Úloha osi CCL22 CCR4 v metastázovaniu rakovinových buniek žalúdočných do omentální mliečna spots

úloha osi CCL22 CCR4 v metastázy žalúdočných rakovinových buniek do omentální mliečne škvrny
abstraktné
pozadia
omentum je jedným z prvých miest pre peritoneálnej metastázy, pretože to má mliečne škvrny, ktoré poskytujú mikroprostredie pre rakovinové bunky, aby ľahko migrovať a rast do mikrometastáz. Táto štúdia skúmala úlohu osi CCL22 CCR4 v rakovinových bunkách žalúdka selektívne infiltrujúcich do mliečne škvrny.
Metódy
rakovina žalúdka MFC bunky značené DII boli injikované intraperitoneálne do kmeňa 615 myší. Myši boli utratené v určených intervaloch a omentum bola vyrezaná pre imunohistochémia. Účinky CCL22 na proliferáciu a migráciu MFCs boli hodnotené pomocou MTT a trans-jamkových testoch. RT-PCR a analýzy Western blot zistené CCR4 mRNA a úrovne expresie proteínov v MFCs. Imunohistochémia bola použitá na analýzu CCL22 a CCR4 expresiu v mliečnych bodových mikrometastáz.
Výsledky
dvoch týždňov po intraperitoneálnej injekcie, Mliečna mieste plochy boli kompletne obsadené množiacich žalúdočné rakovinové bunky a bunka klastra typu mikrometastatické boli pozorované. Na rozdiel od toho rakovinové bunky tvoril jedinej bunky typu mikrometastatické v non-mliečno bodových oblastiach. MFCs exprimuje CCR4, ktorý bol lokalizovaný na bunkovom povrchu a alebo v cytoplazme. Rôzne koncentrácie CCL22 významne zvýšili proliferačnú schopnosť MFCs. Okrem toho, koncentrácia CCL22 medzi 10-100 ng /ml významne zvýšila migráciu MFCs. V omentální mliečne škvrny, CCL22 bola lokalizovaná prevažne na bunkovom povrchu a alebo v cytoplazme. V rámci sekcií omentální mliečno bodových mikrometastáz, CCR4 bola rozpoznaná alebo v rakovinových bunkách žalúdka, tvoriacich buniek mliečne škvrny, krvné bunky a bunky krvi endotelové.
Závery
omentální mliečne škvrny sú kongeniálne mikroprostredie pre peritoneálnej voľných buniek karcinómu žalúdka migrovať, prežiť a vytvoriť bunkový klaster typu metastázy. Os CCL22 CCR4 prispieva k tomuto výberového procesu infiltrácie.
Kľúčové
Karcinóm žalúdka omentální mliečno miesto peritoneálnej metastáza CCL22 CCR4 Úvod
Peritoneálna metastázy je obyčajný vzor vzdialených metastáz u karcinómu žalúdka. Početné štúdie potvrdili, že prognóza pacientov s karcinómom žalúdka s peritoneálnej metastázy je zlá, a to aj tí pacienti liečení radikálnej operácií [1]. Peritoneálnej metastázy sa vyvíja z mikrometastáz pochádzajúcich z voľne peritoneálnych rakovinových buniek [2]. Preto je dôležité pochopiť vlastnosti a mechanizmy, podieľajúce sa na tvorbe peritoneálnej mikrometastáz. Také pochopenie bude pomáhať pri prevencii a opakovanie peritoneálnych metastáz, čím dôjde k zlepšeniu prognózy pacientov s karcinómom žalúdka.
