Une étude immunohistochimique de polyps

gastrique spontanée canine Une étude immunohistochimique des polypes gastriques spontanées canine
Résumé de l'arrière-plan
polypes gastriques (GP) sont caractérisées par des excroissances luminal en saillie au-dessus du plan de la surface de la muqueuse qui peut être classé comme Les lésions non néoplasiques et néoplasiques. Chez l'homme, des études récentes ont attiré l'attention sur le potentiel malin de certaines de ces lésions. Cependant, les polypes gastriques sont des lésions peu répandue chez les chiens. Les résultats

Dans cette étude, la présence de Helicobacter spp., L'activité de prolifération cellulaire, des modifications phénotypiques potentielles, COX-2 et l'expression de p53 dans gastrique spontanée canine polypes ont été étudiés. L'expression de ces molécules a également été étudié dans la muqueuse gastrique canine normale afin d'acquérir de nouvelles connaissances sur l'importance de leur perte ou de la surexpression dans les lésions gastriques.
Conclusions
L'expression normale de presque tous les facteurs évalués, avec l'activité proliférative réduite suggère fortement que, chez les chiens, les polypes gastriques spontanées ne sont pas seulement une constatation rare, mais aussi de la nature bénigne
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Mots-clés
polypes gastriques Canine COX-2 CDX2 Helicobacter spp Ki67 p53 introduction
polypes gastriques (MG) sont considérés comme une entité hétérogène au sens large comme des lésions luminal faisant saillie au-dessus du plan de la surface de la muqueuse qui peut être classée comme biologiquement lésions non néoplasiques et néoplasiques. Chez les humains, en outre la classification se fonde sur l'évaluation de la histogénèse et le potentiel de ces lésions néoplasiques [1]. Par conséquent, parmi les polypes gastriques épithéliaux non néoplasiques, trois sous-types sont reconnus: les polypes des glandes fundiques; polypes hyperplasiques (et variantes) et des tumeurs neuroendocrines (NET) de polypes. glande fundique représentent le type le plus commun et ils sont histologiquement caractérisés par cistically dilatés des glandes de type fundique bordées par les cellules pariétales aplaties avec un degré de distorsion architecturale. La surface comprend le type fovéolaire épithélium, qui peut apparaître atrophique [1]. Les polypes hyperplasiques sont généralement observées dans l'antre et histologiquement consistent à hyperplasiques, allongée et ramification fovéoles situé dans un stroma oedémateux et enflammée abondante. dilatation kystique des fosses est presque invariable présent dans les parties les plus profondes et de surface est bordée par une seule couche de type fovéolaire épithélium [1]. polypes hyperplasiques se produisent dans un contexte de gastrite et son développement est une conséquence d'une réponse muqueuse exagérée à des blessures. Ils sont liés à Helicobacter pylori
(H. pylori
) l'infection et certains auteurs ont conclu que H. pylori
causes d'éradication complète régression ou une diminution significative de sa taille. Il est important d'être conscient que des foyers de dysplasie ou de carcinome intramuqueux peut être rencontré dans ces lésions [1], [2]. Enfin, NET ou les tumeurs dites "carcinoïdes" sont histologiquement composées de nids, des cordes, des tubules, et des amas de cellules qui principalement interposés entre la base fovéolaire, sans perturber l'architecture globale du polype [3].
Contrairement à la documentation la progression dans le cancer colorectal humain, l'association des médecins généralistes avec le développement du cancer gastrique est pas encore complètement établie, mais les études soulignent le potentiel malin de ces lésions. Les médecins généralistes sont rares chez les chiens et sont découvertes fortuites occasionnels pendant l'endoscopie ou les autopsies [4]. GPs canines sporadiques sont rares et la documentation pertinente sont rares. Seulement récemment Taulescu et al. [5] décrit les caractéristiques histopathologiques de 15 lésions. En ce qui concerne excroissances polypoïdes non néoplasiques, l'Organisation mondiale de la santé (OMS) pour la classification des tumeurs chez les animaux domestiques présente un schéma simple où seuls deux entités sont reconnues: le hyperplasiques (régénérative) et les (lymphoïdes bénignes) polypes inflammatoires. Les premiers sont histologiquement identique à la lésion homonymes humaine et la norme de la dernière de l'or est la présence d'un épithélium normal couvrant un noyau de tissu de granulation infiltré par une variété de cellules inflammatoires, parfois accompagnées d'agrégats lymphoïdes avec des centres germinaux importants [4].
