En immunhistokjemisk undersøkelse av canine spontan mage polyps

en immunhistokjemisk undersøkelse av hjørnetann spontane mage polypper
Abstract
Bakgrunn
Gastric polypper (GP) er preget av luminal overgrowths rager over planet av slimhinnen som kan klassifiseres som ikke-neoplastiske og neoplastiske lesjoner. Hos mennesker har nyere studier pekt på ondartet potensialet i noen av disse lesjonene. Men mage polypper er uvanlig lesjoner hos hunder.
Funn
I denne studien, tilstedeværelse av Helicobacter
spp., Mobil proliferativ aktivitet, potensielle fenotypiske endringer, COX-2 og p53 uttrykk i canine spontan mage polypper ble undersøkt. Uttrykket av disse molekylene ble også undersøkt i normal hund mageslimhinnen for å få mer kunnskap om betydningen av deres tap eller overekspresjon i mage lesjoner.
Konklusjoner
normal uttrykk for nesten alle faktorer vurderes, sammen med redusert proliferativ aktivitet er sterkt tankevekkende at i hunder, spontane mage polypper er ikke bare en sjelden funn, men også av godartet natur
Virtual Slides
virtuelle lysbilde (er) for denne artikkelen finner du her:. http .:.. //www diagnosticpathol logi diagnomx eu /vs /13000_ 2014_ 166
nøkkelord
Canine mage polypper COX-2 CDX2 Helicobacter spp Ki67 p53 Innledning
gastric polypper (GPS) er betraktet som en heterogen enhet bredt definert som luminal lesjoner som rager over planet for den mukosale overflaten som kan bli biologisk klassifisert som ikke-neoplastiske og neoplastiske lesjoner. Hos mennesker er avhengig ytterligere klassifisering på evalueringen av histogenesis og neoplastiske potensialet i disse lesjonene [1]. Følgelig blant de ikke-neoplastiske epitelceller mage polypper, er tre undertyper gjenkjennes: fundic kjertel polypper; hyperplastiske polypper (og varianter) og nevroendokrine svulster (NET).
fundic kjertel polypper representerer den vanligste typen, og de er histologisk preget av cistically utvidede fundus-type kjertler omgitt av flate parietalceller med en grad av arkitektonisk forvrengning. Overflaten omfatter foveolar typen epitel, som kan forekomme atrofisk [1]. De hyperplastiske polypper er vanligvis observert i antrum og histologisk består i hyperplastisk, langstrakt og forgrening foveolae satt i et rikt ødematøs og betent stroma. Cystisk utvidelse av gropene er nesten ufravikelig til stede i de dypere partier og overflate er foret med et enkelt lag av foveolar-type epitel [1]. Hyperplastiske polypper opptrer mot en bakgrunn av gastritt og dens utvikling er en konsekvens av en overdrevet mucosal respons på skade. De er knyttet til Helicobacter pylori plakater (H. pylori
) infeksjoner og noen Forfatterne konkluderte med at H. pylori
utrydding årsaken fullstendig regresjon eller betydelig reduksjon i størrelsen. Det er viktig å være klar over at tema for dysplasi eller intramucosal kreft kan være oppstått i disse lesjoner [1], [2]. Endelig er NET eller de såkalte "karsinoide" svulster histologisk sammensatt av reir, ledninger, rør, og klynger av celler som hovedsakelig innskutt mellom foveolar basis, uten å forstyrre den generelle polypp arkitektur [3].
Motsetning til dokumentert progresjon i menneskelig kolorektal kreft, foreningen av fastleger med utvikling av magekreft er fortsatt ikke fullt etablert men studier understreker ondartet potensialet i disse lesjoner. Fastlegen er uvanlig hos hunder og er sporadisk tilfeldig funn under endoskopi eller postmortem undersøkelser [4]. Sporadiske canine legene er sjeldne og relevant litteratur er knappe. Bare nylig Taulescu et al. [5] beskrev histopatologiske funksjonene i 15 lesjoner. Når det gjelder ikke-neoplastiske polypoid utvekster, Verdens helseorganisasjon (WHO) for klassifisering av svulster i husdyr presenterer en enkleste ordning der bare to virksomhet regnskapsføres: den hyperplastisk (regenerativ) og inflammatoriske (godartet lymfoide) polypper. De førstnevnte er histologisk identisk med den humane homonymous lesjon og gullstandarden av den senere er tilstedeværelsen av en normal epitel dekker en granulasjonsvev kjerne infiltreres av en rekke inflammatoriske celler, noen ganger fulgt av lymfoide aggregater med fremtredende germinale sentre [4].
