Rollen til CCL22-CCR4 akse i den metastasering av magekreftceller i omentfaktorene melkeaktige flekker

Rollen til CCL22-CCR4 aksen i metastase av magekreftceller i omentfaktorene melkeaktige flekker
Abstract
Bakgrunn
omentum er en av de første nettstedene for peritoneal metastaser fordi det har melkeaktige flekker som gir et mikromiljø for kreftceller til lett migrere og vokse inn i mikrometastaser. Denne studien undersøkte rolle CCL22-CCR4 akse i magekreftceller selektivt infiltrere inn i melkeaktige flekker.
Metoder
magekreft MFC celler merket med Dil ble injisert intraperitonealt i belastning 615 mus. Musene ble avlivet ved gitte intervaller og omentum ble skåret ut for immunhistokjemi. Virkningene av CCL22 på proliferasjonen og migreringen av MFCer ble bedømt ved MTT og trans-brønners analyser. RT-PCR og Western blot analyse oppdaget CCR4 mRNA og protein uttrykk nivåer i MFCer. Immunhistokjemi ble brukt til å analysere CCL22 og CCR4 uttrykk i melaktig stikkmikrometastaser.
Resultater
To uker etter intraperitoneal injeksjon, melaktig stikk områder ble helt okkupert av voksende mage kreft celler og celle cluster-type mikrometastaser ble observert. I motsetning til cancerceller dannet enkeltcelle-type mikrometastaser i ikke-melkeaktig punktområder. MFCer uttrykt CCR4, som var lokalisert på celleoverflaten og eller i cytoplasma. Ulike konsentrasjoner av CCL22 betydelig økt spredning evne MFCer. I tillegg konsentrasjoner av CCL22 mellom 10-100 ng /ml en signifikant økning vandring av MFCer. Innen omentfaktorene melkeaktige flekker, ble CCL22 lokalisert hovedsakelig på celleoverflaten og eller i cytoplasma. Innenfor deler av omentfaktorene melkepunktmikrometastaser, ble CCR4 anerkjent på eller i mage kreftceller, innholds celler melkeaktig flekker, blodceller og blod endotelceller.
Konklusjoner
oment melkeaktige flekker er en sympatisk mikromiljøet for peritoneal gratis magekreftceller å migrere, overleve og etablere celle cluster-type metastaser. Den CCL22-CCR4 aksen bidrar til dette selektiv infiltrasjon prosessen.
Nøkkelord
Magekreft oment melkeaktig sted Peritoneal metastase CCL22 CCR4 Innledning
Peritoneal metastase er en vanlig mønster av fjernmetastaser i magekreft. Tallrike studier har bekreftet at prognosen av mage kreftpasienter med peritoneal metastaser er dårlig, selv hos pasienter behandlet med radikal kirurgi [1]. Peritoneal metastase utvikler seg fra mikrometastaser som stammer fra gratis peritoneal kreftceller [2]. Derfor er det viktig å forstå de egenskaper og mekanismer som er involvert i dannelsen av peritoneale mikrometastaser. En slik forståelse skal hjelpe til med å forebygge og tilbakefall av peritoneale metastaser, og dermed forbedre den prognose av magekreftpasienter.
melkeaktige flekker er primitive lymfevev i den peritoneale hulrom hos mennesker og dyr, som primært finnes i den større omentum. I motsetning til dette, blir forholdsvis få melkeaktige flekker som finnes i mesenterium og bekkenbunn, og ingen melkeaktige flekker er funnet i andre områder av bukhinnen [3]. Melkeaktige flekker omfatter en rekke makro og lymfocytt samlinger og er involvert i clearance av partikler, bakterier og kreftceller fra bukhulen, spiller en viktig rolle i peritoneal forsvar [4] - [6]. Spesielt ble omentfaktorene makrofager funnet å være cytotoksiske for tumorceller [7], [8]. Noen studier har vist at omentfaktorene melkeaktige flekker er velkjente områder av metastaser av karsinomer i eggstokkene, magen og tykktarmen [9]. Kreftceller selektivt infiltrere inn i melkeaktige flekker i de tidlige stadier av peritoneal kreft formidling og finne en mikromiljøet der de er i stand til å overleve, vokse og danne faste metastaser [10]. Dette fortrinnsrett vedlegg kan forklares med at det finnes visse særtrekk ved melkeaktige flekker, inkludert høyere nivåer av cellulære adhesjonsmolekyler og vekststimulerende faktorer [11], [12]. Derfor, mens melkeaktige flekker ha cytotoksiske egenskaper mot tumorceller og spiller en viktig rolle i forsvaret peritoneal, de gir også områder hvor tumorcelle-proliferasjon og micrometastasis oppstå.
