Uloga osi CCL22-CCR4 u metastaza želučanih stanica raka u omental mliječno spots

ulogu osi CCL22-CCR4 u metastazi želučanih stanica raka u omental mliječne mrlje
apstraktne pregled Pozadina
omentuma je jedan od početnih mjesta za peritonejsku metastaza jer posjeduje mliječno mrlje koje pružaju mikroklima za stanice raka lako migrirati i prerasti u mikrometastaza. Ova studija istražuje ulogu osi CCL22-CCR4 u želučanim stanicama raka selektivno infiltriraju u mliječnim mrlje.
Metode
rak želuca MFC stanice označene DII su intraperitonealno u soj 615 miševa. Miševi su eutanazirane u određenim vremenskim razmacima, a omentuma izreže za imunohistokemijski. Učinci CCL22 na proliferaciju i migraciju MFC su ispitana MTT i trans-i ispitivanjima. RT-PCR i Western blot analize otkrivenih CCR4 mRNA i razina ekspresije proteina u MFC. Imunohistokem se koriste za analizu CCL22 i CCR4 izraz u mliječne licu mikrometastaza. Pregled Rezultati
dva tjedna nakon intraperitonealne injekcije, Mliječni uočiti područja u potpunosti su okupirali razmnožavanje želučane stanice raka i stanična nakupina tipa mikrometastaza su primijećeni. Nasuprot tome, stanice raka formira jednu staničnog tipa mikrometastaza u ne-mliječnih licu područja. MFC izražava CCR4, koji je lokaliziran na staničnoj površini i, ili u citoplazmi. Različite koncentracije CCL22 značajno povećava proliferaciju sposobnost MFC. Osim toga, koncentracije CCL22 između 10-100 ng /ml značajno povećava migraciju MFC. U omental mliječne mjestima, CCL22 je lokaliziran uglavnom na površini stanice i ili u citoplazmi. Unutar sekcije omental mliječno licu mikrometastaza, CCR4 prepoznat ili u želučanim stanice raka, sastavnih stanica, mliječna mrlja krvne stanice i endotelne stanice krvi. Pregled zaključaka
Omental mliječne mrlje su srodan mikrookoliša za peritonejsku slobodne stanice raka želuca seliti, preživjeti, te uspostaviti stanica klaster tipa metastaze. CCL22-CCR4 os doprinosi ovom selektivnom procesu infiltracije. Pregled Ključne riječi pregled Rak želuca Omental mliječna mrlja Peritonejska metastaza CCL22 CCR4 Uvod pregled Peritonejska metastaza je čest uzorak udaljenih metastaza kod raka želuca. Brojna istraživanja su potvrdila da je prognoza bolesnika s rakom želuca s metastazama peritonejsku je loša, čak i na one pacijente tretira s radikalne operacije [1]. Peritonejska metastaze razvija od mikrometastaza podrijetlom od slobodnih stanica raka peritonealni [2]. Stoga je važno shvatiti karakteristike i mehanizama uključenih u formiranju peritonealnim mikrometastaza. Takvo razumijevanje će pomoći u prevenciji i recidiva peritonealnom metastaza, čime se poboljšava prognozu bolesnika s rakom želuca.
Mliječni mjesta su primitivni limfna tkiva u peritonejsku šupljinu ljudi i životinja, koja postoji prvenstveno u većim omentuma. S druge strane, relativno malo mliječne mrlje nalaze se u mesenterium i karlice, a ne mliječne mrlje nalaze u drugim dijelovima peritoneum [3]. Mliječne točke sadrže brojne makrofaga i limfocita agregaciju i uključeni su u vrijeme čestica, bakterija i tumorskih stanica iz peritonealnu šupljinu, igraju važnu ulogu u peritonealnoj dodavanje [4] - [6]. Posebno omental makrofazi nađeno je da citotoksični protiv tumorskih stanica [7], [8]. Neke studije su pokazale da omental mliječne mrlje su dobro poznata mjesta metastaza karcinoma jajnika, želuca i debelog crijeva [9]. Stanice raka selektivno infiltrirati u mliječne mjesta u ranim fazama peritonealnoj širenje raka i pronaći mikro okolinu u kojoj su u mogućnosti da opstane, rasti i formirati čvrste metastaze [10]. Ovaj povlašteni prilog može se objasniti postojanjem određenih posebnih obilježja od mliječne mrlje, uključujući i više razine staničnih adhezijskih molekula i rasta-stimulirajući faktori [11], [12]. Dakle, dok mliječne mrlje imaju citotoksični svojstva protiv tumorskih stanica i igra važnu ulogu u peritonealnoj obranu, oni također pružaju mjesta na kojima proliferacija tumorskih stanica i micrometastasis pojaviti.
