Iš CCL22-CCR4 ašies vaidmuo skrandžio vėžio ląstelių metastazės į taukinės pieniškas dėmių

Iš CCL22-CCR4 ašies vaidmuo skrandžio vėžio ląstelių į taukinės pieniškas dėmės
tezės
Background Viesbutis The taukinės metastazių yra vienas iš pradinių svetainių peritoninės metastazių, nes ji turi Paukščių dėmės, kurie suteikia mikroaplinka už vėžio ląstelių lengvai migruoja ir auga į mikrometastazių. Šis tyrimas tyrė iš CCL22-CCR4 ašies vaidmenį skrandžio vėžio ląstelių selektyviai patekę į pieniškas dėmės.
Metodai
skrandžio vėžys MFC ląsteles, pažymėtus Dii plėvę suleidžiama į padermės 615 pelių. Pelėms buvo užmigdomi nustatytais intervalais ir taukinė buvo pašalintų už imunohistocheminiu. Į CCL22 dėl neplatinimo ir migracijos MFCs poveikis buvo įvertintas MTT ir tarpvalstybiniu bei tyrimus. AT-PGR ir Vakarų dėmė analizė aptikta CCR4 mRNR ir baltymų ekspresijos lygį MFCs. Imunohistocheminis buvo naudojamas analizuoti CCL22 ir CCR4 išraišką Paukščių vietoje mikrometastazių.
Rezultatai
dvi savaites po injekciją į pilvą, pieniškas vietoje plotai buvo visiškai okupuota plinta skrandžio vėžio ląsteles ir ląstelių klasterį tipo mikrometastazių nepastebėta. Priešingai, vėžinės ląstelės susidaro vienos ląstelės tipo mikrometastazių negyvenamųjų pieniškas vietoje srityse. MFCs išreikštas CCR4, kuris buvo lokalizuota ant ląstelės paviršiaus ir arba citoplazmoje. Skirtingų koncentracijų CCL22 žymiai padidino platinimo gebėjimas MFCs. Be to, koncentracijos CCL22 tarp 10-100 ng /ml žymiai padidino MFCs migracija. Per taukinės pieniškas dėmės, CCL22 buvo lokalizuotas daugiausia ant ląstelės paviršiaus ir ar citoplazmoje. Per skyriuose taukinės pieniškas vietoje mikrometastazių, CCR4 buvo pripažintas arba skrandžio vėžio ląstelių, sudarančių ląstelių pieno dėmės, kraujo ląstelių ir kraujo endotelio ląstelių.
Išvadas
taukinės Pieno dėmės yra bendramintis mikroaplinka už pilvaplėvės nemokamai skrandžio vėžio ląsteles migruoti, išgyventi, ir nustatyti metastazes ląstelių klasterį tipo. CCL22-CCR4 ašis prisideda prie šio selektyvaus infiltracijos procese.
Raktiniai žodžiai
Skrandžio vėžys taukinės pieniškas vietoje peritoninė metastazių CCL22 CCR4 Įžanga
peritoninė metastazės yra bendras modelis tolimų metastazių skrandžio vėžio. Daugybė tyrimų patvirtino, kad skrandžio vėžiu sergančių pacientų prognozė peritoninės metastazių yra prasta, net tiems pacientams, gydomiems radikalios operacijos [1]. Pilvaplėvės metastazės atsiranda iš kilmės nuo laisvųjų pilvaplėvės vėžinių ląstelių [2] mikrometastazių. Todėl, ji yra svarbu suprasti, charakteristikas ir mechanizmus, lemiančius peritoninės mikrometastazių formavimas. Toks supratimas padės prevencijos ir pasikartojimo pilvaplėvės metastazių, tokiu būdu gerinant skrandžio vėžiu sergančių pacientų prognozę.