Kjemokiner er små utskilte proteiner klassifisert i de fire subfamilier basert på sekvensen av konserverte N-terminale cysteinrester: CXC, CC, C, og CX3C [13], [14]. Mange studier har vist at kjemokiner og kjemokin reseptorer er årsaksmessig involvert i metastase av kreft [15] - [21]. Den makrofag-avledet kjemokin MDC /CCL22 er en av de CC-kjemokiner som produseres av makrofager og CCR4 ble identifisert som dets spesifikke reseptor [17] - [21], som også er funksjonell reseptor for andre CC-kjemokiner. Ekspresjonen av kjemokin reseptorer er kjent for å være assosiert med cancermetastaser, for eksempel CXCR4, CCR7 og CCR10 i brystkreft [16] og CXCR5, CCR6, CCR7, og CCR4 i bukspyttkjertel, mage og prostata-kreft [22], [23] . Noen studier definitivt vist at CXCR4 og CXCL12 spiller en viktig rolle i den metastasering av magekreftceller i bukhulen [23] - [25]
oment melkeaktige flekker innbefatte tallrike makrofager, men rollen som MDC /CCL22-. CCR4 aksen i mage kreftceller selektivt infiltrere inn i melkeaktige flekker har ennå ikke blitt identifisert. Vi har derfor undersøkt uttrykk for MDC /CCL22 og CCR4 i melkeaktige stikkmikrometastaser, med sikte på å etablere en ny behandlingsmetode for å hindre peritoneal metastase ved å fokusere på kjemotaksien av mage kreftceller.
Materiale og metode
Tumor celle linjer og dyr
murine magekreft MFCer, avledet fra stammen 615 murine karsinom i proksimale magen, ble hentet fra sentrallaboratoriet av Frist Affiliated Hospital of Dalian Medical University. MFCer ble dyrket i RPMI-1640 (Gibco) supplementert med 10% føtalt bovint serum (Sigma) i en inkubator med 5% CO 2 ved 37 ° C. Når sammenflytende, ble cellene trypsinisert og skylt i D-Hanks 'medium. En levedyktig celletall ble utført ved hjelp av trypanblått eksklusjon.
Seks uker gamle belastning 615 mus ble hentet fra Dalian Medical University of China. Musene ble holdt under standard laboratoriebetingelser og hadde fri adgang til standard laboratorie mat og vann. Studieprotokoller ble godkjent av komiteen for forsøksdyr av Dalian Medical University of China i henhold til nasjonale retningslinjer (Permit Number: SYXK2008-0002). Alle tiltak ble iverksatt for å redusere smerte eller ubehag.
Scanning elektronmikros
oment prøvene ble samlet inn, fikset over natten med 2,5% glutaraldehyd i 0,1 M PIPES buffer (pH 6,9), vasket tre ganger i ferske Rør buffer (pH 6,9), og post-fiksert i 1,5 timer i 1% osmiumtetroksyd i 0,1 M Pipes-buffer (pH 6,9). Prøvene ble vasket i dH 2O tre ganger og deretter dehydrert i økende konsentrasjoner av etanol (50, 70, 90 og 100%). Prøver som var kritiske punkt tørket fra flytende karbondioksid, belagt til en tykkelse på 3 nm med en osmium-plasma beleggeren, og observert med et Hitachi S-520 scanning elektronmikroskop.
