Eine immunhistochemische Untersuchung von Hunden spontanen Magenpolypen

Eine immunhistochemische Untersuchung von canine spontanen Magenpolypen
Zusammenfassung
Hintergrund
Magenpolypen (GP) durch luminale Überwachsungen gekennzeichnet sind oberhalb der Ebene der Schleimhautoberfläche vorspringende, der als nicht-neoplastischen und neoplastischen Läsionen klassifiziert werden können. Beim Menschen haben neuere Studien darauf hin, maligne Potential einiger dieser Läsionen gezogen. Jedoch sind Magenpolypen unüblich Läsionen bei Hunden.
Würdigung
In dieser Studie wurde die Anwesenheit von Helicobacter
spp., Die zelluläre Proliferationsaktivität, potentielle phenotypische Veränderungen, COX-2 und p53-Expression in canine spontanen Magen Polypen untersucht. Die Expression dieser Moleküle wurde auch in normalen Eckzahn Magenschleimhaut zu gewinnen, um weitere Erkenntnisse über die Bedeutung ihres Verlustes oder Überexpression in Magen-Läsionen untersucht.
Schlussfolgerungen
Der normale Expression von fast allen Faktoren bewertet, zusammen mit die reduzierte Proliferationsaktivität ist stark suggestiv, dass bei Hunden, spontan Magenpolypen nicht nur ein seltener Befund, sondern auch der gutartigen Natur
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Schlüsselwörter Canine Magenpolypen COX-2 CDX2 Helicobacter spp Ki67 p53 Einführung
Magenpolypen (GPS) sind eine heterogene Einheit betrachtet weit definiert als luminale Läsionen oberhalb der Ebene der Schleimhautoberfläche vorspringende, der als nicht-neoplastischen und neoplastischen Läsionen klassifiziert werden biologisch kann. Beim Menschen setzt weitere Klassifizierung auf die Bewertung der Histogenese und neoplastischen Potential dieser Läsionen [1]. Entsprechend zu den nicht-neoplastischen epithelialen Magenpolypen sind drei Subtypen erkannt: Fundusdrüsen Polypen; hyperplastische Polypen (und Varianten) und neuroendokrinen Tumoren (NET).
Fundusdrüsen Polypen stellen die häufigste Art, und sie sind histologisch durch cistically erweiterten Fundus-Typ Drüsen ausgekleidet durch abgeflachte Belegzellen mit einem Grad der architektonischen Verzerrung charakterisiert. Die Oberfläche besteht aus Becherzellhyperplasie Typ Epithel, die atrophische erscheinen [1]. Die hyperplastische Polypen sind in der Regel in der Kieferhöhle und histologisch bestehen in hyperplastischen, langgestreckten und Verzweigung foveolae gesetzt in einer reichlichen ödematös und entzündete Stroma beobachtet. Zystische Dilatation der Pits ist fast unveränderlich in den tieferen Abschnitten und Oberfläche wird durch eine Einzelschicht aus Becherzellhyperplasie-Typ Epithel [1] ausgekleidet. Hyperplastische Polypen auftreten, gegen einen Hintergrund von Gastritis und seine Entwicklung ist eine Folge einer übertriebenen mukosale Reaktion auf eine Verletzung. Sie sind mit Helicobacter pylori im Zusammenhang
(H. pylori
) Infektion und einige Autoren schlossen daraus, dass H. pylori-Eradikation
Ursache vollständige Regression oder erhebliche Abnahme ihrer Größe. Es ist wichtig, sich bewusst zu sein, dass Brennpunkte der Dysplasie oder intramukosalen Karzinom kann in diesen Läsionen [1] angetroffen werden, [2]. Schließlich sind histologisch von Nestern zusammengesetzt NET oder die sogenannten "Karzinoid" Tumoren, Schnüre, tubules und Clustern von Zellen, die vorwiegend zwischen der Becherzellhyperplasie Basis angeordnet ist, ohne die gesamte Polyp Architektur stören [3].
Entgegen der dokumentierten Progression in der menschlichen Darmkrebs, der Vereinigung der Ärzte mit der Entwicklung von Magenkrebs ist noch nicht vollständig etabliert, aber Studien betonen die maligne Potential dieser Läsionen. Hausärzte sind selten bei Hunden und sind gelegentlich Zufallsbefunde während der Endoskopie oder postmortalen Untersuchungen [4]. Sporadische Hunde-GPs sind selten und die einschlägige Literatur ist knapp. Erst vor kurzem Taulescu et al. [5] beschrieben die histopathologischen Merkmale von 15 Läsionen. In Bezug auf nicht-neoplastischen polypoid Wucherungen, wo die Weltgesundheitsorganisation (WHO) für die Klassifizierung von Tumoren bei Haustieren eine einfachsten Schema stellt nur zwei Einheiten erkannt werden: die hyperplastische (regenerative) und die entzündlichen (gutartige lymphatischen) Polypen. histologisch identisch mit der humanen homonymous Läsion und den Goldstandard des späteren erstere ist das Vorhandensein eines normalen Epithel eines Granulationsgewebes Kern durch eine Vielzahl von Entzündungszellen infiltriert bedeckt, manchmal begleitet von lymphoiden Aggregaten mit prominenten Keimzentren [4].