Mliečne škvrny sú primitívne lymfatického tkaniva v peritoneálnej dutiny ľudí a zvierat, ktorá existuje v prvom rade vo väčšej omentum. Naproti tomu, pomerne málo mliečne škvrny sa nachádzajú v mesenteriu a panvového dna, a žiadne mliečne škvrny sa nachádzajú v iných oblastiach pobrušnice [3]. Mliečne škvrny obsahujú početné makrofágov a lymfocytov agregáciou a sú zapojené do klírens častíc, baktérií a nádorových buniek z brušnej dutiny, hrajú dôležitú úlohu v obrane peritoneálnej [4] - [6]. Predovšetkým sa zistilo, že omentální makrofágy, že cytotoxické voči nádorovým bunkám [7], [8]. Niektoré štúdie preukázali, že omentální mliečne škvrny sú dobre známe miesta metastáz karcinómov vaječníkov, žalúdka a hrubého čreva [9]. Rakovinové bunky selektívne preniknúť do mliečnych miest v raných fázach peritoneálnej šírenie rakoviny a lokalizáciu mikroprostredie, v ktorom sú schopné prežiť, rast a tvoriť metastázy pevných [10]. Toto preferenčné nástavec možno vysvetliť existenciou určitých zvláštnych vlastností mliečne škvrny, vrátane vyššej úrovne bunkových adhéznych molekúl a rastových-stimulačné faktory [11], [12]. Preto, zatiaľ čo mliečne škvrny majú cytotoxické vlastnosti proti nádorových buniek a hrá dôležitú úlohu v obrane peritoneálnej, ale aj miesta, kde sa vyskytujú proliferácie nádorových buniek a micrometastasis.
Chemokiny sú malé vylučované proteíny rozdelené do štyroch podskupín na základe postupnosti konzervatívny N-koncové cysteinové zvyšky: CXC, CC, C, a CX3C [13], [14]. Mnohé štúdie preukázali, že chemokiny a receptor chemokínu príčinne podieľajú na metastázy rakoviny [15] - [21]. Makrofágov odvodených chemokiny MDC /CCL22 je jeden z chemokiny CC produkovaný makrofágy a CCR4 bol identifikovaný ako jeho špecifický receptor [17] - [21], čo je takisto funkčná receptor pre ďalšie CC chemokiny. Expresia chemokinových receptorov je známe, že sú spojené s rakovinou metastázami, ako je CXCR4, CCR7 a CCR10 pri karcinóme prsníka [16] a CXCR5, CCR6, CCR7, a CCR4 v rakoviny pankreasu, žalúdka a prostaty [22], [23] , Niektoré štúdie preukázali, že s konečnou platnosťou CXCR4 a CXCL12 hrajú dôležitú úlohu v metastázy rakovinových buniek žalúdka do peritoneálnej dutiny [23] - [25]
omentální mliečne škvrny obsahujú početné makrofágy, ale rola v MDC /CCL22-. doteraz nebol identifikovaný CCR4 os v buniek karcinómu žalúdka selektívne infiltrujúcich do mliečne škvrny. Preto sme skúmali expresiu MDC /CCL22 a CCR4 v mliečno bodových mikrometastáz, s cieľom vytvoriť novú metódu liečby pre prevenciu peritoneálnej metastázy so zameraním na chemotaxiu buniek karcinómu žalúdka.
Materiály a metódy
Tumor cell riadok a zvieratá myšou
žalúdočné rakovina MFCs, odvodený od kmeňa 615 myšieho karcinómu proximálneho žalúdka, boli získané z centrálneho laboratória k Frist Affiliated nemocnice Dalian lekárskej univerzity. MFCs boli kultivované v RPMI-1640 (Gibco), doplnenom sérom 10% fetálne bovinné (Sigma) v inkubátore 5% CO 2 pri teplote 37 ° C. Raz zhlukovania, boli bunky trypsinizovány a opláchnuté v médiu D-Hanks '. Čítacího životaschopných buniek bola vykonaná za použitia trypánovej modrej.
Šesť týždňov starých myší kmeňa 615 boli získané z Dalian Medical University v Číne. Myši boli udržiavané za štandardných laboratórnych podmienok a mala voľný prístup k štandardnej laboratórnej potrave a vode. Študijné protokoly boli schválené Výborom pre výskum zvierat z Dalian Lekárskej univerzite v Číne podľa národných smerníc (Číslo povolenia: SYXK2008-0002). boli prijaté všetky opatrenia, aby sa minimalizovalo bolesť alebo nepohodlie.