Transmisjonselektronmikros
Seks omentfettet bånd erholdt fra tre 615 mus av hvert kjønn ble brukt. Båndene ble neddykket i en fikseringsoppløsning inneholdende 2% glutaraldehyd i 2 timer, deretter etter-fiksert i en oppløsning inneholdende 2% osmiumtetroksid og 1,5% sukrose i en 0,05 M fosfatbuffer i 2 timer ved 4 ° C. Prøvene ble dehydrert i en gradert serie av etanol. Etter anvendelse av aceton i etanol, ble prøvene innleiret i epoksyharpiks blokker. Ultra-tynne snitt ble farget med uranylacetat og bly citrate og observert med en transmisjonselektronmikroskop (JEM-2000EX).
Tumor celle vedlegg til omentum Bedrifter Den MFC celler ble inkubert i fullstendig RPMI-1640 i en konsentrasjon på 2 mg /l DII (Sigma) i 60 minutter ved 37 ° C. Celler ble vasket tre ganger med Hanks 'balanserte saltløsning. Cellen-merking hastighet var 100% og 1 x 10 4 celler ble injisert intraperitonealt. Musene ble avlivet ved 4, 12, 36, 48, 72 og 120 timer, og 7, 10 og 14 dager etter intraperitoneal injeksjon. Omentum ble skåret ut og strukket på objektglass for videre behandling.
HE og immunhistokjemisk farging
oment Prøver ble oppsamlet, fiksert i en 4% formaldehyd-løsning (pH 7,4) ved 4 ° C i 24 timer, skylles tre ganger med fosfat-bufret saltløsning (pH 7,4) i 3 timer, dehydrert i en gradert serie av etanol, og innstøpt i parafin. Deretter ble 5 um tykke seksjoner påfølgende behandlet for HE og immunfarging ved deparaffinisation med xylen og rehydratisering med gradert etanol.
For å øke ekspresjonen av antigenet i vev, citrat-bufferoppløsning ble tilsatt til prøvene og de ble kokt i en mikrobølgeovn stekeovn. Prøvene ble behandlet med en 3% -ig hydrogenperoksyd-løsning i 10 min for å undertrykke endogen peroksydase-aktivitet og deretter skylt med fosfatbufret saltvann (PBS). For å forhindre ikke-spesifikke immunreaksjoner, ble prøvene behandlet med 3% normalt geiteserum i 10 minutter, og skylt med PBS. Den primære polyklonalt kanin-anti-mus CCL22-antistoff (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) og kanin-anti-muse-CCR4-antistoff (Abcam, Cambridge, UK) ble fortynnet 1: 100 ved hjelp av geiteserum og inkubert ved romtemperatur i 1 time. Etter tre 2 min vaskinger med PBS, ble seksjonene inkubert med biotinylert geit sekundært antistoff i 30 minutter (DAKO, Carpinteria, CA, USA). Etter tre 2 min vasker med PBS, ble streptavidin -horseradish peroksidase (DAKO) lagt til seksjonen i 30 min, etterfulgt av ytterligere tre 2 min vasker med PBS. Prøvene ble utviklet med 3,3'-diaminobenzidin-substrat (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Canada) i 1 min og motfarget med Mayers hematoksylin. Glassene ble dehydrert etter en standard prosedyre og forseglet med dekkglass. Den negative kontrollen ble fremstilt ved den samme fremgangsmåten ved å bruke PBS i stedet for det primære antistoff. Normale mage vev ble anvendt som positiv kontroll.
Immunocytochemistry farging av CCR4
magekreft-celler ble sådd ut i kammers objektglass belagt med poly-L-lysin, fikk feste i 48 timer og deretter brukt for immunocytokjemi. Cellene ble fiksert med 0,3% H 2o 2 i metanol i 60 minutter ved romtemperatur, vasket 4 ganger i PBS, blokkert med 3% BSA og permeabilised med PBS inneholdende 0,1% Triton X-100 i 60 min ved romtemperatur. Den antistoff, FITC-konjugert anti-muse-CCR4 polyklonalt antistoff (1 ug /ml, eBioscience), ble inkubert i 60 minutter ved 37 ° C, vasket 4 ganger og undersøkt under et fluorescens mikroskop (BX-51 TR32000, Olympus).
