Иммуногистохимическое исследование собачьих спонтанных желудка полипы

Иммуногистохимическое исследование собачьих спонтанных желудка полипов
Аннотация
Справочная информация
Желудочные полипы (GP) характеризуются просветными зарослей, выступающими над плоскостью поверхности слизистой оболочки, которые могут быть классифицированы как неопухолевых и опухолевых поражений. У людей, недавние исследования привлекли внимание к злокачественным потенциалом некоторых из этих поражений. Тем не менее, желудочные полипы необычные поражения у собак.
Выводы
В данном исследовании наличие Helicobacter
SPP., Клеточная пролиферативная активность, потенциальные изменения фенотипа, COX-2 и экспрессия р53 в собачьей самопроизвольного желудка полипы были исследованы. Экспрессия этих молекул также была изучена в нормальной собачьей слизистой оболочки желудка, чтобы получить дополнительные знания о значении их потери или избыточной экспрессии в желудочных поражений.
Выводы
нормального выражения почти всех факторов оценивается, наряду с приведенная пролиферативная активность сильно наводит на мысль, что у собак, спонтанные желудка полипы не только редкая находка, но и доброкачественной природы
Virtual Слайды
виртуальный слайд (ы) для этой статьи можно найти здесь:. HTTP :... //WWW diagnosticpathol логии diagnomx ес /против /13000_ 2014_ 166
Ключевые слова,
Canine желудочные полипы ЦОГ-2 CDX2 хеликобактер SPP Ki67 p53 Введение
желудочные полипы (ВОП) считаются гетерогенным субъект в широком смысле как просветными поражениями, выступающими над плоскостью поверхности слизистой оболочки, которые могут быть классифицированы как биологически неопухолевых и опухолевых поражений. В организме человека, дальнейшая классификация опирается на оценку гистогенезе и опухолевый потенциал этих [1] поражений. Соответственно, среди неопухолевых эпителиальных желудка полипов, три подтипа признаны: фундальный железы полипы; гиперпластические полипы (и варианты) и нейроэндокринные опухоли (NET).
фундальный железы Полипы представляют собой наиболее распространенный тип, и они гистологически характеризуются cistically дилатационной желез фундальный типа, выстланных уплощенными париетальных клеток со степенью архитектурного искажения. Поверхность включает foveolar типа эпителий, которые могут появиться атрофические [1]. В гиперпластические полипы, как правило, наблюдается в антральном и гистологически состоят в гиперпластических, удлиненные и ветвление foveolae расположен в обильной отечной и воспаленной стромы. Кистозный дилатация ямы практически неизменным присутствует в более глубоких участках и поверхность выстлана однослойной из foveolar типа эпителия [1]. Гиперпластическими полипами происходят на фоне гастрита и его развитие является следствием преувеличенной реакции слизистой на повреждение. Они связаны с Helicobacter Pylori
(H. Pylori
) инфекции и пришли к выводу, что некоторые авторы H. Pylori
искоренение причин полная регрессия или значительное уменьшение его размера. Важно иметь в виду, что очаги дисплазии или intramucosal карциномы можно встретить в этих поражений [1], [2]. И, наконец, NET или так называемые "карциноид" опухоли гистологически состоит из гнезд, шнуров, трубочек и кластеров клеток, которые в основном расположенных между foveolar основе, не нарушая общую архитектуру полипов [3].
Вопреки задокументированы прогрессии колоректального рака человека, ассоциация врачей общей практики с развитием рака желудка до сих пор полностью не установлены, но исследования подчеркивают злокачественный потенциал этих поражений. Врачи общей практики являются редкостью у собак и случайные случайные находки во время проведения эндоскопии или посмертных экспертиз [4]. Эпизодические собачьи врачи общей практики являются редкими и соответствующая литература мало. Лишь недавно Taulescu и др. [5] описал гистопатологические особенности 15 поражений. Что касается неопухолевых полиповидных наростов, Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) для классификации опухолей у домашних животных представляет собой простейшую схему, где только два субъекта признаются: гиперпластический (регенеративная) и воспалительные (доброкачественные лимфоидные) полипы. Первые гистологически идентичны одноименным поражения человека и золотой стандарт более поздняя версия наличие нормального эпителия, покрывающей ядро ​​грануляционной ткани, пропитанную различными воспалительными клетками, иногда сопровождается лимфоидных агрегатов с известными зародышевых центров [4].
несколько исследований пытаются привлечь некоторые маркеры для злокачественной трансформации в желудочном гиперпластическими полипами человека были выполнены, однако, конкретную молекулу, которая может определить, какие полип подвергнется злокачественной трансформации до сих пор не найдено. У собаки, не так много известно с этой связи.