Snímacie elektrónová mikroskopia
vzorky omentální boli zhromaždené, pevné cez noc s 2,5% glutaraldehydu v 0,1 M pufri PIPES (pH 6,9), premyje sa trikrát v čerstvom Potrubia (pH 6,9), a po pevnú dobu 1,5 hodiny v 1% oxidu osmičelého v 0,1 M Potrubie pufra (pH 6.9). Vzorky boli premyté dH 2O trikrát a potom sa dehydruje vo zvyšujúcich sa koncentráciou etanolu (50, 70, 90 a 100%). Vzorky boli kritického bodu sušeného z kvapalného oxidu uhličitého, potiahnuté na hrúbke 3 nm, s oxidom plazmy potahovacího zariadení, a pozoroval sa Hitachi S-520 SEM pohľadu.
Transmisný elektrónovej mikroskopie
šesť omentální tukové pásy, získanými z troch boli použité 615 myšiam každého pohlavia. Tieto pásy boli ponorené do roztoku, fixačné, ktorý obsahuje 2% glutaraldehydu po dobu 2 hodín, potom sa po stanovených v roztoku, ktorý obsahuje 2% oxid osmičelý a 1,5% sacharózy v 0,05 M fosfátovom pufri po dobu 2 hodín pri teplote 4 ° C. Vzorky boli dehydratované v odstupňované rade etanolu. Po dosadení acetónu etanolu, boli vzorky vložené do epoxidovej živice blokov. Ultratenké rezy boli zafarbené uranylacetátem a citrátom olovnatým a pozoroval s transmisnom elektrónovom mikroskope (JEM-2000EX) pripevnenie.
Buniek nádor na omentum
MFC bunky boli inkubované v kompletnom RPMI-1640 pri koncentrácii 2 mg /l DII (Sigma) počas 60 minút pri teplote 37 ° C. Bunky boli premyté trikrát s vyváženým soľným roztokom Hanksovým. Miera bunkové značenie bola 100% a 1 x 10 4 bunky boli injikované intraperitoneálne. Myši boli utratené pri teplote 4, 12, 36, 48, 72 a 120 hodín, a 7, 10 a 14 dní po intraperitoneálnej injekcií. Opony sa vyreže a pretiahol na podložných sklíčok pre ďalšie spracovanie.
On a imunohistochemické farbenie
vzoriek omentální boli zhromaždené, stanovená v 4% roztoku formaldehydu (pH 7,4) pri teplote 4 ° C počas 24 hodín, premyje sa trikrát s fosfátovým pufrom (pH 7,4) počas 3 hodín, dehydrované v odstupňované rade etanolu, a vložené do parafínu. Potom, 5 um hrubé po sebe nasledujúce rezy boli spracované pre HE a imunobarvení podľa deparaffinisation s xylénu a rehydratáciu sa etanolové.
Pre zvýšenie expresie antigénu v tkanivách, citrátový roztok pufra sa pridá do vzorky, a ktoré boli varené v mikrovlnnej rúre rúry. Vzorky sa spracujú s 3% roztokom peroxidu vodíka po dobu 10 minút, aby sa potláčajú endogénnej peroxidázy a potom opláchnuté fyziologickým roztokom pufrovaným fosfáty (PBS). Aby sa zabránilo nešpecifickej imunitnej reakcie, sa vzorky zmieša s 3% normálnym kozím sére po dobu 10 minút, a opláchnu PBS. Primárne polyklonálne králičie anti-myšou CCL22 protilátka (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) a králičie anti-myšou CCR4 protilátky (abca, Cambridge, UK) sa zriedi v pomere 1: 100 s použitím kozie sérum a inkubujú pri izbovej teplote po dobu 1 hodina. Po troch min 2 premytá PBS boli rezy inkubované s biotinylizované kozie sekundárnej protilátky po dobu 30 minút (DAKO, Carpinteria, CA, USA). Po troch min 2 premytý PBS, bol pridaný streptavidin -horseradish peroxidázou (DAKO), do časti pre 30 minút, nasleduje ďalšie tri 2 min premytie PBS. Vzorky boli vyvinuté s 3,3'-Diaminobenzidine substrátu (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Kanada), po dobu 1 minúty a kontrastne Mayerovým hematoxylínom. Sklíčka bola dehydratovaný na základe štandardného postupu a utesní krycie sklíčko. Negatívna kontrola bola pripravená rovnakým postupom za použitia PBS namiesto primárnej protilátky. Normálny žalúdočné tkaniva boli použité ako pozitívne kontroly.