Kemokini su male luče bjelančevine razvrstane u četiri pod-porodica temelji na slijedu očuvan N-terminalni ostaci cisteina: CXC, CC, C i CX3C [13], [14]. Mnoge su studije pokazale da su kemokini i kemokinskih receptora uzročno su uključeni u metastazi raka [15] - [21]. Makrofagi-derived kemokin MDC /CCL22 jedan od CC kemokina koji su proizvedeni pomoću makrofaga i CCR4 identificiran kao njegov specifični receptor [17] - [21], koji je također funkcionalni receptor za druge CC kemokine. Ekspresija kemokinskih receptora je poznato da je povezan s metastazama karcinoma, kao što su CXCR4, CCR7 i CCR10 kod raka dojke [16] i CXCR5, CCR6, CCR7, a CCR4 u raka gušterače, želuca i prostate, [22] [23] , Neke studije pokazali su da definitivno CXCR4 i CXCL12 igraju važnu ulogu u metastazi raka želuca stanica u peritonealnu šupljinu [23] - [25] pregled Omental mliječne točke sadrže brojne makrofage, no uloga MDC /CCL22-. CCR4 osi u želučanom stanica karcinoma selektivno infiltriranih u mliječnim mjestima još nije identificiran. Stoga ispituje ekspresiju MDC /CCL22 i CCR4 u mliječnim licu mikrometastaza, s ciljem uspostave novu metodu liječenja za sprečavanje peritonealnoj metastaze s naglaskom na kemotaksije želučanih stanica raka.
Materijali i metode pregled tumora stanica liniju i životinja pregled Mišja želučane MFC raka, izvedeni iz soj 615 mišji karcinoma proksimalnog želuca, dobiveni su od središnjeg laboratorija frist SRODNE bolnici Dalian Medicinskom fakultetu Sveučilišta. MFC su kultivirane u RPMI-1640 (Gibco) uz dodatak 10% fetalnog goveđeg seruma (Sigma) u inkubatoru 5% CO 2 na 37 ° C. Jednom proraštene, stanice su tripsinizirane i ispere D-Hanks 'medija. Broj vitalnih stanica je izvedena pomoću plavila.
Šest tjedana stari soj 615 miševi su dobiveni iz Dalian Medicinskog sveučilišta u Kini. Miševi su držane pod standardnim laboratorijskim uvjetima i imale su slobodan pristup standardnoj laboratorijskoj hrani i vodi. Studija protokoli su odobrena od strane Odbora za istraživanje životinja od Dalian Medicinskog sveučilišta u Kini u skladu s nacionalnim smjernicama (dozvola broj: SYXK2008-0002). Sve mjere su poduzete kako bi se smanjila bol ili nelagodu. Pregled, skeniranje elektronskim mikroskopom pregled uzoraka Omental su prikupljeni, fiksna tijekom noći s 2,5% glutaraldchidu u 0,1 M CIJEVI pufer (pH 6,9), tri puta isperu u svježe cijevi pufer (pH 6,9), te nakon određenog za 1,5 sata u 1% osmij tetraoksidom u u 0,1 M cijevi pufera (pH 6.9). Uzorci su isprani u dH 2O tri puta i tada se dehidrira u rastućim koncentracijama etanola (50, 70, 90 i 100%). Uzorci su kritične točke osušenog tekući ugljični dioksid, presvučene na debljinu od 3 nm sa osmij plazme za oblaganje i opaža s Hitachi S-520 pretražnim elektronskim mikroskopom. Pregled transmisijskim elektronskim mikroskopom pregled šest omental debele trake dobivene od tri korišteni su 615 miševi svakog spola. Opsezi su uronjene u otopinu za fiksiranje koja sadrži 2% glutaraldehid 2 sata, zatim se naknadno obrađena u otopinu koja sadrži 2% osmij tetroksida i 1,5% saharoze u 0.05 M fosfatni pufer kroz 2 sata na 4 ° C. Jedinke su dehidrirana u vrhunske zbirke etanola. Nakon zamjenom aceton za etanol, su primjerci ugrađeni u epoksi smole blokova. Ultra-tanke Sekcije su označene s uranyl acetatom i olova citrat i promatraju s transmisijskim elektronskim mikroskopom (JEM-2000EX). Pregled vezanje tumora stanica u omentuma
MFC stanica inkubirani u potpunom RPMI-1640, u koncentraciji 2 mg /L DII (Sigma) 60 minuta pri 37 ° C. Stanice su isprane tri puta s Hanksovoj balansiranoj otopini soli. Stopa stanica-obilježja su 100% i 1 × 10 4 stanice su intraperitonealno. Miševi su eutanazirane na 4, 12, 36, 48, 72 i 120 sati, i 7, 10, i 14 dana nakon intraperitonealnog injektiranja. The omentuma izreže i protegnuo na stakalca za daljnju obradu.
