Vloga osi CCL22 CCR4 na metastaz želodčnih rakavih celic v omental mlečno vložki

Vloga osi CCL22 CCR4 v metastaz želodca rakavih celic v omental mlečno mestih
Abstract
Ozadje
omentum je eden od prvih mest za peritonealno metastaze, saj ima mlečno vložki, ki zagotavljajo mikrookolje za rakave celice, da zlahka selijo in zrastejo v micrometastases. Ta študija je raziskovala vlogo osi CCL22 CCR4 v želodčnih rakave celice selektivno razraščati v mlečno lise.
Metode
raka želodca MFC celice, označene z Dii so intraperitonealno injicira v sev 615 miši. Miši evtanazijo v določenih časovnih presledkih in omentum smo izrezali za imunohistokemijo. Učinki CCL22 na orožja in migracije MFCS ocenil MTT in trans-tudi teste. RT-PCR in Western blot analiza je odkrila CCR4 mRNA in koncentracije proteina izražanja v MFC. Imunohistokemija je bil uporabljen za analizo CCL22 in CCR4 izraz v mlečno kraju samem micrometastases.
Rezultati
dveh tednih po intraperitonealno injekcijo, so mlečni kraju samem področja popolnoma zaseden razmnožene želodčni rakave celice in micrometastases celic grozd tipa niso opazili. V nasprotju s tem, rakave celice oblikujejo posamezne celice tipa micrometastases v non-mlečno kraju samem območjih. MFCS izraženo CCR4, ki so lokalizirane na površini celic in ali v citoplazmi. Različne koncentracije CCL22 znatno povečala sposobnost širjenja orožja za MFC. Poleg tega koncentracije CCL22 med 10-100 ng /ml znatno povečala migracija MFCS. V omental mlečno lise smo CCL22 lokalizirana predvsem na površini celic in ali v citoplazmi. V oddelkih omental mlečno promptnih micrometastases je CCR4 priznana ali v želodčnih rakavih celic, ki sestavljajo celice, mlečne lise, krvne celice in endotelijske celice krvi.
Sklepe
Omental mlečni madeži so prijetno mikrookolje za peritonealno brezplačno želodčne rakavih celic seliti, preživeti, in vzpostaviti celično grozd tipa metastaze. Os CCL22 CCR4 prispeva k temu procesu selektivne infiltracije.
Ključne besede
rak želodca Omental mlečno mesto peritonealni metastaze CCL22 CCR4 Uvod
peritonealni metastaze je pogost vzorec oddaljenih metastaz pri bolnikih z rakom želodca. Številne študije so potrdile, da je prognoza bolnikov z rakom želodca s peritonealno metastaz slaba, celo v tistih bolnikov, zdravljenih z radikalno operacijo [1]. Peritonealno metastaze razvije iz micrometastases izvirajo iz prostih peritonealno celic raka [2]. Zato je pomembno razumeti lastnosti in mehanizmov, ki sodelujejo pri nastanku peritonealno micrometastases. Takšno razumevanje bo pomoč pri preprečevanju in ponovitve peritonealno metastaz, s čimer se izboljša prognozo bolnikov z rakom želodca.
Mlečne mesta so primitivni limfatičnega tkiva v peritonealno votlino ljudi in živali, ki obstaja predvsem v večji omentum. Nasprotno pa so razmeroma malo mlečni madeži na voljo v mezenterij in medeničnega dna, in ne mlečni madeži se nahajajo na drugih področjih potrebušnice [3]. Mlečni vložki obsegajo številne makrofag in limfociti seštevanja in so vključeni v potrditev delcev, bakterij in tumorskih celic trebušne votline, ki igrajo pomembno vlogo pri peritonealno prestregli [4] - [6]. Še posebej je bilo ugotovljeno, da je citotoksična proti tumorskimi celicami omental makrofagov [7], [8]. Nekatere študije so pokazale, da so omental mlečni madeži znanih območij v zasevkov karcinomov jajčnikov, želodca in debelega črevesa [9]. Rakave celice selektivno prodrli v mlečno mest v zgodnjih fazah peritonealno širjenje raka in poiščite mikrookolje, v kateri so sposobni preživeti, rastejo in tvorijo trdne metastaz [10]. To preferenčno nastavek je mogoče pojasniti z obstojem nekaterih posebnih značilnosti mlečno mestih, vključno z višjimi stopnjami celičnih adhezijskih molekul in rasti stimulacijskih dejavnikov [11], [12]. Zato, medtem ko mlečni madeži imajo citotoksične lastnosti proti tumorskih celic in igra pomembno vlogo pri peritonealni obrambi, nudijo tudi lokacije, kjer se pojavljajo tumorske celice razrastejo in micrometastasis.