Imunocytochemie farbenie CCR4
žalúdočné rakovinové bunky boli umiestnené v komorových sklíčka potiahnutá poly-L-lyzínu, ktorý je povolené pripojiť po dobu 48 hodín a potom použité pre imunocytochemie. Bunky boli fixované 0,3% H 2O 2 v metanole po dobu 60 minút pri teplote miestnosti, premyje 4 krát v PBS, blokované 3% BSA a permeabilizovány s PBS obsahujúcom 0,1% Triton X-100 po dobu 60 minút pri izbovej teplote. Protilátka, FITC-konjugovanou anti-myšou CCR4 polyklonálnej protilátky (1 ug /ml, eBioscience), sa vyliahli po dobu 60 minút pri teplote 37 ° C, 4 krát premyté a kontrolované pod fluorescenčným mikroskopom (BX-51 TR32000, Olympus).
imunofluorescenčné značenie makrofágov v omentální mliečne škvrny
pre imunohistochémia, opony bola stanovená vo formalínu po dobu 60 minút a trikrát premyté fosfátom pufrovaným fyziologickým roztokom. Opony bola inkubovaná po dobu 60 minút pri teplote 37 ° C s FITC-konjugovanou anti-myšou F4 /80 myší makrofágové markeru (1 ug /ml; BioLegend), premyje sa trikrát vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom a potom vysuší na vzduchu v tmavom miestnosti po dobu 12 hodín. Imunohistochemické farbenie bol priamo zaznamenal a obrazy boli zachytené s použitím fluorescenčného mikroskopu. (BX-51 TR32000, Olympus)
reverznej transkripcie-PCR analýza
Celková RNA bola extrahovaná a purifikovaný z kultivovaných MFCs za použitia RNeasy Mini Kit (Qiagen, Miláno, Taliansko). Extrakcie zahŕňa krok štiepenia, DNázy. RNA množstvo a kvalita bola stanovená pomocou UV spektrofotometriou. RNA bola transkribovaných do cDNA s použitím horného indexu First-Strand Synthesis System (Invitrogen). RT-PCR bola vykonaná s horným indexom One-Step (Invitrogen). Použité primery boli nasledujúce: CCR4 sense primer 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 antisencie primer 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH dopredný primer 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', a GAPDH reverzné primer 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
Western blot analýza
boli bunky premyté fyziologickým roztokom pufrovaným fosfáty (PBS) a lyžovanie v rádioaktívne značenú protilátkou (RIPA) lyzačného pufra (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 0,1% dodecylsulfát sodný, 1% Nonidet P-40, 1 mM fenylmethylsulfonyl fluorid). Lyzáty boli vymazané odstreďovaním (15000 otáčkach za minútu po dobu 5 minút) a koncentrácia proteínov bola stanovená pomocou metódy kyseliny bicinchoninic pred skladovaním pri -80 ° C. Ekvivalentné množstvo bielkovín boli oddelené na SDS-polyakrylamidové gélovej elektroforézy (PAGE) a prenesené na polyvinylidendifluoridovou membrán. Membrány boli blokované v 5% mliekom bez tuku v Tris-pufrovanom soľnom roztoku s 0,1% Tween 20 a inkubované s primárnou protilátkou cez noc pri 4 ° C. Imunitný komplexy boli potom deteguje za použitia rozšírenej chemiluminiscenčného systému (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Cell testu proliferácie
MFCs boli schovať do 96-jamkových doštičiek v hustote 1 x 10 4 buniek na jamku ( 200 ml) a inkubujú v kompletnom médiu po dobu 24 hodín. Médium bolo nahradené médiu bez séra, ktoré obsahujú rôzne koncentrácie CCL22, s RPMI 1640 slúžiace ako negatívna kontrola. Po inkubácii po dobu 24 hodín, 20 ul MTT činidla sa pridá (5 mg /ml Sigma-Aldrich Co.) a inkubované po dobu 4 hodín. Potom bolo pridané 100 ul činidla detergentu, ponechaný pri teplote miestnosti v tme po dobu 2 hodín a absorbancia pri 492 nm zaznamenaný.
