Imunohistochemické štúdie o psích spontánnych žalúdočných polypov

Imunohistochemické štúdie o psích spontánnych žalúdočných polypov
abstraktné
pozadia
žalúdočné polypy (GP) sú charakterizované priesvitu overgrowths vyčnievajúcich nad rovinou povrch sliznice, ktoré môžu byť klasifikované ako non-neoplastických a neoplastických lézií. U ľudí, nedávne štúdie upozornila na malígnym potenciálom niektorých z týchto lézií. Avšak, žalúdočné polypy sú menej časté lézie u psov.
Závery
V tejto štúdii, je prítomnosť Helicobacter
spp., Bunková proliferačnej aktivita, potenciálny fenotypovej zmeny, COX-2 a p53 expresie v psej gastrickej spontánnej polypy boli skúmané. Expresie týchto molekúl skúmal aj v normálnom psím žalúdočnej sliznice za účelom získania ďalších informácií o význame ich straty alebo nadmerné expresie v žalúdočných lézií.
Závery
normálna expresia takmer všetky faktory hodnotenom, spolu s znížená proliferatívna aktivita je silne vyplýva, že u psov, spontánna žalúdočné polypy nie sú len vzácny nález, ale tiež benígna povahy
virtuálne Snímky
virtuálne snímka (y) tohto článku možno nájsť tu :. http : ... //www diagnosticpathol nika diagnomx eu /vs /13000_ 2014_ 166
Kľúčové slová
Psie žalúdočné polypy COX-2 CDX2 Helicobacter spp Ki67 p53 Úvod
žalúdočné polypy (GPS), sú považované za heterogénne jednotka všeobecne definované ako luminální lézie vyčnievajúcich nad rovinou povrch sliznice, ktoré môžu byť biologicky klasifikované ako non-neoplastických a neoplastických lézií. U ľudí, ďalší klasifikácia je založená na vyhodnotenie histogenézy a nádorových potenciálu týchto lézií [1]. V súlade s tým, že medzi non-neoplastických epitelu žalúdočné polypy, tri podtypy sú rozpoznané: fundic žľazy polypy; hyperplastických polypy (a varianty) a neuroendokrinné nádory fundusu žľazy polypy
(NET). predstavujú najčastejší typ a sú histologicky charakterizované cistically rozšírených fundusu typu žliaz lemovaných sploštené parietálnych buniek s určitým stupňom architektonického skreslenia. Povrch zahŕňa foveolární typu epitelu, ktoré sa môžu objaviť atrofickej [1]. Hyperplastickú polypy sú zvyčajne pozorované v dutine a histologicky spočívajú v hyperplastické, pretiahnutá a vetvenia foveolae nachádza v hojnej edematózne a zapálené stróma. Cystická dilatácie boxov je takmer nemenná prítomný v hlbších častiach, a povrch je lemovaný jednovrstvového z foveolární typu epitelu [1]. Hyperplastická polypy sa vyskytujú na pozadí žalúdka a jeho vývoj je dôsledkom prehnané slizničné reakcie na poranenie. Sú spojené s Helicobacter pylori
(H. pylori
) infekcie a niektorí autori k záveru, že H. pylori
vykorenenie príčina úplné regresie alebo významný pokles jeho veľkosti. Je dôležité si uvedomiť, že ohniská dysplázia či karcinómu intramucosal sa možno stretnúť v týchto lézií [1], [2]. A konečne, NET alebo takzvané "karcinoidové" nádory sú histologicky zložené z hniezd šnúry, kanálikov a zhluky buniek, ktoré prevažne umiestnená medzi foveolární základ, bez toho by bol narušený celkový polyp architektúre [3].
