D'Roll vun der CCL22-CCR4 Achs am Metastasen vun gastric Kriibs Zellen an omental Mëllechstrooss Flecken

D'Roll vun der CCL22-CCR4 Achs am Metastasen vun gastric Kriibs Zellen an omental Mëllechstrooss Flecken VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung der omentum ass eent vun den éischte Plazen fir peritoneal Metastasen well et Mëllechstrooss Flecken leie datt e microenvironment déi fir Zellen Kriibs ze erhale opgeholl an micrometastases wuessen. Dës Etude propagéieren d'Roll vun der CCL22-CCR4 Achs an gastric Kriibs Zellen selektiv an Mëllechstrooss Flecken infiltrating. VerfÜgung Method Gastric Kriibs MFC Zellen mat DiI sech intraperitoneally an 615 Mais Deformatioun heijen Fortgeschratten VerfÜgung. De Mais sech op spezifizéierter Intervalle euthanised an der omentum war fir immunohistochemistry excised. D'Auswierkunge vun CCL22 op d'Prolifératioun a Migratioun vun MFCs sech duerch MTT an Ziel-gutt assays évaluéieren. RT-Hinnen alleguer a Western blot Analyse fonnt CCR4 mRNA an FAQ Ausdrock Niveauen am MFCs. Immunohistochemistry benotzt gouf CCL22 an CCR4 Ausdrock vun der Mëllechstrooss Plaz micrometastases ze analyséieren. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Zwou Wochen no intraperitoneal Sprëtzen, der Mëllechstrooss Plaz Beräicher sech komplett besat duerch proliferating gastric Kriibs Zellen a Zell Stärekoup-Typ micrometastases observéiert goufen. Am Géigesaz, geformt Kriibs Zellen eenzel Zell-Typ micrometastases am Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher. MFCs ausgedréckt CCR4, déi op der Zell Uewerfläch oder an der Zytoplasma en der huet. Verschidde Konzentratioune vun CCL22 geklomme d'Prolifératioun Fähegkeet vun MFCs. Ausserdeem, Konzentratioune vun CCL22 tëscht 10-100 Dummeldéng /ml geklomme der Wanderung vun MFCs. An omental Mëllechstrooss Flecken, war CCL22 en der haaptsächlech op der Zell Uewerfläch oder an der Zytoplasma. An Rubriken vun omental Mëllechstrooss Plaz micrometastases, war op oder an gastric Kriibs Zellen CCR4 unerkannt, entstoend Zellen Mëllechstrooss Flecken, Blutt Zellen a Blutt endothelial Zellen. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung Omental Mëllechstrooss Flecken sinn e congenial microenvironment fir peritoneal gratis gastric Kriibs Zellen zu opgeholl, iwwerlieft, a Zell Stärekoup-Typ Investitiounen etabléieren. D'CCL22-CCR4 Achs dréit zu dëser selektiv einfach Prozess. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung Gastric Kriibs Omental Mëllechstrooss Plaz Peritoneal Metastasen CCL22 CCR4 Erschléisse VerfÜgung Peritoneal Metastasen engem gemeinsame Muster vun fernen Investitiounen an gastric Kriibs ass. Vill Etuden hu confirméiert, datt de Iwwregens hätt vun gastric Kriibs Patienten mat peritoneal Metastasen ass schlecht, souguer an deene Patienten mat radikal Agrëff behandelt [1]. Peritoneal Metastasen entwéckelt aus micrometastases aus fräie peritoneal Kriibs Zellen ursprünglech [2]. Dofir ass et wichteg d'Charakteristiken a Mechanisme vun der Opstellung vun peritoneal micrometastases Équipe ze verstoen. Esou eng Versteesdemech wäerten an d'Préventioun an um Terrain vun peritoneal Investitiounen Hëllef, sou de Iwwregens hätt vun gastric Kriibs Patienten ze verbesseren. VerfÜgung Mëllechstrooss Flecken sinn Ongewéinlech lymphoid Stoffer an der peritoneal Discours vun de Mënschen an Déieren, déi virun allem an der Groussregioun omentum existéiert. Par contre, relativ puer Mëllechstrooss Plazen an der mesenterium an RNT Buedem fonnt, a kee Mëllechstrooss Flecken sinn an anere Beräicher vun der peritoneum [3] fonnt. Mëllechstrooss