Plusieurs études tentent d'impliquer certains marqueurs pour la transformation maligne des polypes hyperplasiques gastriques humains ont cependant été réalisées, une molécule spécifique qui pourrait identifier qui polype fera l'objet d'une transformation maligne n'a pas encore été trouvé. Chez le chien, ne sait pas trop à cet égard.
Cyclooxygenase (COX) est l'enzyme qui permet la synthèse de prostaglandines et d'autres eicosanoïdes de l'acide arachidonique. COX-2 isoforme joue un rôle important dans le développement du cancer gastrique par l'inhibition de l'apoptose et augmentation de la prolifération cellulaire. Bien que peu d'études ont rapporté l'expression accrue de la COX-2 dans les cancers canins données ne sont pas disponibles en ce qui concerne l'expression de COX-2 dans des tissus gastriques canins [6].
Cinétique cellulaire est censée participer à la progression vers un cancer gastrique. Ki-67 anticorps est utilisé pour mesurer l'indice de prolifération d'un tissu particulier en supposant que Ki-67 supérieur révèle l'activité des cellules de la tumeur et prédit le comportement ultérieur d'une pathologie spécifique [7].
Transformation maligne des médecins généralistes hyperplasiques humaine est associée à dysplasie, avec p53 joue un rôle crucial dans le processus [8]. La surexpression de p53 mutée a été corrélée avec les paramètres pathologiques de l'agressivité tumorale et de mauvais pronostic dans le cancer gastrique humaine [9].
Selon le modèle de Correa [10], le cancer gastrique humain se développe dans un processus en plusieurs étapes de gastrite chronique active à métaplasie intestinale (IM), la dysplasie, et enfin, un cancer gastrique. IM est considéré comme une lésion précurseur, consistant en la transdifférenciation de la muqueuse gastrique à un phénotype intestinal, caractérisé par l'expression aberrante du facteur de transcription à homéoboîte CDX2 [11]. Expression de CDX2 en GP canine n'a jamais été caractérisés.
Lésions Comme rares, les propriétés moléculaires et le potentiel néoplasique des médecins généralistes canine reste une zone d'intérêt. Le but de cette étude est de décrire certaines caractéristiques moléculaires de ces lésions afin de mieux comprendre leur comportement biologique. En outre, l'expression de ces molécules dans la muqueuse gastrique normale (NGM) a été étudiée pour évaluer l'importance de leur perte ou de la surexpression dans les lésions gastriques
Animaux &. Méthodes de Quatre antraux spécimens normaux canines gastriques de la muqueuse et de neuf médecins généralistes antraux canine (Figure 1A), reçues entre 2007 et 2013, ont été sélectionnés à partir des archives du Laboratoire de pathologie vétérinaire, ICBAS-UP (Portugal) et Département de Pathologie de MVF , Cluj-Napoca (Roumanie). Les tissus ont été fixés dans du formol tamponné à 10% et inclus dans la paraffine. sections consécutives de série 3 um d'épaisseur ont été faites, l'une pour le diagnostic histologique de routine et les autres pour des études immunohistochimiques. Figure 1 Les caractéristiques morphologiques et immunohistochimiques des polypes gastriques canins. (A) aspect brut; (B) polype hyperplasique; (C) polype inflammatoire; (D) immunoexpression
(E) H. pylori. (F) de la COX-2 immunoexpression; (G) Ki-67 immunoexpression; (H) immunoexpression p53. Encart: séminome intratubulaire (+ contrôle) (I) CDX2 de immunoexpression. Encart: intestin normale (+ de contrôle). Les caractéristiques morphologiques et immunohistochimiques des polypes gastriques canins. (A) d'aspect brut de la muqueuse gastrique pylore montrant un polype solitaire (zone délimitée) (cas 9); (B) et (C) de l'examen microscopique des hématoxyline et diapositives éosine teinté révélant un polype hyperplasique (cas 4) et un polype inflammatoire (cas 8). Bar = 500 um et 100 um, respectivement. (D) Photomicrographie montrant l'expression de H. pylori positive dans un polype hyperplasique (cas 2). Bar = 200 um. (E) Détail du cas précédent mettant en évidence la grande quantité de Helicobacter spp. organismes à l'intérieur des glandes gastriques. Bar = 10 pm. (F) Photomicrographie révélant forte et diffuse de la COX-2 expression dans l'épithélium fovéolaire ramifié du polype hyperplasique (cas 1). Bar = 200 um. Encart présentant un détail de l'expression de la COX-2 dans l'épithélium fovéolaire; (G) Immunomarquage de Ki-67 dans l'épithélium hyperplasique (cas 3: 32,1%). Bar = 200 um. Encart montrant le détail d'expression KI-67 dans l'isthme et dans la base de glandes. (H) Photomicrographie révélant une réactivité immunohistochimique négative de p53 dans le polype hyperplasique (cas 2). Bar = 200 um. Le tissu de séminome intratubulaire canine a été utilisé comme témoin positif pour p53 (encadré). (I) d'expression de CDX2 négatif dans le polype hyperplasique (cas 1). Bar = 200 um. Le tissu de l'intestin normale canine a été utilisé comme témoin positif pour CDX2 (encadré). Immunoperoxydase-diaminobenzidine tache avec hématoxyline de Mayer de contraste (D-I).