Kemokini so majhne izločajo proteine, ki so razvrščeni v štiri poddrużin temelji na zaporedju ohranjeni N-terminalni ostanki cisteinske: CXC, CC, C in CX3C [13], [14]. Številne študije so dokazale, da so kemokini in kemokinskih receptorji vzročno vključeni v metastaz raka [15] - [21]. The-makrofagov izvira kemokin MDC /CCL22 je eden od Kemokini CC ki jih proizvaja makrofagov in CCR4 je ugotovila, da [17] svoje posebne receptorje - [21], ki je obenem funkcionalna receptor za druge kemokinov CC. Izražanje receptorjev za kemokine je znano, da je povezano z rakom metastazami, kot CXCR4, CCR7 in CCR10 raka dojke [16] in CXCR5, CCR6, CCR7 in CCR4 na raka trebušne slinavke, želodca in prostate [22], [23] . Nekatere študije dokončno dokazali, da CXCR4 in CXCL12 igrajo pomembno vlogo pri metastaz želodca rakavih celic v peritonealno votlino [23] - [25]
Omental mlečni madeži obsegajo številne makrofage, vendar vloga MDC /CCL22-. še ni bila ugotovljena CCR4 os v želodcu rakave celice selektivno razraščati v mlečno mestih. Zato smo pregledali izraz MDC /CCL22 in CCR4 v mlečno promptnih micrometastases, z namenom vzpostavitve nove metode zdravljenja za preprečevanje peritonealno metastaze s poudarkom na kemotakso želodčnih rakavih celic.
Materiali in metode
tumorja mobilni Line in živali
glodalca želodca MFCS raka, ki izhajajo iz sev 615 mišje raka proksimalnega želodcu, so bili pridobljeni iz centralnega laboratorija odvisnih bolnišnice frist Dalian Medical University. MFCS smo kultivirali v RPMI-1640 (Gibco), dopolnjenem z 10% fetalnega govejega seruma (Sigma) v inkubatorju s 5% CO 2 pri 37 ° C. Ko konfluentnih smo celice trypsinised in splaknemo v medijih D-Hanksovimi. Štetje izvedljiva celica je bila narejena z trypan modro izključenosti.
Šest tednov stare sev 615 miši so bili pridobljeni iz Dalian Medicinske univerze na Kitajskem. Miši smo vzdrževali pri standardnih laboratorijskih pogojih in so imeli prost dostop do standardnega laboratorijskega hrane in vode. Študija protokoli so bili potrjeni s strani Odbora za raziskave živali v Dalian Medicinske univerze na Kitajskem v skladu z nacionalnimi smernicami (Dovoljeno število: SYXK2008-0002). so bili sprejeti vsi ukrepi za zmanjšanje bolečine ali nelagodje.
vrstično elektronsko mikroskopijo
Omental vzorci so bili zbrani, fiksni čez noč s 2,5% glutaraldehid v 0,1 M CEVI pufer (pH 6,9), speremo trikrat sveže cevi buffer (pH 6,9) in po fiksni 1,5 ure v 1% osmijevim tetroksidom v 0,1 M cevi pufer (pH 6,9). Vzorci so bili sprani s dH 2O trikrat in nato dehidriran pri povečevanju koncentracije etanola (50, 70, 90 in 100%). Vzorci so bili kritični točki, posušimo iz tekočega ogljikovega dioksida, prevlečene z debelino 3 nm z plazme premazovanje mijevim in opazili s Hitachi S-520 vrstičnim elektronskim mikroskopom.
