Il ruolo dell'asse CCL22-CCR4 nella metastasi delle cellule di cancro gastrico in macchie biancastre omentali

Il ruolo dell'asse CCL22-CCR4 nella metastasi delle cellule di cancro gastrico in omentali macchie biancastre
Abstract
sfondo
L'omento è uno dei siti iniziali per metastasi peritoneali perché possiede macchie biancastre che forniscono un microambiente per le cellule tumorali di migrare facilmente e crescere in micrometastasi. Questo studio ha esaminato il ruolo dell'asse CCL22-CCR4 in cellule di cancro gastrico selettivamente infiltrano in macchie biancastre.
Metodi
cellule tumorali MFC gastrico etichettati con DII sono stati iniettati per via intraperitoneale nel ceppo 615 topi. I topi sono stati sacrificati a intervalli specifici e l'omento è stato asportato per immunoistochimica. Gli effetti della CCL22 sulla proliferazione e la migrazione di MFC sono stati valutati da MTT e analisi trans-well. RT-PCR e analisi Western Blot rilevati CCR4 mRNA e livelli di espressione della proteina in MFC. Immunoistochimica è stata utilizzata per analizzare CCL22 e di espressione CCR4 nelle micrometastasi Spot latteo.
Risultati
Due settimane dopo l'iniezione intraperitoneale, le zone del punto latteo sono state completamente occupate da cellule proliferanti di cancro gastrico e delle cellule di cluster di tipo micrometastasi sono stati osservati. Al contrario, le cellule tumorali formano singoli micrometastasi cellule di tipo nelle zone a pronti non latteo. MFC espressa CCR4, che è stato localizzato sulla superficie cellulare ed o nel citoplasma. Diverse concentrazioni di CCL22 aumentato significativamente la capacità proliferazione di MFC. Inoltre, le concentrazioni di CCL22 tra 10-100 ng /ml aumentato significativamente la migrazione di MFC. All'interno di macchie biancastre omentali, CCL22 era localizzata principalmente sulla superficie cellulare ed o nel citoplasma. All'interno di sezioni di micrometastasi a pronti latteo omentali, CCR4 è stato riconosciuto o in cellule di cancro gastrico, le cellule costituenti latte spot, le cellule del sangue e le cellule endoteliali del sangue
. Conclusioni
omental macchie biancastre sono un microambiente congeniale cellule di cancro gastrico libero peritoneale di migrare, di sopravvivere, e stabilire delle cellule cluster di tipo metastasi. L'asse CCL22-CCR4 contribuisce a questo processo di infiltrazione selettivo.
Parole
cancro gastrico omentale macchia lattiginosa peritoneale metastasi CCL22 CCR4 Introduzione
metastasi peritoneale è un modello comune di metastasi a distanza di cancro gastrico. Numerosi studi hanno confermato che la prognosi dei pazienti affetti da cancro gastrico con metastasi peritoneale è scarsa, anche in quei pazienti trattati con chirurgia radicale [1]. Metastasi peritoneale si sviluppa da micrometastasi provenienti da liberi cellule tumorali peritoneali [2]. Pertanto, è importante comprendere le caratteristiche ei meccanismi coinvolti nella formazione di micrometastasi peritoneali. Tale comprensione sarà di aiuto nella prevenzione e nel ripetersi di metastasi peritoneali, migliorando così la prognosi dei pazienti affetti da cancro gastrico.
macchie biancastre sono primitivi tessuti linfoidi nella cavità peritoneale di uomini e animali, che esiste principalmente nella grande omento. Per contro, relativamente poche macchie biancastre si trovano nel mesentere e del pavimento pelvico e macchie biancastre si trovano in altre aree del peritoneo [3]. macchie biancastre comprendono numerose aggregazioni macrofagi e linfociti e sono coinvolti nella clearance di particelle, batteri e cellule tumorali dalla cavità peritoneale, giocando un ruolo importante nella difesa peritoneale [4] - [6]. In particolare, i macrofagi omentali sono risultati essere citotossica contro le cellule tumorali [7], [8]. Alcuni studi hanno dimostrato che macchie biancastre omentali sono noti siti di metastasi dei carcinomi delle ovaie, dello stomaco e del colon [9]. Le cellule tumorali selettivamente infiltrano nelle macchie biancastre nelle prime fasi di diffusione peritoneale cancro e di individuare un microambiente in cui essi sono in grado di sopravvivere, crescere e formare metastasi solidi [10]. Questo attaccamento preferenziale può essere spiegato con l'esistenza di alcune particolari caratteristiche di macchie biancastre, tra cui alti livelli di molecole di adesione cellulare e fattori di crescita-stimolatori [11], [12]. Pertanto, mentre macchie biancastre hanno proprietà citotossiche contro le cellule tumorali e giocano un ruolo importante nella difesa peritoneale, forniscono anche siti dove la proliferazione delle cellule tumorali e micrometastasi verificano.