Flecken besteet aus villen macrophage an lymphocyte aggregations a sinn an d'Minnen vun Deelecher, Bakterien a entholl Zellen aus der peritoneal Discours, spillt eng wichteg Roll an peritoneal Ofwier [4] Équipe - [6]. Besonnesch waren omental macrophages fonnt cytotoxic géint entholl Zellen ze ginn [7], [8]. Verschidde Studie berichten bewisen, dass omental Mëllechstrooss Flecken sinn bekannt Siten vun Investitiounen vun carcinomas vun der daat sin eis Politiker, Moo an Colon [9]. Cancer Zellen infiltrate selektiv an der Mëllechstrooss Flecken an den Grondsteen vun peritoneal Weiderleede Kriibs an Geldautomat engem microenvironment an deem se kënnen sinn ze iwerliewen, wuessen a staark Investitiounen Form [10]. Dëst privilegiéierten ausdrécken kënnt vun der Existenz vu gewësse speziell Charakteristiken vun Mëllechstrooss Flecken erkläert ginn, dorënner héichen Niveau vun bewosst Haftung Molekülle an Wuestum-stimulatory Faktoren [11], [12]. Dofir, iwwerdeems Mëllechstrooss Flecken cytotoxic Eegeschafte géint entholl Zellen hunn an eng wichteg Roll an peritoneal Ofwier Leeschtung, déi se och Siten wou entholl Zell Prolifératioun an micrometastasis geschéien. VerfÜgung Chemokines kleng secreted Proteinen séiert an de véier subfamilies baséiert op der Haaptrei ginn vun conserved N-Uschloss cysteine ​​Reschter: CXC, CC, C, an CX3C [13], [14]. Vill Studien hu bewisen, datt chemokines an chemokine kenne causally an der Metastasen vum Kriibs betraff sinn [15] - [21]. D'macrophage-ofgeleet chemokine MDC /CCL22 ass eent vun de CC chemokines produzéiert vun macrophages an CCR4 war wéi hir spezifesch receptor identifizéiert [17] - [21], déi fir aner CC chemokines och déi funktionell receptor ass. Den Ausdrock vun chemokine kenne ass bekannt mat Kriibs Investitiounen, wéi CXCR4, CCR7 an CCR10 zu Broscht Kriibs [16] an CXCR5, CCR6, CCR7, an CCR4 zu pancreatic, gastric an Aarbecht Cancers verbonne ginn [22], [23] . Verschidde Studie bewisen, definitiv, datt CXCR4 an CXCL12 eng wichteg Roll an der Metastasen vun gastric Kriibs Zellen an der peritoneal Discours Leeschtung [23] - [25] zu Omental Mëllechstrooss Flecken besteet aus villen macrophages, mä d'Roll vun der MDC /CCL22-. CCR4 Achs an gastric Kriibs Zellen selektiv an Mëllechstrooss Flecken infiltrating huet nach net identifizéiert ginn. Mir sinn dofir der Ausdrock vun MDC /CCL22 an CCR4 an eiser Plaz micrometastases iwwerpréift, mat dem Zil peritoneal Metastasen eng nei Behandlung Method vun der mise fir Präventioun op der chemotaxis vun gastric Kriibs Zellen vun Fredi. VerfÜgung spontan a Methoden VerfÜgung klinescher Zell Linn an Déieren VerfÜgung Murine gastric Kriibs MFCs, aus der proximal Mo vun der murine Deformatioun ofgeleet carcinoma 615, sech aus der Mëtt Labo vun der Frist laizistesch Hospital vun Dalian Medical Universitéit krut. MFCs sech cultured zu RPMI-1640 (Gibco) mat 10% An et Bovine serum (Fläch) an eng incubator vun 5% CO nà 2 op 37 ° C. Eemol a Spuenien wär, huet den Zellen trypsinised an am D-Hanks 'Medien rinsed. A liewensfäeg Zell Grof war mat trypan blo Exklusioun gesuergt. VerfÜgung Six-Woch-ale Klischee 615 Mais aus der Dalian medezinesch Uni vu China kritt huet. De Mais sech ënner normale Labo Konditiounen haten a gratis Zougang zu Standard Labo Iessen a Waasser haten. (: SYXK2008-0002 hänkt Number) Etude Ëmwelt- sech duerch de Komitee fir Déieren Fuerschung vun der Dalian medezinesch Uni vu China laut national Richtlinnen guttgeheescht. sech All Mesure keng Péng oder Nikotin ze minimiséieren. VerfÜgung Scannen Elektronen microscopy VerfÜgung Omental