Uno studio immunoistochimico di canino polyps

gastrica spontanea Uno studio immunoistochimico di canini polipi gastrici spontanee
Abstract
sfondo
polipi gastrici (GP) sono caratterizzati da overgrowths luminali sporgenti al di sopra del piano della superficie mucosa che possono essere classificati come lesioni non neoplastiche e neoplastiche. Negli esseri umani, studi recenti hanno attirato l'attenzione sul potenziale maligno di alcune di queste lesioni. Tuttavia, polipi gastrici sono lesioni non comuni nei cani.
Risultati
In questo studio, la presenza di Helicobacter
spp., L'attività proliferativa cellulare, potenziali alterazioni fenotipiche, COX-2 e di espressione di p53 in canino gastrica spontanea polipi sono stati studiati. L'espressione di queste molecole è stato studiato anche in normale mucosa gastrica canina al fine di acquisire ulteriori conoscenze del significato della loro perdita o sovraespressione di lesioni gastriche.
Conclusioni
Il normale espressione di quasi tutti i fattori valutati, insieme a l'attività proliferativa ridotto è fortemente suggestiva che, nei cani, polipi gastrici spontanee non sono solo un reperto raro, ma anche di natura benigna
diapositive virtuali
la slitta virtuale (s) per questo articolo può essere trovato qui:. http :... //www diagnosticpathol gia diagnomx eu /vs /13000_ 2014_ 166
Parole
Canine polipi gastrici COX-2 CDX2 Helicobacter spp Ki67 p53 Introduzione
polipi gastrici (GP) sono considerati un'entità eterogenea ampiamente definito come lesioni luminali sporgenti al di sopra del piano della superficie mucosa che può essere biologicamente classificato come lesioni non-neoplastiche e neoplastiche. Negli esseri umani, ulteriore classificazione si basa sulla valutazione della istogenesi e potenziale neoplastico di queste lesioni [1]. Di conseguenza, tra i non neoplastiche epiteliali polipi gastrici, tre sottotipi vengono riconosciuti: fundica polipi ghiandola; polipi iperplastici (e varianti) e tumori neuroendocrini (NET).
fundica polipi ghiandola rappresentano il tipo più comune e sono caratterizzati da istologicamente cistically dilatate ghiandole fundica tipo fiancheggiate da parte delle cellule parietali appiattite con un grado di distorsione architettonica. La superficie comprende tipo foveolare dell'epitelio, che può apparire atrofica [1]. I polipi iperplastici sono tipicamente osservati nel antro e istologicamente consistere in iperplastici, di forma allungata e la ramificazione foveolae situato in un abbondante stroma edematoso e infiammato. dilatazione cistica dei solchi è quasi invariabilmente presenti nelle porzioni più profonde e di superficie è rivestita da uno strato singolo di foveolar tipo epitelio [1]. polipi iperplastici si verificano in un contesto di gastrite e il suo sviluppo è una conseguenza di una risposta mucosale esagerata di un infortunio. Esse sono legate alla Helicobacter pylori
(H. pylori
) infezioni e alcuni autori hanno concluso che H. pylori
eradicazione causa regressione completa o significativa diminuzione della sua dimensione. E 'importante essere consapevoli del fatto che foci di displasia o carcinoma intramucoso può essere incontrata in queste lesioni [1], [2]. Infine, NET o cosiddetti tumori carcinoidi "" sono istologicamente composti da nidi, cordoni, tubuli, e gruppi di cellule che prevalentemente interposta tra la base foveolare, senza disturbare l'architettura complessiva polipo [3].
Contrariamente alla documentata la progressione in cancro colorettale umano, l'associazione dei medici con lo sviluppo del cancro gastrico non è ancora completamente definito ma studi sottolineano il potenziale maligno di queste lesioni. Medici sono rari nei cani e sono occasionali ritrovamenti accidentali durante l'endoscopia o autopsie [4]. GP canini sporadici sono rari e la letteratura sono scarsi. Solo recentemente Taulescu et al. [5] ha descritto le caratteristiche istopatologiche di 15 lesioni. Per quanto riguarda gli sviluppi polipoidi non neoplastiche, l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) per la classificazione dei tumori negli animali domestici presenta uno schema più semplice in cui vengono riconosciuti solo due entità: la iperplastica (recupero) e polipi benigni (linfoidi) infiammatorie. I primi sono istologicamente identiche alla lesione omonima umano e il gold standard della successiva è la presenza di un epitelio normale che copre un nucleo di tessuto di granulazione infiltrato da una varietà di cellule infiammatorie, a volte accompagnata da aggregati linfoidi con centri germinali di spicco [4].