Transmisijsko elektronsko mikroskopijo
dobljenega Šest omental maščobni trakovi od treh so uporabili 615 miši vsakega spola. Pasovih potopimo v raztopino vezave, ki vsebuje 2% glutaraldehid 2 uri, nato pa po določenih v raztopini, ki vsebuje 2% osmijev tetroksid in 1,5% saharoze v 0,05 M fosfatnega pufra za 2 uri pri 4 ° C. Osebki so se sušila v stopenjski seriji etanola. Po zamenjavi aceton za etanol, so bili osebki vgrajeni v epoksi blokih smole. Ultra-tanke odseki smo obarvali z uranil acetat in svinca citrat in opazili pri prenosnih elektronskim mikroskopom (JEM-2000EX) navezanost.
Celic tumorja na omentum
MFC celice smo inkubirali v popolni RPMI-1640 v koncentraciji 2 mg /L Dii (Sigma) za 60 minut pri 37 ° C. Celice smo sprali trikrat z uravnoteženim raztopino soli Hanks '. Stopnja celica označevanja je bila 100% in 1 x 10 4 celice intraperitonealno injicira. Miši evtanazijo pri 4, 12, 36, 48, 72 in 120 ur, in 7, 10, in 14 dni po intraperitonealno injekcijo. Omentum smo izrezali in raztegne na stekelca za mikroskopiranje za nadaljnjo predelavo.
On in so bili zbrani Imunohistokemijsko
Omental vzorcev, določene v 4% raztopine formaldehida (pH 7,4) pri 4 ° C za 24 ur, trikrat izprana s fosfatnim pufrom (pH 7,4), 3 ure, dehidrirali v stopenjski seriji etanola in vdelali v parafin. Nato smo 5 mikrometrov debelih zaporednih odsekov pripravljenih za HE in imunskim barvanjem ga deparaffinisation s ksilena in rehidraciji s prilagojenem etanolom.
Za poveča ekspresijo antigena v tkivih, citrat raztopino dodamo k vzorcem in so bili kuhali v mikrovalovni pečici pečica. Vzorce smo obdelali s 3% raztopino vodikovega peroksida za 10 minut za zatiranje endogenega peroksidaze aktivnost in nato speremo s fosfatnim pufrom (PBS). Za preprečevanje nespecifične imunske reakcije, smo vzorce obdelali s 3% normalne kozji serum 10 min in spere s PBS. primarna poliklonalni kunčjega anti-miš CCL22 protitelo (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, ZDA) in kunčjega anti-miš CCR4 protitelo (Abcam, Cambridge, Velika Britanija), smo razredčili 1: 100 s pomočjo koz seruma in inkubiramo pri sobni temperaturi 1 uro. Po treh 2 min opere s PBS, so odseki inkubirali s kozjim biotiniliranega sekundarnega protitelesa za 30 min (Dako, CARPINTERIA, CA, ZDA). Po treh 2 min opere s PBS, je streptavidina -horseradish peroksidazo (DAKO) dodamo k odseku 30 minut, čemur sledi nadaljnja tri 2 min opere s PBS. Vzorci so bili razviti z 3,3'-diaminobenzidine substrata (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Kanada) za 1 minuto in jih nasprotno s hematoksilinom Mayer. Diapozitivi so dehidrirani po standardni postopek in zapečatena z coverslips. Negativna kontrola smo pripravili po enakem postopku ob uporabi PBS namesto primarnega protitelesa. Normalne želodcu tkiva smo uporabili kot pozitivno kontrolo.
Imunocitokemija obarvanja CCR4
želodčnega rakave celice zasadimo v komornih diapozitive prevlečenih s poli-L-lizina, pustimo, da se veže za 48 ur in nato uporabljene za imunocitokemija. Celice so bile določene z 0,3% H 2O 2 v metanolu za 60 minut pri sobni temperaturi, speremo 4-krat v PBS, blokirali s 3% BSA in permeabilised s PBS, ki vsebuje 0,1% Tritona X-100 za 60 minut pri sobni temperaturi. Protitelo, FITC konjugiranim anti-miš CCR4 poliklonska protiteles (1 ug /ml, eBioscience) smo inkubirali 60 min pri 37 ° C, speremo 4-krat in pregleda pod fluorescenčni mikroskop (BX-51 TR32000 Olympus).
