
Po Correa je modela [10], rak človeškega želodca razvija v večstopenjski proces od aktivnim kroničnim gastritisom z intestinalno metaplazijo (IM), displazije, in končno, rak želodca. IM se šteje kot predhodnikov lezijo, ki sestoji iz transdifferentiation želodčne sluznice na črevesno fenotipa, označen z aberantno ekspresije homeobox transkripcijskega faktorja CDX2 [11]. Izražanje CDX2 v pasjih zdravniki še nikoli ni bila značilna.
Kot občasni poškodbe, molekularne lastnosti in virusne potencial udarci zdravnikov ostaja področje zanimanja. Namen te študije je opisati nekaj molekularnih značilnosti teh poškodb, da bi bolje razumeli njihove biološke lastnosti. Poleg tega je izraz teh molekul v normalnem želodčne sluznice (NGM) raziskovali oceniti pomen njihove izgube ali prekomerno v želodcu lezij
Živali &.; METODE
Štiri običajne pasje antralnih želodčne sluznice osebki in devet udarci antralnih zdravniki (slika 1A), je prejel med letoma 2007 in 2013, so bili izbrani iz arhiva Laboratorija za Veterinary Pathology, ICBAS-UP (Portugalska) in patologijo Oddelek za FVM Cluj-Napoca (Romunija). Tkiva so bile določene v 10% zastalega formalinu in-parafin vgrajeni. Serijski zaporednih oddelki 3 um-debele so bile narejene, eno za rutinsko histološko diagnozo in drugih za Imunohistokemične študije. Slika 1 Morfološke in imunohistokemičnim značilnosti pasji želodčnih polipov. (A) Bruto vidik; (B) hiperplastični polip; (C) vnetnega polip; (D) (e) H. pylori
immunoexpression. (F) COX-2 immunoexpression; (G) Ki-67 immunoexpression; (H) p53 immunoexpression. Vložek: intratubular seminom (+ kontrola) (I) CDX2 immunoexpression. Vložek: normalno črevo (+ kontrola). Morfološke in Imunohistokemične značilnosti pasji želodčnih polipov. (A) Bruto vidik pilorično želodčne sluznice, ki prikazuje samotni polip (razmeji območje) (primer 9); (B) in (C) Mikroskopski pregled hematoksilinom in-eozin obarvajo diapozitive, ki kažejo na hiperplastični polip (primer 4) in vnetne polip (primer 8). Bar = 500 mikrometrov in 100 mikrometrov, oz. (D) fotomikrograf dokazovanje pozitivnega H. pylori
izraz v hiperplastični polip (primer 2). Bar = 200 mikrometrov. (E) Detajl prejšnjem primeru izpostavlja velike količine Helicobacter
spp. organizmi v notranjosti želodčnih žlez. Bar = 10 um. (F) fotomikrograf razkriva močan in difuzno COX-2, izraz v razvejane foveolar epitela v hiperplastični polip (primer 1). Bar = 200 mikrometrov. Razširjenje predstavitvijo podrobnosti izraza COX-2 v foveolar epitela; (G) imunskim barvanjem Ki-67 v hiperplastični epitela (primer 3: 32,1%). Bar = 200 mikrometrov. Vložek, ki prikazuje podrobnosti KI-67 izražanja v ožine in v bazo žlez. (H) fotomikrograf razkrivajo negativen imunohistokemičnim reaktivnost p53 v hiperplastični polip (primer 2). Bar = 200 mikrometrov. Tkivo iz pasjega intratubular seminom je bila uporabljena kot pozitivna kontrola za p53 (vložkom). (I) Negativno CDX2 izraz v hiperplastični polip (primer 1). Bar = 200 mikrometrov. Tkivo iz pasjega normalno črevesa je bila uporabljena kot pozitivna kontrola za CDX2 (vložkom). Imunoperoksidazni-diaminobenzidine lazura z Mayer hematoksilinom za nasprotno (D-I).
Oddelki so neodvisno pregledali trije patologi. Normalno tkiva so obravnavana kot taka v skladu s Prachasilpchain et al. [10] in so bili negativni prisotnosti Helicobacter
spp. (Potrjeno z modificiranim Giemsu in anti-H. Pylori
imunohistokemično). Zdravniki so bili razvrščeni po klasifikaciji Svetovne zdravstvene organizacije za domače živali diagnostična merila [3].