Diversi studi cercando di coinvolgere alcuni marcatori per la trasformazione maligna di polipi iperplastici gastriche umane sono state eseguite tuttavia, una molecola specifica che potrebbe identificare quali polipo subirà una trasformazione maligna non è ancora stato trovato. Nel cane, non si sa con riguardo.
Cicloossigenasi (COX) è l'enzima che permette la sintesi delle prostaglandine e altri eicosanoidi da acido arachidonico. COX-2 isoforma gioca un ruolo importante nello sviluppo del cancro gastrico attraverso l'inibizione dell'apoptosi e aumento della proliferazione cellulare. Anche se alcuni studi hanno riportato l'aumentata espressione di COX-2 nei tumori canini non sono disponibili dati riguardanti COX-2 nei tessuti gastrici cane [6].
Cinetica cellulare è pensato di partecipare alla progressione verso il cancro gastrico. Ki-67 anticorpo viene utilizzato per misurare l'indice di proliferazione di un particolare tessuto supponendo che l'aumento Ki-67 rivela l'attività delle cellule tumorali e prevede l'ulteriore comportamento di una determinata patologia [7].
Trasformazione maligna di GP iperplastica umana è associato displasia, con p53 svolge un ruolo cruciale nel processo [8]. Sovraespressione di p53 mutato è stata correlata con i parametri patologici di aggressività del tumore e prognosi infausta nel carcinoma gastrico umano [9].
Secondo il modello di Correa [10], il cancro gastrico umano si sviluppa in un processo a più fasi di gastrite cronica attiva a metaplasia intestinale (IM), la displasia, e, infine, il cancro gastrico. IM è considerata lesione precursore, costituito dalla transdifferenziazione della mucosa gastrica ad un fenotipo intestinale, caratterizzato dal aberrant espressione del fattore di trascrizione homeobox CDX2 [11]. L'espressione di CDX2 GPS cane non è mai stato caratterizzato.
Lesioni Come non comuni, le proprietà molecolari e potenziale neoplastico dei medici canina rimane un'area di interesse. Lo scopo di questo studio è descrivere alcune caratteristiche molecolari di queste lesioni al fine di comprendere meglio il loro comportamento biologico. Inoltre, l'espressione di queste molecole nella mucosa gastrica (NGM) è stato studiato per valutare la significatività della loro perdita o sovraespressione di lesioni gastriche
Animali &.; Metodi
Quattro normali canini antrali campioni di mucosa gastrica e nove medici antrali canini (Figura 1A), hanno ricevuto tra il 2007 e il 2013, sono stati selezionati dagli archivi del Laboratorio di Patologia, ICBAS-UP (Portogallo) e Patologia Dipartimento di FVM , Cluj-Napoca (Romania). I tessuti sono stati fissati in formalina al 10% tamponata e inclusi in paraffina. Serial sezioni consecutive 3 micron di spessore sono stati fatti, uno per routine di diagnosi istologica e gli altri per studi di immunoistochimica. Figura 1 caratteristiche morfologiche e immunoistochimiche dei polipi gastrici canini. (A) aspetto lordo; (B) polipi iperplastici; (C) polipo infiammatorio; (D) (E) H. pylori
immunoexpression. (F) COX-2 immunoexpression; (G) Ki-67 immunoexpression; (H) immunoexpression p53. Nel riquadro: seminoma intratubulare (+ controllo) (I) CDX2 immunoexpression. Nel riquadro: intestino normale (+ di controllo). caratteristiche morfologiche e immunoistochimiche dei polipi gastrici canina. (A) aspetto lordo della mucosa gastrica pilorica mostrando un polipo solitari (area delimitata) (caso 9); (B) e (C) L'esame microscopico di ematossilina e diapositive eosina macchiato rivelando un polipo iperplastico (caso 4) ed un polipo infiammatorio (caso 8). Bar = 500 micron e 100 micron, rispettivamente. (D) Photomicrograph dimostrando il positivo H. pylori
espressione in un polipo iperplastico (caso 2). Bar = 200 micron. (E) Particolare del caso precedente evidenziando la grande quantità di Helicobacter
spp. organismi all'interno delle ghiandole gastriche. Bar = 10 micron. (F) Photomicrograph rivelando una forte e diffusa espressione di COX-2 in ramificata epitelio foveolare del polipo iperplastico (caso 1). Bar = 200 micron. Inserto presentando un particolare della COX-2 in epitelio foveolar; (G) immunocolorazione di Ki-67 nell'epitelio iperplastico (caso 3: 32,1%). Bar = 200 micron. Inserto che mostra il dettaglio di espressione KI-67 nell'istmo e nella base ghiandole. (H) Photomicrograph rivelando una reattività immunoistochimica negativo di p53 nel polipi iperplastici (caso 2). Bar = 200 micron. Tessuto da canino seminoma intratubulare è stato utilizzato come controllo positivo per p53 (nel riquadro). (I) espressione CDX2 negativo nel polipi iperplastici (caso 1). Bar = 200 micron. Tessuto da canino intestino normale è stato utilizzato come controllo positivo per CDX2 (nel riquadro). macchia dell'immunoperossidasi-diaminobenzidina con di contrasto ematossilina di Mayer (D-I).