Na rozdiel od dokumentované progresie v ľudskej rakoviny hrubého čreva, združenia lekárov s rozvojom rakoviny žalúdka nie je ešte definitívne stanovené, ale štúdie zdôrazňujú malígny potenciál týchto lézií. Praktickí lekári sú menej časté u psov a sú občasné náhodné nálezy pri endoskopicky alebo posmrtné vyšetrenie [4]. Sporadické psie praktickí lekári sú vzácne a príslušné literatúre je málo. Len nedávno Taulescu et al. [5] popísali histopatologické rysy 15 lézií. Čo sa týka nenádorových polypovitými výrastky, Svetová zdravotnícka organizácia (WHO) pre klasifikáciu nádorov u domácich zvierat predstavuje najjednoduchší systém, kde sa účtuje iba dva subjekty: hyperplastickú (regeneratívnu) a zápalové (benígne lymfatické) polypy. Prvý z nich sú histologicky identická s ľudským rovnomennej lézie a zlatého štandardu neskoršieho je prítomnosť normálneho epitelu pokrývajúci jadro granulačné tkanivo infiltrovaná rôznymi zápalových buniek, niekedy sprevádzaná lymfoidných agregáty s poprednými zárodočných centrách [4].
Niekoľko štúdií sa snaží zahrnúť niektoré markery pre malígny transformáciou v žalúdku človeka hyperplastické polypy boli vykonané však špecifickú molekulu, ktorá by mohla identifikovať, ktoré polyp podstúpi malígny transformáciu doteraz nebol nájdený. U psov, nie je veľa známe tejto súvislosti.
Cyklooxygenázy (COX) je enzým, ktorý umožňuje syntézu prostaglandínov a ďalších eikosanoidov z kyseliny arachidónovej. COX-2 izoforma hrá dôležitú úlohu v rozvoji rakoviny žalúdka vďaka inhibíciu apoptózy a zvýšenú bunkovú proliferáciou. Aj keď niekoľko štúdií ohlásil zvýšenú expresiu COX-2 v psích nádorov dostupné informácie ohľadom expresie COX-2 v psích žalúdočnej tkanive žiadne dáta, [6].
Mobilné kinetiku sa predpokladá, že sa zúčastňujú v progresii smerom k rakoviny žalúdka. Ki-67 protilátky sa používa na meranie indexu proliferácie určité tkanivá, za predpokladu, že vyššia Ki-67 ukazuje aktivitu nádorových buniek a predpovedá ďalšie správanie konkrétneho patológie [7].
Malígny transformáciu ľudského hyperplastické lekárov je spojené s dysplázia, s p53 hrá kľúčovú úlohu v tomto procese [8]. Nadmerná expresia mutovaného proteínu p53 bola v korelácii s patologickými parametrami nádoru agresivity a zlou prognózou u ľudskej rakoviny žalúdka [9].
Podľa modelu Correa v [10], ľudskej rakoviny žalúdka sa vyvíja vo viacstupňovom procese od chronickej aktívnej gastritíde na črevnú metaplázia (IM), dysplázia, a nakoniec, rakovina žalúdka. IM je považovaný za predchodcu lézie, skladajúci sa z transdiferenciace žalúdočnej sliznice črevnej fenotypu, vyznačujúci sa tým, aberantne expresia transkripčného faktoru homeobox CDX2 [11]. Vyjadrenie CDX2 v psích lekárov nebola nikdy charakterizovaná.