imunofluorescenčnim označevanje makrofagov v omental mlečno vložki
za imunohistokemijo smo omentum določene v formalinu 60 minut ter speremo trikrat s fosfatnim pufrom. Omentum smo inkubirali 60 min pri 37 ° C s FITC konjugiranim anti-miške F4 /80 mišje makrofagov označevalcem (1 mg /ml; Biolegend), izprali trikrat s fosfatom zapufrano slanico, nato posušimo na zraku v temno Prostor za 12 ur. Imunohistokemijsko je neposredno zadel za slike so bile posnete z fluorescence mikroskopa. (BX-51 TR32000, Olympus)
Reverse transkripcijo-PCR analiza
Total RNA je bila vzeta in prečiščen iz kultiviranih MFC z uporabo RNeasy Mini Kit (Qiagen, Milano, Italija). Pridobivanje vključuje DNazo I prebavo korak je. RNA količina in kakovost je bila ocenjena z UV spektrofotometrijo. RNA je bila prepisana na cDNA z nadpisano Prva sinteza traku System (Invitrogen). RT-PCR smo izvedli z nadpisano One-Step (Invitrogen). Primerji, ki se uporabljajo, so bili naslednji: CCR4 oligonukleotidni 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 protismerni oligonukleotidni 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH naprej premaz 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 'in GAPDH obrnjenimi primer 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
Western blot analizo
celice speremo s fosfatnim pufrom (PBS) in lizirali v radioimunskega testa (RIPA) liznega pufra (150 mM NaCI, 50 mM Tris-HCI, 0,1% natrijevega dodecil sulfata, 1% Nonidet P-40, 1 mM fenilmetilsulfonil fluorid). Za lizate so bili potrjeni s centrifugiranjem (15.000 obratih 5 minut) in koncentracije proteinske smo določili po metodi bicinchoninic sekvenco pred shranjevanjem pri -80 ° C. Enakovredne količine beljakovin ločimo na SDS-poliakrilamid gelsko elektroforezo (PAGE) in prenese na poliviniliden ditluoridne membrane. Membrane so pri 5% nemastnega mleka blokiran v Tris pufrom z 0,1% Tween 20 in inkubiramo s primarnim protitelesom preko noči pri 4 ° C. Imunskih kompleksov smo nato zazna z izboljšano kemiluminescenco sistema (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Celičnem testu proliferacije
MFCS smo zasejali v 96 vdolbinami z gostoto 1 x 10 4 celic na jamico ( 200 ml) in inkubirali v kompletnem mediju 24 ur. Medij je bil nadomeščen z medij brez seruma, ki vsebujejo različne koncentracije CCL22 z RPMI 1640, ki služi kot negativna kontrola. Po inkubaciji 24 ur, 20 u.l z MTT Reagent, dodamo (5 mg /ml Sigma-Aldrich Co.) ter inkubirali 4 ure. Nato dodamo 100 xl detergentov reagenta, pustimo pri sobni temperaturi v temnem prostoru 2 uri in absorbanco pri 492 nm zabeležene.
Migracije vsebnosti
mobilnega migracijske teste smo izvedli v komorah s premerom 6,4 mm, z 8-mm por filtri (Becton Dickinson LABWARE, Franklin Lakes, NJ). MFCS damo v zgornjo komoro (100 celic na jamico), medtem ko je spodnja komora napolni z DMEM, ki vsebujejo različne koncentracije CCL22 (0, 1, 10 in 100 ng /ml). Celice inkubiramo 24 ur pri 37 ° C v 5% CO2. Celice, ki niso skozi membrano pore bile odstranjene. Preselili celice so bile določene in obarvajo. Celic številke v spodnji komori preštejemo 10 naključnih področjih (x 200) in izraženo kot povprečno število celic na vidno polje. Podatki so bili kot povprečje treh neodvisnih poskusov zastopane.
Rezultati
morfologija mlečno lise
elektronsko mikroskopijo je pokazala, da so mlečni madeži večinoma sestavljena iz bogatih makrofagov (slika 1A), z nekaterimi limfocitov, nevtrofilcev in različne stromalnih celic (slika 1B). Slika 1 Prenos in vrstična elektronska mikroskopija omental mlečno mestih. (A) z elektronsko mikroskopijo pokazala, da je sestava celica v mlečno lis večinoma sestavljena iz obilnih makrofagov (M). (B) Nekatere limfociti (L) in nevtrofilcev (N) so bile ugotovljene tudi (povečava, 4,000X). (C) v Rimski kraju samem področjih, se plast celic površine sestavljena iz makrofagov, limfocitov in občasne mesothelial celice in so ločeni z medceličnih vrzeli ali pore. (D) v ne-mlečno kraju samem območja, niso opazili intercelularne vrzeli ali pore (povečavi 500X).