On i imunohistokemijskih bojanja
uzoraka Omental su prikupljeni, fiksirane u 4% -tnom otopinom formaldehida (pH 7,4) na 4 ° C tijekom 24 sata, isprane tri puta s puferom (pH 7,4) tijekom 3 sata, dehidrirana u nizu gradiranog etanola, i uklopljene u parafin. Zatim, 5 um debele sekcije redom obrađeno na njega i imunološkim prodora deparaffinisation s ksilenom i rehidracije gradijentom etanola.
Za povećanje ekspresije antigena u tkivu, citratni pufer otopine dodano je u uzorke, te su kuhani u mikrovalnoj pećnica. Uzorci su tretirani s 3% -tnom otopinom vodikovog peroksida kroz 10 min kako bi se suzbila Aktivnost endogene peroksidaze, a zatim ispere s puferom (PBS). Za sprječavanje nespecifične imune reakcije, uzorci se tretiraju s 3% normalnom kozjem serumu tijekom 10 minuta, te ispere s PBS-om. Primarni poliklonsko zečje anti-mišjim CCL22 antitijelo (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) i zečjeg protiv mišjeg CCR4 antitijelo (Abcam, Cambridge, UK) bili su razrijeđeni 1: 100 pomoću kozjeg seruma i inkubira na sobnoj temperaturi kroz 1 sat. Nakon tri 2 min ispiranja PBS-om, sekcije su inkubirane s biotiniliranim kozjim sekundarnih antitijela tijekom 30 minuta (Dako, Carpinteria, CA, USA). Nakon tri 2 min ispiranja PBS-om, streptavidin -horseradish peroksidaza (DAKO), dodan je u odjeljak za 30 minuta, a zatim još tri 2 min ispiranja PBS-om. Uzorci su razvijeni u 3,3'-diaminobenzidin supstrata (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Canada) 1 minut i obojena Mayerovim hematoksilinom. Stakalca su dehidratirana nakon standardnog postupka i zapečaćena s pokrovnim. Negativna kontrola je pripremljen istim postupkom, koristeći PBS umjesto primarnog antitijela. Normalne želuca tkiva su korišteni kao pozitivna kontrola.
Imunocitokemiju bojenje CCR4 pregled želučanog kancerozne stanice su nasađene u komori slajdova obloženim s poli-L-lizina, ostavljena da se vežu na 48 sati, a zatim se koristi za imunocitokemiju. Stanice su fiksirane s 0.3% H 2O 2 u metanolu tijekom 60 minuta na sobnoj temperaturi, ispere se 4 puta u PBS, blokirani sa 3% BSA i permeabilised s PBS koji sadrži 0,1% Triton X-100 tijekom 60 minuta na sobnoj temperaturi. Antitijelom, FITC-konjugirani anti-mišji CCR4 poliklonskog antitijela (1 ug /ml, eBioscience), inkubira se 60 minuta na 37 ° C, ispere se 4 puta i pregledani pod fluorescentnim mikroskopom (BX-51 TR32000, Olympus).