Echantillon waren an 0,1 M geannert Prellbock (pH 6.9) Iwwernuechtung mat 2,5% glutaraldehyde gesammelt, fix, zou dräi Mol am frësch geannert Prellbock (pH 6.9), a Post-fix fir 1,5 Stonnen an 1% Osmium tetroxide zu 0,1 M geannert Prellbock (pH 6.9). D'Echantillon waren an DH 2O dräi Mol gewäsch an duerno léif an Konzentratioune vun Ethanol waarden (50, 70, 90 an 100%). Uplanzen sech kriteschen Punkt-gedréchent aus flëssegem Kuelendioxid, bedeckt zu engem enke Bou vun 3 nm mat enger Osmium Plasma coater, a mat engem Hitachi S-520 Scannen Elektronen microscope observéiert. VerfÜgung Transmissioun Elektronen microscopy VerfÜgung Six omental Fett Bands kritt aus dräi 615 Mais vun all Geschlecht gebraucht goufen. D'Bands sech zu engem zéien Léisung mat 2% glutaraldehyde fir 2 Stonnen Beweegung, dann zu enger Léisung-Post fix mat 2% Osmium tetroxide an 1,5% sucrose vun engem 0,05 M phosphate Prellbock fir 2 Stonnen bei 4 ° C. D'uplanzen sech zu engem graded Serie vun Ethanol léif. acetone fir Ethanol, goufen d'uplanzen Ënnerbewosstsinn epoxy resin Bleck no substituting. Ultra-dënn Rubriken sech mat uranyl acetate a Féierung citrate Kierchefënster a mat engem Transmissioun Elektronen microscope observéiert (Jem-2000EX). VerfÜgung klinescher Zell Uschloss un d'omentum VerfÜgung Den MFC Zellen zu komplett RPMI-1640 bei enger Konzentratioun incubated sech vun 2 mg /L DiI (Fläch) fir 60 min bei 37 ° C. Zellen sech dräimol mat Hanks "ausgeglachen Salz Léisung gewäsch. D'Zell-Etikette Taux war 100% an 1 × 10 4 Zellen intraperitoneally heijen goufen. De Mais sech op 4, euthanised 12, 36, 48, 72 an 120 Stonnen, an 7, 10, an 14 Deeg no intraperitoneal Sprëtz. D'omentum war op microscope excised an dozweschent drënner fir weider ze verschaffen. VerfÜgung HIEN an immunohistochemical staining VerfÜgung Omental Echantillon sech fir 24 Stonnen an engem 4% formaldehyde Léisung (pH 7.4) bei 4 ° C gesammelt, fix, rinsed dräimol mat phosphate gefiermt Salins (pH 7.4) fir 3 Stonnen, an engem graded Serie vun Ethanol léif, an zu paraffin Ënnerbewosstsinn. Dunn, 5 μm décke hannereneen Rubriken huet fir HIEN Filteren an immunostaining vun deparaffinisation mat xylene an abordablel mat graded Ethanol. VerfÜgung Fir den Ausdrock vun antigen zu Stoffer, citrate gefiermt Léisung augment war fir d'Echantillonen derbäi a si waren zu enger Schleck erëm gekacht Uewen. D'Echantillon waren mat engem 3% Waasserstoff Hem Léisung fir 10 min behandelt der endogenous peroxidase Aktivitéit eraus an dann mat phosphate gefiermt Salins (PBS) rinsed. Ze verhënneren Net-spezifesch immun Reaktioune, goufen d'Echantillonen fir 10 min mat 3% normal Geess serum behandelt, a mat PBS rinsed. Der Primärschoul polyclonal Kanéngchen anti-Maus CCL22 antibody (Santa Cruz Déi, Santa Cruz, CA, USA) an Kanéngchen anti-Maus CCR4 antibody (Abcam, Cambridge, UK) huet 1 verdënntem: 100 Geess serum benotzt a bei Raumtemperatur incubated fir 1 Stonn. No dräi 2 min Mëtten mat PBS, huet de Rubriken fir 30 min (DAKO, Carpinteria, CA, USA) mat engem biotinylated Geess Secondaire antibody incubated. No dräi 2 min Mëtten mat PBS, war streptavidin -horseradish peroxidase (DAKO) fir 30 min fir d'Sektioun dobäi, déi aner dräi 2 min Mëtten mat PBS gefollegt. D'Echantillon waren mat 3,3'-diaminobenzidine Realitéiten (Vecteure Laboratoiren, haaptsächlech, Ontario, Kanada) fir 1 min an counterstained mat Mayer d'haematoxylin entwéckelt. D'drënner waren léif folgenden e Liewesniveau Prozedur a mat coverslips versiegelt. Déi negativ Kontroll war déi selwecht Prozedur bereet amplaz vun der Primärschoul antibody benotzt