Migračný test
migráciu buniek testy boli vykonané v komorách s priemerom 6,4 mm s 8-mm pórov filtrov (Becton Dickinson laboratórne, Franklin Lakes, NJ). MFCs boli umiestnené v hornej komore (100 buniek na jamku), zatiaľ čo dolná komora bola naplnená DMEM obsahujúcim rôzne koncentrácie CCL22 (0, 1, 10 a 100 ng /ml). Bunky boli inkubované po dobu 24 hodín pri teplote 37 ° C v 5% CO2. Bunky, ktoré neprešli cez membránu póry boli odstránené. Migrované bunky boli fixované a zafarbené. Počty buniek v dolnej komore boli počítané v 10 náhodných polí (x 200) a bola vyjadrená ako priemerný počet buniek na zornom poli. Údaje boli zastúpené ako priemer troch nezávislých experimentov.
Výsledky
morfológia mliečne škvrny
Elektrónová mikroskopia ukázala, že mliečne škvrny boli tvorené prevažne bohaté makrofágov (obrázok 1a), s niektorými lymfocytov, neutrofilov a rôzne stromálne bunky (obrázok 1B). Obrázok 1 Prenos a Snímacie elektrónové mikroskopia omentální mliečne škvrny. (A) Elektrónová mikroskopia ukázala, že bunka zloženie mliečne škvrny sa z veľkej časti skladá z bohatej makrofágov (M). (B) Niektoré lymfocyty (L) a neutrofilov (N) boli tiež poznamenať, (zväčšenie, 4,000X). (C) v mliečnej mieste oblastí, bunky povrchová vrstva sa skladala z makrofágov, lymfocytov a diskontinuálnych mezoteliálnych buniek a boli oddelené medzibunkových medzier alebo pórov. (D) V non-mliečne mieste plochy nebol pozorovaný medzibunkovej medzery alebo póry (zväčšenie 500x).
Skenovacie elektrónová mikroskopia ukázala, že povrch týchto mliečne škvrny bola morfologicky odlišné od toho non-mliečnych postrehnúť omentum. Bunky povrchová vrstva sa skladala z makrofágov, lymfocytov a diskontinuálnych mezoteliálnych buniek, ktoré boli oddelené od medzibunkových medzier alebo pórov (obrázok 1C). V non-mliečne bodových oblastiach, medzibunkovej medzery alebo póry neboli pozorované (obrázok 1D).
Imunofluorescenčný a on za omentální mliečne škvrny
celého väčšie omentum myšou 615 bola ohraničená caudally úzkym tukového tkaniva pruh (obrázok 2A), pozdĺž ktoré boli pozorované bunkové agregáty (zelená), známy ako mliečne škvrny, (obrázok 2B). Krvné kapiláry, arterioles a lymphocapillary nádoby boli nájdené v mliečnych bodových oblastiach (Obrázok 2C). Obrázok 2 Morfológia mliečnych škvŕn. (A-B) väčšie omentum myšou 615 bola ohraničená úzkym prúžkom tukového tkaniva (zväčší, 50X), pozdĺž ktorej bunkové agregáty, známe ako mliečne škvrny, boli pozorované. (C) Krvné kapilár a arteriol nádoby sa nachádzajú v mliečnych bodových oblastiach (zväčšenie 200X).