Scanning elektronska mikroskopija je pokazala, da je bila površina teh mlečno madežev morfološko razlikuje od ne-mlečno kraju samem območjih od omentum. sloj celice površinske sestavljalo makrofagov, limfocitov in prekinjenih mesothelial celic, ki so ločene z medceličnih vrzeli ali por (slika 1C). V ne-mlečno kraju samem območjih, medceličnem vrzeli ali pore niso opazili (slika 1D).
Imunofluorescenčni in HE za omental mlečno mestih
celotno večjo omentum od 615 miši kavdalno obrobljen z ozkim maščobnega tkiva trak (slika 2A), vzdolž katere so opazili celični agregati (zelene), znan kot mlečno lise (slika 2B). Krvne kapilare, arteriole in lymphocapillary plovila, je bilo ugotovljeno v mlečno kraju samem območjih (slika 2C). Slika 2 Morfologija z mlečno mestih. (A-B) Večja omentum od 615 miši obrobljen z ozkim trakom maščobnega tkiva (povečave, 50x), vzdolž katere so bile opažene celičnih agregatov, znane kot mlečno lis. (C) Krvne kapilare in arteriole plovila najdemo v mlečno kraju samem območjih (povečave, 200X).
Vizualizacija tumorskih celic na omentum v zgodnjih časih
MFCS začela držati omental mlečno lise na 4 ure po injiciranju. V 12 urah po injiciranju, so MFCS predvsem usmeriti v mlečno mestih (slika 3A), medtem ko ni bilo tumorske celice najdemo v ne-mlečno kraju samem območjih omentum (slika 3B). Slika 3 želodca rakave celice držijo omental mlečno kraju samem področjih v različnih časovnih točkah. (A-B) Slika mlečno promptnih makrofagov (zelena) in veliko število Dii-MFC (rdeča) skoncentrirana v mlečno kraju samem območjih 12 ur po intraperitonealno injekcijo. (C-D) Po 72 urah je število Dii-MFCS zmanjšal v mlečno naključnem področjih, medtem ko proliferirajoče celice tumorja v mlečno lise in so opazili nastanek micrometastases. Občasnih Tumorske celice so našli v omental non-mlečno kraju samem območjih. (E-F) Dva tedna po intraperitonealnem injiciranju, so mlečni naključne površine popolnoma zasedli proliferirajoče želodčne rakavih celic in opazili celica grozd tipa metastaze. Številčnejših rakava celica grozdi niso opazili v non-mlečno kraju samem območjih in rakave celice oblikujejo posamezne celice tipa metastaze. (Povečava, × 200).
Po 72 urah, vse bolj razširjeni tumorske celice in oblikovanje micrometastases so bile ugotovljene v mlečno kraju samem območjih (slika 3c). Nasprotno, po 72 urah po injiciranju zdravila, so občasnih tumorske celice najdemo v ne-mlečno kraju samem območjih, medtem ko ni bilo mobilnih skupin zaznati (slika 3D).
Po 2 tednih po intraperitonealno injekcijo, so mlečni kraju samem površine popolnoma ki jih razraščajo želodca rakavih celic in metastaz celic grozd tipa zasedli so opazili (slika 3E). V nasprotju s tem pa so se grozdi raka bolj razširjeni celic ne opazi v ne-mlečno kraju samem območjih in rakave celice oblikovali enoten celic tipa metastaze (Slika 3F).
CCR4 izraz v rakavih celicah želodca
MFCS jasno izražene CCR4 mRNA (Slika 4A). Protein izraz CCR4 je preučila tudi zahodni blot analiz (slika 4b). MFCS izraženo CCR4 protein, ki lokalizirane na celični površini in /ali v citoplazmi (slika 4C). Slika 4 CCR4 ekspresijo v želodčnih rakavih celic. (A) MFCS jasno izraženo CCR4 mRNA. (B) Protein izraz CCR4 je preučila tudi zahodni blot analiz. (C) MFCS izražena CCR4 proteina in njegovega je lokalizirana na celični površini in /ali v citoplazmi na MFCS.