Immunofluorescent merking av makrofager i omentfaktorene melkeaktige flekker
for immunhistokjemi, ble omentet fiksert i formalin i 60 minutter og vasket tre ganger med fosfat-bufret saltløsning. Omentum ble inkubert i 60 minutter ved 37 ° C med en FITC-konjugert anti-muse-F4 /80 muse-makrofag markør (1 pg /ml; Biolegend), vasket tre ganger i fosfat-bufret saltvann, og deretter lufttørket i en mørk rom i 12 timer. Immunhistokjemisk farging ble direkte mottok og bilder ble tatt ved hjelp av et fluorescens mikroskop. (BX-51 TR32000; Olympus)
Revers transkripsjon-PCR-analyse
Totalt RNA ble ekstrahert og renset fra dyrkede MFCer ved hjelp av en RNeasy Mini Kit (Qiagen, Milano, Italia). Utvinningen inkluderer DNase fordøyelse trinn. RNA kvantitet og kvalitet ble bestemt ved UV-spektrofotometri. RNA ble transkribert til cDNA ved anvendelse av Superscript First-Strand Synthesis System (Invitrogen). RT-PCR ble utført med Super One-Step (Invitrogen). Primerne som ble brukt var som følger: CCR4 forstand primer 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 antisense-primer 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH forover primer 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', og GAPDH revers primer 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
Western blot-analyse
Cellene ble vasket med fosfatbufret saltvann (PBS) og lyseres i radioimmunopresipitasjonsanalyse assay (RIPA) lysebuffer (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 0,1% natriumdodecylsulfat, 1% Nonidet P-40, 1 mM fenylmetylsulfonylfluorid). Lysatene ble fjernet ved sentrifugering (15.000 rpm i 5 minutter), og proteinkonsentrasjoner ble bestemt ved anvendelse av bicinchoninic syremetoden før lagring ved -80 ° C. Ekvivalente mengder av protein ble separert på SDS-polyakrylamid-gelelektroforese (PAGE) og overført til polyvinylidendifluorid-membraner. Membranene ble blokkert i 5% fettfri melk i Tris-bufret saltvann med 0,1% Tween 20, og inkuberes med det primære antistoff over natten ved 4 ° C. Immunkompleksene ble deretter påvist ved anvendelse av den forbedrede kjemiluminescens-systemet (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Celleproliferasjonsanalyse
MFCer ble sådd på 96-brønners plater i en tetthet på 1 x 10 4 celler per brønn ( 200 ml) og inkubert i komplett medium i 24 timer. Mediet ble erstattet med serum-fritt medium inneholdende forskjellige konsentrasjoner av CCL22, med RPMI 1640 som tjener som negativ kontroll. Etter inkubering i 24 timer, 20 ul av MTT Reagens, ble (5 mg /ml Sigma-Aldrich Co.) tilsatt og inkubert i 4 timer. Deretter ble 100 ul av detergent-reagens tilsatt, fikk stå ved romtemperatur i mørket i 2 timer, og absorbansen ved 492 nm registreres.
Migration assay
cellemigrering ble utført i diameter kamre 6,4 mm med 8 mm pore filtre (Becton Dickinson Laboratorium, Franklin Lakes, NJ). MFCer ble plassert i det øvre kammer (100 celler pr brønn), mens det nedre kammer ble fylt med DMEM inneholdende forskjellige konsentrasjoner av CCL22 (0, 1, 10 og 100 ng /ml). Celler ble inkubert i 24 timer ved 37 ° C i 5% CO2. Cellene som ikke passerer gjennom membranporene ble fjernet. Migrerte celler ble fiksert og farget. Celle tall i det nedre kammer ble tellet i 10 tilfeldig felt (x 200) og uttrykt som den gjennomsnittlige antall celler pr synsfelt. Dataene ble representert som gjennomsnitt av tre uavhengige eksperimenter.
Resultater
Morfologi av melkeaktige flekker
Elektronmikroskopi viste at melkeaktige flekker ble i stor grad består av rikelig makrofager (Figur 1a), med noen lymfocytter, nøytrofile og forskjellige stromale celler (figur 1B). Figur 1 Transmisjon og scanning elektronmikroskopi av omentfaktorene melkeaktige flekker. (A) Elektronmikroskopi viste at cellen sammensetningen av melkeaktige flekker var i stor grad sammensatt av tallrike makrofager (M). (B) Noen lymfocytter (L) og nøytrofile (N) ble også registrert (forstørrelse, 4,000X). (C) I melaktig høyrisiko, overflatelaget cellene besto av makrofager, lymfocytter og usammenhengende mesothelial celler og ble separert ved inter hull eller porer. (D) I den ikke-melkeaktig punktområder, intercellulære åpninger eller porer ble ikke observert (forstørrelse 500X).
