Un estudio inmunohistoquímico de polyps

gástrica espontánea canino un estudio inmunohistoquímico de los pólipos gástricos espontáneas caninos
Abstract
Antecedentes
pólipos gástricos (GP) se caracterizan por una proliferación luminal que sobresalen por encima del plano de la superficie de la mucosa que puede ser clasificado como Las lesiones no neoplásicas y neoplásicas. En los seres humanos, los estudios recientes han llamado la atención sobre el potencial maligno de algunas de estas lesiones. Sin embargo, pólipos gástricos son lesiones poco comunes en los perros.
Hallazgos
En este estudio, la presencia de Helicobacter
spp., La actividad proliferativa celular, posibles alteraciones fenotípicas, COX-2 y la expresión de p53 en gástrica espontánea canino se investigaron los pólipos. La expresión de estas moléculas también se estudió en la mucosa gástrica canina normal con el fin de obtener un mayor conocimiento de la importancia de su pérdida o sobreexpresión en las lesiones gástricas.
Conclusiones
la expresión normal de casi todos los factores evaluados, junto con la actividad proliferativa reducido es muy sugestiva de que, en perros, pólipos gástricos espontáneos no sólo son un hallazgo poco común, pero también de la naturaleza benigna
preparaciones virtuales comentario el preparaciones virtuales (s) de este artículo se puede encontrar aquí:. http :... //www diagnosticpathol gía diagnomx eu /vs /13000_ 2014_ 166
Palabras clave
pólipos gástricos caninos de la COX-2 CDX2 Helicobacter spp Ki67 p53 Introducción
Los pólipos gástricos (GPS) se consideran una entidad heterogénea ampliamente definido como lesiones luminales que sobresalen por encima del plano de la superficie de la mucosa que puede ser biológicamente clasificado como lesiones no neoplásicas y neoplásicas. En los seres humanos, la clasificación adicional se basa en la evaluación de la histogénesis y potencial neoplásico de estas lesiones [1]. De acuerdo con ello, entre los pólipos gástricos epiteliales no neoplásicas, se reconocen tres subtipos: pólipos de glándulas fúndicas; pólipos hiperplásicos (y variantes) y los tumores neuroendocrinos (NET).
pólipos de glándulas fúndica representan el tipo más común y se caracterizan histológicamente por las glándulas de tipo fúndica cistically dilatados revestidos por células parietales aplanadas con un grado de distorsión de la arquitectura. La superficie comprende tipo foveolar epitelio, que puede aparecer atrófica [1]. Los pólipos hiperplásicos se observan típicamente en el antro e histológicamente consiste en hiperplásico, alargada y la ramificación foveolas situado en un estroma edematoso e inflamado abundante. dilatación quística de los pozos es casi invariable presente en las porciones más profundas y la superficie está recubierta por una sola capa de epitelio de tipo foveolar [1]. Los pólipos hiperplásicos se producen en un contexto de gastritis y su desarrollo es consecuencia de una respuesta exagerada a la mucosa lesión. Están relacionadas con Helicobacter pylori gratis (H. pylori
) infección y algunos autores llegaron a la conclusión de que la erradicación de H. pylori
causa regresión completa o reducción significativa de su tamaño. Es importante tener en cuenta que los focos de displasia o carcinoma intramucoso puede ser encontrado en estas lesiones [1], [2]. Por último, NET o los llamados tumores carcinoides "" son histológicamente compuestas de nidos, cordones, túbulos, y grupos de células que predominantemente interpuesto entre la base foveolar, sin perturbar la arquitectura general pólipo [3].
Contrariamente a la documentada la progresión en el cáncer colorrectal humano, la asociación de los médicos con el desarrollo de cáncer gástrico todavía no está plenamente establecida, pero los estudios hacen hincapié en el potencial maligno de estas lesiones. Los médicos no son comunes en los perros y son hallazgos incidentales ocasionales durante la endoscopia o exámenes post-mortem [4]. Médicos caninos esporádicos son raros y la literatura relevante es escasa. Sólo recientemente Taulescu et al. [5] describe las características histopatológicas de las lesiones 15. En cuanto a crecimientos polipoides no neoplásicas, la Organización Mundial de la Salud (OMS) para la clasificación de los tumores en los animales domésticos presenta un esquema más simple, donde se reconocen sólo dos entidades: la hiperplasia (regenerativa) y los pólipos (benignos) linfoides inflamatorias. Los primeros son histológicamente idéntico a la lesión homónima humano y el estándar de oro de la tarde es la presencia de un epitelio normal que cubre un núcleo de tejido de granulación infiltrado por una variedad de células inflamatorias, a veces acompañados de agregados linfoides con centros germinales prominentes [4]. sin embargo
la Varios estudios que tratan de involucrar a algunos marcadores para la transformación maligna de los pólipos hiperplásicos gástricos humanos se llevaron a cabo, una molécula específica que podría identificar qué pólipo se someterá a la transformación maligna aún no ha sido encontrado. En el perro, no se sabe mucho con este sentido.