Циклооксигеназа (ЦОГ) представляет собой фермент, который позволяет синтез простагландинов и других эйкозаноидов из арахидоновой кислоты. СОХ-2 изоформы играет важную роль в развитии рака желудка путем апоптоза ингибирование и усилению пролиферации клеток. Хотя несколько исследований сообщили о повышенную экспрессию ЦОГ-2 в рака у собак нет данных о наличии экспрессии ЦОГ-2 в собачьих желудка тканей [6].
Клеточной кинетики, как полагают, участвует в прогрессии к раку желудка. Ki-67 антитела используют для измерения индекса пролиферации конкретной ткани, предполагающей, что выше, Ki-67 показывает активность опухолевых клеток и предсказывает дальнейшее поведение специфической патологии [7].
Малигнизации гиперпластических ВОП человека ассоциируется с дисплазия с р53 играет решающую роль в этом процессе [8]. Избыточная экспрессия мутантного р53 коррелирует с патологическими параметрами агрессивности опухоли и неблагоприятным прогнозом при карциноме желудка человека [9].
Согласно модели Корреа [10], рак желудка человека развивается в процессе многоступенчатой ​​от хронического активного гастрита с кишечной метаплазией (IM), дисплазия, и, наконец, рак желудка. И.М. рассматривается как поражение предшественника, состоящий из трансдифференцировкой слизистой оболочки желудка к кишечным фенотипом, характеризующееся аномальным экспрессию фактора транскрипции Гомеобоксный CDX2 [11]. Выражение CDX2 в собачьих врачей общей практики никогда не были охарактеризованы.
Как необычные поражения, молекулярные свойства и опухолевый потенциал собачьих врачей общей практики остается сферой интересов. Целью данного исследования является описание некоторых молекулярных особенностей этих поражений для того, чтобы лучше понять их биологическое поведение. Кроме того, экспрессия этих молекул в нормальной слизистой оболочке желудка (NGM) исследовали, чтобы оценить значимость их потери или избыточной экспрессии в желудочных поражений
Животные и усилитель. МЕТОДЫ
Четыре нормальные собачьи антральных желудка образцы слизистой оболочки и девять собачьих антральных врачей общей практики (рис 1А), полученные в период с 2007 по 2013 год, были отобраны из архива лаборатории ветеринарной патологии, ICBAS-UP (Португалия) и патологоанатомического отделения МКО , Клуж-Напока (Румыния). Ткани фиксировали в 10% забуференном формалине и залитых парафином. Последовательные последовательные секции 3 мкм толщиной были сделаны, один для последующего гистологического диагноза и других для иммуногистохимических исследований. Рисунок 1 Морфологические и иммуногистохимические особенности собачьего желудка полипов. (A) Gross аспект; (Б) гиперпластический полип; (C) Воспалительный полип; (D) (E) H. Pylori
иммуноэкспрессии. (F) ЦОГ-2 иммуноэкспрессии; (G) Ki-67 иммуноэкспрессии; (H) p53 иммуноэкспрессии. Врезка: внутриканального семиномы (+ контроль) (I) CDX2 иммуноэкспрессии. Врезка: нормальный кишечник (+ управление). Морфологические и иммуногистохимические особенности собачьего желудка полипов. (A) Брутто аспект привратника слизистой оболочки желудка, показывая одиночное полип (разделителями область) (пример 9); (В) и (С) Микроскопическое исследование гематоксилином и эозином окрашенных слайдов, раскрывающих гиперпластического полипа (случай 4) и воспалительный полип (случай 8). Бар = 500 мкм и 100 мкм, соответственно. (D) Микрофотография демонстрирует положительный результат H. Pylori
выражение в гиперпластический полип (случай 2). Бар = 200 мкм. (Е) Деталь предыдущем случае выделяя большое количество хеликобактером
SPP. организмов внутри желудочных желез. Бар = 10 мкм. (F) Микрофотография выявления сильной и диффузные экспрессию СОХ-2 в разветвленного foveolar эпителии гиперпластический полип (случай 1). Бар = 200 мкм. Вставки представляя деталь экспрессии СОХ-2 в foveolar эпителием; (G) Иммуноокрашивание Ki-67 в гиперпластический эпителий (случай 3: 32,1%). Бар = 200 мкм. Врезка, показывающий детали экспрессии Ki-67 в перешейке и в базе желез. (Н) Микрофотография обнажив отрицательную иммуногистохимическое реактивность р53 в гиперпластических полипов (случай 2). Бар = 200 мкм. Ткань из собачьей внутриканального семиномах использовался в качестве положительного контроля для p53 (вставка). (I) Отрицательное выражение CDX2 в гиперпластический полип (1 случай). Бар = 200 мкм. Ткань из собачьей нормальной кишки использовали в качестве положительного контроля для CDX2 (вставка). Иммунопероксидазной-диаминобензидин пятно гематоксилин контрастирующая Майера (D-I).
Срезы независимо друг от друга исследовали тремя патологоанатомов. Нормальные ткани считались таковыми в соответствии с Prachasilpchain и соавт. [10] и были отрицательными на наличие Helicobacter
SPP. (Подтверждено модифицированным красителем Гимза и анти-H. Пилорусов
иммуногистохимии). ВОП были классифицированы в соответствии с классификацией ВОЗ для домашних животных диагностических критериев [3]. Китай для иммуногистохимического исследования, была применена панель антител, специфичных для антигенов нескольких (таблица 1). Система обнаружения Novolink Max-Полимер (Novocastra) использовали в соответствии с instructions.Table 1 антител производителя используемых для собачьего желудка тканей иммуногистохимии
Маркер