Imunofluorescentni označavanje makrofaga u omental mliječne mjestima pregled za imunohistokemiju je omentuma fiksira u formalinu tijekom 60 minuta i ispere se tri puta s fosfatom puferiranom fiziološkom otopinom. Omentuma se inkubira 60 minuta na 37 ° C s FITC-konjugiranim anti-mišjim F4 /80 mišjih makrofaga marker (1 ug /ml; Biolegend), isprana tri puta u fiziološkoj otopini puferiranoj fosfatom, a zatim suši na zraku u mraku mjesta za 12 sati. Imunokemijsko bojenje je izravno postigao i slike su snimljene pomoću fluorescencijskog mikroskopa. (BX-51 TR32000, Olympus)
Reverzna transkripcija-PCR analiza pregled Ukupna RNA se ekstrahira i očisti iz kulture MFC uporabom RNeasy Mini Kit (Qiagen, Milano, Italija). Ekstrakcija uključuju DNase probavu korak. Količina i kvaliteta RNA je procijenjena pomoću UV spektrofotometrije. RNA je transkribirana u cDNA pomoću Superscript prvom dvolančanih sinteza sustava (Invitrogen). RT-PCR je izveden s eksponentima jednom koraku (Invitrogen). Primeri korišteni su kako slijedi: CCR4 senzitivni primer 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 negativna početnica 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH forward primer 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', i GAPDH okrenuti primer 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 ', pregled Western blot analiza pregled stanice su isprane s fosfatno-puferiranom fiziološkom otopinom (PBS), te liziraju u radioimmunoprecipitation testu (RIPA) pufer lizina (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 0.1% natrij-dodecil-sulfat, 1% Nonidet P-40, 1 mM temlmetilsultbnil fluorid). Lizati očišćeni su centrifugiranjem (15.000 okretaja u minuti tijekom 5 minuta), a koncentracija proteina je određena korištenjem metode bicinkroniničnoj kiseline prije skladištenja na -80 ° C. Ekvivalentne količine proteina su razdvojeni na SDS-poliakrilamid gel elektroforeze (PAGE), te prenese u polivinilidenfluorid membrane. Membrane su blokirane u 5% nemasnog mlijeka u puferu Tris-puferskoj fiziološkoj otopini s 0,1% Tween 20 i inkubirane s primarnim protutijelom preko noći na 4 ° C. Imuni kompleksi su zatim detektira pomoću pojačane kemiluminiscencije sustav (Amersham, Buckinghamshire, UK). Pregled proliferacije stanica pregled MFC su nasađene u ploče s 96 jažica u gustoći od 1 × 10 4 stanica po jažici ( 200 mL) i inkubirane u medij za 24 sata. Medij je zamijenjen s medijem bez seruma koji sadrži različite koncentracije CCL22 s RPMI 1640 služi kao negativna kontrola. Nakon inkubacije tijekom 24 sata, 20 ul MTT reagensa je dodan (5 mg /mL Sigma-Aldrich Co.) i inkubira tijekom 4 sata. Zatim se doda 100 ul deterdženta reagensa, ostavljena je na sobnoj temperaturi u tami tijekom 2 sata, a apsorpcija pri 492 nm snimljene. Test migracije pregled pregled stanične migracije Testovi se izvode na komore promjera 6.4 mm s 8 mm filtri pora (Becon Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ). MFC su smješteni u gornju komoru (100 stanica po udubini), dok je donja komora ispunjena DMEM koji sadrži različite koncentracije CCL22 (0, 1, 10 i 100 ng /mL). Stanice su inkubirane 24 sata na 37 C u 5% CO2. Stanice koje nisu prolaze kroz pore membrane su skinute. Premješten stanice su fiksirane i obojene. Broj stanica u donjoj komori se mjeri u 10 slučajnih polja (× 200) i izražena kao prosječan broj stanica po vidnom polju. Podaci su prikazani kao prosjek tri neovisna pokusa. | Rezultati
morfologiju Mliječne točke