Ciclooxigenasa (COX) es la enzima que permite la síntesis de prostaglandinas y otros eicosanoides a partir del ácido araquidónico. COX-2 isoforma juega un papel importante en el desarrollo de cáncer gástrico mediante la inhibición de la apoptosis y el aumento de la proliferación celular. Aunque algunos estudios informaron el aumento de la expresión de COX-2 en los cánceres caninos no hay datos disponibles con respecto a COX-2 expresión en tejidos gástricos caninos [6].
Cinética celular se cree que participar en la progresión hacia cáncer gástrico. Ki-67 anticuerpo se utiliza para medir el índice de proliferación de un tejido particular suponiendo que el aumento de Ki-67 revela actividad de las células del tumor y predice el comportamiento adicional de una patología específica [7].
Transformación maligna de GPs hiperplásico humano está asociado con displasia, con p53 juega un papel crucial en el proceso [8]. La sobreexpresión de p53 mutado se ha correlacionado con los parámetros patológicos de la agresividad del tumor y de mal pronóstico en el carcinoma gástrico humano [9].
Según el modelo de Correa [10], cáncer gástrico humano se desarrolla en un proceso de múltiples pasos de gastritis crónica activa a metaplasia intestinal (IM), displasia, y finalmente, el cáncer gástrico. IM es considerado como lesión precursora, que consiste en la transdiferenciación de la mucosa gástrica a un fenotipo intestinal, caracterizado por la expresión aberrante del factor de transcripción homeobox CDX2 [11]. Expresión de CDX2 en que nunca se ha caracterizado médicos caninos.
Como lesiones poco comunes, las propiedades moleculares y potencial neoplásico de los médicos canina sigue siendo un área de interés. El propósito de este estudio es describir algunas de las características moleculares de estas lesiones con el fin de comprender mejor su comportamiento biológico. Además, la expresión de estas moléculas en la mucosa gástrica normal (NGM) se investigó para evaluar la importancia de su pérdida o sobreexpresión en las lesiones gástricas
Animales &.; Métodos
Cuatro ejemplares caninos normales antrales mucosa gástrica y nueve médicos antrales caninas (Figura 1A), recibieron entre 2007 y 2013, fueron seleccionados de los archivos del Laboratorio de Patología Veterinaria, ICBAS-UP (Portugal) y el Departamento de Patología FVM , Cluj-Napoca (Rumanía). Los tejidos se fijaron en 10% de formalina tamponada y embebidos en parafina. secciones consecutivas de serie 3 micras de espesor se realizaron, uno para el diagnóstico histológico de rutina y los otros para estudios inmunohistoquímicos. Figura 1 Los rasgos morfológicos e inmunohistoquímicos de los pólipos gástricos caninos. (A) aspecto bruto; (B) pólipo hiperplásico; (C) de pólipos inflamatorios; (D) (E) H. pylori
inmunoexpresiones. (F) de la COX-2 inmunoexpresiones; (G) Ki-67 inmunoexpresiones; (H) inmunoexpresiones p53. Recuadro: seminoma intratubular (+ control) (I) CDX2 inmunoexpresiones. Recuadro: intestino normal (+ control). Los rasgos morfológicos e inmunohistoquímicos de los pólipos gástricos canina. (A) aspecto bruto de la mucosa gástrica pilórica mostrando un pólipo solitario (zona delimitada) (caso 9); (B) y (C) El examen microscópico de hematoxilina y eosina diapositivas que revelan un pólipo hiperplásico (caso 4) y un pólipo inflamatorio (caso 8). Bar = 500 micras y 100 micras, respectivamente. (D) Fotomicrografía que demuestra la H. pylori positivos
expresión en un pólipo hiperplásico (caso 2). Bar = 200 micras. (E) Detalle del caso anterior destacando la gran cantidad de Helicobacter
spp. organismos dentro de las glándulas gástricas. Bar = 10 micras. (F) Fotomicrografía que revela fuerte y difusa expresión COX-2 en el epitelio foveolar ramificada del pólipo hiperplásico (caso 1). Bar = 200 micras. El recuadro presenta un detalle de la expresión de la COX-2 en epitelio foveolar; (G) La inmunotinción de Ki-67 en el epitelio hiperplásico (caso 3: 32,1%). Bar = 200 micras. El recuadro muestra el detalle de expresión KI-67 en el istmo y en la base de glándulas. (H) Microfotografía que revela una reactividad inmunohistoquímica negativa de p53 en el pólipo hiperplásico (caso 2). Bar = 200 micras. El tejido de seminoma intratubular canino se ha utilizado como control positivo para p53 (recuadro). (I) CDX2 expresión negativa en el pólipo hiperplásico (caso 1). Bar = 200 micras. El tejido de intestino normal, canino se ha utilizado como control positivo para CDX2 (recuadro). mancha inmunoperoxidasa-diaminobencidina con contratinción de hematoxilina de Mayer (D-I).