Učinke CCL22 na proliferacijo in invazijo MFCS
učinkov CCL22 o širjenju MFCS so bili ocenjeni z MTT testom. CCL22 znatno povečal zmožnost proliferacije pri različnih koncentracijah (1-100 ng /ml) v primerjavi s kontrolno skupino (P < 0,05) (slika 5A). Slika 5 Učinki CCL22 na proliferacijo in invazijo MFCS. (A) CCL22 znatno povečal zmožnost proliferacije pri različnih koncentracijah (1-100 ng /ml) v primerjavi s kontrolno skupino (P <0,05). (BC) Koncentracija CCL22 med 10-100 ng /ml bistveno povečala migracija MFCS, pri čemer je optimalni odziv pa 10 ng /ml (P < 0,01).
Koncentraciji CCL22 med 10-100 ng /ml bistveno povečano migracijo MFCS, pri čemer je optimalni odziv pa 10 ng /ml. (p 0.05 glede na medij sam) (slika 5B-C)
CCL22 in CCR4 izražanje v omental mlečno naključnih micrometastases
v omental mlečni lise smo CCL22 opazili predvsem na celični površini in ali v citoplazmi sestavnih celic (slika 6A). V omental mlečno kraju samem micrometastases 12 ur, 7 dni in 14 dni po intraperitonealno injekcijo, je CCR4 opazili na ali v želodčnih rakave celice, sestavni celice iz mlečnega kraju samem, mesothelial celic, krvnih celic in krvnih endotelijskih celicah (slika 5B-D ). Slika 6 CCL22 in CCR4 izraz v omental mlečno kraju samem micrometastases. (A) v odseku med omental mlečno lise smo CCL22 lokalizirana predvsem na površini celic in ali v citoplazmi sestavnih celic. (B-D) v oddelku o omental mlečno kraju samem micrometastases (12 h po intraperitonealno injekcijo), je CCR4 lokalizirano ali v želodčnih rakavih celic, sestavni celice mlečna kraju samem, mesothelial celic, krvnih celic in krvnih endotelijskih celic. (C) Sedem dni po intraperitonealnem injiciranju. (D) v štirinajstih dneh po intraperitonealno injekcijo.
Razprava
etiologiji peritonealno metastaz raka želodca še ni pojasnjen. Sprostitev prostih rakavih celic iz lezije, kjer primarni tumor vdre v korena, se šteje, da je izvor peritonealne metastaz [26]. Več kot sto let je minilo od Paget razvil teorijo `semena in tal" [27]. Je hipoteza, da so nekatere tumorske celice (semena) selektivno kolonizirajo oddaljene organe (površje) z ugodno okolje, ki omogoča preživetje tumorskih celic. V tej študiji smo ugotovili, da so bili omental mlečni madeži prijetno mikrookolje zaradi svojih fizikalnih in kemijskih lastnosti, za peritonealno brezplačno želodčne rakavih celic za migracijo, preživetje, rast in tvorijo trdne metastaze.
Scanning elektronska mikroskopija je pokazala, da je površina teh mlečni madeži so morfološko razlikuje od ne-mlečno kraju samem območjih omentum. sloj celice površinske sestavljalo makrofagov, limfocitov in rezanih mesothelial celic in ločimo s številnimi medceličnih vrzeli ali pore. Izrazite intercelularne vrzeli ali pore povzročil submesothelial vezivnega tkiva in celice, ki se izpostavijo peritonealno površini, ki je predlagala, da predstavlja prednostno mesto za adhezijo tumorskih celic.
Micrometastases so trenutno razvrščene v enocelični in malih celic grozda vrste [28]. Sedanja Študija je pokazala drugačen tip tumorskih celic metastaz v mlečno mestih v primerjavi z ne-mlečno kraju samem območjih. Dva tedna po intraperitonealnem injiciranju, so mlečni naključne površine popolnoma zasedli proliferirajoče želodca rakavih celicah, in želodčni rakave celice tvorjena celica grozd tipa metastaz. Vendar proliferajoča rakave celice niso bili opaženi v non-mlečno kraju samem območij na isti stopnji, in rakave celice oblikujejo posamezne celice tipa metastaze. Ta pojav je mogoče pojasniti s številnimi krvnih kapilar in arterijskih plovil, ki so prisotna v omental mlečno kraju samem območij, ki zagotavljajo zadostno oskrbo s krvjo za rast želodca rakavih celic.