Chemiochine sono piccole proteine ​​secrete classificati in quattro sottofamiglie in base alla sequenza di conservata N-terminale residui di cisteina: CXC, CC, C, e CX3C [13], [14]. Molti studi hanno dimostrato che le chemochine ei loro recettori sono causalmente coinvolti nella metastasi del cancro [15] - [21]. Il chemochine MDC /CCL22 macrofagi derivati ​​è una delle chemochine CC prodotte dai macrofagi e CCR4 stato identificato come suo recettore specifico [17] - [21], che è anche il recettore funzionale per altre chemochine CC. L'espressione dei recettori per chemochine è noto per essere associato con metastasi del cancro, come il CXCR4, CCR7 e CCR10 nel cancro al seno [16] e CXCR5, CCR6, CCR7, e CCR4 in pancreatici, gastrici e della prostata [22], [23] . Alcuni studi hanno dimostrato che definitivamente CXCR4 e CXCL12 svolgono un ruolo importante nella metastasi delle cellule di cancro gastrico nella cavità peritoneale [23] - [25]
macchie biancastre omental comprendono numerosi macrofagi, ma il ruolo del MDC /CCL22-. non è stato ancora identificato asse CCR4 in cellule di cancro gastrico selettivamente infiltrano in macchie biancastre. Abbiamo quindi esaminato l'espressione di MDC /CCL22 e CCR4 in micrometastasi a pronti latteo, con l'obiettivo di creare un nuovo metodo di trattamento per prevenire le metastasi peritoneali, concentrandosi sulla chemiotassi di cellule di cancro gastrico.
Materiali e metodi
cellula tumorale linea e animali
murini MFC cancro gastrico, derivati ​​dal ceppo murino 615 il carcinoma dello stomaco prossimale, sono stati ottenuti dal laboratorio centrale del Frist Ospedale Affiliato di Dalian Medical University. MFC sono state coltivate in RPMI-1640 (Gibco) supplementato con siero fetale bovino 10% (Sigma) in un incubatore al 5% di CO 2 a 37 ° C. Una volta confluenti, le cellule sono state trypsinised e risciacquati nei media D-Hanks '. Una conta delle cellule vitali è stata effettuata utilizzando trypan esclusione blu.
Sei settimane di età topi ceppo 615 sono stati ottenuti dal Dalian Medical University della Cina. I topi sono stati mantenuti in condizioni standard di laboratorio e aveva libero accesso al cibo standard di laboratorio e acqua. protocolli di studio sono stati approvati dal Comitato per la Ricerca degli animali del Dalian Medical University della Cina secondo le linee guida nazionali (numero di permesso: SYXK2008-0002). sono state prese tutte le misure per ridurre al minimo qualsiasi dolore o disagio.
microscopia elettronica a scansione
campioni omental sono stati raccolti, fissati durante la notte con il 2,5% glutaraldeide 0,1 M TUBI tampone (pH 6,9), lavato per tre volte nelle tubazioni freschi tampone (pH 6.9), e post-fisso per 1,5 ore in 1% tetrossido di osmio in 0,1 M Tubi tampone (pH 6,9). I campioni sono stati lavati in dH 2O tre volte e poi disidratato in concentrazioni crescenti di etanolo (50, 70, 90 e 100%). I campioni erano microscopia elettronica punto critico essiccato da anidride carbonica liquida, rivestito con uno spessore di 3 nm con una spalmatrice plasma osmio, e osservato con un microscopio elettronico a scansione Hitachi S-520.
Trasmissione
sei bande grasso omentale ottenuti da tre sono stati utilizzati 615 topi di ogni genere. Le bande sono stati immersi in una soluzione di fissaggio contenente 2% glutaraldeide per 2 ore, quindi post-fissate in una soluzione contenente 2% tetrossido di osmio e 1,5% di saccarosio in tampone 0,05 M di fosfato per 2 ore a 4 ° C. I campioni sono stati disidratati in una serie graduata di etanolo. Dopo sostituendo l'acetone per l'etanolo, i campioni sono stati incorporati in blocchi di resina epossidica. sezioni ultrasottili sono state colorate con acetato di uranile e citrato di piombo e osservati con un microscopio elettronico a trasmissione (JEM-2000EX) attaccamento delle cellule del tumore
. al omento
Le cellule sono state incubate MFC in completo RPMI-1640 ad una concentrazione di 2 mg /L DII (Sigma) per 60 min a 37 ° C. Le cellule sono state lavate tre volte con soluzione salina bilanciata Hanks '. Il tasso di cella di etichettatura è stata del 100% e 1 × 10 4 cellule sono state iniettate per via intraperitoneale. I topi sono stati sacrificati a 4, 12, 36, 48, 72 e 120 ore, e 7, 10, e 14 giorni dopo l'iniezione intraperitoneale. L'omento è stato asportato e teso su vetrini da microscopio per l'ulteriore elaborazione.