Mehrere Studien versuchen, einige Marker für maligne Transformation in menschlichen Magenhyperplastischen Polypen beinhalten wurden jedoch durchgeführt werden, ein bestimmtes Molekül, das erkennen konnte, welche Polyp maligne Transformation unterzogen werden ist noch nicht gefunden worden. In dem Hund wird mit dieser Hinsicht nicht viel bekannt.
Cyclooxygenase (COX) ist das Enzym, das die Synthese von Prostaglandinen und anderen Eicosanoiden aus Arachidonsäure ermöglicht. COX-2-Isoform spielt eine wichtige Rolle bei Magenkrebs Entwicklung durch Apoptose-Hemmung und eine erhöhte Zellproliferation. Obwohl nur wenige Studien, die die erhöhte Expression von COX-2 in Eckzahn Krebs berichtet keine Daten verfügbar über COX-2-Expression in Eckzahn Magengewebe [6]. Cellular Kinetik
wird angenommen, in der Entwicklung hin zu Magenkrebs zu beteiligen. Ki-67-Antikörper wird verwendet, um den Proliferationsindex eines bestimmten Gewebes zu messen, unter der Annahme, dass eine höhere Ki-67-Aktivität von Tumorzellen zeigt, und sagt das weitere Verhalten einer bestimmten Pathologie [7].
Maligne Transformation von menschlichen hyperplastischen GPs zugeordnet ist Dysplasie, mit p53 eine entscheidende Rolle im Prozess spielen [8]. Die Überexpression von p53 mutiert ist mit pathologischen Parametern der Tumoraggressivität und einer schlechten Prognose in menschlichen Magenkarzinom korreliert [9].
Nach Correas Modell [10], die menschliche Magenkrebs entwickelt sich in einem mehrstufigen Prozess aus einer chronisch-aktiven Gastritis intestinale Metaplasie (IM), Dysplasie und schließlich Magenkrebs. IM ist als Vorläufer Läsion betrachtet, bestehend aus der Transdifferenzierung der Magenschleimhaut auf einen intestinalen Phänotyp durch die aberrante Expression des Transkriptionsfaktors homeobox CDX2 gekennzeichnet [11]. Die Expression von CDX2 in Hunde-GPs hat nie charakterisiert.
Wie selten Läsionen, die molekularen Eigenschaften und neoplastischen Potential von Hunde-GPs bleibt ein Bereich von Interesse. Der Zweck dieser Studie ist es, einige molekulare Merkmale dieser Läsionen zu beschreiben, um besser an ihre biologische Verhalten verstehen. Zusätzlich wurde die Expression dieser Moleküle in normalen Magenschleimhaut (NGM) untersuchte die Bedeutung von Verlust oder Überexpression in Magen-Läsionen zu bewerten
Tiere &. Vier normale Hunde antralen Magenschleimhaut Proben und neun Hunde antral GPs
Methoden (Abbildung 1A), die zwischen 2007 und 2013 wurden aus den Archiven des Labors für Veterinär-Pathologie ausgewählt, ICBAS-UP (Portugal) und Pathologie-Abteilung von FVM , Cluj-Napoca (Rumänien). Die Gewebe wurden in 10% gepuffertem Formalin und in Paraffin eingebettet fixiert. Serielle aufeinanderfolgende Abschnitte 3 &mgr; m Dicke wurden hergestellt, eine für Routine histologische Diagnose und die anderen für die immunhistochemischen Untersuchungen. Abbildung 1 Morphologische und immunhistochemische Merkmale der Hunde Magenpolypen. (A) Brutto Aspekt; (B) hyperplastische Polypen; (C) Entzündliche Polyp; (D) (E) H. pylori
immunoexpression. (F) COX-2 immunoexpression; (G) Ki-67 immunoexpression; (H) p53 immunoexpression. Kleines Bild: intratubulären seminoma (+ control) (I) CDX2 immunoexpression. Inset: normal Darm (+ Kontrolle). Morphologische und immunhistochemische Merkmale der Hunde Magenpolypen. (A) Brutto Aspekt der pyloric Magenschleimhaut ein einsames Polyp zeigt (begrenzte Fläche) (Fall 9); (B) und (C) eine mikroskopische Untersuchung von Hämatoxylin und Eosin-gefärbten Objektträger eine hyperplastische Polypen enthüllt (Fall 4) und eine entzündliche Polyp (Fall 8). Bar = 500 &mgr; m und 100 &mgr; m, respectively. (D): Mikroskopische Aufnahme zeigt die positive H. pylori
Expression in einem hyperplastischen Polypen (Fall 2). Bar = 200 &mgr; m. (E) Detail des vorherigen Fall die große Menge von Helicobacter
spp hervorheben. Organismen in den Magendrüsen. Bar = 10 &mgr; m. (F): Mikroskopische Aufnahme enthüllt starke und diffuse COX-2-Expression in verzweigte Becherzellhyperplasie Epithel des hyperplastischen Polypen (Fall 1). Bar = 200 &mgr; m. Inset ein Detail der COX-2-Expression in Becherzellhyperplasie Epithel präsentiert; (G) Immunostaining von Ki-67 in der hyperplastischen Epithel (Fall 3: 32,1%). Bar = 200 &mgr; m. Inset zeigt die Details der KI-67-Expression in den Isthmus und in der Basis Drüsen. (H): Mikroskopische Aufnahme enthüllt eine negative immunhistochemischen Reaktivität von p53 in den hyperplastischen Polypen (Fall 2). Bar = 200 &mgr; m. Das Gewebe aus Hunde- intratubulären seminoma wurde als positive Kontrolle für p53 (kleines Bild) verwendet. (I) Negative CDX2 Ausdruck in der hyperplastischen Polypen (Fall 1). Bar = 200 &mgr; m. Das Gewebe aus Hunde- normalen Darm wurde als positive Kontrolle für CDX2 (kleines Bild) verwendet. Immunperoxidase-Diaminobenzidin Fleck mit Mayers Hämatoxylin counterstain (D-I).