Le sezioni sono state esaminate indipendentemente da tre patologi. tessuti normali sono stati considerati come tali secondo Prachasilpchain et al. [10] e sono risultati negativi per la presenza di Helicobacter
spp. (Confermata da modificata macchia Giemsa e anti-H. Pylori
immunoistochimica). MMG sono stati classificati in base alla classificazione WHO per animali domestici criteri diagnostici [3].
Per lo studio immunoistochimico, un pannello di anticorpi specifici per diversi antigeni è stata applicata (Tabella 1). sistema di rilevamento Novolink Max-Polymer (Novocastra) è stato utilizzato in base alle instructions.Table 1 Anticorpi del produttore utilizzati per canini tessuti gastrici immunoistochimica
marker
Clone
Fornitore
La diluizione
Antigen smascheramento
Il periodo di incubazione
controllo positivo
H. pylori
Polyclonal
Zytomed, Deutschland
1: 200
CB /PC
on mucosa gastrica umana da H. pylori
COX-2
SP21
NeoMarkers, Stati Uniti
1:75
CB /PC
on Canine tumore mammario
p53
anti-p53
Novocastra, UK
1: 400
CB /PC
on Canine intratubulare seminoma
CDX2
AMT28
Novocastra, UK
1: 300
CB /PC
on canina normale dell'intestino
KI-67
MIB-1
Dako, Danimarca
01:50
CB /PC
on Canine alto grado di linfoma
CB
tampone citrato; pentola a pressione PC.
on durante la notte
. Il rilevamento di Helicobacter
spp. è stato valutato come: negativo, non organismi, o positivo, la presenza di Helicobacter
spp. colonizzazione densità batterica è stata quantificata: +
, pochi (< 10/400 ×); ++
, Moderata (10-50 /400 ×) e +++, gran numero di organismi (> 50/400 ×). Batteri posizione è stata registrata: 0 = assente; 1 = superficie della mucosa gastrica e pozzi; 2 = 1 + lume di ghiandole gastriche (400 ×) [12]. COX-2 immunoexpression è stato segnato per la percentuale di cellule marcate (< 25%; 25-50%, 51-75%; > 75%) e l'intensità di etichettatura (0, negativo; +, debole; ++, moderata; +++, forte). L'indice di marcatura Ki-67 è stata definita come percentuale di nuclei positivi determinato contando almeno 1000 nuclei nei campi selezionati (× 400) [8]. Inoltre, immunoreattività è stata valutata considerando le ghiandole gastriche diviso in tre zone: zona 1 (fossette gastriche); zona 2 (istmo /zona proliferativa) e la zona 3 (base ghiandola) [13]. p53 e CDX2 immunoreattività sono stati definiti come positivo quando colorazione nucleare distinto è stato riconosciuto in almeno il 10% delle cellule [8], [14].
risultati
I dati clinici disponibili, la classificazione istologica delle lesioni e immunoistochimica principale risultati, sulla base dei criteri proposti per ogni anticorpo, sono riassunti nella tabella 2.Table 2 i dati a disposizione degli animali, la classificazione istologica dei tessuti gastrici canini e reperti immunoistochimici
principale caso
Breed

Sesso /Età (anni)
diagnosi istologica
Helicobacter
spp.