Scanning elektronmikroskopi viste at overflaten av disse melkeaktige flekker var morfologisk distinkt fra den til de ikke-melkeaktig høyrisiko av omentum. Overflatelaget Cellene besto av makrofager, lymfocytter og usammenhengende mesothelial celler, som ble separert ved intercellulære åpninger eller porer (figur 1C). I den ikke-melkeaktig stikk områder ble de inter hull eller porer ikke observert (figur 1D).
Immunfluorescens og HE for omentfaktorene melkeaktige flekker
Hele større omentum av 615 mus ble avgrenset caudally av en smal fettvev stripe (figur 2A), langs hvilken ble observert cellulære aggregater (grønt), kjent som melkeaktige flekker, (figur 2B). Blod kapillærene, arterioler og lymphocapillary fartøyene ble funnet i melkeaktige stikk områder (Figur 2C). Figur 2 Morfologi av melkeaktige flekker. (A-B) Jo større omentum på 615 mus ble avgrenset av en smal stripe fettvev (forstørrelse 50X), langs hvilken cellulære aggregater, kjent som melkeaktige flekker, ble observert. (C) Blood kapillærene og arteriole fartøy finnes innenfor melaktig høyrisiko (forstørrelse, 200X).
Visualisering av kreftceller på omentum på tidlige tidspunkter
MFCer begynte å følge omentfaktorene melkeaktige flekker på 4 timer etter injeksjonen. Ved 12 timer etter injeksjon, ble MFCer særlig konsentrert til de melkeaktige flekker (figur 3A), mens ingen tumorceller ble funnet i de ikke-melkeaktig sted områder av omentum (figur 3B). Figur 3 Gastric kreftceller følge omentfaktorene melaktig stikk områder på ulike tidspunkter. (A-B) Bilde av melaktig stikkmakrofager (grønt) og et stort antall Dil-MFCer (rød) konsentrert i melke høyrisiko 12 timer etter intraperitoneal injeksjon. (C-D) Etter 72 timer ble antallet DII-MFCer redusert i melkeaktige stikk områder mens prolifererende tumorceller i den melkeaktige flekker og ble observert dannelse av mikrometastaser. Sporadiske tumorceller ble funnet i omentfaktorene ikke-melkeaktige punktområder. (E-F) To uker etter intraperitoneal injeksjon ble melkeaktig punktområdene helt opptas av prolifererende magekreftceller og celle cluster-typen metastase ble iakttatt. Prolifererende kreft cellegruppene ble ikke observert i de ikke-melkeaktig stikk områder og kreftceller dannet enkeltcelle-type metastaser. (Forstørrelse, × 200).
Etter 72 timer voksende kreftceller og dannelse av mikrometastaser ble registrert i melaktig stikk områder (Figur 3C). I motsetning til 72 timer etter injeksjon, ble sporadiske kreftceller funnet i de ikke-melkeaktig stikk områder, mens ingen cellegruppene ble registrert (Figur 3D).
På 2 uker etter intraperitoneal injeksjon, melaktig høyrisiko helt var okkupert av prolifererende magekreftceller og celleklase-type metastaser ble observert (figur 3E). I motsetning til dette ble det voksende kreftcellegrupper ikke observert i de ikke-melkeaktig høyrisiko og kreftceller dannet enkeltcelle-type metastasering (figur 3F).
CCR4 ekspresjon i magekreftceller
MFCer klart uttrykt CCR4 mRNA (figur 4A). Proteinekspresjon av CCR4 ble også undersøkt ved hjelp av Western blot (Figur 4B). MFCer uttrykte CCR4 protein, som lokalisert til celleoverflaten og /eller i cytoplasma (figur 4C). Figur 4 CCR4 uttrykk i magekreftceller. (A) MFCer klart uttrykt CCR4 mRNA. (B) Protein uttrykk for CCR4 ble også undersøkt av Western blot. (C) MFCer uttrykt CCR4 protein og dets ble lokalisert på celleoverflaten og /eller i cytoplasma av MFCer.