Ako menej časté lézie, molekulárne vlastnosti a nádorových potenciál psích lekárov zostáva oblasť záujmu. Účelom tejto štúdie je popísať niektoré molekulárne vlastnosti týchto lézií, aby bolo možné lepšie pochopiť ich biologické správanie. Navyše expresie týchto molekúl v normálnej žalúdočnej sliznice (NGM) bol skúmaný zhodnotiť význam ich stratu alebo nadmerné expresie v žalúdočných lézií
Zvieratá &.; Metódy
Štyri normálny psie antrálnej vzorky žalúdočnej sliznice a deväť psie antrálnej GPS (1A), dostal v rokoch 2007 až 2013, boli vybrané z archívu laboratória veterinárnej patológie, ICBAS-UP (Portugalsko) a patológie Ústavu MKO , Kluž (Rumunsko). Tkanivá boli fixované v 10% pufrovanom formalínu a zaliatych v parafínu. Sériovej po sebe idúce úseky 3 um hrubé boli robené, jeden pre rutinné histologickej diagnóze a iní pre imunohistochemické štúdie. Obrázok 1 morfologické a imunohistochemické rysy psie žalúdočných polypov. (A) Gross aspekt; (B) hyperplastická polyp; (C) Zápalová polyp; (D) (E) H. pylori
immunoexpression. (F) COX-2 immunoexpression; (G) Ki-67 immunoexpression; (H), p53 immunoexpression. Vsadenie: Intratubulární Seminoe (+ kontrola) (I) CDX2 immunoexpression. Vsadenie: normálne črevo (+ kontrola). Morfologické a imunohistochemické rysy psích žalúdočných polypov. (A) Gross aspekt pyloric žalúdočnej sliznice, čo ukazuje na osamelú polyp (vymedzený priestor) (case 9); (B) a (C) Mikroskopické vyšetrenie hematoxylínom a eosínu-nafarbená odhaľujúce hyperplastickú polyp (prípad 4) a zápalový polyp (prípad 8). Bar = 500 um a 100 um, v danom poradí. (D) Photomicrograph preukázanie pozitívneho H. pylori
expresiu v hyperplastickú polypu (prípad 2). Bar = 200 um. (E) Detail predchádzajúcom prípade poukazujúce na veľké množstvo Helicobacter
spp. organizmy vnútri žalúdočných žliaz. Bar = 10 um. (F) Photomicrograph odhaľuje silné a difúzne expresie COX-2 do rozvetvený foveolární epitelu hyperplastické polypu (prípad 1). Bar = 200 um. Vložka predstavuje detail expresie COX-2 do foveolární epitelu; (G) imunologické Ki-67 v hyperplastickú epitelu (prípad 3: 32,1%). Bar = 200 um. Vsadenie ukazuje detail KI-67 expresie v šiji a v základni žliaz. (H) Photomicrograph odhaľuje negatívne imunohistochemické reaktivitu p53 v hyperplastické polypu (prípad 2). Bar = 200 um. Tkanivo z psieho intratubulární seminoma bola použitá ako pozitívna kontrola pre p53 (vložky). (I) Negatívny CDX2 výraz v hyperplastickú polypu (prípad 1). Bar = 200 um. Tkanivo z psieho normálneho čreva bola použitá ako pozitívna kontrola pre CDX2 (vložky). Imunoperoxidázovému-Diaminobenzidine škvrna s Mayer hematoxylín kontrastným (D-I).
Rezy boli skúmané nezávisle troma patológmi. Normálny tkanivá boli považované za také podľa Prachasilpchain et al. [10] a boli negatívne na prítomnosť Helicobacter
spp. (Potvrdené modifikovaným farbivom Giemsa a anti-H. Pylori
imunohistochémia). VL boli klasifikované podľa klasifikácie WHO pre hospodárske zvieratá diagnostické kritériá [3].
Pre imunohistochemické štúdie, bola použitá panel protilátok špecifických pre niekoľko antigénov (tabuľka 1). bol použitý Novolink Max-Polymer detekčný systém (Novocastra) podľa protilátok výrobcu instructions.Table 1 používané na psie žalúdočné tkaniva imunohistochémia
Marker
Clone
Dodávateľ
riedenie
antigén odmaskovaniu
Inkubačná doba
Pozitívna kontrola
H. pylori
Polyklonálne
Zytomed, Deutschland
1: 200
CB /PC
ON
ľudskej žalúdočnej sliznice H. pylori
COX-2
SP21
NeoMarkers, USA
1:75
CB /PC
ON
Psie nádoru mliečnej žľazy
p53
Anti-p53
Novocastra, UK
1: 400
CB /PC
v
Canine Intratubulární Seminoe
CDX2
AMT28
Novocastra, UK
1: 300
CB /PC
ON
Psie normálne črevo
Ki-67
MIB-1
Dako, Dánsko
01:50
CB /PC
ON
Psie vysoko kvalitné lymfóm
CB
citrátu; PC tlakový hrniec.
ON
cez noc.