Las secciones se examinaron de forma independiente por tres patólogos. Los tejidos normales fueron considerados como tal de acuerdo con Prachasilpchain et al. [10] y fueron negativos para la presencia de Helicobacter spp
. (Confirmado por tinción de Giemsa modificado y anti-H. Pylori
inmunohistoquímica). GPs se clasificaron según la clasificación de la OMS para los animales domésticos criterios de diagnóstico [3].
Para el estudio inmunohistoquímico, se aplicó a un panel de anticuerpos específicos para varios antígenos (Tabla 1). Se utilizó Novolink Max-Polymer sistema de detección (Novocastra) de acuerdo con anticuerpos instructions.Table 1 del fabricante utilizadas para los tejidos gástricos caninos inmunohistoquímica
marcador
Clon
Proveedor
La dilución
antígeno desenmascarar
El período de incubación
Control positivo
H. pylori
policlonal
Zytomed, Deutschland
1: 200
CB /PC en accreditations.enligne-fr.com mucosa gástrica humana con H. pylori
la COX-2
SP21
NeoMarkers, EE.UU.
1:75
CB /PC en accreditations.enligne-fr.com canina tumoral mamaria
p53
anti-p53
Novocastra, Reino Unido
1: 400
CB /PC en accreditations.enligne-fr.com canina intratubular seminoma
CDX2
AMT28
Novocastra, Reino Unido
1: 300
CB /PC en accreditations.enligne-fr.com canina intestino normales
KI-67
MIB-1
Dako, Dinamarca
01:50
CB /PC
linfoma canino EN
alto grado
CB
tampón citrato; olla a presión PC. en accreditations.enligne-fr.com durante la noche.
detección de Helicobacter spp
. fue calificado como: negativo, la ausencia de organismos, o positiva, la presencia de Helicobacter spp
. la colonización bacteriana se cuantificó la densidad: +
, pocos (< 10/400 ×); ++
, Moderada (10-50 /400 ×) y +++, gran número de organismos (> 50/400 ×). ubicación bacterias se registró: 0 = ausente; 1 = superficie de la mucosa gástrica y pozos; 2 = 1 + lumen de las glándulas gástricas (400 ×) [12]. COX-2 inmunoexpresión se obtuvo para el porcentaje de células marcadas (< 25%; 25 a 50%; 51-75%; > 75%) y la intensidad de etiquetado (0, negativo; +, débil; ++, moderada; +++, fuerte). El índice de etiquetado Ki-67 se definió como el porcentaje de núcleos positivos determina contando al menos 1000 núcleos en los campos seleccionados (× 400) [8]. Además, la inmunorreactividad se evaluó teniendo en cuenta las glándulas gástricas dividido en tres zonas: Zona 1 (a cielo gástrica); zona 2 (istmo /zona proliferativa) y la zona 3 (base de empaquetadura) [13]. p53 y CDX2 inmunoreactividad se define como positivo cuando la tinción nuclear distinta fue reconocido en al menos 10% de las células [8], [14].
Hallazgos
Los datos clínicos disponibles, la clasificación histológica de las lesiones y de inmunohistoquímica principal resultados, teniendo en cuenta los criterios propuestos para cada anticuerpo, se resumen en la Tabla 2 2.Table los datos disponibles de los animales, la clasificación histológica de los tejidos gástricos caninos y principal hallazgos inmunohistoquímicos
Caso
Breed

Sexo /Edad (años) guía empresas diagnóstico histológico
Helicobacter spp
.