Клон

Поставщик

Разбавление

Antigen разоблачительной

Инкубационный период

Положительный контроль

H. Pylori

Polyclonal
Zytomed, Deutschland
1: 200
CB /PC маршрут на слизистой оболочке желудка человека с хеликобактерной

ЦОГ-2
SP21
NeoMarkers, США
1:75 <бр> CB /PC маршрут на собачьих опухоли молочных желез
р53
Анти-p53
Novocastra, Великобритания
1: 400
CB /PC маршрут на Canine внутриканального семиномы
CDX2
AMT28
Novocastra, Великобритания
1: 300
CB /PC маршрут на собачьих нормальный кишечник
Ki-67
MIB-1
Дако, Дания
1:50
CB /PC маршрут на собачьих высокий класс лимфому
CB
цитратный буфер; PC скороварка. Маршрут на одну ночь.
Обнаружения Helicobacter
SPP. был оценен как: отрицательный, без каких-либо организмов, или положительный, наличие Helicobacter
SPP. Колонизация Бактериальная плотность была количественно: +
, несколько (&л; 10/400 ×); ++
, Умеренная (10-50 /400 ×) и +++, большое количество организмов (>, 50/400 ×). Бактерии местоположение было записано: 0 = отсутствует; 1 = поверхности слизистой оболочки желудка и ямы; 2 = 1 + Просвет желудочных желез (400 ×) [12]. ЦОГ-2 иммуноэкспрессии был забит за процент меченых клеток (&л; 25%; 25-50%; 51-75%; > 75%) и интенсивность маркировки (0, отрицательное значение; +, слабый; ++, умеренный; +++, сильный). Индекс маркировки Ки-67 был определен как процент положительных ядер определяется путем подсчета ядер не менее 1000 в выбранных полях (× 400) [8]. Кроме того, иммунореактивность оценивали с учетом желудочных желез, разделенных на три зоны: Зона 1 (желудочный ямы); зона 2 (перешеек /пролиферативная зона) и зона 3 (железы основание) [13]. P53 и CDX2 иммунореактивности были определены как положительные, когда отчетливый ядерное окрашивание было признано, по меньшей мере, 10% клеток [8], [14].
Результаты
имеющихся клинических данных, гистологические классификации поражений и основной иммуногистохимических результаты, принимая во внимание критерии, предложенные для каждого антитела, приведены в таблице 2.Table 2 Имеющиеся данные о животных, гистологическую классификацию собачьего желудка тканей и основного иммуногистохимического выводов
чехол для
Порода
<бр> Пол /Возраст (лет)

гистологический диагноз

хеликобактер
SPP.

ЦОГ-2

KI-67 (%)

p53

CDX2

SE

DG

1
Ротвейлер
M /12
Гиперпластический полип
+++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
36,12,3
-
-
2 <бр> Ирландский сеттер
F /12
Гиперпластический polyp
+++2
>75%/+++
>75%/+++
31,42,3
-
-
3
Poodle
F/12
Hyperplastic полип
+++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
32,12,3
-
-
4
Аргентинский мастиф
F /9
Гиперпластический полип
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
28,92 , 3
- Форум - страница 5 Ротвейлер
F /14
Гиперпластический полип
+2
> 75% /+++
> 75% /+++
30,92,3
-
-
6
Смешанная порода
F /16
Гиперпластический polyp
++2
>75%/+++
>75%/+++
16,72,3
-
-
7
Poodle
M/13
Inflammatory полип
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
31,52,3
-
-
8 <бр> немецкая овчарка
M /9
воспалительный полип
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
10,82
- Новости -
9
Boxer
M /10
Гиперпластический полип
+1
> 75% /+++
> 75% /+++
4,62
-
-
10
смешанной породы
M /2
NGM
0
> 75% /++ +
> 75% /+ 18,32