Za imunohistokemičnim študiji je bila uporabljena plošča protiteles, specifičnih za več antigenov (tabela 1). Novolink Max-Polymer sistem za zaznavanje (Novocastra) je bila uporabljena v skladu s proizvajalčevimi protiteles instructions.Table 1, ki se uporabljajo za pasje želodčnih tkiva imunohistokemija
Marker
Clone
Dobavitelj
redčenje
antigena razkrinkanje
inkubacijska doba
Pozitivna kontrola
H. pylori
poliklonskimi
Zytomed, Deutschland
1: 200
CB /PC
ON
humani želodčne sluznice s H. pylori
COX-2
SP21
NeoMarkers, ZDA
1:75
CB /PC
ON
Pasja tumor dojke
p53
Anti-p53
Novocastra, UK
1: 400
CB /PC
ON
pasje intratubular seminom
CDX2
AMT28
Novocastra, UK
1: 300
CB /PC
ON
Pasja normalno črevesja
KI-67
MIB-1
Dako, Danska
01:50
CB /PC
ON
Pasja visoke stopnje na limfom
CB
citratnega pufra; štedilnik tlak PC.
NA
čez noč.
odkrivanje Helicobacter
spp. je bila ocenjena kot: negativno, brez organizmov, ali je pozitiven, prisotnost Helicobacter
spp. Bakterijska kolonizacija gostota je količinsko: +
, malo (< 10/400 ×); ++
, Zmerna (10-50 /400 ×) in +++, veliko število organizmov (>, 50/400 ×). Bakterije lokacija je bila zabeležena: 0 = odsoten; 1 = sluznice površine in želodčnih jame; 2 = 1 + lumen želodčnih žlez (400 ×) [12]. COX-2 immunoexpression je dosegel za odstotek označenih celic (< 25%, 25-50%, 51-75%; > 75%) in intenzivnost označevanje (0, negativna; +, šibka; ++ zmerno; +++, močna). Indeks označevanje Ki-67 je bil definiran kot odstotek pozitivnih jeder s štetjem vsaj 1000 jedra na izbranih področjih (x 400) določi [8]. Poleg tega je bil radioinkorporacijo ocenili glede na želodčne žleze razdeljenih v tri cone: cona 1 (želodčni pit); zone 2 (ožine /proliferacije cona) in cona 3 (žleza baza) [13]. p53 in CDX2 radioinkorporacijo so bili opredeljeni kot pozitiven, ko je bil ločen jedrsko obarvanje priznana v vsaj 10% celic [8], [14].
Ugotovitve
na voljo kliničnih podatkov, histološka klasifikacija lezij in glavna imunohistokemijske rezultati, glede na merila, predlagana za vsak protiteles, so povzeti v tabeli 2.Table 2 na voljo podatke o živalih, histološki klasifikacijo pasji želodčnega tkiva in glavni imunohistokemičnim ugotovitev
zadevi
Pasma

Spol /starost (let)
histološke diagnoze
Helicobacter
spp.
COX-2
KI-67 (%)

p53
CDX2
SE
DG
1
Rottweiler
M /12
hiperplastični polip
+++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
36,12,3
- -
2
Irish Setter
F /12
hiperplastični polyp
+++2
>75%/+++
>75%/+++
31,42,3
-
-
3
Poodle
F/12
Hyperplastic polip
+++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
32,12,3
- -
4
argentinski mastif
F /9
hiperplastični polip
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
28,92 3 -
-
5
Rottweiler
F /14
hiperplastični polip
2
> 75% /+++
> 75% /+++
30,92,3
- -
6
Mešani pasma
F /16
hiperplastični polyp
++2
>75%/+++
>75%/+++
16,72,3
-
-
7
Poodle
M/13
Inflammatory polip
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
31,52,3
- -
8
nemški ovčar
M /9
vnetna polip
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
10,82
- -
9
Boxer
M /10
hiperplastični polip
1
> 75% /+++
> 75% /+++
4,62
- -
10
Mešani pasma
M /2
NGM
0
> 75% /++ +
> 75% /+
18,32
- -
11
koder cross
F/15
NGM
0
>75%/+++
>75%/++
23,62
-
-
12
Boxer
M/4
NGM
0
>75%/+++
>75%/+
15,62
-
-
13
Mixed vzgojiti
M /8
NGM
0
> 75% /+++
> 75% /++
22,82 -
-
M
moški, F
ženska
COX-2. SE, površina epitela; DG, globlje žleze. ≫ 75% immunopositive celic, + šibka, ++ zmerna, +++ močna intenzivnost
Helicobacter
spp .: + nekaj.; ++ Zmerno število; +++ Velikega števila organizmov. Bakterije lokacija 0, odsoten; 1 = na površino sluznice in v želodcu jam; 2 = 1+ lumen iz želodčnih žlez; KI-67: območje 2, ožine in cona 3, žleze osnove; p53 in CDX2: -., negativni
Od devetih GP poškodb, sedem so razvrščene kot hiperplastičnih polipov (slika 1B) in dve kot vnetne polipov (slika 1C). Ugotovili niso nobenih znakov displazije. Vsi zdravniki pokazala Helicobacter
spp. organizmov (Slika 1D), prednostno se nahaja v lumnu želodca žlez (slika 1E) (tabela 2).