la COX-2
KI-67 (%)
p53
CDX2
SE
DG
1 | Rottweiler
M /12
pólipo hiperplásico
2 +++ Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
36,12,3 -
- página 2
Irish Setter
F /12
hiperplásico polyp
+++2
>75%/+++
>75%/+++
31,42,3
-
-
3
Poodle
F/12
Hyperplastic pólipo
+++ 2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
32,12,3 -
- página 4
argentina mastín
F /9
pólipo hiperplásico
++ 2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /28,92 +++
, 3 -
- página 5
Rottweiler
F /14
pólipo hiperplásico
2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
30,92,3 -
- página 6
raza mixta
F /16
hiperplásico polyp
++2
>75%/+++
>75%/+++
16,72,3
-
-
7
Poodle
M/13
Inflammatory pólipo
++ 2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
31,52,3 -
- página 8
pastor alemán
M /9
pólipo inflamatorio
++ 2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
10,82
- -
9
boxeador
M /10
pólipo hiperplásico
1 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
4,62 CD -
- 10
de raza mixta
M /2
NGM
0 Hotel > 75% /++ + Hotel > 75% /+
18,32 -
- página 11
caniche cross
F/15
NGM
0
>75%/+++
>75%/++
23,62
-
-
12
Boxer
M/4
NGM
0
>75%/+++
>75%/+
15,62
-
-
13
Mixed criar
M /8
NGM
0 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /++
22,82
- -
M
hombres, M
mujer
la COX-2:. SE, epitelio superficial; DG, glándulas más profundas. ≫ 75% de las células immunopositive, + débil, moderada ++, +++ fuerte intensidad
Helicobacter spp .: +
pocos.; ++ Número moderado; +++ Gran número de organismos. La ubicación bacterias 0, ausente; 1 = en la superficie de la mucosa y dentro de fosas gástricas; 2 = 1+ lumen de las glándulas gástricas; KI-67: Zona 2, istmo y la zona 3, base de empaquetadura; p53 y CDX2: -., negativa Red de nueve lesiones GP, siete fueron clasificados como pólipos hiperplásicos (Figura 1B) y dos como pólipos inflamatorios (Figura 1C). No se identificaron signos de displasia. Todos los médicos revelaron Helicobacter spp
. organismos (Figura 1D), preferentemente situados en el lumen de las glándulas gástricas (Figura 1E) (Tabla 2).
Diferencias de COX-2 inmunoexpresiones entre NGM y los médicos fueron mínimos (Tabla 2). Ambos grupos presentaron una fuerte expresión de la COX-2 en más de 75% de epitelio superficial gástrico. Profundamente, las glándulas gástricas de NGM mostraron una débil a moderada expresión COX-2, mientras que las glándulas de los médicos mostraron una fuerte expresión de la COX-2 (Figura 1F). Sin embargo, los médicos presentan difusa de la COX-2 acumulación citoplasma de las células epiteliales. Francia El índice de proliferación de los médicos fue mayor (24,8% del valor medio) que NGM (valor de 20,0% media). No se detectó señal de Ki-67 sólo en el compartimento proliferativo de NGM mientras que en los médicos de familia, este etiquetado a menudo alcanza la zona 3 (Figura 1G).
Ambos p53 y CDX2 inmunodetección fue totalmente negativa en todos los casos de caninos NGM y el GPS (Figura . 1H y yo): perfil Discusión & conclusión
estudios con respecto a la COX-2 en NGM humanos informó de la falta [15], [16], débil [17] o la expresión generalizada [18]. Estas discrepancias están quizás relacionados con el anticuerpo primario (policlonal o monoclonal) y para el sistema de puntuación para la evaluación adoptado inmunorreactividad. La expresión consistente de COX-2 en NGM podría explicarse por dos hipótesis: (1) COX-2 se expresa constitutivamente en la mucosa gástrica canina; o (2) estudios recientes demostraron que H. pylori
induce COX-2 expresión en la mucosa gástrica humana y McCarthy et al. [19] llegó a la conclusión de que la expresión de COX-2 en la mucosa del antro fue reducido pero no eliminado en el epitelio tras la erradicación de H. pylori
. Sung et al. [15] también mostraron que a pesar de la erradicación de H. pylori
, sólo había una reducción modesta de la COX-2 en el epitelio gástrico, aunque COX-2 expresión en la lámina propia se redujo notablemente. A pesar de estos perros son actualmente negativos para Helicobacter
spp., No es posible descartar una infección previa por estos organismos que podrían justificar la expresión persistente de la COX-2. México La sobreexpresión de la COX-2 en la más profunda glándulas de los médicos pueden explicarse por la presencia de una cantidad variable de Helicobacter
organismos en este compartimiento gástrico, que, de manera similar a lo que ocurre en los seres humanos con H. pylori, España puede conducir a un aumento de la expresión de esta enzima a través de la producción de citocinas proinflamatorias [15] - [17]. fotos: por definición, un GP es una hiperproliferación de la mucosa gástrica, por lo que su aparición se relaciona necesariamente con un aumento del recambio celular y la actividad mitótica. Yao et al. informó de un índice de proliferación del 22,2% en los médicos hiperplásicas humanos. La diferencia ligeramente en los porcentajes obtenidos en ambos estudios puede estar relacionada con la especie en cuestión (perro vs. humana) y /o con tamaño de la muestra (22 vs. 9 casos). Además, el aumento de la proliferación de la mucosa gástrica se asoció con H. pylori
[20] ya que la infección aumenta brevemente la apoptosis de las células proliferativas de la superficie y a continuación, se expande la zona proliferativa a más profundo en la glándula, presumiblemente como respuesta compensatoria [21] .