HE e la colorazione immunoistochimica
campioni omental sono stati raccolti, fissati in una soluzione di formaldeide al 4% (pH 7,4) a 4 ° C per 24 ore, lavata tre volte con tampone fosfato (pH 7,4) per 3 ore, disidratati in una serie graduata di etanolo, e inclusi in paraffina. Poi, 5 micron di spessore sezioni consecutive sono stati trattati per HE e immunostaining da deparaffinisation con xilene e reidratazione con etanolo graduata.
Per aumentare l'espressione dell'antigene nei tessuti, soluzione tampone citrato è stato aggiunto ai campioni e sono stati bolliti in un forno a microonde forno. I campioni sono stati trattati con una soluzione di perossido di idrogeno al 3% per 10 min a sopprimere l'attività perossidasica endogena e quindi risciacquati con tampone fosfato (PBS). Per evitare reazioni immunitarie non specifiche, i campioni sono stati trattati con 3% di siero normale di capra per 10 min, e lavate con PBS. Il policlonale di coniglio primaria anti-topo CCL22 anticorpi (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) e il coniglio topo anti-CCR4 anticorpi (Abcam, Cambridge, UK) sono stati diluiti 1: 100 con siero di capra e incubato a temperatura ambiente per 1 ora. Dopo tre 2 min lavaggi con PBS, le sezioni sono state incubate con un anticorpo secondario biotinilato di capra per 30 minuti (DAKO, Carpinteria, CA, USA). Dopo tre lavaggi con 2 min PBS, streptavidina perossidasi -horseradish (DAKO) è stato aggiunto alla sezione per 30 minuti, seguita da altri tre 2 min lavaggi con PBS. I campioni sono stati sviluppati con 3,3 'Diaminobenzidina substrato (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Canada) per 1 min e di contrasto con ematossilina di Mayer. I vetrini sono stati disidratati a seguito di una procedura standard e sigillati con lamelle. Il controllo negativo è stato preparato con la stessa procedura utilizzando PBS al posto dell'anticorpo primario. i tessuti dello stomaco normali sono stati utilizzati come controllo positivo.
Immunocitochimica colorazione di CCR4
cellule di cancro gastrico sono stati placcati in camera di diapositive rivestiti con poli-L-lisina, ha permesso di attaccare per 48 ore e poi utilizzati per immunocitochimica. Le cellule sono state fissate con 0,3% H 2O 2 in metanolo per 60 min a temperatura ambiente, lavate 4 volte in PBS, bloccato con 3% BSA e permeabilizzate con PBS contenente 0,1% Triton X-100 per 60 min a temperatura ambiente. L'anticorpo, FITC-coniugato anti-topo CCR4 anticorpo policlonale (1 ug /ml, eBioscience), è stata incubata per 60 min a 37 ° C, lavate 4 volte e controllato sotto un microscopio a fluorescenza (BX-51 TR32000, Olympus).