Die Schnitte wurden durch drei Pathologen unabhängig geprüft. Normalgewebe wurden als solche betrachtet nach Prachasilpchain et al. [10] und für das Vorhandensein von Helicobacter spp
negativ waren. (Bestätigt durch modifizierte Giemsa und anti-H. Pylori
Immunhistochemie). Hausärzte für Haustiere nach WHO-Klassifikation eingestuft wurden diagnostischen Kriterien [3]. Für die immunhistochemischen Studie wurde (Tabelle 1) angewendet wird, eine Gruppe von Antikörpern, die spezifisch für verschiedene Antigene
. Novolink Max-Polymer-Detektionssystem (Novocastra) wurde gemäß den für Hunde Magengewebe verwendet instructions.Table 1 Antikörper des Herstellers verwendet Immunhistochemie
Marker
Klon
Lieferant
Verdünnung
Antigen Demaskierung
Inkubationszeit
Positive Kontrolle
H. pylori
polyklonalen
Zytomed, Deutschland
1: 200
CB /PC Schürzen
menschliche Magenschleimhaut mit H. pylori
COX-2
SP21
NeoMarkers, USA
1:75
CB /PC Schürzen
Canine-Brusttumor
p53
Anti-p53
Novocastra, UK
1: 400
CB /PC Schürzen
Canine intratubulären seminoma
CDX2
AMT28
Novocastra, UK
1: 300
CB /PC Schürzen
Canine normalen Darm
KI-67
MIB-1
Dako, Dänemark
01.50
CB /PC Schürzen
Canine hochgradige Lymphome
CB Citratpuffer
; PC Dampfkochtopf. Schürzen
über Nacht.
Nachweis von Helicobacter
spp. negativ, keine Organismen oder positiv, das Vorhandensein von Helicobacter
spp: wurde als bewertet. Bakteriendichte Kolonisation wurde quantifiziert: +
, wenig (< 10/400 ×); ++
, Mittel (10-50 /400 ×) und +++, eine große Anzahl von Organismen (> 50/400 ×). Bakterien Standort wurde aufgezeichnet: 0 = nicht vorhanden; 1 = Schleimhautoberfläche und Magengrübchen; 2 = 1 + Lumen der Magendrüsen (400 ×) [12]. COX-2 immunoexpression wurde für den Prozentsatz der markierten Zellen erzielt (< 25%; 25-50%, 51-75%, > 75%) und Markierungsintensität (0, negativ; +, schwach; ++, moderate; +++, stark). Das Ki-67 Markierungsindex als Prozentsatz der positiven Kerne definiert wurde durch Zählen mindestens 1000 Kerne in den ausgewählten Feldern bestimmt (× 400) [8]. Zusätzlich wurde Immunreaktivität die Magendrüsen in drei Zonen unterteilt Berücksichtigung beurteilt: Zone 1 (Magengrube); Zone 2 (Isthmus /proliferative Zone) und Zone 3 (Drüse Basis) [13]. p53 und CDX2 Immunreaktivität wurden als positiv definiert, wenn unterschiedliche Kernfärbung in mindestens 10% der Zellen erkannt wurde [8], [14].
Würdigung
Die klinischen Daten, die histologische Klassifizierung der Läsionen und die wichtigsten immunhistochemischen Ergebnisse, die vorgeschlagenen Kriterien für jeden Antikörper unter Berücksichtigung, sind in Tabelle 2.Table 2 zur Verfügung stehenden Daten der Tiere, die histologische Klassifizierung der hunde Magen-Gewebe und Haupt immunhistochemischen Befunde
Fall zusammengefasst bei
Breed

Geschlecht /Alter (Jahre)
histologische Diagnose
Helicobacter
spp.
COX-2
KI-67 (%)
p53
CDX2
SE
DG
1

• Makroskopische Ausmaß der Magenschleimhaut Atrophie: erhöhte Risikofaktor für Plattenepithelkarzinom des Ösophagus in Japan
• Risikofaktoren für die Tiefe der Infiltration in den frühen Magenkarzinom unterschieden gedrückt: eine vorläufige analysis