PBS. Normal Mo. Stoffer goufen als déi positiv Kontroll benotzt. VerfÜgung Immunocytochemistry staining vun CCR4 VerfÜgung Gastric Kriibs Zellen sech am Chambre drënner plated bedeckt mat puer dovun-L-lysine, erlaabt fir 48 Stonnen ze leeën an dann fir immunocytochemistry benotzt. D'Zellen mat 0.3% H 2O fix waren 2 zu methanol fir 60 min bei Raumtemperatur, gewäsch 4 Mol am PBS, konnt mat 3% BSA an permeabilised mat PBS 0,1% Triton X-100 fir 60 min mat bei Raumtemperatur. D'antibody, FITC-conjugated anti-Maus CCR4 polyclonal antibody (1 μg /ml, eBioscience), fir 60 min bei 37 ° C incubated war, gewäsch 4 Mol an ënner engem Fluorescence Microscope (BX-51 TR32000, Olympus) Aenzeien.
Immunofluorescent Etikette vun macrophages zu omental Mëllechstrooss Flecken VerfÜgung fir immunohistochemistry, war d'omentum fir 60 min an formalin fix a Katakombe dräimol mat phosphate-gefiermt Salins. , Zou dräi Mol am phosphate-gefiermt Salins an da Loft-gedréchent an engem däischteren; D omentum fir 60 min bei 37 ° C mat engem FITC-conjugated anti-Maus F4 /80 murine macrophage Bewaacher (Biolegend 1 μg /ml) incubated war Plaz fir 12 Stonnen. Immunohistochemical staining war direkt Faarwen a Biller huet mat enger fluorescence microscope ageholl. (BX-51 TR32000; Olympus) VerfÜgung Transkriptiouns-Hinnen alleguer Analyse VerfÜgung Total RNS Réckproduktioun gouf ofgebaut a sidd aus cultured MFCs eng RNeasy Mini Kit (QIAGEN benotzt, Milan, Italien). D'Reduktioun och eng DNase ech unzereegen Schrëtt. RNS Quantitéit a Qualitéit war vun UV spectrophotometry évaluéieren. mat der SuperScript Éischt-Strand Synthes System (Invitrogen) den RNS war an cDNA annescht. RT-Hinnen alleguer war mat SuperScript One-Step (Invitrogen) gesuergt. D'primers benotzt sech wéi follegt zesummen: CCR4 Sënn primer 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ", CCR4 antisense primer 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3"), GAPDH vir primer 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ", an GAPDH ëmgedréint primer 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '. VerfÜgung Western blot Analyse VerfÜgung BTS mat phosphate-gefiermt Salins (PBS) zou sech an radioimmunoprecipitation assay (Ripa) lysed lysis Prellbock (150 mm NaCl, 50 mm Tris-HCl, 0,1% Natrium dodecyl sulphate, 1% Nonidet P-40, 1 mm phenylmethylsulfonyl fluoride). D'lysates sech duerch centrifugation (15,000 Ziichter fir 5 min) geraumt an d'FAQ Konzentratioune sech mat der bicinchoninic Seier Method virun Stockage bei -80 ° C alles. Gläichwäerteg Montanten vun FAQ sech op SDS-polyacrylamide gelies electrophoresis (PAGE) getrennt an zu polyvinylidene difluoride Schläimhait transferéiert. Schläimhait sech an 5% Fett-Mëllech gratis an Tris-gefiermt Salins mat 0,1% Tween 20 an incubated mat der Primärschoul antibody Nuecht op 4 ° C gespaart. Immun investéiert goufen dann erwëscht andeems de coopération chemiluminescence System (Amersham, Buckinghamshire, UK). VerfÜgung Zell Prolifératioun assay VerfÜgung MFCs sech rakommen an 96-gutt Placken op eng Dicht vun 1 × 10 4 Zellen pro gutt ( 200 ml) an zu komplett mëttelfristeg fir 24 Stonnen incubated. Déi mëttel- war mat serum-gratis mëttelfristeg mat verschiddenen Konzentratioune vun CCL22 ageholl, mat RPMI 1640 als negativ Kontroll Déngscht. No incubating fir 24 Stonnen, 20 μL vun MTT Reagent (5 mg /ml; Fläch-Aldrich Co.) gouf fir 4 Stonnen notéiert an incubated. Dunn, 100 μL vun Nodeems reagent war derbäi, lénks bei Raumtemperatur am däischteren fir 2 Stonnen an der absorbance bei 492 nm opgeholl. VerfÜgung Migratioun assay VerfÜgung