Nekatere študije so pokazale, da je proces rasti tumorja in metastaz vključuje različne celične celice in matrike interakcij celic, zunajcelični, ki so posredovane z celičnih adhezijskih molekul. Vsak korak zahteva adhezije celic molekule in receptorje [29]. Mesothelial celice obloge mlečno lise povzroči višjo stopnjo celičnih adhezijskih molekul (tj medcelične adhezijske molekule-1) kot ne-mlečno kraju samem področjih, kar bo prispevalo k večji oprijemljivosti [11], [12]. še ni bila opredeljena vloga Kemokini v želodčnih rakave celice selektivno infiltracije v mlečno mestih. Mlečne vložki obsegajo številne makrofagov, ki proizvajajo kemokin MDC /CCL22 [30]. CCL22 in njegov receptor CCR4 so vključeni v različne vrste patologij. CCL22 je zelo izražena v opeklin s T ustvarjenih celičnega vnetne bolezni [29]. CCR4 bil prvič poročala, da jih Th2 celice, ki sodelujejo pri humoralne imunosti in alergijskih odzivov [30] prednostno izražena. CCL22 in CCR4 prav tako igrajo pomembno vlogo pri rasti in metastaz [17] raka - [21], kar je veliko antagonisti CCR4 receptorjev, kot tudi anti-CCR4 protitelesa so se razvili v farmacevtski industriji [31], [32]. V tej študiji smo ugotovili, da MFCS jasno izraženo CCR4 mRNA. CCR4 protein je preučila tudi zahodni blot analiz. CCR4 je bila izražena na ali v želodčnih rakavih celic v poglavju o omental mlečno kraju samem micrometastases 12 ur, 7 dni in 14 dni po intraperitonealno injekcijo. CCL22 bil izražen predvsem na površini celic in ali v citoplazmi makrofagov. CCL22 znatno povečala sposobnost proliferacije želodčnih rakavih celic in koncentracije CCL22 med 10-100 ng /ml bistveno povečala migracija MFCS. Makrofagov v omental mlečno vložki ne le citotoksične lastnosti proti tumorskih celic, ampak tudi proizvajajo CCL22, ki pomaga pri želodčnih rakave celice preživijo in rastejo v trdne metastaz. Os MDC /CCL22 CCR4 igra pomembno vlogo pri želodčnih rakave celice selektivno infiltracije v omental mlečno vložki in oblikovanje trdne metastaze.
Zaključek
želodcu proste rakave celice (semena) poiskati mikrookolje vsebuje ugodne fizikalne in kemijske lastnosti znotraj mlečni madeži, v kateri so sposobni preživeti in rasti, ki določa celica grozd tipa metastaze. Os CCL22 CCR4 prispeva k selektivnim infiltracije. Informacije
avtorjev
Yi Zhang in Liang Cao so navedeni kot co-prva avtorjev.
Deklaracij
Zahvala
je ta projekt podprla z National Natural Science Foundation of China (število Grant: 81101633), Naravoslovno Foundation province Liaoning (število Grant: 201202047), projekt znanost in tehnologijo Dalian (število Grant: 2012E15SF142)
Avtorji "prvotna predloženi datoteke za. slike
Spodaj so povezave do originalnih predloženih spisov avtorjev za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif avtorjev 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif avtorjev prvotne datoteke za prvotno datoteke za sliko 3 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif avtorjev Slika 2 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif avtorjev prvotne datoteke za sliko 4 prvotne datoteke 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif avtorjev za sliki 5 izvirna datoteka 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif avtorjev na sliki 6 nasprotujočimi si interesi
Vsi avtorji izjavita, da nimajo konkurenčnih interesov.

• Združenje LEC in tnpA Helicobacter pylori genov z rakom želodca v brazilski population
• plazemske mRNA izraz za BRCA1 in TS kot potencialnih napovednih biomarkerjev za kemoterapijo v želodčni cancer