Pieno dėmės primityvūs limfinių audinių į pilvaplėvės ertmę žmonėms ir gyvūnams, kurie egzistuoja pirmiausia į didžioji taukinė. Priešingai, palyginti nedaug Pieno dėmės randama mesenterium ir dubens ir nėra Milky dėmės randama kitų sričių pilvaplėvės [3]. Pieno dėmės apima daug makrofagų ir limfocitų apibendrinimo ir dalyvauja dalelių, bakterijų ir vėžinių ląstelių iš pilvaplėvės ertmės klirensas, vaidina svarbų vaidmenį peritoninės gynybos [4] - [6]. Visų pirma, buvo nustatyta, taukinės makrofagų būti citotoksinis prieš auglio ląstelių [7], [8]. Kai kurie tyrimai parodė, kad taukinės Pieno dėmės gerai žinomų svetainių metastazių iš karcinoma kiaušidžių, skrandžio ir storosios žarnos [9]. Vėžio ląstelės selektyviai įsiskverbti į Paukščių dėmės ankstyvosiose stadijose pilvaplėvės vėžiu sklaidos ir suraskite mikroaplinka, kurioje jie galėtų išgyventi, augti ir formuoti kietus metastazių [10]. Šis lengvatinis areštas gali būti paaiškinamas tuo, kad tam tikrų specialių savybių pieniškas dėmių, taip pat didesniam korinio adhezijos molekulių lygmenų ir augimą stimuliuojantį faktorių [11], [12] egzistavimą. Todėl, nors pieniškas dėmės turi citotoksinių savybes prieš vėžinių ląstelių ir atlieka svarbų vaidmenį peritoninės gynybos, jie taip pat teikia svetaines, kuriose atsiranda naviko ląstelių proliferaciją ir micrometastasis.
Chemokinai yra mažas išskiriami baltymai skirstomi į keturias subfamilies remiantis seka užkonservuotas N-terminalų cisteino liekanos: CXC CC, C ir CX3C [13], [14]. Daugelis tyrimų įrodė, kad chemokinus ir chemokino receptoriai yra priežastiniais dalyvauja vėžio [15] metastazių - [21]. Makrofagų gautas chemokinas MDC /CCL22 yra vienas iš CC chemokinus pagamintų makrofagų ir CCR4 buvo nustatyta, kad jos specifinį receptoriaus [17] - [21], kuris taip pat yra funkcinis receptorius kitų CC chemokinus. Iš chemokino receptorių ekspresija yra žinoma, kad būti susijęs su vėžio metastazių, pavyzdžiui, CXCR4, CCR7 ir CCR10 krūties vėžio [16] ir CXCR5, CCR6, CCR7 ir CCR4 kasos, skrandžio ir prostatos vėžio [22], [23] , Kai kurie tyrimai parodė, kad galutinai CXCR4 ir CXCL12 vaidina svarbų vaidmenį skrandžio vėžio ląstelių metastazės į pilvaplėvės ertmę [23] - [25]
taukinės Pieno dėmės apima daug makrofagų, tačiau iš MDC /CCL22- vaidmuo. CCR4 ašis skrandžio vėžio ląstelių selektyviai patekę į pieniškas dėmės dar nebuvo nustatytas. Todėl išnagrinėjo MDC /CCL22 ir CCR4 į pieniškas vietoje mikrometastazių išraišką, siekiant sukurti naują gydymo metodą prevencijos peritoninė metastazių, sutelkiant dėmesį į skrandžio vėžio ląstelių chemotaksio tikslas.
Medžiagos ir metodai
Naviko ląstelių linijos ir gyvūnai
pelių skrandžio vėžio MFCs, gautų iš padermės 615 pelių karcinoma proksimalinės skrandyje, buvo gautos iš centrinės laboratorijos Fristo filialas ligoninės Dalian medicinos universitete. MFCs buvo auginamos RPMI-1640 (Gibco) papildytas 10% vaisiaus galvijų serumo (sigma), į 5% CO 2 37 ° C temperatūroje inkubatoriuje. Kai susiliejimo, ląstelės buvo trypsinised ir perskalauti D-Hanks žiniasklaidai. Perspektyvioje ląstelių skaičius buvo atliekama naudojant Trypan mėlyna atskirtį.
Šešių savaičių senumo padermės 615 pelėms buvo gautas iš Dalian medicinos universitetas Kinijoje. Pelės buvo išlaikytos pagal standartinių laboratorijos sąlygomis ir galėjo laisvai patekti į standartiniu laboratoriniu maisto ir vandens. Studijų protokolai buvo patvirtinti gyvūnų tyrimų Dalian medicinos universitetas Kinijoje pagal nacionalines gaires komiteto (leidimo numeris: SYXK2008-0002). buvo imtasi visų priemonių, siekiant sumažinti bet kokį skausmą ar diskomfortą.