Zell Migratioun assays goufen zu 6,4 mm Duerchmiesser CHAMBERS mat 8-mm gesuergt pore Filter (Becton Dickinson Labware, Franklin sin, NJ). MFCs sech an der ieweschter ëmkomm (100 Zellen pro gutt) während dem ënneschten Chamber mat DMEM mat verschiddenen Konzentratioune vun CCL22 (0, 1, 10, an 100 Dummeldéng /ml) gefëllt gouf. Zellen sech op 37 ° C an 5% CO2 fir 24 Stonnen incubated. Déi Zellen déi net duerch d'Membran Pore Ugrëff gemaach goufen ofgegruewen. Migrated Zellen sech fest an Kierchefënster. Zell Zuelen am ënneschten ëmkomm waren zu 10 ënnerschiddleche Beräicher (× 200) an ausdrécke wéi d'duerchschnëttlech Zuel vun Zellen pro Terrain vun Vue gezielt. D'Date goufen als déi vun der Moyenne vun dräi onofhängeg Experimenter vertrueden. VerfÜgung Resultater VerfÜgung grousse Ganzen vun der Mëllechstrooss Flecken VerfÜgung Elektronen microscopy verroden, datt d'Mëllechstrooss Flecken schiddene vun räich macrophages (Dorënner 1A) komponéiert huet, mat e puer lymphocytes, neutrophils a verschidde stromal Zellen (Dorënner 1B). Figur 1 Transmissioun an Scannen Elektronen microscopy vun omental Mëllechstrooss Flecken. (A) Elektronen microscopy verroden, dass d'Zell Zesummesetzung vun der Mëllechstrooss Flecken schiddene vun räich macrophages (M) komponéiert huet. (B) Verschidden lymphocytes (L) an neutrophils (N) waren bemierken och (Vergréisserung, 4,000X). (C) an der Mëllechstrooss Plaz Beräicher, bestoung d'Uewerfläch futti Zellen vun macrophages, lymphocytes an erauskomm mesothelial Zellen a goufen duerch intercellular thematiséieren oder Pore getrennt. (D) An d'Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher, goufen intercellular thematiséieren oder Pore net observéiert (Vergréisserung, 500X). VerfÜgung Scannen Elektronen microscopy verroden, datt d'Uewerfläch vun dësen Mëllechstrooss Flecken morphologically z'ënnerscheedde war aus, datt vun der Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher vun der omentum. D'Uewerfläch futti Zellen aus macrophages, lymphocytes an erauskomm mesothelial Zellen, déi vun intercellular thematiséieren oder Pore (Dorënner 1c) getrennt goufen. An d'Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher, goufen d'intercellular thematiséieren oder Pore net observéiert (Dorënner 1D). VerfÜgung Immunofluorescence an HIEN fir omental Mëllechstrooss Flecken VerfÜgung Déi ganz grouss omentum vun der 615 Mais soss war caudally duerch e schmuele Fett Otemschwieregkeeten Sträif (Dorënner 2A), laanscht déi bewosst Bodrum (gréng), wéi Mëllechstrooss Flecken bekannt, observéiert goufen (Dorënner 2B). Blutt capillaries, arterioles an lymphocapillary geéiert goufen bannent der Mëllechstrooss Plaz Beräicher (Dorënner 2C) fonnt. Figur 2 grousse Ganzen vun der Mëllechstrooss Flecken. (A-B) Déi grouss omentum vun der 615 Mais war duerch e schmuele Fett Otemschwieregkeeten Sträif (Vergréisserung, 50X) Openthalt, laanscht déi bewosst Bodrum, wéi Mëllechstrooss Flecken bekannt, observéiert huet. (C) Blood capillaries an arteriole geéiert gi bannent der Mëllechstrooss Plaz Beräicher (Vergréisserung, 200X). VerfÜgung Visualisation vun entholl Zellen op der omentum um fréie Zäit Punkten VerfÜgung MFCs fonnt ugefaang zu der omental Mëllechstrooss Flecken um 4 Stonnen ze halen Post-Sprëtz. Um 12 Stonnen Post-Sprëtz kréien, MFCs sech besonnesch an der Mëllechstrooss Flecken (Dorënner 3A) konzentréiert, iwwerdeems keng entholl Zellen vun der Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher vun der omentum (Dorënner 3B) fonnt goufen. Figur 3 Gastric Kriibs Zellen unhänken der omental Mëllechstrooss Plaz