la zona proliferativa en el estómago antral está en el tercio inferior de las unidades típicas glándulas [21], cerca de la base de los hoyos gástricos, que constituye el sitio de la renovación celular. Esta muy corto zona, con poca o ninguna mitosis, es casi imposible de identificar en la mucosa gástrica inactivo. En NGM humano, señal de Ki-67 está presente sólo en el compartimento proliferativo [13] como tal en nuestro estudio (Tabla 2). Sin embargo, en los médicos de familia, este etiquetado a menudo alcanza la zona 3 (Figura 1G), presumiblemente debido a que en el istmo hay células que regeneran constantemente otros que migran de manera bidireccional, a la superficie de la mucosa y hacia abajo a la base de la glándula, ya que se diferencian en madura las células [21].
Carrasco et al. [22] se describe la tinción de p53 positiva en aproximadamente el 94,1% de los carcinomas gástricos caninos. Nuestros resultados refuerzan los estudios humanos anteriores en el que p53 fue reconocido sólo en componentes (pre) neoplásicas [9] en lugar de la mucosa gástrica no tumoral [18] o los médicos [8]. Además, Guo et al. [2] encontró co-expresión de ambos CA19-9 y p53 limitado a pequeñas áreas de células epiteliales atípicos, que se estima como adenocarcinoma, presentes en un pólipo hiperplásico foveolar humano. Además, el índice KI-67 fue mayor en estos focos maligno en comparación con la mucosa gástrica rodeado.
Doster et al. [23] se describe la expresión de CDX2 dentro de focos de metaplasia del cambio, es decir, células caliciformes, presente en todos los casos de adenocarcinomas gástricos caninos incluidos en su estudio. IM es un fenómeno inusual en el perro y hasta la fecha no hay descripción en cuanto a su ocurrencia espontánea. En los seres humanos, IM es generalmente inducida por la irritación continua de la mucosa gástrica y H. pylori
infección sigue siendo un factor desencadenante importante. Las vías moleculares implicadas en la regulación y función de CDX2 canina son desconocidos. Sin embargo, ya que la expresión del mismo factor de transcripción está asociado con el mantenimiento /desarrollo del fenotipo intestinal en los seres humanos y perros, la hipótesis de que CDX2 se regula de manera similar en las dos especies es plausible (datos no publicados).
Helicobacter
spp. presente en los casos de GPs caninos pueden desarrollar diferentes estrategias de colonización, la infección y la patogenicidad de las que se practican por H. pylori
en los seres humanos, con el tiempo que justifica la rareza de IM en el estómago del perro. Por lo tanto, las vías responsables de la inducción de la expresión CDX2 en perros pueden ser diferentes de los ya descritos en los seres humanos. Se necesitan más estudios para confirmar esta hipótesis.
Aunque ciertas características patológicas de los pólipos se correlacionan con el riesgo de desarrollar cáncer en los seres humanos, en los perros todavía no es posible determinar qué lesiones se convertirán en cáncer. En conclusión, el presente estudio sugiere que los médicos esporádicos caninos son un hallazgo raro y de naturaleza benigna.
Declaraciones
Agradecimientos
I. Amorim (SFRH /BD /76237/2011) reconoce FCT, la Fundación para la Ciencia y la Tecnología (FCT), para el apoyo financiero (PTDC /CVT /117610/2010). IPATIMUP es un Laboratorio Asociado del Ministerio de Ciencia, Tecnología y Educación Superior portugués y es parcialmente apoyado por la FCT. Este artículo fue publicado bajo el marco del Fondo Social Europeo, Programa Operativo de Desarrollo de Recursos Humanos (2007-2013 POSDRU /159 /1,5 /S /136893).
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