Skenavimo elektronų mikroskopija
taukinės mėginių buvo surinkti, fiksuotas per naktį 2,5% gliutaraldehidu 0,1 M VAMZDŽIŲ buferio (pH 6,9), triskart plaunami šviežių Vamzdžiai buferio (pH 6,9), ir po fiksuotas 1,5 valandos 1% osmio Tetraoksidas 0,1 M Vamzdžiai buferio (pH 6,9). Mėginiai buvo išplautos dH 2O tris kartus ir tada dehidratuotas Didinamos koncentracijos etanolio (50, 70, 90 ir 100%). Mėginiai buvo kritinis taškas džiovintos iš skysto anglies dioksido, padengtas iki 3 nm storio su osmio plazmos COATER ir pastebėtas su "Hitachi" S-520 skenavimo elektroniniu mikroskopu.
Elektronine mikroskopija
gautą Šeši taukinės riebalų juostos nuo trijų buvo naudojami 615 pelių kiekvieno lyties. Juostos buvo panardintas į fiksavimo tirpalo, kuriame yra 2% glutaraldehido 2 valandas, tada po ilgalaikio tirpalas, kuriame yra 2% osmį tetrokside ir 1,5% masės sacharozės į 0,05 M fosfato buferio 2 valandas, esant 4 ° C temperatūroje. Egzemplioriai buvo dehidratuotas rūšiavo serijos etanolio. Po pakeisti acetonu etanolio, egzemplioriai buvo įdėta į epoksidinė derva blokus. Itin ploni skyriai buvo tamsintas su uranilo acetato ir švino citrate ir pastebėtas su perdavimo elektronų mikroskopu (JEM-2000EX).
Naviko ląstelių prisirišimas prie taukinės pervežimas MFC ląstelių buvo inkubuojami visiškai RPMI-1640, esant koncentracijai 2 mg /L DII (Sigma), 60 min 37 ° C temperatūroje. Ląstelės buvo tris kartus plaunamos sruogas "subalansuotas druskos tirpalo. Ląstelių ženklinimas lygis buvo 100% ir 1 × 10 4 ląstelės buvo švirkščiamas į pilvaplėvės ertmę. Pelės buvo užmigdomi 4, 12, 36, 48, 72 ir 120 valandų, ir 7, 10, ir 14 dienų po to, kai injekciją į pilvą. Taukinė buvo pašalintų ir ištempti ant stiklelių tolesniam perdirbimui.
Jis ir imunohistocheminis dažymas
taukinės mėginių buvo surinkti, nustatytą 4% formaldehido tirpalu (pH 7,4), esant 4 ° C temperatūroje 24 valandas, nuplauti tris kartus su fosfatinio buferio druskų tirpalu (pH 7,4) 3 valandas, dehidratuotas surūšiuoti serijos etanolio, ir įterptais parafinu. Tada 5 mkm storio eilės skyriai buvo tvarkomi jis ir imunodažymu pagal deparaffinisation su ksileno ir Rehidratacija su rūšiuojami etanolio.
Sustiprino antigeno audiniuose, citratas buferinis tirpalas buvo pridėta prie mėginių išraišką ir jie buvo virti mikrobangų krosnelėje orkaitė. Mėginiai buvo gydomi 3% vandenilio peroksido tirpalo 10 min slopinti endogeninio peroksidazės aktyvumo ir tada nuplauti fosfatinio buferio druskų tirpalo (PBS). Kad būtų užkirstas kelias nespecifinį imuninį reakcijas, mėginiai buvo gydomi 3% normalaus ožkų serume 10 min, ir skalaujami PBS. Pagrindinis polikloninis triušio prieš pelės CCL22 antikūnas (Santa Krusas Biotechnologijos, Santa Krusas, Kalifornija, JAV) ir triušio prieš pelės CCR4 antikūnas (Abcam, Kembridžas, Jungtinė Karalystė), buvo atskiestas 1: 100, naudojant ožkų kraujo serumo ir inkubuojama kambario temperatūroje 1 valandą. Po trijų 2 min plovyklose su PBS, sekcijos buvo inkubuojamos su biotinilintu ožkos antrinio antikūno 30 min (DaKo, Carpinteria, CA, JAV). Po trijų 2 min plovyklose su PBS, avidino -horseradish peroksidazės (DAKO) buvo įtraukta į 30 min skyriuje, po to dar tris 2 min plovyklose su PBS. Bandiniai buvo sukurta su 3,3'-diaminobenzidinas substrato (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Kanada) 1 min ir counterstained su Mayer hematoksilinu. Skaidrės buvo dehidratuoto po standartinės procedūros ir apgaubti coverslips. Neigiamas kontrolė buvo paruošti pagal tą pačią procedūrą, naudojant PBS, o ne pirminio antikūno. Normalus skrandžio audiniai buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė.