Beräicher bei verschiddene Zäit Punkten. (A-B) Image vun eiser Plaz macrophages (gréng) a grousser Zuel vun DiI-MFCs (rout) konzentréiert an eiser Plaz Beräicher 12 h der intraperitoneal Sprëtz. (C-D) No 72 h, ofgeholl d'Zuel vun DiI-MFCs an eiser Plaz Beräicher iwwerdeems entholl Zellen an der Mëllechstrooss Flecken proliferating an der Opstellung vu micrometastases waren observéiert. Sporadesch entholl Zellen sech am omental Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher fonnt. (E-F) Zwou Wochen no der intraperitoneal Sprëtzen, der Mëllechstrooss Plaz Beräicher sech duerch d'proliferating gastric Kriibs Zellen komplett besat an der Zell Stärekoup-Typ Metastasen war observéiert. Proliferating Kriibs Zell Kéip waren an der Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher a Kriibs Zellen geformt eenzel Zell-Typ Investitiounen net observéiert. (Vergréisserung, × 200). VerfÜgung No 72 Stonnen, entholl Zellen proliferating an der Opstellung vu micrometastases waren an der Mëllechstrooss Plaz Beräicher (Dorënner 3C) feststellen. Am Géigesaz, um 72 Stonnen Post-Sprëtz kréien, sporadesch entholl Zellen am Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher fonnt goufen, iwwerdeems keng Zell Stärekéip fonnt goufen (Dorënner 3D). VerfÜgung Op 2 Wochen no intraperitoneal Sprëtzen, der Mëllechstrooss Plaz Beräicher sech komplett gastric Kriibs Zellen a Zell Stärekoup-Typ Investitiounen besat vun der proliferating goufen observéiert (Dorënner 3). Am Géigesaz, huet proliferating Kriibs Zell Stärekéip net am Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher observéiert a Kriibs Zellen eenzel Zell-Typ Metastasen (Dorënner 3F). VerfÜgung CCR4 Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen VerfÜgung MFCs kloer ausgedréckt CCR4 mRNA (Dorënner gemaach 4A). Protein Ausdrock vun CCR4 war och déi westlech blots (Dorënner 4B) iwwerpréift. MFCs ausgedréckt CCR4 FAQ, déi zu der Zell Uewerfläch an /oder zu der Zytoplasma (Dorënner 4C) en der. Figur 4 CCR4 Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen. (A) MFCs ausgedréckt kloer CCR4 mRNA. (B) Protein Ausdrock vun CCR4 war och déi westlech blots iwwerpréift. (C) MFCs ausgedréckt CCR4 FAQ a sengem war op der Zell Uewerfläch en der an /oder zu der Zytoplasma vun der MFCs. VerfÜgung D'Auswierkunge vun CCL22 op der Verbreedung an Invasioun vun MFCs VerfÜgung D'Auswierkunge vun CCL22 op der Verbreedung vun MFCs sech duerch eng MTT assay évaluéieren. CCL22 geklomme d'Prolifératioun ëmmer bei verschiddenen Konzentratioune (1-100 Dummeldéng /ml) wann am Verglach zu der Kontroll Grupp (P &Si besteet; 0,05) (Dorënner 5A). Figur 5 D'Auswierkunge vun CCL22 op der Verbreedung an Invasioun vun MFCs. (A) CCL22 geklomme d'Prolifératioun ëmmer bei verschiddenen Konzentratioune (1-100 Dummeldéng /ml) am Verglach zu der Kontroll Grupp (P &Si besteet; 0,05). (V) Konzentratioun vun CCL22 tëscht 10-100 Dummeldéng /bedeitend Migratioun vun MFCs fräi ml, mat der optimal Äntwert ass 10 Dummeldéng /ml (P &Si besteet; 0.01). Eng Usammlung vu CCL22 tëscht 10-100 NG VerfÜgung /ml vill fräi Migratioun vun MFCs, mat der optimal Äntwert 10 Dummeldéng /ml ginn. (P &Si besteet; 0,05 par rapport zu der mëttel- eleng) (dorënner 5B-C) VerfÜgung CCL22 an CCR4 Ausdrock vun der omental Mëllechstrooss Plaz micrometastases VerfÜgung an der omental Mëllechstrooss Flecken, CCL22 war an der Zytoplasma vun der Assemblée Zellen (Dorënner 6A) observéiert haaptsächlech op der Zell Uewerfläch a oder. An der omental Mëllechstrooss Plaz micrometastases 12 Stonnen, 7 Deeg an 14 Deeg nom intraperitoneal Sprëtzen, CCR4 