Vizualizácia nádorových buniek na omentum v raných časových bodoch
MFCs začali rešpektovať omentální mliečne škvrny na 4 hodiny po injekcii. Po 12 hodinách po injekcii, MFCs boli obzvlášť sústredené v mliečne škvrny (obrázok 3a), zatiaľ čo žiadne nádorové bunky boli nájdené v non-mliečne postrehnúť omentum (obrázok 3B). Obrázok 3 žalúdočné rakovinové bunky dodržiavať omentální mliečnych bodových miestach v rôznych časových bodoch. (A-B) Obrázok mliečno bodových makrofágov (zelene) a veľkého počtu DII-MFCs (červená) sústredená v mliečno bodových oblastiach 12 hodín po intraperitoneálnou injekciou. (C-D) Po 72 hodinách sa počet Dii-MFCs znížená mliečno mieste oblastiach, pričom proliferujúcich nádorových buniek v mliečnych bodov a bola pozorovaná tvorba mikrometastáz. Sporadické nádorové bunky boli nájdené v omentální non-mliečna postrehnúť. (E-F) Dva týždne po intraperitoneálnej injekcii, mliečna mieste plochy boli úplne obsadená proliferujúcich nádorových buniek žalúdočnej a bol pozorovaný bunkový zhluk typu metastázy. Rozširujúce sa bunka rakovina klastre neboli pozorované v non-mliečnej mieste oblastiach a rakovinové bunky tvorené samostatnými metastáz buniek typu. (Zväčšenie, x 200).
Po 72 hodinách sa proliferujúcich nádorových buniek a tvorba mikrometastáz bolo uvedené v mliečnych mieste oblastí (obr 3C). Na rozdiel od toho po 72 hodinách po injekcii, sporadické nádorové bunky boli nájdené v non-mliečne mieste oblastiach, pričom žiadne zhluky buniek boli zistené (obrázok 3D).
Po 2 týždňoch po intraperitoneálnej injekcie, mliečna mieste oblasti boli úplne obsadený proliferujúcich žalúdočné rakovinové bunky a bunka klastra typu metastázami boli pozorované (obr 3E). Naproti tomu, zhlukov buniek proliferujúcich rakoviny neboli pozorované v non-mliečnej mieste oblastiach a rakovinové bunky tvorili jediný typ buniek, metastázy (obrázok 3F).
CCR4 expresiu v rakovinových bunkách žalúdku
MFCs jasne exprimuje CCR4 mRNA (obr 4A). Expresia proteínu z CCR4 sa tiež skúmala pomocou Western blot (obrázok 4B). MFCs exprimuje CCR4 proteín, ktorý lokalizované na povrchu buniek a /alebo v cytoplazme (obrázok 4C). Obrázok 4 CCR4 expresiu v rakovinových bunkách žalúdka. (A) MFCs jasne vyjadrené CCR4 mRNA. (B) Expresia proteínu z CCR4 bol tiež skúmaný Western bloty. (C) MFCs exprimuje CCR4 proteín a jeho bol lokalizovaný na bunkovom povrchu a /alebo v cytoplazme MFCs.
Účinky CCL22 na proliferáciu a inváziu MFCs
účinky CCL22 na proliferáciu MFCs boli hodnotené pomocou testu MTT. CCL22 významne zvýšila schopnosť proliferácie v rôznych koncentráciách (1 až 100 ng /ml) v porovnaní s kontrolnou skupinou (P menšia ako 0,05) (Obrázok 5A). Obrázok 5 Účinky CCL22 na proliferáciu a inváziu MFCs. (A) CCL22 významne zvýšila schopnosť proliferácie v rôznych koncentráciách (1 až 100 ng /ml) v porovnaní s kontrolnou skupinou (P menšia ako 0,05). (BC) Koncentrácia CCL22 medzi 10-100 ng /ml významne zvýšila migráciu MFCs, s optimálnou reakcia je 10 ng /ml (p 0,01).