Razlike na COX-2 immunoexpression med NGM in zdravniki so bili minimalni (tabela 2). Obe skupini sta predstavljeni močno COX-2 ekspresije več kot 75% želodčne površno epitela. Globoko so želodčne žleze NGM pokazala šibko do zmerno COX-2, izraz, medtem ko so žleze zdravniki so pokazali močan COX-2, izraz (slika 1F). Kljub temu, zdravniki predstavili razpršeno COX-2 kopičenje citoplazme v epitelnih celic.
Proliferacije indeks zdravnikov je bila višja (srednja vrednost 24,8%) kot NGM (srednja vrednost 20,0%). Ki-67 signal, je bila odkrita šele v proliferativno predelu NGM medtem ko je v GPS, je to označevanje pogosto doseže območje 3 (slika 1 G).
Tako p53 in CDX2 imunološki je bil v vseh primerih pasje NGM in zdravniki v celoti negativen (Slika . 1 H in I)
razpravo & sklep
študije o COX-2 v človeški NGM poročalo o pomanjkanju [15], [16], šibka [17] ali splošni izraz [18]. Te razlike so morda povezani s primarnim protitelesom (monoklonskega ali poliklonskega) in sistem točkovanja sprejetim za ocenjevanje radioinkorporacijo. Dosledno izražanje COX-2 v NGM lahko razložimo z dvema hipotezah: (1) COX-2 je konstitutivno izražen v pasjem želodčne sluznice; ali (2) Nedavne študije so pokazale, da je H. pylori PODJETJA
inducirano COX-2 ekspresije v človeške želodčne sluznice in McCarthyja et al. [19] ugotovila, da je COX-2 pri antralnih sluznice skrajša, vendar se ne izloča v epitela po uspešno izkoreninjenje H. pylori
. Sung sod. [15] prav tako pokazala, da čeprav izkoreninjenje H. pylori
, je bilo le skromno znižanje COX-2 v želodcu epitela, čeprav je COX-2 pri lamine proprie občutno zmanjša. Kljub temu ti psi pa so trenutno negativen Helicobacter
spp., Ni mogoče izključiti prejšnje okužbe s teh organizmov, ki bi lahko upravičila vztrajno izražanje COX-2.
Čezmerno COX-2 v globlje žleze GPS je mogoče razložiti s prisotnostjo različnih količino Helicobacter
organizmov v tem želodca predelu, ki je podobno kot tisto, kar se zgodi pri ljudeh s H. pylori, lahko
privede do povečanega izražanja tega encima s proizvodnjo od vnetnih citokinov [15] - [17].
po definiciji GP je hiperproliferacijske od želodčne sluznice, s čimer je njena pojav nujno povezana s povečanjem prometa celic in mitotične aktivnost. Yao sod. poročali proliferativni indeks 22,2% v človeške hiperplastičnih zdravnike. Nekoliko razlika v odstotkih pridobljenih v obeh študijah se lahko nanašajo na zadevne vrste (človeških vs pes) in /ali z velikostjo vzorca (22 v primerjavi z 9 primerov). Poleg tega se je povečala širjenje želodčne sluznice, povezanih s H. pylori
[20], saj je okužba kratko poveča apoptozo površine in proliferacije celic, nato pa razširi proliferativni območje za globlje v žleze, verjetno kot izravnalni odgovor [21] .
proliferacije območje v antralnih želodcu je v spodnji tretjini tipičnih žleze enot [21], v bližini dnu želodca jame, ki predstavlja mesto celično obnovo. To je zelo kratek področje, s pičlimi ali brez mitozi, je skorajda ni več v neaktivnem želodčne sluznice. V človeški NGM, Ki-67 signal je prisoten samo v proliferativno predelu [13], kot je na primer v naši raziskavi (tabela 2). Vendar pa je v splošnem zdravniku, ta oznaka pogosto doseže območje 3 (slika 1G), verjetno zato, ker v ožine so celice, ki se nenehno obnavljajo druge, ki se selijo obojestransko, do površino sluznice in navzdol do baze žleze, saj se diferencirajo v zreli celice [21].