war op oder an der gastric Kriibs Zellen, entstoend Zellen vun der Mëllechstrooss Plaz, mesothelial Zellen, Blutt Zellen a Blutt endothelial Zellen (Dorënner 5B-D observéiert ). Figur 6 CCL22 an CCR4 Ausdrock vun der omental Mëllechstrooss Plaz micrometastases. (A) An der Rubrik vun der omental Mëllechstrooss Flecken, war CCL22 en der haaptsächlech op der Zell Uewerfläch oder an der Zytoplasma vun der Assemblée Zellen. (B-D) An der Rubrik vun der omental Mëllechstrooss Plaz micrometastases (12 h der intraperitoneal Sprëtz), war CCR4 en der op oder an der gastric Kriibs Zellen, entstoend Zellen vun Mëllechstrooss Plaz, mesothelial Zellen, Blutt Zellen a Blutt endothelial Zellen. (C) siewen Deeg nom intraperitoneal Sprëtz. (D) Fourteen Deeg nom intraperitoneal Sprëtz. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung D'aetiology vun peritoneal Metastasen zu gastric Kriibs bleift opgekläert ze ginn. Der Verëffentlechung vun gratis Kriibs Zellen aus engem lesion wou e primäre entholl der serosa Charel Ewert gëtt als den Urspronk vun peritoneal Metastasen ze ginn [26]. Méi wéi engem Joerhonnert huet ofgelaf well Paget der Theorie vun `Som a Buedem" [27] entwéckelt. Hien hypothesised datt bestëmmte entholl Zellen (Some) selektiv wäit Organer (Buedem) mat engem ordentleche Ëmwelt colonize datt d'Iwwerliewe vun entholl Zellen maaachen. An dëser Etude, fonnt mir dass omental Mëllechstrooss Flecken congenial microenvironments sech wéinst hirem physeschen a chemesch Eegeschaften, fir peritoneal gratis Zellen gastric Kriibs ze opgeholl, iwerliewen, wuessen a staark Investitiounen Form. VerfÜgung Scannen Elektronen microscopy verroden, datt d'Uewerfläch vun dësen Mëllechstrooss Flecken war morphologically z'ënnerscheedde aus, datt vun der Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher vun der omentum. D'Uewerfläch futti Zellen aus macrophages, lymphocytes an erauskomm mesothelial Zellen a goufen duerch vill intercellular thematiséieren oder Pore getrennt. Déi féierend intercellular thematiséieren oder Pore ëmmer submesothelial connective Otemschwieregkeeten an Zellen zu der peritoneal Uewerfläch ausgesat ze sinn, déi eng privilegiéierten Standuert fir entholl Zell Haftung ze vertrieden ass proposéiert. VerfÜgung Micrometastases sinn weideres an Single-Zell séiert a kleng-Zell Stärekoup Zorte [28]. Déi heiteg Etude fonnt engem aneren Typ vu entholl Zell Metastasen zu Mëllechstrooss Flecken am Verglach zu den Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher. Zwou Wochen no der intraperitoneal Sprëtzen, der Mëllechstrooss Plaz Beräicher sech komplett vun der proliferating gastric Kriibs Zellen besat, a gastric Kriibs Zellen geformt Zell Stärekoup-Typ Investitiounen. Allerdéngs goufen proliferating Kriibs Zellen net um selwechten Etapp vun der Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher observéiert, a Kriibs Zellen eenzel Zell-Typ Investitiounen gemaach. Dëse Phänomen kann duerch déi vill Blutt capillaries an arterial Offshore präsent an der omental Mëllechstrooss Plaz Beräicher erkläert ginn, deen eng befriddeg Blutt Kar fir de Wuesstem vun gastric Kriibs Zellen gëtt. Verschidde Studie VerfÜgung hunn uginn, datt de Prozess vun entholl Wuesstem an Metastasen ëmfaasst eng Varietéit vun Zell-Zell a Zell-extracellular Matrixentgasung Interaktioune dass déi Zell Haftung Molekülle mediated sinn. All Schratt verlaangt Zell Haftung Molekülle an kenne [29]. Mesothelial Zellen Mëllechstrooss Flecken produzéiere héichen Niveau vun bewosst Haftung Molekülle Doropshin (i.e., intercellular Haftung Protein-1) wéi Net-Mëllechstrooss