Koncentráciu CCL22 medzi 10-100 ng /ml významne zvýšená migrácia MFCs, s optimálnou reakcia je 10 ng /ml. (P menšia ako 0,05 v porovnaní so samotným médiom) (obrázok 5B-C)
CCL22 a CCR4 expresie v mliečnej omentální mieste mikrometastáz
v omentální mliečne škvrny, CCL22 bol pozorovaný prevažne na povrchu bunky, alebo v cytoplazme buniek tvoria (obrázok 6A). V omentální mliečno bodových mikrometastáz 12 hodín denne, 7 dní a 14 dní po intraperitoneálnej injekcie, CCR4 bola pozorovaná na alebo v rakovinových bunkách žalúdka, tvoriaca bunky mliečne mieste, mesothelial buniek, krvinky a krvné endoteliálnych buniek (obrázok 5B-D ). Obrázok 6 CCL22 a CCR4 Výraz v omentální mliečno bodových mikrometastáz. (A) V úseku omentální mliečne škvrny, CCL22 bola lokalizovaná prevažne na bunkovom povrchu a v cytoplazme alebo ju tvoria buniek. (B-D) V úseku omentální mliečnych na mieste mikrometastáz (12 hodín po intraperitoneálnej injekcie), CCR4 bol lokalizovaný na alebo v rakovinových bunkách žalúdka, tvoriaca bunky mliečno mieste, mesothelial buniek krviniek a krvných endoteliálnych buniek. (C) Sedem dní po intraperitoneálnou injekciou. (D) Štrnásť dní po intraperitoneálnou injekciou.
Diskusia
etiológie peritoneálnej metastázy rakoviny žalúdka je potrebné ešte objasniť. Uvoľnenie voľných nádorových buniek z lézií, kde primárny nádor napadne serosa je považovaný za pôvod peritoneálnej metastáz [26]. Viac ako sto rokov uplynulo od Paget vyvinul teóriu `osiva a pôdy" [27]. On predpokladal, že niektoré nádorové bunky (semená) selektívne kolonizovať vzdialených orgánoch (podklad) sa priaznivé prostredie, ktoré uľahčuje prežitie nádorových buniek. V tejto štúdii sme zistili, že omentální mliečne škvrny boli kongeniálne mikroprostredie, pretože ich fyzikálne a chemické vlastnosti, pre peritoneálnej voľných buniek karcinómu žalúdka k migrácii, prežitie, rast a tvorí pevné metastázy.
Skenovacie elektrónová mikroskopia ukázala, že povrch z nich mliečne škvrny bol morfologicky odlišný od toho non-mliečne bodových oblastiach omentum. Bunky povrchová vrstva sa skladala z makrofágov, lymfocytov a diskontinuálnych mezoteliálnych buniek a boli oddelené mnohých medzibunkových medzier alebo pórov. Výrazné medzibunkovej medzery alebo póry spôsobila submesothelial spojivového tkaniva a bunky, ktoré majú byť vystavené peritoneálnej povrch, ktorý sa má predstavujú prednostné miesto pre adhéziu nádorových buniek.
Mikrometastáz sú v súčasnosti klasifikované do jedného klastra-bunky a malý-bunka typy [28]. Táto štúdia našla iný typ nádorových buniek metastáz v mliečnej škvrny v porovnaní s non-mliečne postrehnúť. Dva týždne po intraperitoneálnej injekcii, mliečna mieste plochy boli úplne obsadená proliferujúcich buniek karcinómu žalúdka, a buniek karcinómu žalúdka vytvorená bunka klastra typu metastázy. Avšak, množiace nádorové bunky neboli v non-mliečne mieste oblastiach na rovnakej úrovni, a rakovinové bunky tvorené samostatnými metastáz buniek typu. Tento jav sa dá vysvetliť tým, že mnoho krvných kapilár a tepien prítomných v mliečnych omentální mieste oblastí, ktoré poskytujú dostatočný prísun krvi pre rast buniek karcinómu žalúdka.