Carrasco et al. [22] opisano p53-pozitivno barvanje pri približno 94,1% od pasjih želodčnega karcinoma. Naši rezultati krepijo prejšnje človeške študije, v kateri je bila p53 priznane le v (pred) neoplastične komponent [9], ne pa non-tumorskemu želodčne sluznice [18] ali zdravniki [8]. Poleg tega Guo et al. [2] je dalo sodelovanje izražanje obeh CA19-9 in p53 omejeno na majhna območja atipičnih epitelnih celic, ocenjenih kot adenokarcinom, prisotne v človeškem hiperplastičnih foveolar polipa. Poleg tega je indeks KI-67 višja v teh maligni žarišč v primerjavi z obdani želodčne sluznice.
Doster et al. [23] opisano CDX2 izražanje v žarišč metaplastic sprememb, in sicer Kelih celic, prisoten v vseh primerih pasje želodčnih adenokarcinoma vključeni v svoji študiji. IM je nenavaden pojav pri psih in do sedaj ni opisa v zvezi z njenim spontani pojav. Pri človeku, ki je UI običajno povzročena z neprestanim draženje želodčne sluznice in H. pylori
infekcija ostaja pomemben dejavnik sprožitev. Molekularne poti, ki sodelujejo pri udarci ureditvi in ​​delovanju CDX2 niso znani. Vendar, ker je izražanje istega transkripcijski faktor povezan z vzdrževanjem /razvoj črevesne fenotipa v obeh ljudeh in psih, hipoteza, da se CDX2 podobno urejeno v obeh vrstah verjeten (podatki niso objavljeni).
Helicobacter
spp. prisotna v primeru psov zdravniki lahko razvijejo različne strategije kolonizacije, okužbe in patogenosti od tistih, ki jih H. pylori
izvaja pri ljudeh, sčasoma upravičuje redkost UI v želodcu psa. Zato lahko poti, ki so odgovorni za indukcijo CDX2 izražanja pri psih razlikujejo od tistih, ki so že opisani v ljudeh. Nadaljnje raziskave so potrebne za potrditev te hipoteze.
Čeprav nekatere patološke značilnosti polipi v korelaciji s tveganjem za razvoj raka pri ljudeh, pri psih je še vedno ni mogoče določiti, katere poškodbe bodo napreduje v raka. Skratka, ta študija kaže, da so udarci občasnih zdravniki redko ugotovitev in benigne narave.
Deklaracij
priznanj
I. Amorim (SFRH /BD /76237/2011) priznava, FCT, Portugalska fundacija za znanost in tehnologijo (FCT), za finančno podporo (PTDC /CVT /117610/2010). IPATIMUP je izredni Laboratorij za portugalskega ministrstva za znanost, tehnologijo in visoko šolstvo, ki je delno podprt s FCT. Ta dokument je bil objavljen pod okviru Evropskega socialnega sklada, razvoj človeških virov Operativni program 2007-2013 (POSDRU /159 /1.5 /S /136893).
Avtorji "prvotna predložiti datoteke za slike
Spodaj so povezave do prvotni avtorjev prenosov datotek za slike. Izvirna datoteka 13000_2014_166_MOESM1_ESM.gif avtorjev za sliko 1 Konkurenca interesov
nobeden od avtorjev tega prispevka finančnega ali osebnega odnosa z drugimi ljudmi ali organizacij, ki bi neprimerno vplivajo ali pristranskosti v vsebino članka.

• Makroskopski obseg želodčne sluznice atrofije: povečana dejavnik tveganja za požiralnika ploščatocelični karcinom v Japan
• Dejavniki tveganja za globino infiltracije v diferenciranih depresivni zgodnjega raka želodca: predhodno dejavniki analysis