-
-
11
Пудель cross
F/15
NGM
0
>75%/+++
>75%/++
23,62
-
-
12
Boxer
M/4
NGM
0
>75%/+++
>75%/+
15,62
-
-
13
Mixed разводить
M /8
NGM
0
> 75% /+++
> 75% /++
22,82
- Форум -
M
мужчина, F
женская
ЦОГ-2:. SE, поверхностный эпителий; DG, более глубокие железы. > 75% иммуноположительных клеток, + слабая, умеренная ++, +++ сильная интенсивность
хеликобактер
SPP .: + немногие. ++ Умеренное количество; +++ Большое количество организмов. Бактерии местоположение 0, отсутствует; 1 = на поверхности слизистой оболочки и в желудочных впадинах; 2 = 1+ просвете желез желудка; KI-67: зона 2, перешеек и зона 3, железы основание; P53 и CDX2: -., отрицательный
Из девяти GP поражений, семь были классифицированы как гиперпластические полипы (рис 1b) и два как воспалительные полипы (рис 1C). Не было выявлено никаких признаков дисплазии. Все врачи общей практики выявили Helicobacter
SPP. организмов (рис 1D), предпочтительно расположенный в просвет желудочных желез (рис 1д) (таблица 2).
Различия на ЦОГ-2 иммуноэкспрессии между NGM и ВОП были минимальными (таблица 2). Обе группы представили сильную экспрессию ЦОГ-2 в более чем 75% желудка поверхностного эпителия. Глубоко, желудочные железы NGM показали слабую до умеренной экспрессии СОХ-2, в то время как железы ВОП показали сильную СОХ-2 выражение (рис 1F). Тем не менее, врачи общей практики представлены диффузное ЦОГ-2 накопление цитоплазмы в эпителиальных клетках.
Пролиферативной индекс ВОП был выше (среднее значение 24,8%), чем NGM (среднее значение 20,0%). Ki-67 был зарегистрирован сигнал только в пролиферативной отсеке NGM, тогда как в ВОП, эта маркировка часто достигается зону 3 (рис 1G).
Оба P53 и CDX2 иммунологического был полностью отрицательным во всех случаях собачьей NGM и врачей общей практики (рис . 1H и I)
Обсуждение &Amp; Вывод
исследований в отношении ЦОГ-2 в человеческом NGM сообщили отсутствие [15], [16], слабое [17] или обобщенное выражение [18]. Эти расхождения, возможно, связаны с первичным антителом (поликлональным или моноклональным) и к балльной системе, принятой для оценки иммунореактивности. Последовательное выражение COX-2 в NGM можно объяснить двумя гипотезами: (1) COX-2 конститутивно экспрессируется в собачьей слизистой оболочки желудка; или (2), недавние исследования показали, что H. Pylori
индуцированной экспрессии СОХ-2 в слизистой оболочке желудка человека и McCarthy и др. [19] пришли к выводу, что экспрессия ЦОГ-2 в антральном слизистой оболочки снижается, но не устраняется в эпителии после успешной эрадикации H. Pylori
. Sung и др. [15] также показали, что, хотя эрадикации H. Pylori
, есть только умеренное снижение ЦОГ-2 в эпителии желудка, хотя экспрессия ЦОГ-2 в собственной пластинке слизистой оболочки была заметно снижена. Несмотря на эти собаки в настоящее время является негативным для Helicobacter
SPP., Не представляется возможным, чтобы исключить предыдущую инфекцию этими организмами, которые могли бы оправдать постоянное выражение COX-2.
Сверхэкспрессией СОХ-2 в чем глубже железы врачей общей практики может быть объяснено наличием различной количества Helicobacter
организмов в этом желудочном отделении, которое, подобно тому, что происходит у людей с H. Pylori,
может привести к увеличению экспрессии этого фермента за счет производства провоспалительных цитокинов [15] - [17]. Ру по определению, GP является гиперпролиферация слизистой оболочки желудка, таким образом, его начало обязательно связано с ростом оборота клеток и митотической активности. Яо и др. сообщили пролиферативный индекс 22,2% в гиперпластических врачей общей практики человека. Немного разница в процентах, полученные в обоих исследованиях, могут быть связаны с рассматриваемых видов (человек против собаки) и /или с размером выборки (22 против 9 случаев). Кроме того, усиленное разрастание слизистой оболочки желудка была связана с H. Pylori
[20], так как инфекция кратко увеличивает апоптоз поверхности и пролиферативных клеток, а затем расширяет пролиферативную зону глубже в железе, по-видимому, как компенсаторная реакция [21] .