Detekciu Helicobacter
spp. bola hodnotená ako: negatívne, bez organizmov, alebo pozitívne, prítomnosť Helicobacter
spp. Bakteriálna kolonizácie hustota bola kvantifikovaná: +
málo (menej ako 10/400 x); ++
, Stredná (10-50 /400 ×) a +++, veľký počet organizmov (viac než 50/400 ×). Poloha Baktérie bola zaznamenaná: 0 = neprítomný; 1 = povrch sliznice a žalúdočné jamy; 2 = 1 + lumen žalúdočných žliaz (400 x) [12]. COX-2 immunoexpression bola hodnotená na percento značených buniek (< 25%, 25-50%, 51-75%; > 75%) a intenzity značenia (0, záporná +, slabý, ++, stredné; +++, silná). Index značenie Ki-67 bola definovaná ako percento pozitívnych jadier stanovené odpočtom aspoň 1000 jadra vo vybraných oblastiach (x 400) [8]. Navyše imunoreaktivita bola hodnotená s ohľadom na žalúdočné žľazy rozdelených do troch zón: zóna 1 (žalúdočné PIT); Zóna 2 (šije /proliferačnej zóna) a zóna 3 (žľaza báza) [13]. p53 a CDX2 imunoreaktivity boli definované ako pozitívne, ak bol zreteľný nukleárnej farbenie uznaná v najmenej 10% buniek [8], [14].
Zistenie
dostupných klinických údajov, histologické klasifikácia lézií a hlavné imunohistochemických výsledky, s ohľadom na navrhovaných kritériách pre každú protilátku, sú zhrnuté v tabuľke 2.Table 2 boli k dispozícii údaje o zvieratách, histologické klasifikácii psích žalúdočných tkanivách a hlavné Imunohistochemické nálezy
Case
Plemeno

Pohlavie /vek (roky)
Histologické
Helicobacter
spp.
COX-2
KI-67 (%)
p53
CDX2
SE
DG
1
Rotvajler
M /12
hyperplastická polyp
+++ 2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
36,12,3 - -
2
Írsky seter
F /12
hyperplastická polyp
+++2
>75%/+++
>75%/+++
31,42,3
-
-
3
Poodle
F/12
Hyperplastic polyp
+++ 2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
32,12,3 - -
4
Argentínska doga
F /9
hyperplastická polyp
++ 2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
28,92 , 3 - -
5
Rotvajler
F /14
hyperplastická polyp
2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
30,92,3 - -
6
Zmiešané plemeno
F /16
hyperplastická polyp
++2
>75%/+++
>75%/+++
16,72,3
-
-
7
Poodle
M/13
Inflammatory polyp
++ 2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
31,52,3 - -
8
nemecký ovčiak
M /9
zápalový polyp
++ 2 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
10,82
- -
9
Boxer
M /10
hyperplastická polyp
1 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /+++
4,62 - -
10
Zmiešané plemeno
M /2
NGM
0 Hotel > 75% /++ + Hotel > 75% /+
18,32 - -
11
Pudel cross
F/15
NGM
0
>75%/+++
>75%/++
23,62
-
-
12
Boxer
M/4
NGM
0
>75%/+++
>75%/+
15,62
-
-
13
Mixed plemeno
M /8
NGM
0 Hotel > 75% /+++ Hotel > 75% /++
22,82 -
-
M
muž, F
female
COX-2 :. SE, povrch epitelu; DG, hlbšie žľazy. ≫ 75% immunopositive buniek, + slabá, ++ stredné, +++ silnej intenzity
Helicobacter
spp.: + Málo .; ++ Stredne číslo; +++ Veľké množstvo organizmov. Baktérií umiestnenia 0, chýba; 1 = zapnuté povrch sliznice a do žalúdka jám; 2 = 1+ lumen žalúdočných žliaz; KI-67: zóna 2, šije a zóna 3, žľaza základňa; p53 a CDX2: -., negatívne
z deviatich GP lézií, sedem bolo klasifikované ako hyperplastických polypy (obrázok 1b) a dva ako zápalových polypov (obrázok 1C). Neboli zistené žiadne známky dysplázie. Všetci praktickí lekári odhalil Helicobacter
spp. organizmov (obrázok 1D), s výhodou sa nachádza v lumena žalúdočných žliaz (obrázok 1E) (tabuľka 2). Rozdiely
na COX-2 immunoexpression medzi NGM a lekárov boli minimálne (tabuľka 2). Obe skupiny prezentované silné expresie COX-2 vo viac ako 75% žalúdočné povrchového epitelu. Hlboko, žalúdočné žľazy NGM ukázali slabý až stredne expresie COX-2, zatiaľ čo žľazy lekárov ukázali silnú expresie COX-2 (obrázok 1F). Avšak, lekári zobrazená difúzna COX-2 akumuláciu cytoplazmou, v epiteliálnych bunkách.