Imunocitochemiją dėmės CCR4
skrandžio vėžio ląstelių buvo padengtą sekcinių skaidres padengtų su poli-L-lizino, leidžiama pridėti 48 valandas ir po to naudojamos imunocitocheminiais. Ląstelės buvo nustatyti su 0,3% H 2O 2 metanolį, 60 min kambario temperatūroje, plauti 4 kartus PBS, užblokuotas su 3% BSA ir permeabilised PBS, kurių sudėtyje yra 0,1% Triton X-100 60 min kambario temperatūroje. Antikūnas, FITC konjuguoto anti-pelės CCR4 polikloninis antikūnas (1 mikrogramo /ml, eBioscience), buvo inkubuojami 60 min 37 ° C temperatūroje, plauti 4 kartus ir tikrinami pagal fluorescencijos mikroskopu (BX-51 TR32000, Olympus).
makrofagų į taukinės pieniškas dėmės
dėl imunohistocheminiu, The taukinė buvo fiksuojami formalinu 60 min ir nuplauti tris kartus fosfato buferinis druskos tirpalu imunofluorescencinių ženklinimas. Taukinė buvo inkubuojami 60 min 37 ° C temperatūroje, turintis FITC konjuguoto anti-pelės F4 /80 pelių makrofagų persekiotoją (1 g /ml; Biolegend), triskart plaunami fosfato-buferio druskų tirpalu ir tada oro išdžiovinami tamsus patalpa 12 valandų. Imunohistocheminį dažymo buvo tiesiogiai gavo ir vaizdai buvo užfiksuoti naudojant fluorescencijos mikroskopu. (BX-51 TR32000; Olympus)
atvirkštinės transkripcijos-PGR analizė
viso RNR buvo išskirta ir išgrynintas iš išaugintų MFCs, naudojant RNeasy Mini Kit (Qiagen, Milan, Italy). Ištraukimo įtraukti dezoksiribonukleazė I virškinimo žingsnį. RNR kiekis ir kokybė buvo vertinama naudojant UV spektrofotometrijos. RNR transkripcija į kDNR naudojant viršuje Pirmosios grandinės sintezei sistema (Invitrogen). AT-PGR buvo atliekama su viršuje One-Step (Invitrogen). Naudojami pradmenys buvo taip: CCR4 prasminį pradmenį, 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 Priešprasminis gruntas 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH į priekį gruntas 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', ir GAPDH atvirkštinio gruntas 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
Western blot analizė
ląstelės buvo išplauti su fosfatas-buferinio tirpalo (PBS) ir lizuojamos į radioimunoprecipitacijos tyrime (Ripa) lizės buferiniame tirpale (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl,, 0,1% natrio dodecil-sulfatas, 1% Nonidet P-40, 1 mM fenilmetilsulfonilfluoridą). Lizatai vartų centrifuguojant (15,000 rpm 5 min) ir baltymų koncentracija buvo nustatoma naudojant bicinchoninic rūgšties metodas prieš saugojimą iki -80 ° C. Lygiaverčiai sumos baltymų buvo atskirti nuo SDS-poliakrilamido gelyje (puslapis) ir perkelti į polivinilideno difluoridą membranas. Membranos buvo užblokuotas 5% be riebalų pieno tri-buferio druskų tirpalu su 0,1% Tween 20 ir inkubuojamos su pirminiais antikūnais per naktį 4 ° C temperatūroje. tada Imuninės kompleksai buvo aptikta naudojant sustiprintas chemiliuminescencine sistemą (Amersham, Buckinghamshire, Jungtinė Karalystė).