Flere studier prøver å involvere noen markører for malign transformasjon i menneskelige mage hyperplastiske polypper ble utført imidlertid et bestemt molekyl som kan identifisere hvilke polypp vil gjennomgå malign transformasjon er ennå ikke funnet. Hos hunder er lite kjent med denne forbindelse.
Cyclooxygenase (COX) er enzymet som tillater syntese av prostaglandiner og andre eikosanoider fra arakidonsyre. COX-2-isoformen spiller en viktig rolle i magekreft utvikling gjennom apoptose inhibitor og øket celleproliferasjon. Selv om få studier rapporterte økt uttrykk av COX-2 i hjørnetann kreft ingen data er tilgjengelig om COX-2 uttrykk i canine mage vev [6].
Cellular kinetikk er tenkt å delta i utviklingen mot magekreft. Ki-67 antistoff som brukes til å måle proliferasjonen indeksen for et bestemt vev forutsatt at høyere Ki-67 viser tumorcelleaktivitet og predikerer ytterligere virkemåten til en spesifikk patologi [7].
Malign transformasjon av humane hyperplastisk GPS er tilknyttet dysplasi, med p53 spiller en avgjørende rolle i prosessen [8]. Overekspresjon av mutert p53 har blitt korrelert med patologiske parametere av tumor aggressivitet og dårlig prognose i menneskets magekreft [9].
Ifølge Correa modell [10], human magekreft utvikler seg i en flertrinnsprosess fra kronisk aktiv gastritt til intestinal metaplasi (IM), dysplasi, og til slutt, magekreft. IM regnes som forløper lesjon, bestående av det transdifferensiering av gastrisk mucosa til en intestinal fenotype, karakterisert ved at den avvikende ekspresjon av homeobox transkripsjonsfaktor CDX2 [11]. Uttrykk av CDX2 i hjørnetann legene har aldri blitt karakterisert.
Så uvanlig lesjoner, de molekylære egenskaper og neoplastisk potensial hjørnetann fastleger fortsatt et område av interesse. Hensikten med denne studien er å beskrive noen molekylære funksjoner av disse lesjonene for å bedre forstå deres biologiske oppførsel. I tillegg ble uttrykket av disse molekylene i normal mageslimhinnen (NGM) undersøkt for å vurdere betydningen av deres tap eller overekspresjon i helsefare for Dyr &.; metoder
Fire normale canine antrum mageslimhinnen prøver og ni hunde antrum GPS (Figur 1a), mottatt mellom 2007 og 2013, ble valgt ut fra arkivene til Laboratory of Veterinary patologi, ICBAS-UP (Portugal) og patologi Avdeling for FVM , Cluj-Napoca (Romania). Vev ble fiksert i 10% bufret formalin og parafin-embedded. Serie påfølgende avsnitt 3 mikrometer tykke ble gjort, en for rutinemessig histologisk diagnose og de andre for immunhistokjemiske studier. Figur 1 Morfologiske og immunhistokjemiske funksjonene canine mage polypper. (A) Brutto aspekt; (B) Hyperplastisk polypp; (C) Inflammatorisk polypp; (D) (E) H. pylori
immunoexpression. (F) COX-2 immunoexpression; (G) Ki-67 immunoexpression; (H) p53 immunoexpression. Innfelt: intratubular seminom (+ kontroll) (I) CDX2 immunoexpression. Innfelt: normal tarm (+ kontroll). Morfologiske og immunhistokjemiske funksjoner av hjørnetann mage polypper. (A) Brutto aspekt av pyloric mageslimhinnen som viser en enslig polypp (avgrenset område) (sak 9); (B) og (C) Mikroskopisk undersøkelse av haematoxylin og eosin-farget lysbilder avsløre en hyperplastisk polypp (sak 4) og en inflammatorisk polypp (sak 8). Bar = 500 um og 100 um, respektivt. (D) Mikroskopbilde som viser den positive H. pylori
uttrykk i en hyperplastisk polypp (sak 2). Bar = 200 mikrometer. (E) Detalj av forrige sak fremhever den store mengden av Helicobacter
spp. organismer inne i mage kjertler. Bar = 10 mikrometer. (F) Mikroskopbilde avslørende sterk og diffus COX-2 uttrykk i forgrenet foveolar epitel av hyperplastisk polypp (case 1). Bar = 200 mikrometer. Inset presentere en detalj av COX-2 uttrykk i foveolar epitel; (G) Farging av Ki-67 i hyperplastisk epitel (sak 3: 32,1%). Bar = 200 mikrometer. Inset viser detalj av KI-67 uttrykk i eidet og i kjertlene basen. (H) Mikroskopbilde avslører en negativ immunhistokjemiske reaktivitet av p53 i hyperplastisk polypp (sak 2). Bar = 200 mikrometer. Vev fra hjørnetann intratubular seminom har vært brukt som positiv kontroll for p53 (innfelt). (I) Negativ CDX2 uttrykk i hyperplastisk polypp (case 1). Bar = 200 mikrometer. Vev fra hjørnetann normal tarmen har vært brukt som positiv kontroll for CDX2 (innfelt). Immunoperoxidase-diaminobenzidin flekken med Mayers hematoksylin counterstain (D-I).