elektronskim mikroskopom otkriva da je Mliječni pjege su uglavnom sastoji od obilnih makrofagima (Slika 1a), uz neke limfociti, neutrofili i različite stanice strome (Slika 1B). Slika 1 Prijenos i elektronske mikroskopije od omental mliječnih mjesta. (A) Elektronska mikroskopija pokazala da stanica sastav mliječne mrlja uglavnom se sastoji od obilnih makrofaga (M). (B) Neki limfociti (L) i neutrofili (N) su također zamijećeni (uvećanja, 4,000X). (C) U mliječne licu područjima, sloj stanica površine koja se sastoji od makrofaga, limfocita i diskontinuirane mezotelnih stanica te su razdvojeni intracelularnih pukotina ili pora. (D) U ne-mliječno licu mjesta područjima, intracelularne pukotine ili pore nisu zabilježene (uvećanja, 500x). Pregled, skeniranje elektronskim mikroskopom otkriva da je površina tih mliječnih spotova je morfološki razlikuju od onih od ne-mliječnih licu područjima od omentuma. Sloj stanica površine koja se sastoji od makrofaga, limfocita i diskontinuirane mezotelnih stanica, koje su odvojene intracelularnih pukotina ili porama (Slika 1C). U ne-mliječnih licu područjima, intracelularne pukotine ili pore nisu zabilježene (Slika 1D). Pregled Imunofluorescencija i on za omental mliječne mrlje
cijelu veće omentuma od 615 miševa graniči Bliže repu uskom masnog tkiva pruga (slika 2A), duž koje su promatrane stanični agregati (zelena), poznat i kao mliječne mrlje, (slika 2B). Krvne kapilare, Arteriole i lymphocapillary posude pronađeni su unutar mliječnih licu područja (Slika 2c). Slika 2 Morfologija mliječne mrlje. (A-B) veća omentuma od 615 miševa obrubljen uskom trakom masnog tkiva (uvećanja, 50x), uz koju, zabilježeni su stanični agregati, poznati kao mliječno mjesta. (C) kapilara i arteriole posude nalaze se unutar mliječnih licu područja (uvećanjem, 200X).
Vizualizacija tumorskih stanica na omentuma u ranim vremenskim točkama
MFC počeo pridržavati omental mliječne mrlje na 4 sata nakon injekcije. U 12 sati nakon ubrizgavanja, MFC su posebno koncentrirani u mliječne mrlje (Slika 3A), a ne tumorske stanice su pronađeni u ne-mliječnih licu područja omentuma (slika 3B). Slika 3 Želučani stanice raka pridržavati omental mliječno licu mjesta područjima u različitim vremenskim točkama. (A-B) Slika mliječno licu makrofaga (zeleno) i velikim brojem DII-MFC (crveno) koncentrirana u mliječnim licu područjima 12 h nakon intraperitonealne injekcije. (C-D) Poslije 72 h, broj DII-MFC smanjena u mliječnim licu područjima, dok proliferacije tumorskih stanica u mliječne mjesta i zabilježene su formiranje mikrometastaza. Sporadični tumorske stanice su pronađena u omental ne-mliječnih licu područja. (E-F) Dva tjedna nakon intraperitonealne injekcije, Mliječni uočiti područja u potpunosti su okupirali proliferacijom stanica želuca raka i uočeno je stanična nakupina tipa metastaze. Proliferacija stanica raka skupine nisu uočeni u ne-mliječnih terenskih područja i stanice karcinoma formiraju jednu stanica tipa metastaze. (Povećanje, × 200).
Nakon 72 sata, razmnožavanje tumorskih stanica i formiranje mikrometastaza zabilježena u Mliječnoj licu područja (Slika 3c). Za razliku od toga, nakon 72 sata nakon ubrizgavanja, sporadični tumorske stanice su pronađeni u ne-mliječnih terenskih područja, dok su bez stanične nakupine otkrivene (slika 3D).
U 2 tjedna nakon intraperitonealne injekcije, Mliječni uočiti područja bili potpuno okupirali proliferacijom stanica želuca raka i stanična nakupina tipa metastaze su primijećeni (Slika 3E). Nasuprot tome, stanični klasteri proliferating raka nisu uočeni u ne-mliječnih terenskih područja i stanice karcinoma formiraju jednu stanica tipa metastaza (Slika 3f). Pregled CCR4 ekspresija u stanicama raka želuca
MFC jasno izraženim CCR4 mRNA (Slika 4A). Protein ekspresija CCR4 ispitana je pomoću Western blot (slika 4b). MFC izražava CCR4 protein koji je lokaliziran na površini stanice i /ili u citoplazmi (Slika 4C). Slika izraz 4 CCR4 u želučanim stanicama raka. (A) MFC jasno izražena CCR4 mRNA. (B) Protein ekspresija CCR4 također se ispituje Western blot. (C) MFC izraženi CCR4 protein i njegov je lokaliziran na površini stanice i /ili u citoplazmi MFC.