Sections ont été examinées de façon indépendante par trois pathologistes. Les tissus normaux ont été considérés comme tels selon la Prachasilpchain et al. [10] et se sont révélés négatifs pour la présence de Helicobacter spp. (Confirmée par Giemsa modifiée et anti-H. Pylori
immunohistochimie). GPs ont été classés selon la classification de l'OMS pour les animaux domestiques critères diagnostiques [3].
Pour l'étude immunohistochimique, un panel d'anticorps spécifiques pour plusieurs antigènes a été appliqué (tableau 1). Novolink Max-Polymer système de détection (Novocastra) a été utilisé selon instructions.Table 1 les anticorps du fabricant utilisés pour les tissus gastriques canins immunohistochimie
Marker
Clone
Fournisseur
dilution
Antigène démasquage
période d'incubation
contrôle positif
H. pylori
polyclonaux
Zytomed, Deutschland
1: 200
CB /PC
ON
muqueuse gastrique humaine par H. pylori
COX-2
SP21
NeoMarkers, Etats-Unis
1:75
CB /PC
ON
Canine tumeur mammaire
p53
Anti-p53
Novocastra, Royaume-Uni
1: 400
CB /PC
ON
Canine intratubulaire séminome
CDX2
AMT28
Novocastra, Royaume-Uni
1: 300
CB /PC
ON
Canine intestin normale
KI-67
MIB-1
Dako, 01:50
CB /PC du Danemark
CB de ON
Canine haute qualité lymphome
tampon citrate; PC autocuiseur.
ON
nuit Détection de Helicobacter spp.
. a été classé comme: négatif, aucun organisme, ou positif, la présence d'Helicobacter spp. la colonisation de la densité bactérienne a été quantifiée: +
, quelques-uns (< 10/400 ×); ++
, Modérée (10-50 /400 ×) et +++, un grand nombre d'organismes (> 50/400 ×). Lieu de bactéries a été enregistré: 0 = absent; 1 = surface de la muqueuse et gastriques fosses; 2 = 1 + lumen des glandes gastriques (400 ×) [12]. COX-2 immunoexpression a été marqué pour le pourcentage de cellules marquées (< 25%; 25-50%; 51-75%; > 75%) et de l'intensité de l'étiquetage (0, négative; +, faible, ++, modérée; +++, forte). L'indice de marquage Ki-67 a été défini comme le pourcentage de noyaux positifs déterminés par comptage d'au moins 1000 noyaux dans les champs sélectionnés (x 400) [8]. En outre, l'immunoréactivité a été évaluée en tenant compte des glandes gastriques divisé en trois zones: la zone 1 (fosse gastrique); zone 2 (isthme /zone proliférative) et zone 3 (base glande) [13]. p53 et CDX2 immunoréactivité ont été définis comme positif lorsque la coloration nucléaire distincte a été reconnue dans au moins 10% des cellules [8], [14].
Constatations
Les données cliniques disponibles, la classification histologique des lésions et immunohistochimique principale les résultats, compte tenu des critères proposés pour chaque anticorps, sont résumés dans le tableau 2.Table 2 les données disponibles des animaux, la classification histologique des tissus gastriques canins et principale Case
conclusions immunohistochimique
race

Sexe /âge (années)
diagnostic histologique
Helicobacter
spp.