Niektoré štúdie ukázali, že proces rastu nádorov a metastáz zahŕňa rad bunka-bunka a interakcie matrix bunkových extracelulárnej, ktoré sú sprostredkované bunkových adhéznych molekúl. Každý krok vyžaduje bunkovej adhézie molekúl a receptorov [29]. Mesothelial bunky lemujúce mliečne škvrny produkujú vyššie hladiny bunkových adhéznych molekúl (tj intercelulárnej adhézny molekula-1) ako non-mliečne bodových oblastiach, a tým prispievajú k lepšiemu priľnutiu [11], [12]. doteraz nebola identifikovaná role chemokiny do buniek karcinómu žalúdka selektívne infiltrovať do mliečne škvrny. Mliečne škvrny obsahujú početné makrofágy, ktoré produkujú chemokiny MDC /CCL22 [30]. CCL22 a jeho "receptor CCR4 sú zapojení do najrôznejších patologických stavov. CCL22 je vysoko exprimovaný v léziách vytvorených T bunkami sprostredkovaná zápalové ochorenia [29]. CCR4 bol prvýkrát zaznamenaná byť prednostne exprimovaný Th2 buniek, ktoré sa podieľajú na humorálnej imunity a alergické reakcie [30]. CCL22 a CCR4 tiež hrať dôležitú úlohu v raste a metastáz [17] rakoviny - [21], čím sa rad antagonistov receptora CCR4, rovnako ako anti-CCR4 protilátky sú vyvíjané vo farmaceutickom priemysle [31], [32]. V tejto štúdii sme zistili, že MFCs jasne exprimuje CCR4 mRNA. CCR4 proteín bol tiež skúmaný Western bloty. CCR4 bola vyjadrená alebo v žalúdočných rakovinových buniek v úseku omentální mliečno bodových mikrometastáz 12 hodín denne, 7 dní a 14 dní po intraperitoneálnou injekciou. CCL22 bol exprimovaný prevažne na povrchu buniek a alebo v cytoplazme makrofágov. CCL22 výrazne zvýšila proliferačnú schopnosť buniek karcinómu žalúdka, a koncentrácia CCL22 medzi 10-100 ng /ml významne zvýšila migráciu MFCs. Makrofágy v omentální mliečne škvrny majú nielen cytotoxické vlastnosti proti bunkám nádoru, ale tiež produkujú CCL22, ktorý pomáha buniek karcinómu žalúdka prežiť a rásť do pevných metastáz. Os MDC /CCL22 CCR4 hrá dôležitú úlohu v rakovinových bunkách žalúdka selektívne infiltrovať do omentální mliečne škvrny a tvorí pevné metastázy.
Záver
žalúdočné voľné rakovinové bunky (semená) lokalizovať mikroprostredie obsahujúce priaznivé fyzikálne a chemické vlastnosti v rámci mliečne škvrny, v ktorom sú schopné prežiť a rásť, ktorou sa ustanovujú bunka klaster typu metastázy. Os CCL22 CCR4 prispieva k tomuto selektívnemu infiltrácie. Informácie
autorov
Yi Zhang Liang a Cao sú uvedené ako ko-prvý autorov.
Deklarácia
Poďakovanie
Tento projekt bol podporený touto Národná prírodná Science Foundation of China (Grant číslo: 81101633), Natural Science Foundation v provincii Liao-ning (Grant číslo: 201202047), Science and Technology projekt Dalian (Grant číslo: 2012E15SF142)
Autori ďalej len "pôvodné predloženej súbory. obrazy
Nižšie sú uvedené odkazy na pôvodných predložených súborov autorov pre obrazy. "Pôvodný súbor na obrázku 1 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif autorského 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif autorov pôvodného súboru pre" pôvodného súboru pre Obrázok 3 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif autorského Obrázok 2 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif autorského pôvodného súboru na Obrázok 4 pôvodného súboru 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif autorského na obrázku 5 pôvodný súbor 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif autorov na obrázok 6 protichodnými záujmami
Všetci autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy.

• Združenie LEC a tnpA Helicobacter pylori génov s rakovinou žalúdka v brazílskej populácie
• Plazmové mRNA expresné hladiny BRCA1 a TS ako potenciálnych prediktívnych biomarkerov pre chemoterapiu rakoviny žalúdka