пролиферативная зона в антральном отделе желудка находится в нижней трети типичных желез блоков [21], близко к основанию желудочных впадинах, составляющий участок клеточного обновления. Это очень короткий район, с скудными или вообще без митозов, почти неясный в неактивном слизистой оболочки желудка. В человеческом NGM, Ki-67 присутствует сигнал только в пролиферативной отделении [13] в качестве таковых в нашем исследовании (таблица 2). Тем не менее, в ВОП, эта маркировка часто достигается зона 3 (рис 1G), предположительно потому, что в перешейке есть клетки, которые постоянно регенерировать другие, которые мигрируют двунаправленным, вплоть до поверхности слизистых оболочек и вниз к основанию железы, так как они дифференцируются в зрелые клетки [21].
Карраско и др. [22] описал p53-положительное окрашивание приблизительно 94,1% собачьих желудка карцином. Наши результаты подтверждают предыдущие исследования человека, в которых р53 распознается только в (пре) неопластических компонентов [9], а не неопухолевые слизистой оболочки желудка [18] или ВОП [8]. Кроме того, Го и др. [2] обнаружили коэкспрессии обоих CA19-9 и р53, ограниченный небольшими участками атипичных эпителиальных клеток, оценивается как аденокарцинома, присутствующих в человеческом гиперпластический foveolar полипа. Кроме того, индекс Ki-67 был выше у этих очагов злокачественного по сравнению с окруженной слизистой оболочке желудка.
Достер и соавт. [23] описал экспрессию CDX2 в очагах метапластического изменения, а именно бокаловидных клеток, присутствующих во всех случаях собачьего желудка аденокарциномы, включенных в их исследовании. IM является необычным явлением в собаки и до настоящего времени нет описания относительно его спонтанного возникновения. В организме человека, IM обычно индуцируется непрерывным раздражение слизистой оболочки желудка и антихеликобактерную
инфекция остается важным пусковым фактором. Молекулярные пути, участвующие в собачьей регуляции и функции CDX2 неизвестны. Тем не менее, так как выражение одного и того же фактора транскрипции, связан с поддержанием /развитием кишечного фенотипа у человека и у собак, гипотеза, что CDX2 подобным же образом регулируется в обоих видов является правдоподобным (неопубликованные данные).
Хеликобактер
SPP. присутствует в случаях собачьих врачей общей практики могут разработать различные стратегии колонизации, инфекции и патогенности от тех, практикуется H. Pylori
в организме человека, в конце концов, оправдывая редкость обмена мгновенными сообщениями в желудке собаки. Таким образом, проводящие пути, ответственные за индукцию экспрессии CDX2 у собак, могут отличаться от тех, которые уже описаны в организме человека. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы подтвердить эту гипотезу.
Хотя некоторые патологические признаки полипов коррелирует с риском развития рака у людей, у собак, это по-прежнему не представляется возможным определить, какие поражения будет прогрессировать к раку. В заключение, данное исследование показало, что собачьи спорадические врачи общей практики являются редкая находка и доброкачественной природы.
Декларациях
подтверждениях
I. Аморим (SFRH /BD /76237/2011) признает ПКТ, португальскую Фонд по науке и технике (ПКТ) за финансовую поддержку (PTDC /CVT /117610/2010). IPATIMUP является адъюнкт лаборатории Министерства португальским науки, техники и высшего образования и частично поддержана ПКТ. Эта статья была опубликована под рамках Европейского социального фонда, оперативная программа развития людских ресурсов (2007-2013 POSDRU /159 /1.5 /S /136893).
Авторы 'оригинал представлены файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки на оригинал авторов представлены файлы для изображений. Исходный файл 13000_2014_166_MOESM1_ESM.gif авторов для фигурного 1 Конкурирующие интересы
Ни один из авторов данной статьи не имеет финансовые или личные отношения с другими людьми или организациями, которые могли неадекватно повлиять или косых содержание бумаги.

• Макроскопические степень атрофии слизистой оболочки желудка: повышенный фактор риска развития пищевода пло…
• Факторы риска для глубины проникновения в дифференцированной депрессии раннего рака желудка: предварительн…