Effektene av CCL22 på proliferasjonen og invasjonen av MFCer
Virkningene av CCL22 på proliferasjonen av MFCer ble vurdert av et MTT-assay. CCL22 betydelig økt proliferasjon evne ved forskjellige konsentrasjoner (1-100 ng /ml) sammenlignet med kontrollgruppen (P < 0,05) (figur 5A). Figur 5 Effektene av CCL22 på spredning og invasjonen av MFCer. (A) CCL22 betydelig økt proliferasjon evne ved forskjellige konsentrasjoner (1-100 ng /ml) sammenlignet med kontrollgruppen (P 0,05). (BC) Konsentrasjon av CCL22 mellom 10-100 ng /ml en signifikant økning migrering av MFCer, med den optimale responsen er 10 ng /ml (P < 0,01)., En konsentrasjon av CCL22 mellom 10-100 ng /ml betraktelig økt migrasjon av MFCer, med den optimale responsen er 10 ng /ml. (P < 0,05 sammenlignet med kun medium) (figur 5B-C)
CCL22 og CCR4 ekspresjon i omentfaktorene melaktig stikkmikrometastaser
på omentfaktorene melkeaktige flekker, CCL22 ble observert hovedsakelig på celleoverflaten og eller i cytoplasma av de bærende celler (figur 6A). I omentfaktorene melaktig stikkmikrometastaser 12 timer, 7 dager og 14 dager etter intraperitoneal injeksjon, ble CCR4 observert på eller i mage kreftceller, innholds celler av melkeaktig sted, mesothelial celler, blodceller og blod endotelceller (Figur 5B-D ). Figur 6 CCL22 og CCR4 uttrykk i omentfaktorene melkepunktmikrometastaser. (A) I den delen av omentfaktorene melkeaktige flekker, ble CCL22 lokalisert hovedsakelig på celleoverflaten og eller i cytoplasma av de bærende celler. (B-D) i den delen av omentfaktorene melaktig stikkmikrometastaser (12 timer etter intraperitoneal injeksjon), ble CCR4 lokalisert på eller i magekreftceller, bestående av celler av melkeaktig flekk, mesothelial celler, blodceller og blod endotelceller. (C) Syv dager etter intraperitoneal injeksjon. (D) Fjorten dager etter intraperitoneal injeksjon.
Diskusjon
Etiologien til peritoneal metastaser i magekreft er ikke avklart. Frigjøringen av frie cancerceller fra en lesjon hvor en primærtumor invaderer serosa anses å være opprinnelsen til peritoneal metastase [26]. Mer enn et århundre har gått siden Paget utviklet teorien om `frø og jord" [27]. Han hypotese at visse tumorceller (frø) selektivt å kolonisere fjerntliggende organer (jord) med et gunstig miljø som fremmer overlevelsen av tumorceller. I denne studien fant vi at omentfaktorene melkeaktige flekker var congenial microenvironments på grunn av sine fysiske og kjemiske egenskaper, for peritoneal gratis mage kreftceller til å migrere, overleve, vokse og danne faste metastaser.
Scanning elektronmikroskopi viste at overflaten av disse melkeaktige flekker var morfologisk distinkt fra den til de ikke-melkeaktig sted områder av omentum. Overflatelaget Cellene besto av makrofager, lymfocytter og usammenhengende mesothelial celler og ble separert ved mange intercellulære åpninger eller porer. Den fremtredende intercellulære åpninger eller porer forårsaket submesothelial bindevev og celler til å bli utsatt for peritoneal overflate, som er foreslått for å representere et gunstig sted for tumor-celle adhesjon.
Mikrometastaser er for tiden klassifisert i enkelt-celle og små-celle område typer [28]. Denne studien fant en annen type svulst celle metastase i melkeaktige flekker i forhold til de ikke-melkepunktområder. To uker etter intraperitoneal injeksjon ble melkeaktig punktområdene helt opptas av prolifererende magekreftcellene, og magekreftceller dannet celleklase-type metastaser. Men prolifererende kreftceller ble ikke observert i de ikke-melkeaktig stikk områder på samme scene, og kreftceller dannet enkeltcelle-type metastaser. Dette fenomen kan forklares ved de mange blodkapillærene og arterielle fartøy som er tilstede i omentfaktorene melaktig punktområder, som gir en adekvat blodtilførsel for vekst av magekreftceller.