Snittene ble uavhengig undersøkt av tre patologer. Normale vev ble betraktet som sådan i henhold til Prachasilpchain et al. [10] og var negative for tilstedeværelse av Helicobacter spp
. (Bekreftet av modifisert Giemsa beis og anti-H. Pylori
immunhistokjemi). Legene ble klassifisert i henhold til WHO-klassifisering for husdyr diagnostiske kriterier [3].
For immunhistokjemiske studien ble et panel av antistoffer som er spesifikke for flere antigener brukt (tabell 1). Novolink Max-Polymer deteksjonssystem (Novocastra) ble brukt i henhold til produsentens instructions.Table 1 Antistoffer brukes for canine mage vev immunhistokjemi
Marker
Clone
Leverandør
fortynning
Antigen avsløring
Inkubasjonstiden
Positiv kontroll
H. pylori
Polyclonal
Zytomed, Deutschland
1: 200
CB /PC
PÅ
Menneskelig mageslimhinnen med H. pylori
COX-2
SP21
NeoMarkers, USA
1:75
CB /PC
PÅ
Canine brysttumor
p53
Anti-p53
Novocastra, UK
1: 400
CB /PC
PÅ
Canine intratubular seminom
CDX2
AMT28
Novocastra, UK
1: 300
CB /PC
PÅ
Canine normal tarm
KI-67
MIB-1
Dako, Danmark
01:50
CB /PC
PÅ
Canine høy klasse lymfom
CB
citrate buffer; PC trykkoker.
PÅ
over natten.
Påvisning av Helicobacter
spp. ble vurdert som: negativ, ingen organismer, eller positive, tilstedeværelse av Helicobacter
spp. Bakteriell tetthet kolonisering ble kvantifisert: +
, få (< 10/400 ×); ++
, Moderat (10-50 /400 x) og +++, stort antall organismer (>, 50/400-x). Bakterier plassering ble spilt: 0 = fraværende; 1 = slimhinnen og mage groper; 2 = 1 + lumen av gastriske kjertler (400 x) [12]. COX-2 immunoexpression ble scoret for prosentandelen av merkede celler (< 25%, 25-50%, 51-75%; > 75%) og merking intensitet (0, negativ, +, svak; ++, moderat; +++, sterk). Ki-67-merkeindeksen er definert som prosentandelen av positive kjerner bestemt ved å telle minst 1000 kjerner i de utvalgte områder (x 400) [8]. I tillegg immunoreaktivitets ble vurdert med tanke på mage kjertler inndelt i tre soner: Sone 1 (gastrisk pit); sone 2 (eidet /proliferativ sone) og sone 3 (kjertel base) [13]. p53 og CDX2 immunoreaktivitets ble definert som positiv når distinkt nukleær farging ble anerkjent i minst 10% av cellene [8], [14].
Funn
Tilgjengelige kliniske data, histologisk klassifisering av lesjoner og hoved immunhistokjemiske resultater, vurderer de kriterier som foreslås for hvert antistoff, er oppsummert i tabell 2.Table 2 Tilgjengelige data til dyrene, histologisk klassifisering av hjørnetann mage vev og hoved immunhistokjemiske funn
sak Book Breed

Kjønn /Alder (år)
Histologisk diagnose
Helicobacter
spp.