COX-2
KI-67 (%)
p53
CDX2
SE
DG
1
Rottweiler
M /12
polipi iperplastici
+++ 2
> 75% /+++ Hotel > 75% /+++
36,12,3 -
- Pagina 2
Setter irlandese
F /12
iperplastici polyp
+++2
>75%/+++
>75%/+++
31,42,3
-
-
3
Poodle
F/12
Hyperplastic polipo
+++ 2
> 75% /+++ Hotel > 75% /+++
32,12,3 -
- Pagina 4
argentino Mastiff
F /9
polipo iperplastici
++ 2
> 75% /+++ Hotel > 75% /+++
28,92 , 3 -
-
5
Rottweiler
F /14
polipo iperplastici
+2
> 75% /+++
> 75% /+++
30,92,3 -
- Pagina 6
di razza mista
F /16
iperplastici polyp
++2
>75%/+++
>75%/+++
16,72,3
-
-
7
Poodle
M/13
Inflammatory polipo
++ 2
> 75% /+++ Hotel > 75% /+++
31,52,3 -
- Pagina 8
Pastore Tedesco
M /9
polipo infiammatorio
++ 2
> 75% /+++ Hotel > 75% /+++
10,82
- -
9
Boxer
M /10
polipo iperplastici
+1
> 75% /+++ Hotel > 75% /+++
4,62 -
- 10
mista razza
M /2
NGM
0
> 75% /++ + Hotel > 75% /+
18,32 -
-
11
Poodle cross
F/15
NGM
0
>75%/+++
>75%/++
23,62
-
-
12
Boxer
M/4
NGM
0
>75%/+++
>75%/+
15,62
-
-
13
Mixed allevare
M /8
NGM
0
> 75% /+++ Hotel > 75% /++
22,82 -
-
m maschile, F
femminile
COX-2. SE, superficie dell'epitelio; DG, ghiandole più profondi. ≫ il 75% delle cellule immunopositive, + debole, moderata ++, +++ forte intensità
Helicobacter
spp .: + pochi.; ++ Numero moderato; +++ Gran numero di organismi. La posizione batteri 0, assente; 1 = sulla superficie della mucosa e all'interno di fossette gastriche; 2 = 1+ lume delle ghiandole gastriche; KI-67: zona 2, istmo e la zona 3, base della ghiandola; p53 e CDX2: -., negativo Illustrazione Di nove lesioni medico di famiglia, sette sono stati classificati come polipi iperplastici (Figura 1B) e due come polipi infiammatori (Figura 1C). Non sono stati identificati segni di displasia. Tutti i medici hanno rivelato Helicobacter
spp. organismi (Figura 1D), preferenzialmente situati nel lume delle ghiandole gastriche (Figura 1E) (Tabella 2).
Differenze di COX-2 immunoexpression tra NGM e medici sono stati minimi (Tabella 2). Entrambi i gruppi rappresentati forte espressione COX-2 in più del 75% dei gastrica dell'epitelio superficiale. Profondamente, le ghiandole gastriche di NGM hanno mostrato una debole a moderata COX-2, mentre le ghiandole di medici hanno mostrato una forte espressione di COX-2 (Figura 1F). Tuttavia, i medici hanno presentato diffusa accumulo citoplasma COX-2 nelle cellule epiteliali.
L'indice proliferativo del GPS è stato più elevato (valore del 24,8% medio) rispetto NGM (valore del 20,0% medio). Ki-67 segnale è stato rilevato solo nel compartimento proliferativo di NGM mentre nei GP, questa etichettatura spesso raggiunto la zona 3 (Figura 1G).
Sia p53 e CDX2 immunolocalizzazione era del tutto negativo in tutti i casi di cane NGM e MMG (Figura . 1H e I)
Discussione & conclusione
studi riguardanti COX-2 in NGM umana ha riferito la mancanza [15], [16], debole [17] o l'espressione generalizzata [18]. Queste discrepanze sono forse riportate l'anticorpo primario (monoclonale o policlonale) e al sistema di punteggio adottato per la valutazione immunoreattività. L'espressione coerente della COX-2 in NGM potrebbe essere spiegato con due ipotesi: (1) COX-2 costitutivamente espressa nella mucosa gastrica canino; o (2) studi recenti hanno dimostrato che H. pylori
indotto COX-2 nella mucosa gastrica umana e McCarthy et al. [19] ha concluso che la COX-2 nella mucosa antrale è stato ridotto, ma non eliminato nell'epitelio dopo l'eradicazione di successo di H. pylori
. Sung et al. [15] ha anche mostrato che sebbene eradicazione di H. pylori
, vi era solo una modesta riduzione della COX-2 nell'epitelio gastrico, anche se COX-2 nella lamina propria era marcatamente ridotta. Nonostante questi cani essendo attualmente negativo per Helicobacter
spp., Non è possibile escludere una precedente infezione da questi organismi che potrebbero giustificare l'espressione persistente della COX-2.