Proliferačnej index lekárov bola vyššia (stredná hodnota 24,8%) než NGM (stredná hodnota 20,0%). Bola zistená Ki-67 signál iba v proliferačnej priestore NGM zatiaľ čo v praktických lekárov, toto značenie často dosiahla zónu 3 (obr 1G).
Obaja p53 a CDX2 imunodetekce bol úplne negatívny vo všetkých prípadoch psieho NGM a GPS (obr . 1H a i)
Diskusia & Záver
štúdií ohľadom COX-2 v ľudskom NGM hlásený nedostatok [15], [16], [17] slabý alebo všeobecný výraz, [18]. Tieto rozdiely sú zrejme súvisí s primárnou protilátkou (monoklonálne alebo polyklonálne) a do bodovacieho systému prijatého na vyhodnotenie imunoreaktivity. Dôsledné Expresia COX-2 v NGM môže byť vysvetlená dve hypotézy: (1) COX-2 je konštitutívne exprimovaný v psej žalúdočnej sliznici; alebo (2) Nedávne štúdie ukázali, že H. pylori
indukovanej expresie COX-2 v ľudskom žalúdočnej sliznice a McCarthy et al. [19] k záveru, že expresia COX-2 v antrálnej sliznici bola znížená, ale nie je odstránená v epitelu po úspešnej eradikácii H. pylori
. Sung et al. [15] tiež ukázalo, že aj keď eradikácia H. pylori
, došlo len k miernemu zníženiu COX-2 v žalúdočnej epitel, hoci expresia COX-2 v lamina propria bola výrazne znížená. Napriek tomu títo psi sú v súčasnosti negatívne Helicobacter
spp., Že nie je možné vylúčiť predchádzajúcej infekcii týchto organizmov, ktoré by mohli odôvodniť pretrvávajúce expresiu COX-2.
Zvýšenú expresiu COX-2 vo hlbšie žľazy lekárov možno vysvetliť prítomnosti rôznych množstvo Helicobacter
organizmov v tomto žalúdku priestore, ktoré podobne ako u ľudí, čo sa deje s H. pylori, sa môžu
viesť k zvýšenej expresiu tohto enzýmu prostredníctvom produkcie prozápalových cytokínov [15] - [17].
podľa definície, GP je hyperproliferáciou žalúdočnej sliznice, čím sa jej nástup je nevyhnutne spojené so zvýšením obratu buniek a mitotické aktivity. Yao et al. hlásených proliferačnej index 22,2% v ľudských hyperplastické lekárov. Rozdiel v percentách získaných v oboch štúdiách ľahko môže súvisieť s predmetných druhov (človek verzus pes) a /alebo s veľkosťou vzorky (22 vs. 9 prípadov). Ďalej, zvýšená proliferácia žalúdočnej sliznice bola spojená s H. pylori
[20], pretože infekcia krátko zvyšuje apoptózu povrchu a proliferatívnych buniek, a potom rozširuje proliferačnej zóny hlbšie do žľazy, pravdepodobne ako vyrovnávacia reakcie [21] .
proliferatívnej zóny v antrálnej žalúdku, je v dolnej tretine typických žľazy jednotkami [21], v blízkosti spodnej časti žalúdka jam, tvoriaci miesto bunkovej obnove. Jedná sa o veľmi krátky priestor, s nedostatočnými alebo žiadnymi mitózách, je takmer neidentifikovateľné v neaktívnom žalúdočnej sliznici. V ľudskej NGM, Ki-67 signál je prítomný iba v proliferačnej priestore [13], ako napríklad v našej štúdii (tabuľka 2). Avšak, v systéme GPS, tieto označenia sa často dosiahne zóny 3 (obrázok 1G), pravdepodobne preto, že v šiji sú bunky, ktoré neustále regenerovať ďalšie, ktoré migrujú obojsmerne, na povrch sliznice a dole na základňu žľazy, ako sa diferencujú na zrelé bunky [21].