COX-2
KI-67 (%)
p53
CDX2
SE
DG
1
Rottweiler
M /12
polype hyperplasique
+++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
36,12,3
-
- 2
Setter irlandais
F /12
hyperplasiques polyp
+++2
>75%/+++
>75%/+++
31,42,3
-
-
3
Poodle
F/12
Hyperplastic polype
+++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
32,12,3
-
- 4
Argentine Mastiff
F /9
polype hyperplasique
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
28,92 , 3
-
- 5
Rottweiler
F /14
polype hyperplasique
+2
> 75% /+++
> 75% /+++
30,92,3
-
- 6
race mixte
F /16
hyperplasiques polyp
++2
>75%/+++
>75%/+++
16,72,3
-
-
7
Poodle
M/13
Inflammatory polype
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
31,52,3
-
- 8
Berger allemand
M /9
polype inflammatoire
++ 2
> 75% /+++
> 75% /+++
10,82
-
- 9
Boxer
M /10
polype hyperplasique
+1
> 75% /+++
> 75% /+++
4,62
-
- 10
Mixed race
M /2
NGM
0
> 75% /++ +
> 75% /+
18,32
-
- 11
Caniche cross
F/15
NGM
0
>75%/+++
>75%/++
23,62
-
-
12
Boxer
M/4
NGM
0
>75%/+++
>75%/+
15,62
-
-
13
Mixed reproduire
M /8
NGM
0
> 75% /+++
> 75% /++
22,82
- -
M
mâle, F
femme de la COX-2. SE, épithélium de surface; DG, les glandes plus profondes. ≫ 75% des cellules immunopositives, + faible, ++ modérée, +++ forte intensité
Helicobacter
spp .: + quelques-uns.; ++ Nombre modéré; +++ Grand nombre d'organismes. L'emplacement de bactéries 0, absent; 1 = sur la surface de la muqueuse et dans les fosses gastriques; 2 = 1 + lumière des glandes gastriques; KI-67: zone 2, isthme et zone 3, la base des glandes; p53 et CDX2: -., négative
de neuf lésions GP, sept ont été classés comme des polypes hyperplasiques (figure 1B) et deux comme des polypes inflammatoires (figure 1C). Aucun signe de dysplasie ont été identifiés. Tous les médecins ont révélé Helicobacter spp. Différences d'organismes (figure 1D), de préférence situés dans la lumière des glandes gastriques (Figure 1E) (tableau 2). sur la COX-2 immunoexpression entre NGM et les médecins ont été minimes (tableau 2). Les deux groupes ont présenté une forte COX-2 expression dans plus de 75% de l'épithélium superficiel gastrique. Profondément, les glandes gastriques de NGM ont montré une faible à modérée de la COX-2 expression, tandis que les glandes de médecins généralistes ont montré une forte expression de COX-2 (figure 1F). Néanmoins, les médecins généralistes ont présenté diffuse la COX-2 cytoplasme accumulation dans les cellules épithéliales.
L'indice prolifératif des médecins généralistes a été plus élevé (valeur de 24,8% signifie) que NGM (valeur de 20,0% moyenne). Ki-67 signal n'a été détecté que dans le compartiment prolifératif de NGM alors que dans les médecins, cet étiquetage souvent atteint la zone 3 (figure 1G).
Deux p53 et CDX2 immunodétection était entièrement négative dans tous les cas de canine NGM et médecins généralistes (Figure . 1H et I)
Discussion & conclusion
études concernant la COX-2 dans NGM humain rapporté manque [15], [16], faible [17] ou l'expression généralisée [18]. Ces écarts sont peut-être liés à l'anticorps primaire (polyclonal ou monoclonal) et le système de notation adopté pour l'évaluation de l'immunoréactivité. L'expression cohérente de la COX-2 dans NGM pourrait être expliquée par deux hypothèses: (1) de la COX-2 est exprimé constitutivement dans la muqueuse gastrique canine; ou (2) des études récentes ont montré que H. pylori
induit l'expression de COX-2 dans la muqueuse gastrique humaine et McCarthy et al. [19] a conclu que la COX-2 expression dans la muqueuse antrale a été réduit mais pas éliminé dans l'épithélium après éradication de H. pylori
. Sung et al. [15] ont également montré que, bien que l'éradication de Helicobacter pylori
, il n'y avait qu'une légère diminution de la COX-2 dans l'épithélium gastrique, bien que l'expression de COX-2 dans la lamina propria, est nettement réduite. En dépit de ces chiens étant actuellement négatifs pour Helicobacter spp., Il est impossible d'exclure une infection antérieure par ces organismes qui pourraient justifier l'expression persistante de la COX-2.