L'iperespressione della COX-2 nel più profondo ghiandole di GPS possono essere spiegate dalla presenza di varia quantità di Helicobacter
organismi in questo compartimento dello stomaco, che, analogamente a quanto accade negli esseri umani con H. pylori,
possono portare a un aumento dell'espressione di questo enzima attraverso la produzione di citochine proinfiammatorie [15] -. [17]
per definizione, un GP è una iperproliferazione della mucosa gastrica, così la sua insorgenza è necessariamente correlato ad un aumento del fatturato cellulare e dell'attività mitotica. Yao et al. riportato un indice proliferativo del 22,2% nel GPS iperplastiche umani. La lieve differenza nelle percentuali ottenute in entrambi gli studi possono essere correlati alla specie in questione (cane vs umana) e /o con la dimensione del campione (22 vs 9 casi). Inoltre, l'aumento della proliferazione di mucosa gastrica è stata associata ad H. pylori
[20] in quanto l'infezione aumenta brevemente l'apoptosi delle acque superficiali e cellule proliferative e poi si espande la zona proliferativa di più profondo nella ghiandola, presumibilmente come una risposta compensatoria [21] .
la zona proliferativa nello stomaco antrale è nel terzo inferiore delle unità tipiche ghiandole [21], vicino alla base delle fossette gastriche, che costituisce il sito di rinnovamento cellulare. Questo brevissimo zona, con mitosi scarsi o nulli, è quasi identificabile nella mucosa gastrica inattiva. In NGM umana, Ki-67 segnale è presente solo nel compartimento proliferativo [13] come tale nel nostro studio (Tabella 2). zona Tuttavia, nei GP, questa etichettatura spesso raggiunto 3 (figura 1G), presumibilmente perché nell'istmo ci sono cellule che rigenerano costantemente altri che migrano bidirezionalmente, fino alla superficie mucosale e fino alla base della ghiandola, come si differenziano in maturo le cellule [21].
Carrasco et al. [22] ha descritto colorazione p53-positivo in circa il 94,1% dei carcinomi gastrici canine. I nostri risultati rafforzano precedenti studi sull'uomo in cui p53 è stato riconosciuto solo nel (pre) componenti neoplastiche [9], piuttosto che mucosa gastrica non tumorale [18] o GPS [8]. Inoltre, Guo et al. [2] trovato co-espressione di entrambi CA19-9 e p53 confinato in piccole aree di cellule epiteliali atipiche, stimati come adenocarcinoma, presenti in un polipo foveolare iperplastico umano. Inoltre, l'indice KI-67 era maggiore in questi foci maligni rispetto alla mucosa gastrica circondato.
Doster et al. [23] ha descritto espressione CDX2 entro focolai di cambiamento metaplastica, vale a dire cellule caliciformi, presente in tutti i casi di adenocarcinoma gastrico canini inclusi nel loro studio. IM è un fenomeno insolito nel cane e fino ad oggi non esiste una descrizione per quanto riguarda la sua presenza spontanea. Negli esseri umani, IM è solitamente indotta da irritazione continua della mucosa gastrica e H. pylori
infezione rimane un importante fattore scatenante. I meccanismi molecolari coinvolti nella regolazione e la funzione di CDX2 canina sono sconosciuti. Tuttavia, poiché l'espressione dello stesso fattore di trascrizione è associata con il mantenimento /sviluppo del fenotipo intestinale nell'uomo e cani, l'ipotesi che CDX2 è analogamente regolata in entrambe le specie è plausibile (dati non pubblicati).
Helicobacter
spp. presenti nei casi di medici canina possono sviluppare diverse strategie di colonizzazione, infezione e patogenicità da quelle praticate da H. pylori
negli esseri umani, alla fine che giustifica la rarità di IM nello stomaco del cane. Pertanto, i percorsi responsabili della induzione dell'espressione CDX2 nei cani possono differire da quelli già descritti negli esseri umani. Ulteriori studi sono necessari per confermare questa ipotesi.
Anche se alcune caratteristiche patologiche di polipi correlano con il rischio di sviluppare il cancro negli esseri umani, nei cani non è ancora possibile stabilire quali lesioni progredirà al cancro. In conclusione, questo studio suggerisce che canini medici sporadici sono un raro trovare e di natura benigna.
Dichiarazioni
Ringraziamenti
I. Amorim (SFRH /BD /76237/2011) riconosce FCT, la Fondazione portoghese per la scienza e la tecnologia (FCT), per il sostegno finanziario (PTDC /CVT /117610/2010). IPATIMUP è un laboratorio associato del Ministero della Scienza, tecnologia e dell'istruzione superiore portoghese ed è parzialmente supportato da FCT. Questo documento è stato pubblicato sotto il telaio del Fondo sociale europeo, sviluppo delle risorse umane Programma operativo 2007-2013 (POSDRU /159 /1.5 /S /136893).
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