Carrasco a kol. [22] je popísané p53-pozitívne farbenie u približne 94,1% psích žalúdočných karcinómov. Naše výsledky posilňujú predchádzajúce štúdie u ľudí, v ktorom bol p53 uznaná iba v (pre) neoplastických komponentov [9], skôr ako non-nádorové žalúdočnej sliznice [18] alebo praktickí lekári [8]. Okrem toho, Guo et al. [2] ko-expresiu ako CA19-9 a p53 obmedzená na malé oblasti atypických epiteliálnych buniek, ktorá sa odhaduje ako adenokarcinóm, prítomných v ľudskom hyperplastické foveolární polyp. Navyše index KI-67 bola vyššia v týchto malígnych ložísk v porovnaní s obklopený žalúdočnej sliznici.
Doster et al. [23] je popísané CDX2 expresiu v ohniskách metaplastická zmeny, a to pohárikových buniek, prítomný vo všetkých prípadoch psích žalúdočných adenokarcinómy zahrnuté vo svojej štúdii. IM je nezvyčajný jav u psa a až do dnešného dňa neexistuje žiadny opis týkajúci sa jeho spontánny výskyt. U ľudí, IM je obvykle indukuje kontinuálna dráždenie žalúdočnej sliznice a H. pylori infekcie
zostáva dôležitým spúšťacím faktorom. Molekulárna dráhy zapojené do psej reguláciu a funkciu CDX2 nie sú známe. Avšak, pretože expresia rovnaké transkripčný faktor je spojený s udržiavaním /vývoj črevnej fenotypu ako u ľudí a psov, hypotéza, že CDX2 je podobne upravený v oboch druhov je vierohodné (dáta nie sú publikované).
Helicobacter
spp. prítomný v prípadoch psích lekárov sa môže vyvinúť rôzne stratégie kolonizácie, infekcie a patogenita od tých, cvičil H. pylori
u ľudí, nakoniec sa ospravedlňovať vzácnosti IM v žalúdku psa. Preto dráhy zodpovedné za indukciu CDX2 expresie u psov sa môžu líšiť od tých, ktoré už bolo popísané u ľudí. Ďalšie štúdie sú potrebné na potvrdenie tejto hypotézy.
Aj keď niektoré patologické rysy polypov koreluje s rizikom vzniku rakoviny u ľudí, u psov je to ešte nie je možné určiť, ktoré lézie bude postupovať k rakovine. Na záver, táto štúdia naznačuje, že psie sporadické praktickí lekári sú vzácny nález a benígne povahy.
Deklarácia
Poďakovanie
I. Amorim (SFRH /BD /76237/2011) uznáva, FCT, nadácia portugalskej pre vedu a technológie (FCT), pre finančnú podporu (PTDC /CVT /117610/2010). IPATIMUP je spolupracovník Laboratórium portugalského ministerstva vedy, technológie a vysokého školstva a je čiastočne podporovaná FCT. Tento článok bol publikovaný v rámci Európskeho sociálneho fondu, Operačný program Rozvoj ľudských zdrojov 2007-2013 (POSDRU /159 /1,5 /S /136893).
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na pôvodné autorov predložený súbory obrazov. Pôvodný súbor 13000_2014_166_MOESM1_ESM.gif autorov na obrázok 1 protichodnými záujmami
Žiadny z autorov tohto dokumentu má finančnú alebo osobný vzťah s ostatnými ľuďmi alebo organizáciami, ktoré by mohli nevhodne ovplyvniť či skreslenie obsahu papiera.

• Makroskopické rozsah žalúdočnej sliznici atrofia: zvýšený rizikový faktor pre pažeráka skvamocelulárneho karcinómu v Japonsku
• Rizikové faktory pre hĺbku infiltrácie v diferencovanom depresii včasného karcinómu žalúdka: predbežné analysis