ląstelių proliferaciją Analizės
MFCs buvo pasėjamos į 96-duobučių lėkštelėse esant tankiui 1 × 10 4 ląstelės per šulinio ( 200 ml) ir inkubuojami visiškai terpėje už 24 val. Vidutinės buvo pakeistas su serumo neturinčioje terpėje, kurių sudėtyje yra įvairios koncentracijos CCL22, su RPMI 1640, veikiantis kaip neigiama kontrolė. Po to, kai inkubavimą 24 valandų, 20 pL MTT reagentu (5 mg /ml; Sigma-Aldrich Co.) buvo pridėta ir inkubuojami 4 valandas. Tada, buvo įtraukta 100 pL ploviklio reagentu, paliktas kambario temperatūroje 2 valandas tamsoje ir esant 492 nm bangos ilgiui absorbcijos užregistruotą.
Migracijos tyrimas
ląstelių migraciją tyrimų buvo atlikta 6,4 mm skersmens kamerų su 8-mm porų filtrai (Becton Dickinson laboratory, Franklinas ežerų NJ). MFCs buvo atitinkamai viršutinėje kameros (100 ląstelių viename šulinėlyje), o apatinę kamerą buvo užpildyta su DMEM, kuriose yra įvairių koncentracija CCL22 (0, 1, 10, ir 100 ng /ml). Ląstelės buvo inkubuojami 24 valandas 37 ° C temperatūroje 5% CO2. Ląstelės, kurios nebuvo praeina pro membranos poras buvo pašalintas. Migravo ląstelės buvo fiksuotas ir nudažomos. Mobilaus ryšio numeriai apatinėje kameroje buvo skaičiuojamas 10 atsitiktinių laukų (× 200) ir išreikštas kaip vidutinė celių skaičiumi vienam lauke. Duomenys buvo pristatomas kaip trijų nepriklausomų eksperimentų vidurkį.
Rezultatai
morfologijos Paukščių dėmės
elektroniniu mikroskopu parodė, kad Paukščių dėmės buvo daugiausia sudaro gausiai makrofagų (1a paveikslas), su kai kuriais limfocitų, neutrofilų ir įvairūs trakto stromos ląstelių (1B pav). 1 pav perdavimas ir skenavimo elektronų mikroskopijos taukinės pieniškas dėmės. (A), Elektroninė mikroskopija parodė, kad ląstelių kompozicija pagal Paukščių dėmės sudarė iš esmės gausiai makrofagų (M). (B) Kai limfocitai (L) ir neutrofilų (N), taip pat buvo pažymėta (priartinimas, 4,000X). (C), pieniškas vietoje srityse, paviršinio sluoksnio ląstelių sudarė makrofagų, limfocitų ir nenuolatinio mesothelial ląsteles ir buvo atskirtos tarpląstelinius tarpus ar poras. (D) Jei ne pieniškas vietoje sritys, Tarpląstelinių spragų ar poras nepastebėta (priartinimas, 500X).
Skenavimo elektronų mikroskopija parodė, kad Šių pieniškas dėmių paviršius buvo morfologiškai skiriasi nuo kitų ne pieniškas vietoje srityse iš taukinės. Paviršinio sluoksnio ląstelių sudarė makrofagų, limfocitų ir nenuolatinio mesothelial ląstelių, kurios buvo atskirtos tarpląstelinius tarpus ar poras (1c pav.) Per ne pieniškas vietoje srityse, tarpląstelinėje spragų ar poras nepastebėta (1D pav.)
Imunofluorescentinis, ir jis už taukinės pieniškas dėmės Viesbutis The visai didžioji taukinė iš 615 pelių buvo ribojasi caudally siauras riebalinio audinio juostele (2A pav), išilgai kurio buvo pastebėtas mobilieji suvestiniai rodikliai (žalia), žinomas kaip pieniškas dėmės, (2B pav.) Kraujo kapiliarai, arteriolių ir lymphocapillary laivai buvo rastos Paukščių vietoje srityse (2c pav.) 2 pav morfologija Paukščių dėmės. (A-B) didžioji taukinė iš 615 pelių buvo ribojasi siauras riebalinio audinio juostele (didinimo, 50x), išilgai kurio, pastebėta, mobilieji užpildai, žinomas kaip pieniškas dėmės. (C) Kraujo kapiliarai ir arteriolė laivai rastos Paukščių vietoje srityse (priartinimu, 200X).