Plaz Beräicher, also bis verstäerkte Haftung Contributioun [11], [12]. D'Roll vun chemokines zu gastric Kriibs Zellen selektiv an der Mëllechstrooss Flecken infiltrating huet nach net identifizéiert ginn. Mëllechstrooss Flecken besteet aus villen macrophages datt d'chemokine MDC /CCL22 [30] produzéieren. CCL22 an seng 'receptor CCR4 sinn an engem ënnerschiddlechen Gamme vun pathologies Équipe. CCL22 ass héich an lesions vun T Zell-mediated demagogesch Krankheeten hunn ausgedréckt [29]. CCR4 war éischt zéien duerch Th2 Zellen ausgedréckt gemellt ginn, déi zu humoral excellence an allergescher Äntwerte Équipe ginn [30]. CCL22 an CCR4 och eng wichteg Roll an Kriibs Wuesstem an Metastasen Leeschtung [17] - [21], esou vill CCR4 receptor antagonists souwéi eng anti-CCR4 antibody sinn an der pharmazeuteschen Industrie entwéckelt ginn [31], [32]. An dëser Etude, fonnt mir datt de MFCs kloer CCR4 mRNA ausgedréckt. CCR4 FAQ war och déi westlech blots iwwerpréift. CCR4 war an der Rubrik vun der omental Mëllechstrooss Plaz micrometastases 12 Stonnen op oder an der gastric Kriibs Zellen ausgedréckt, 7 Deeg an 14 Deeg nom intraperitoneal Sprëtz. CCL22 war ausgedréckt haaptsächlech op der Zell Uewerfläch oder an der Zytoplasma vun der macrophages. CCL22 geklomme d'Prolifératioun Fähegkeet vun gastric Kriibs Zellen, an Konzentratioune vun CCL22 tëscht 10-100 Dummeldéng /ml vill Migratioun vun MFCs fräi. Macrophages zu omental Mëllechstrooss Flecken net nëmmen cytotoxic Eegeschafte géint entholl Zellen hunn, mä si produzéiere och CCL22, déi Zellen gastric Kriibs iwwerlieft an wuessen an zolitt Investitiounen hëlleft. D'MDC /CCL22-CCR4 Achs spillt eng wichteg Roll an gastric Kriibs Zellen selektiv an omental Mëllechstrooss Flecken infiltrating zolitt Investitiounen Form. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Gastric gratis Kriibs Zellen (Some) bannent engem microenvironment mat ordentleche physesch a chemesch Eegeschaften Geldautomat Mëllechstrooss Flecken an deem si kënnen ze iwwerliewen a wuessen, mise Zell Stärekoup-Typ Investitiounen. D'CCL22-CCR4 Achs dréit zu dëser selektiv einfach. VerfÜgung Auteuren 'Informatiounen VerfÜgung Yi Zhang an Liang Cao als Co-éischt Auteuren opgezielt sinn. VerfÜgung Deklaratioune VerfÜgung Merci VerfÜgung Dëse Projet vun der Gemeng ënnerstëtzt gouf national Natural Science Foundation of China (Grant Nummer: 81101633), d'Natural Science Foundation vun Liaoning Province (Grant Nummer: 201202047), der Wëssenschaft an Technologie Projet vun Dalian (Grant Nummer: 2012E15SF142) VerfÜgung Auteuren 'original Dateien proposéiert. Biller VerfÜgung sinn ennen d'Linken op der original deposéiert Fichieren fir Biller "Auteuren. 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif Auteuren 'original Datei fir Figur 1 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif Auteuren' original Datei fir Figur 2 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif Auteuren 'original Datei fir Figur 3 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif Auteuren' original Datei fir Figur 4 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif original Datei 'Auteuren fir Figur 5 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif Auteuren 'original Datei fir Figur 6 Wettsträit Interessen VerfÜgung All Auteuren erklären, datt se keng Competitioun Interessen hunn. VerfÜgung

• Association vun LEC an tnpA Helicobacter pylori Genen mat gastric Kriibs an engem brasilianesche population
• Plasma mRNA Ausdrock Niveau vun BRCA1 an TS als potentiell predictive biomarkers fir Chimiotherapie zu gastric cancer