COX-2
KI-67 (%) <.no> p53
CDX2
SE
DG
en
Rottweiler
M /12
Hyperplastisk polypp
+++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
36,12,3 -
-
2
irsk setter
F /12
Hyperplastisk polyp
+++2
>75%/+++
>75%/+++
31,42,3
-
-
3
Poodle
F/12
Hyperplastic polypp
+++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
32,12,3 -
-
4
argentinsk mastiff
F /9
Hyperplastisk polypp
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
28,92 3 -
-
5
Rottweiler
F /14
Hyperplastisk polypp
2
> 75% /+++
> 75% /+++
30,92,3 -
-
6
Blandet rase
F /16
Hyperplastisk polyp
++2
>75%/+++
>75%/+++
16,72,3
-
-
7
Poodle
M/13
Inflammatory polypp
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
31,52,3 -
-
8
Schäfer
M /9
Inflammatory polypp
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
10,82
- -
9
Boxer
M /10
Hyperplastisk polypp
en
> 75% /+++
> 75% /+++
4,62 -
-
10
Blandet rase
M /2
NGM
0
> 75% /++ +
> 75% /+
18,32 -
-
11
puddel cross
F/15
NGM
0
>75%/+++
>75%/++
23,62
-
-
12
Boxer
M/4
NGM
0
>75%/+++
>75%/+
15,62
-
-
13
Mixed avle
M /8
NGM
0
> 75% /+++
> 75% /++
22,82 -
-
M
male, F
kvinnelige
COX-2. SE, overflate epitel; DG, dypere kjertler. ≫ 75% av immunopositive celler, + svak, ++ moderat, +++ sterk intensitet
Helicobacter
spp .: + noen.; ++ Moderat nummer, +++ Stort antall organismer. Den bakterier sted 0, fraværende; 1 = på slimhinner og i mage groper; 2 = 1+ lumen av mage kjertler; KI-67: sone 2, eidet og sone 3, kjertel base; p53 og CDX2: -., negativ
Av ni GP lesjoner, syv ble klassifisert som hyperplastiske polypper (figur 1B) og to som provoserende polypper (figur 1C). Ingen tegn til dysplasi ble identifisert. Alle fastleger åpenbart Helicobacter
spp. organismer (Figur 1D), fortrinnsvis lokalisert i lumen av mage kjertler (figur 1E) (tabell 2).
Forskjeller på COX-2 immunoexpression mellom NGM og allmennleger var minimal (tabell 2). Begge grupper presentert sterk COX-2-ekspresjon i mer enn 75% av gastrisk overfladisk epitel. Dypt, mage kjertler NGM viste en svak til moderat COX-2 uttrykk, mens kjertlene i allmennleger viste sterk COX-2 uttrykk (figur 1F). Likevel fastlegene present diffuse COX-2 cytoplasma akkumulering i epitelceller.
Proliferative indeks over fastleger ble høyere (gjennomsnittlig verdi av 24,8%) enn NGM (gjennomsnittlig verdi på 20,0%). Ki-67 signal ble oppdaget bare i proliferative rommet NGM mens i allmennleger, denne merkingen ofte nådd sone 3 (figur 1G).
Både p53 og CDX2 immundeteksjon var helt negativ i alle tilfeller av canine NGM og fastleger (figur . 1H og jeg)
diskusjon & Konklusjonen
Studier om COX-2 i menneskelig NGM rapportert mangel [15], [16], svak [17] eller generalisert uttrykk [18]. Disse avvikene er kanskje relatert til den primære antistoff (monoklonale eller polyklonale) og til scoring system vedtatt for immunoreaktivitets evaluering. Den konsekvente ekspresjon av COX-2 i NGM kunne forklares ved to hypoteser: (1) COX-2 er konstitutivt uttrykt i hjørnetann mageslimhinnen; eller (2) nylige studier viste at H. pylori
induseres COX-2-ekspresjon i humane mageslimhinne og McCarthy et al. [19] konkluderte med at COX-2 uttrykk i antrum slimhinnen ble redusert, men ikke eliminert i epitel etter vellykket eradikering av H. pylori
. Sung et al. [15] viste også at skjønt utryddelse av H. pylori
, var det bare en beskjeden reduksjon av COX-2 i den gastriske epitel, selv COX-2-ekspresjon i lamina propria ble betydelig redusert. Til tross for disse hundene blir for tiden negativ Helicobacter
spp., Er det ikke mulig å utelukke en tidligere infeksjon av slike organismer som kan rettferdiggjøre vedvarende ekspresjon av COX-2.
Overekspresjon av COX-2 i de dypere kjertler legene kan forklares ved tilstedeværelsen av varierende mengde av Helicobacter
organismer i denne gastrisk kammer som, i likhet med hva som skjer hos mennesker med H. pylori, kan
føre til en økt ekspresjon av dette enzym gjennom produksjons av proinflammatoriske cytokiner [15] -. [17]
Per definisjon er en GP en hyper av mageslimhinnen, og dermed sin debut nødvendigvis er knyttet til en økning i cellefornyelsen og mitotisk aktivitet. Yao et al. rapporterte en proliferativ indeks på 22,2% i menneskelige hyperplastiske fastleger. Den litt forskjell i prosentfordelingen i begge studiene kan ha sammenheng med de aktuelle artene (human vs hund) og /eller med utvalgsstørrelse (22 vs. 9 tilfeller). I tillegg ble økt proliferasjon av mageslimhinnen forbundet med H. pylori product: [20] ettersom infeksjonen øker kort apoptose av overflaten og proliferative celler og deretter utvider proliferative sonen til dypere i kjertelen, antagelig som et kompenserende reaksjon [21] .