Vizualizavimas vėžinių ląstelių adresu pradžioje, kiekis
MFCs taukinės pradėjo laikytis taukinės pieniškas dėmės po 4 valandas po injekcijos. Per 12 valandas po injekcijos, MFCs buvo ypač koncentruotas Paukščių dėmės (3a paveikslas), o nėra naviko ląstelės buvo rasta ne pieniškas vietoje sričių taukinės (3b pav.) Pav 3 skrandžio vėžio ląstelės laikytis taukinės pieniškas vietoje srityse įvairiais laiko momentais. (A-B), vaizdas pieniškas vietoje makrofagų (žali) ir daug Dii-MFCs (raudona) sutelkta pieniškas vietoje srityse per 12 valandų po injekciją į pilvą. (C-D), 72 h, Dii-MFCs skaičius sumažėjo pieniškas vietoje srityse, o plinta vėžinių ląstelių Paukščių dėmių ir buvo pastebėtas mikrometastazių formavimas. Pavienių naviko ląstelės buvo rasta taukinės ne pieniškas vietoje srityse. (E-F), dvi savaites po injekciją į pilvą, pieniškas vietoje plotai buvo visiškai okupuota proliferuojančias skrandžio vėžio ląsteles ir buvo stebimas ląstelių klasterį tipo metastazės. Plintančios vėžio ląstelių branduoliai nebuvo pastebėta ne pieniškas vietoje srityse ir vėžinės ląstelės susidaro metastazes vienos ląstelės tipo. (Priartinimas, x 200).
Po 72 valandų, plinta navikines ląsteles ir mikrometastazių formavimas buvo pažymėta Paukščių vietoje srityse (3c pav.) Priešingai, po 72 valandų po injekcijos, pavienių vėžinių ląstelių buvo rasta ne pieniškas vietoje srityse, o ne ląstelių branduoliai buvo aptikta (3D pav.)
Tuo 2 savaites po injekciją į pilvą, pieniškas vietoje sritys buvo visiškai užima proliferuojančias skrandžio vėžio ląsteles ir metastazių ląstelių klasterį tipo nepastebėta (3E pav.) Priešingai, plinta vėžio ląstelių branduoliai nebuvo pastebėta ne pieniškas vietoje srityse ir vėžinės ląstelės susidaro vienos ląstelės tipo metastazių (3F pav.)
CCR4 išraiška skrandžio vėžio ląstelių
MFCs aiškiai CCR4 mRNR (Paveikslas 4A). Baltymų išraiška CCR4 pat buvo tiriama, Vakarų dėmės (4b pav.) MFCs išreikštas CCR4 baltymą, kuris lokalizuotas prie ląstelės paviršiaus ir /arba citoplazmoje (4C pav). 4 pav CCR4 išraiška skrandžio vėžio ląsteles. (A) MFCs aiškiai CCR4 iRNR. (B), baltymų ekspresija CCR4 pat buvo tiriama, Vakarų dėmės. (C) MFCs išreiškė CCR4 baltymų ir jos buvo lokalizuotas ant ląstelės paviršiaus ir /arba iš MFCs citoplazmoje.
Iš CCL22 poveikį platinimo ir invazijos MFCs Viesbutis The apie CCL22 Poveikis platinimu MFCs vertino MTT metodu. CCL22 žymiai padidėjo dauginimąsi gebėjimą skirtingos koncentracijos (1-100 ng /ml), lyginant su kontroline grupe (P < 0,05) (5a pav). 5 paveiksle CCL22 poveikis platinimo ir invazijos MFCs. (A), CCL22 žymiai padidėjo dauginimąsi gebėjimą skirtingos koncentracijos (1-100 ng /ml), lyginant su kontroline grupe (P < 0,05). (BC) koncentracija CCL22 tarp 10-100 ng /ml žymiai padidėjo migraciją MFCs, su optimalus atsakas suprantamas kaip 10 ng /ml (P < 0,01).