Noen studier har indikert at prosessen med tumorvekst og metastase innebærer en rekke celle-celle og celle-ekstracellulær matriks-interaksjoner som er mediert av celleadhesjonsmolekyler. Hvert trinn krever celleadhesjonsmolekyler og reseptorer [29]. Mesothelial cellene lining melkeaktige flekker produsere høyere nivåer av cellulære adhesjonsmolekyler (dvs. inter adhesjonsmolekyl-1) enn ikke-melkepunkt områder, og dermed bidra til økt vedheft [11], [12]. Rollen kjemokiner i magekreftceller selektivt infiltrere inn i melkeaktige flekker har ennå ikke blitt identifisert. Melkeaktige flekker omfatter en rekke makrofager som produserer chemokine MDC /CCL22 [30]. CCL22 og dens 'reseptor CCR4 er involvert i en rekke ulike sykdommer. CCL22 er sterkt uttrykt i lesjoner som er opprettet av T-celle-medierte inflammatoriske sykdommer [29]. CCR4 ble først rapportert å være fortrinnsvis uttrykkes ved Th2-celler, som er involvert i humoral immunitet og allergiske reaksjoner [30]. CCL22 og CCR4 spiller også en viktig rolle i kreftvekst og metastase [17] - [21], således mange CCR4-reseptor-antagonister, så vel som et anti-CCR4-antistoff blir utviklet i den farmasøytiske industri [31], [32]. I denne studien fant vi at MFCer klart uttrykk CCR4 mRNA. CCR4 protein ble også undersøkt av Western blot. CCR4 ble uttrykt på eller i mage kreftceller i den delen av omentfaktorene melaktig stikkmikrometastaser 12 timer, 7 dager og 14 dager etter intraperitoneal injeksjon. CCL22 ble uttrykt i hovedsak på celleoverflaten og eller i cytoplasma av makrofager. CCL22 økt betydelig spredning muligheten av mage kreftceller, og konsentrasjoner av CCL22 mellom 10-100 ng /ml betydelig økt migrasjon av MFCer. Makrofager i omentfaktorene melkeaktige flekker ikke bare har cytotoksiske egenskaper mot kreftceller, men de produserer også CCL22, noe som bidrar til magekreftceller overleve og vokse inn i faste metastaser. MDC /CCL22-CCR4 aksen spiller en viktig rolle i magekreftceller selektivt infiltrere inn omentfaktorene melkeaktige flekker og danne faste metastaser.
Konklusjon
Gastric gratis kreftceller (frø) finne en mikromiljøet som inneholder gunstige fysiske og kjemiske egenskaper innen melkeaktige flekker der de er i stand til å overleve og vokse, etablere celle cluster-type metastaser. Den CCL22-CCR4 aksen bidrar til denne selektive infiltrasjon.
Forfatter informasjon
Yi Zhang og Liang Cao er oppført som co-første forfatterne
Erklæringer
Takk.
Dette prosjektet ble støttet av Foundation National Natural Science of China (Grant nummer~~POS=HEADCOMP: 81101633), Natural Science Foundation i Liaoning-provinsen (Grant nummer~~POS=HEADCOMP: 201202047), Science and Technology prosjektet Dalian (Grant nummer~~POS=HEADCOMP: 2012E15SF142)
Forfattere 'opprinnelige innsendte filer for. Images Nedenfor er linkene til forfatternes originale innsendte filer for bilder. 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 1 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 2 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 3 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 4 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 5 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif Forfatteroriginalfilen for figur 6 konkurrerende interesser
Alle forfattere erklærer at de ikke har noen konkurrerende interesser.

• Association of LEC og tnpA Helicobacter pylori gener med magekreft i en brasiliansk population
• Plasma mRNA uttrykk nivåer av BRCA1 og TS som potensielle prediktive biomarkører for kjemoterapi i mage cancer