La surexpression de la COX-2 dans le plus profond glandes de médecins généralistes peuvent être expliqués par la présence d'une quantité des organismes Helicobacter variant dans ce compartiment gastrique qui, de façon similaire à ce qui se passe chez l'homme avec H. pylori,
peut conduire à une expression accrue de cette enzyme par la production de cytokines pro-inflammatoires [15] - [17].
par définition, un GP est une hyperprolifération de la muqueuse gastrique, donc son apparition est nécessairement liée à une augmentation du chiffre d'affaires de la cellule et l'activité mitotique. Yao et al. fait état d'un indice de prolifération de 22,2% en GP hyperplasiques humaines. La différence légèrement dans les pourcentages obtenus dans les deux études peut être liée à l'espèce en question (chien vs humaine) et /ou avec la taille de l'échantillon (22 contre 9 cas). En outre, l'augmentation de la prolifération de la muqueuse gastrique a été associée à H. pylori
[20] puisque l'infection augmente brièvement l'apoptose de surface et les cellules proliférantes, puis élargit la zone proliferative au plus profond dans la glande, probablement en réponse compensatoire [21] .
la zone proliférative dans l'estomac antrale est dans le tiers inférieur des glandes typiques unités [21], à proximité de la base des fosses gastriques, constituant le site du renouvellement cellulaire. Cette zone très courte, avec mitoses maigres ou pas, est presque non identifiable dans la muqueuse gastrique inactive. Dans NGM humain, Ki-67, le signal est uniquement présent dans le compartiment prolifératif [13] en tant que telle dans notre étude (tableau 2). zone Toutefois, les médecins généralistes, cet étiquetage souvent atteint 3 (figure 1G), sans doute parce que dans l'isthme il y a des cellules qui régénèrent constamment les autres qui migrent de manière bidirectionnelle, à la surface de la muqueuse et vers le bas à la base de la glande, comme ils se différencient en maturité cellules [21].
Carrasco et al. [22] décrit la coloration de p53 positif chez environ 94,1% des carcinomes gastriques canins. Nos résultats renforcent les études humaines antérieures dans lesquelles p53 n'a été reconnue dans les composants néoplasiques (pré) [9] plutôt que de la muqueuse non tumorale gastrique [18] ou les médecins généralistes [8]. En outre, Guo et al. [2] ont trouvé co-expression des deux CA19-9 et p53 confiné à de petites zones de cellules épithéliales atypiques, estimés adénocarcinome, présents dans un polype fovéolaire hyperplasiques humaine. En outre, l'indice KI-67 était plus élevée dans ces foyers malins par rapport à la muqueuse gastrique entouré. Le plus Doster et al. [23] ont décrit l'expression de CDX2 dans les foyers du changement métaplasique, à savoir les cellules caliciformes, présentes dans tous les cas d'adénocarcinomes gastriques canins inclus dans leur étude. IM est un phénomène inhabituel chez le chien et jusqu'à ce jour, il n'y a aucune description concernant son apparition spontanée. Chez l'être humain, IM est habituellement provoquée par une irritation continue de la muqueuse gastrique et une infection par H. pylori
reste un facteur important de déclenchement. Les voies moléculaires impliquées dans la régulation et la fonction de CDX2 canine sont inconnus. Helicobacter Cependant, étant donné que l'expression du même facteur de transcription est associé au maintien en vigueur /développement du phénotype intestinal chez les humains et les chiens, l'hypothèse selon laquelle CDX2 est régulée de manière similaire chez les deux espèces est plausible (données non publiées).
spp. présente dans les cas de médecins généralistes canines peuvent développer différentes stratégies de la colonisation, l'infection et la pathogénicité de celles pratiquées par H. pylori
chez l'homme, par la suite justifier la rareté de la GI dans l'estomac du chien. Par conséquent, les voies responsables de l'induction de l'expression de CDX2 chez les chiens peuvent être différents de ceux déjà décrits chez les humains. D'autres études sont nécessaires pour confirmer cette hypothèse.
Bien que certaines caractéristiques pathologiques de polypes sont en corrélation avec le risque de développer un cancer chez l'homme, chez les chiens, il est encore impossible de déterminer quelles lésions évolueront vers un cancer. En conclusion, la présente étude suggère que les médecins sporadiques canins sont une découverte rare et de la nature bénigne. Des déclarations des remerciements de I. Amorim (SFRH /BD /76237/2011) reconnaît FCT, la Fondation pour la Science et la Technologie (FCT), un soutien financier (PTDC /CVT /117610/2010). IPATIMUP est un laboratoire associé du ministère portugais de la science, la technologie et de l'enseignement supérieur et est partiellement soutenu par FCT. Ce document a été publié sous le cadre du Fonds social européen, programme opérationnel de développement des ressources humaines 2007-2013 (POSDRU /159 /1.5 /S /136893).
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