A CCL22 koncentraciją tarp 10-100 ng /ml žymiai padidėjo migraciją MFCs, su optimalus atsakas suprantamas kaip 10 ng /ml. (P < 0,05, palyginti su terpei) (pav 5B-C)
CCL22 ir CCR4 išraiška ir taukinės pieniškas vietoje mikrometastazių
į ir taukinės Pieno dėmės, CCL22 buvo stebimas daugiausia ant ląstelės paviršiaus ir arba sudedamųjų ląstelių citoplazmoje (6A pav). Per taukinės pieniškas vietoje mikrometastazių 12 valandų, 7 dienų ir 14 dienų po injekciją į pilvą, CCR4 buvo pastebėta ar skrandžio vėžio ląsteles, sudedamosios ląstelių pieniškas vietoje, mesothelial ląstelių, kraujo ląstelių ir kraujo endotelio ląstelių (pav 5B-D ). 6 pav CCL22 ir CCR4 išraiška taukinės pieniškas vietoje mikrometastazių. (A) į taukinės pieniškas dėmės skyriuje CCL22 buvo lokalizuotas daugiausia ant ląstelės paviršiaus ir arba sudedamųjų ląstelių citoplazmoje. (B-D) Atsižvelgiant į taukinės pieniškas vietoje mikrometastazių (12 h po injekciją į pilvą) skyriuje, CCR4 buvo lokalizuotas arba skrandžio vėžio ląsteles, sudedamosios ląstelės pieniškas vietoje, mesothelial ląstelių, kraujo ląstelių ir kraujo endotelio ląstelių. (C) septynias dienas po to, kai injekciją į pilvą. dar reikia išsiaiškinti (D) per keturiolika dienų po injekciją į pilvą.
Diskusijos
peritoninės metastazių skrandžio vėžio etiologijos. Laisvųjų vėžinių ląstelių iš pažeidimo kur pagrindinis navikas įsiskverbia į serosa spaudai laikomas peritoninės metastazių [26] kilmė. Daugiau nei šimtmetį praėjo Paget sukūrė `sėklos ir dirvos" [27] teoriją. Jis iškėlė hipotezę, kad kai naviko ląstelės (sėklos) pasirinktinai kolonizuoti tolimus organus (pamatas) su palankios aplinkos, kuri palengvina vėžinių ląstelių išgyvenimą. Šiame tyrime mes nustatėme, kad taukinės Pieno dėmės buvo bendramintis mikroaplinkos, nes jų fizines ir chemines savybes, už pilvaplėvės nemokamai skrandžio vėžio ląstelių migruoti, išgyventi, augti ir formuoti metastazes kietas.
Skenavimo elektronų mikroskopija parodė, kad iš jų paviršius Pieno dėmės buvo morfologiškai skiriasi nuo kitų ne pieniškas vietoje sričių taukinės. Paviršinio sluoksnio ląstelių sudarė makrofagų, limfocitų ir nenuolatinio mesothelial ląsteles ir buvo atskirti daugelio tarpląstelinius tarpus ar poras. Žymūs Tarpląstelinių spragų ar poras sukėlė submesothelial ir jungiamojo audinio ląstelės būti veikiami pilvaplėvės paviršiaus, kurias siūloma atstovauti lengvatinį vietą naviko ląstelių sukibimą.
Mikrometastazių šiuo metu klasifikuojami į vienaląsčiai ir smulkiųjų ląstelių klasterį rūšys [28]. Šis tyrimas parodė, skirtingo tipo naviko ląstelių metastazės į pieniškas dėmės, palyginti su ne pieniškas vietoje srityse. Praėjus dviems savaitėms po injekciją į pilvą, pieniškas vietoje plotai buvo visiškai okupuota proliferuojančias skrandžio vėžio ląsteles ir skrandžio vėžio ląstelės susidaro metastazes ląstelių klasterį tipo. Tačiau proliferuotos vėžinės ląstelės nebuvo pastebėta ne pieniškas vietoje srityse vienu etapu, o vėžinės ląstelės susidaro metastazes vienos ląstelės tipo. Šis reiškinys gali būti paaiškintas daugelio kraujo kapiliarus ir arterijų esančių laivų į taukinės pieniškas vietoje srityse, kurios užtikrintų tinkamą kraujo tiekimą skrandžio vėžio ląstelių augimą.