Učinci CCL22 na proliferaciju i invaziju MFC
učinaka CCL22 na proliferaciju MFC su ispitana MTT testom. CCL22 značajno povećava proliferaciju sposobnosti u različitim koncentracijama (1-100 ng /mL) u usporedbi s kontrolnom skupinom (P 0,05) (Slika 5A). Slika 5 Učinci CCL22 na proliferaciju i invazije MFC. (A) CCL22 značajno povećava proliferaciju sposobnosti pri različitim koncentracijama (1-100 ng /mL) u usporedbi s kontrolnom skupinom (P 0,05). (BC) Koncentracija CCL22 između 10-100 ng /ml značajno povećava migracije MFC, a optimalni odgovor bio 10 ng /ml (P < 0.01).
Koncentraciji od CCL22 između 10-100 ng /ml značajno povećanu migraciju MFC, a optimalna reakcija se 10 ng /ml. (P 0,05 u usporedbi s medija) (Slika 5B-C) pregled CCL22 i CCR4 izraz u omental mliječne licu mikrometastaza
u omental mliječne mjesta, CCL22 uočeno uglavnom na površini stanice ili u citoplazmi sastavnih stanica (Slika 6A). U omental mliječno licu mikrometastaza 12 sata dnevno, 7 dana, a 14 dana nakon intraperitonealne injekcije CCR4 zabilježen je na ili u želučanih stanica raka, koji su sastavni dio stanica Mliječne točke, mesothelial stanice, krvne stanice i endotelne stanice krvi (slika 5b-D ). Slika 6 CCL22 i CCR4 izraz u omental mliječnih licu mikrometastaza. (A) u odjeljku omental mliječne mjestima, CCL22 je lokaliziran uglavnom na površini stanice i ili u citoplazmi konstitutivnih stanica. (B-D) U odjeljku omental mliječno licu mikrometastaza (12 h nakon intraperitonealne injekcije), CCR4 je lokaliziran na ili u želučanih stanica raka, konstitutivni stanice mliječno licu, mesothelial stanice, krvne stanice i endotelne stanice krvi. (C) Sedam dana nakon intraperitonealnog injektiranja. (D) Četrnaest dana nakon što je u trbušnu šupljinu injekcije. Pregled Rasprava pregled Etiologija peritonejsku metastaza kod raka želuca, ostaje da se razjasni. Oslobađanje slobodnih stanica raka iz lezija gdje primarni tumor napadne serosa se smatra podrijetlo peritonejsku metastaza [26]. Više od jednog stoljeća proteklo od Paget razvio teoriju `sjemena i tla" [27]. On pretpostavka da određene tumorske stanice (sjemenke) selektivno kolonizirati udaljenim organima (tla) s povoljnog okruženja koja olakšava opstanak tumorskih stanica. U ovom istraživanju, otkrili smo da omental mliječne mrlje bile blizak mikrookoliša zbog svojih fizikalnih i kemijskih svojstava, za peritonejsku slobodnih stanica raka želuca seliti, preživjeti, rasti i formirati čvrste metastaze. Pregled, skeniranje elektronskim mikroskopom otkriva da je površina od njih mliječne mrlje je morfološki razlikuju od onih od ne-mliječnih licu područja omentuma. Sloj stanica površine koja se sastoji od makrofaga, limfocita i diskontinuirane mezotelnih stanica te su odijeljeni od mnogih intracelularnih pukotina ili pora. Istaknuti intracelularne pukotine ili pore izazvao submesothelial vezivnog tkiva i stanice da će biti izloženi peritonejsku površine, što je predložio da predstavljaju povlašteno mjesto za prianjanje stanica tumora.
Mikrometastaza su trenutno klasificirani u single-stanica i malih stanica klasteru vrste [28]. Ovaj Studija je pokazala različite vrste tumorskih stanica metastaza u mliječne mrlje u odnosu na ne-mliječnih licu područja. Dva tjedna nakon intraperitonealne injekcije, Mliječni uočiti područja u potpunosti su okupirali proliferacijom želučanih stanica raka, i želučanih stanica raka formirana stanica klaster tipa metastaze. Međutim, proliferacija stanice raka nije primijećeno u ne-mliječnih licu područja u istoj fazi, i stanice karcinoma formiraju jednu stanica tipa metastaze. Ovaj fenomen se može objasniti mnogo krvnih kapilara i arterija prisutnih u omental mliječno licu područja, koje pružaju dovoljnu količinu krvi za rast želučanih stanica raka.