proliferative sone i antrum magen er i nedre tredjedel av de typiske kjertler enheter [21], nær bunnen av mage groper, som utgjør stedet for mobilnettet fornyelse. Denne svært korte område, med snaut eller ingen mitoser, er nesten uidentifiserbar i inaktiv mageslimhinnen. I human NGM, er Ki-67 signal til stede bare i den proliferative rommet [13] som sådan i vårt studium (tabell 2). Men i de legene, denne merkingen ofte nådd sonen 3 (figur 1G), antagelig fordi i eidet der er celler som stadig regenerere andre som vandrer i begge retninger, opp til den mukosale overflaten og ned til den kjertel base, som de differensiere til modne celler [21].
Carrasco et al. [22] beskrevet p53-positiv farging i ca 94,1% av hjørnetann mage karsinom. Våre resultater forsterke tidligere menneskelig studier der p53 ble bare anerkjent i (pre) neoplastiske komponenter [9] i stedet for ikke-tumormageslimhinnen [18] eller fastlege [8]. Videre Guo et al. [2] funnet co-uttrykk for både CA19-9 og p53 begrenset til små områder av atypiske epitelceller, anslått som adenokarsinom, til stede i en menneskelig hyperplastisk foveolar polypp. I tillegg er KI-67-indeksen var høyere i disse ondartet foci i forhold til den omgitt gastrisk mucosa.
Doster et al. [23] beskrevet CDX2 uttrykk innenfor foci av metaplastiske endring, nemlig slimceller, til stede i alle tilfeller av canine mage adenokarsinomer som inngår i studiet. IM er et uvanlig fenomen i hunden og opp til dags dato er det ingen beskrivelse om sin spontane forekomst. Hos mennesker er IM vanligvis indusert ved kontinuerlig irritasjon av mageslimhinnen og H. pylori
infeksjon er fortsatt en viktig utløsende faktor. De molekylære stier involvert i canine regulering og funksjon av CDX2 er ukjent. Siden imidlertid uttrykk for den samme transkripsjonsfaktor er assosiert med vedlikehold /utvikling av tarm fenotype hos både mennesker og hunder, er sannsynlig hypotesen om at CDX2 er tilsvarende regulert i begge arter (data ikke publisert).
Helicobacter
spp. stede i tilfeller av canine fastleger kan utvikle ulike strategier for kolonisering, infeksjon og patogenitet fra de praktiseres av H. pylori
hos mennesker, til slutt rettferdig sjeldenhet av IM i magen til hunden. Derfor kan trasé som er ansvarlige for induksjon av CDX2 ekspresjon i hunder avviker fra det som allerede er beskrevet hos mennesker. Videre studier er nødvendig for å bekrefte denne hypotesen.
Selv om visse patologiske trekk ved polypper korrelerer med risiko for å utvikle kreft i mennesker, hunder det er fortsatt ikke mulig å fastslå hvilke lesjoner vil utvikle seg til kreft. I konklusjonen, antyder studien at canine sporadiske allmennleger er et sjeldent funn og godartet natur.
Erklæringer
Takk
I. Amorim (SFRH /BD /76237/2011) erkjenner FCT, den portugisiske Foundation for Science and Technology (FCT), for økonomisk støtte (PTDC /CVT /117610/2010). IPATIMUP er en Associate Laboratory av den portugisiske departementet for vitenskap, teknologi og høyere utdanning og er delvis støttet av FCT. Denne artikkelen ble publisert under rammen av European Social Fund, Human Resources Development Handlingsprogrammet 2007-2013 (POSDRU /159 /1,5 /S /136893).
Forfattere 'originale legges filer for Images Nedenfor er linker til forfatternes opprinnelige legges filer for bilder. 13000_2014_166_MOESM1_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 1 konkurrerende interesser
Ingen av forfatterne av dette papiret har en økonomisk eller personlig forhold til andre personer eller organisasjoner som feilaktig kan påvirke eller skjevhet innholdet på papiret.

• Makroskopisk grad av mage mucosal atrofi: økt risikofaktor for esophageal plateepitelkarsinom i Japan
• Risikofaktorer for dyp på infiltrasjon i den differensierte deprimert tidlig magekreft: en foreløpig analyse