Kai kurie tyrimai parodė, kad naviko augimui ir metastazių procesas yra susijęs su ląstelių-ląstelių ir ląstelių-matriksą sąveikų, medijuojamų ląstelių adhezijos molekulių įvairovė. Kiekvienas žingsnis reikalauja ląstelių adhezijos molekulių ir receptorius [29]. Mesothelial ląstelės sienelės Paukščių dėmės gaminti aukštesnio lygio korinio adhezijos molekulių (pvz, tarpląstelinės adhezijos molekulė-1), nei ne pieniškas vietoje srityse, tokiu būdu prisidedant prie stipresnio sukibimo [11], [12]. dar nebuvo nustatyta iš chemokinus vaidmuo skrandžio vėžio ląstelės selektyviai patekę į Paukščių dėmės. Pieno dėmės apima daug makrofagus, kurie gamina chemokino MDC /CCL22 [30]. CCL22 ir jos "receptorius CCR4 dalyvauja įvairiausių patologijų. CCL22 ekspresija ypač esant pažeidimams, sukurtų T ląstelinis uždegiminių ligų [29]. CCR4 pirmą kartą buvo pranešta, kad pirmenybė išreiškė Th2 ląstelių, kurios dalyvauja humoralinį imunitetą ir alerginių reakcijų [30]. CCL22 ir CCR4 taip pat vaidina svarbų vaidmenį vėžio augimo ir metastazių [17] - [21], todėl daugelis CCR4 receptorių antagonistai, taip pat anti-CCR4 antikūnų rengiami farmacijos pramonėje [31], [32]. Šiame tyrime, mes nustatėme, kad MFCs aiškiai CCR4 iRNR. CCR4 baltymas taip pat buvo ištirta Vakarų dėmės. CCR4 buvo išreikštas arba skrandžio vėžio ląstelių į taukinės pieniškas vietoje mikrometastazių 12 valandų, 7 dienų ir 14 dienų po injekciją į pilvą skyriuje. CCL22 buvo esmės išreiškiamas ant ląstelės paviršiaus ir ar atsižvelgiant į makrofagų citoplazmoje. CCL22 žymiai padidino platinimo galimybę skrandžio vėžio ląsteles ir koncentracijos CCL22 tarp 10-100 ng /ml gerokai padidėjo migracija MFCs. Makrofagų taukinės pieniškas dėmių ne tik citotoksinių savybes prieš vėžinių ląstelių, tačiau jie taip pat gamina CCL22, kuri padeda skrandžio vėžio ląstelės išgyventi ir augti į kietųjų metastazių. MDC /CCL22-CCR4 ašis vaidina svarbų vaidmenį skrandžio vėžio ląstelių selektyviai patekę į taukinės pieniškas dėmių ir formos metastazės kietas.
Išvada
Skrandžio nemokama vėžinės ląstelės (sėklos) suraskite mikroaplinka, kurių sudėtyje palankias fizines ir chemines savybes per Pieno dėmės, kurioje jie galėtų išgyventi ir augti, nustatant metastazes ląstelių klasterį tipo. CCL22-CCR4 ašis prisideda prie šio selektyvaus infiltracija.
Autorių informacija
Yi Zhang ir Liang Cao yra išvardytos, kaip bendraturčių pirmoji autoriams.
Deklaracijų
nusipelniusieji
Šis projektas parėmė Nacionalinis gamtos mokslo fondas Kinijos (dotacijos numeris: 81.101.633), Gamtos mokslo fondas Liaoning provincijos (dotacijos numeris: 201.202.047), mokslo ir technologijų projektas Dalian (dotacijos numeris: 2012E15SF142)
Autoriai "originalas pateikti failus. vaizdai
Žemiau išvardintos nuorodos į autorių originalių pateiktų failų vaizdų. 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif Autorių originalus failas 1 pav 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif Autorių originalaus failo 2 pav 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif Autorių originalios 3 pav 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif Autorių originalaus failo 4 pav 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif Autorių originalaus failo 5 paveiksle 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif autorių originalus failas 6 pav konkuruojančių interesų
Visi autoriai teigia, kad jos neturi konkuruojančius interesus.

• Asociacija LEC ir tnpA Helicobacter pylori genų su skrandžio vėžio Brazilijos gyventojų
• Plazminiai iRNR raiška lygiai BRCA1 ir TS, kaip potencialių prognozavimo biologinių žymenų chemoterapija skrandžio cancer