Neke studije pokazale su da je proces rasta tumora i metastaza uključuje niz stanica-stanica i stanica-vanstanični matriks koji su povezani pomoću molekula stanične adhezije. Svaki korak zahtijeva molekula stanične adhezije i receptori [29]. Mesothelial stanica koje oblažu mliječno mrlje proizvode više razine staničnih adhezijskih molekula (tj adhezijskih molekula-1) od ne-mliječnih terenskih područja, čime se pridonosi pojačanom prianjanja [11], [12]. Uloga kemokina na želučani stanice karcinoma selektivno infiltracije u mliječne mrlje još nije identificiran. Mliječni točke sadrže brojne makrofage koje proizvode kemokina MDC /CCL22 [30]. CCL22 i njegova 'CCR4 receptora koji su uključeni u raznolik raspon bolesti. CCL22 vrlo je izražen u lezijama stvorio T-stanice-om upalne bolesti [29]. CCR4 najprije se izvještavalo da preferencijalno izražen Th2 stanice, koji su uključeni u humoralnog imuniteta i alergijskih odgovora [30]. CCL22 i CCR4 također igraju važnu ulogu u rastu tumora i metastaza [17] - [21], tako da se mnogi antagonisti CCR4 receptora kao i anti-CCR4 antitijelo se razvija u farmaceutskoj industriji [31], [32]. U ovom istraživanju, otkrili smo da su MFC jasno izražena CCR4 mRNA. CCR4 protein također ispitana je Western blot. CCR4 izražena ili u stanicama karcinoma želuca u odjeljku omental mliječno licu mikrometastaza 12 sata dnevno, 7 dana i 14 dana nakon intraperitonealne injekcije. CCL22 je uglavnom eksprimiran na staničnoj površini i, ili u citoplazmi makrofaga. CCL22 značajno povećava proliferaciju sposobnost želučanih stanica karcinoma, i koncentracije CCL22 između 10-100 ng /ml značajno povećava migraciju MFC. Makrofaga u omental mliječne mrlje ne samo da su citotoksične svojstva protiv tumorskih stanica, ali oni također proizvode CCL22, koji pomaže želučane stanice raka preživjeti i rasti u čvrste metastaza. MDC /CCL22-CCR4 os igra važnu ulogu u želučanim stanicama raka selektivno infiltracije u omental mliječne mrlje i formirati čvrste metastaze. Pregled Zaključak
Želučani slobodnih stanica stanica (sjeme) locirati mikroklima sadrži povoljne fizikalne i kemijske osobine unutar mliječne mrlje u kojoj su u mogućnosti da opstane i raste, uspostavljanje stanične klaster tipa metastaze. CCL22-CCR4 os pridonosi ove selektivne infiltracije. Informacije
autora
Yi Zhang i Liang Cao su navedeni kao ko-prvi autora. Pregled deklaracija
Zahvale pregled Projekt je podržan od strane Nacionalna zaklada Prirodne znanosti Kine (Grant broj: 81101633), Natural Science Foundation of provincije Liaoning (Grant broj: 201202047), Znanstveno-tehnologijski projekt Dalian (Grant broj: 2012E15SF142)
Autori 'original podnijeli datoteke za. slike
Ispod su linkovi na autora originalnih dostavljenih datoteka za slike. Izvorna datoteka za Slika 1 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif autorskim 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif autora izvorne datoteke za sliku 2 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif autorskim izvorne datoteke na Slici 3 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif autorskim izvorne datoteke za Slika 4 izvorne datoteke 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif pisaca za lik 5 izvorna datoteka 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif autora za slika 6 suprotstavljenih interesa pregled Svi autori izjavljuju da nemaju konkurentne interese. pregled

• Udruga LEC i tnpA Helicobacter pylori gena s rakom želuca u brazilske population
• Plazma mRNA razinu ekspresije BRCA1 i TS kao potencijalne prediktivni biomarkera za kemoterapije kod raka želuca