etichettatura immunofluorescente dei macrofagi in macchie biancastre omentali
per l'immunoistochimica, l'omento è stato fissato in formalina per 60 min e lavato per tre volte con PBS. L'omento è stato incubato per 60 min a 37 ° C con un anticorpo mouse F4 /80 marcatore FITC-coniugato murino macrofagi (1 mg /ml; Biolegend), lavate tre volte in PBS e poi essiccato all'aria in un buio ambiente per 12 ore. La colorazione immunoistochimica è stata direttamente segna e immagini sono state catturate utilizzando un microscopio a fluorescenza. (BX-51 TR32000; Olympus)
Reverse analisi trascrizione-PCR
RNA totale è stato estratto e purificato da MFC in coltura utilizzando un kit RNeasy Mini (Qiagen, Milano, Italia). L'estrazione comprende una fase di digestione DNasi I. quantità e qualità dell'RNA è stata valutata mediante spettrofotometria UV. L'RNA è stato trascritto in cDNA utilizzando il First-Strand Synthesis sistema SuperScript (Invitrogen). RT-PCR è stata eseguita con SuperScript One-Step (Invitrogen). I primer utilizzati sono stati i seguenti: CCR4 senso di primer 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 innesco antisenso 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH forward primer 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', e GAPDH primer reverse 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
analisi Western blot
cellule sono state lavate con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) e lisate in test radioimmunoprecipitazione (RIPA) tampone di lisi (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 0,1% sodio dodecil solfato, 1% Nonidet P-40, 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoro). I lisati sono stati liquidati per centrifugazione (15.000 rpm per 5 min) e le concentrazioni di proteine ​​sono state determinate utilizzando il metodo dell'acido bicinconinico prima dello stoccaggio a -80 ° C. quantità equivalenti di proteine ​​sono state separate su SDS-SDS-PAGE (pagina) e trasferiti su membrane polivinildenfluoruro. Le membrane sono state bloccate in latte senza grassi 5% in soluzione salina tamponata con Tris con 0,1% Tween 20 e incubate con l'anticorpo primario overnight a 4 ° C. immunocomplessi sono stati poi rilevati utilizzando il sistema di chemiluminescenza (Amersham, Buckinghamshire, Regno Unito).
proliferazione cellulare saggio
MFC sono state seminate in piastre da 96 pozzetti ad una densità di 1 × 10 4 cellule per pozzetto ( 200 mL) e incubate in terreno completo per 24 ore. Il mezzo è stato sostituito con terreno privo di siero contenenti varie concentrazioni di CCL22, con RPMI 1640 che serve come controllo negativo. Dopo incubazione per 24 ore, 20 ml di MTT Reagent (5 mg /mL; Sigma-Aldrich Co.) è stata aggiunta e incubate per 4 ore. Poi, 100 ml di reagente detergente è stata aggiunta, si lascia a temperatura ambiente al buio per 2 ore e l'assorbanza a 492 nm registrata. Assay
migrazione
saggi di migrazione cellulare sono stati eseguiti nelle camere di diametro 6.4 mm con 8 mm filtri pori (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ). MFC sono stati collocati nella camera superiore (100 cellule per pozzetto), mentre la camera inferiore è stato riempito con DMEM contenente varie concentrazioni di CCL22 (0, 1, 10, e 100 ng /mL). Le cellule sono state incubate per 24 ore a 37 ° C in 5% CO2. Le cellule che non passano attraverso i pori della membrana sono stati rimossi. cellule migrate sono state fissate e colorate. numero di cellule nella camera inferiore sono state contate in 10 campi casuali (× 200) ed espressi come il numero medio di cellule per campo di vista. I dati sono stati rappresentati come media di tre esperimenti indipendenti.
Risultati
Morfologia delle macchie biancastre
La microscopia elettronica ha rivelato che le macchie biancastre sono stati in gran parte composte da macrofagi abbondanti (Figura 1A), con alcuni linfociti, dei neutrofili e varie cellule stromali (Figura 1B). Figura 1 Trasmissione e microscopia elettronica a scansione di macchie biancastre omentali. (A) La microscopia elettronica ha rivelato che la composizione cellulare delle macchie biancastre era largamente composto di macrofagi abbondanti (M). (B) Alcuni linfociti (L) e neutrofili (N) sono stati anche notato (ingrandimento, 4,000X). (C) Nelle zone Spot latteo, le cellule strato superficiale composto da macrofagi, linfociti e cellule mesoteliali discontinui e sono stati separati da spazi vuoti intercellulari o pori. (D) Nel non-lattiginoso aree per il pranzo, spazi intercellulari o pori non sono stati osservati (ingrandimento, 500X).
Microscopio elettronico a scansione ha rivelato che la superficie di queste macchie biancastre era morfologicamente distinta da quella delle aree a pronti non latteo del omento. Le cellule dello strato di superficie consisteva di macrofagi, linfociti e cellule mesoteliali discontinui, che sono stati separati da spazi intercellulari o pori (Figura 1C). Nelle zone a pronti non latteo, le lacune intercellulari o pori non sono stati osservati (Figura 1D).
Immunofluorescenza e HE per omentali macchie biancastre
Tutta la grande omento dei topi 615 è stato delimitato caudalmente da un tessuto adiposo stretto stripe (Figura 2A), lungo il quale sono stati osservati aggregati cellulari (verdi), noto come macchie biancastre, (Figura 2B). capillari sanguigni, arterie e vasi lymphocapillary sono stati trovati all'interno delle aree campione di latte (Figura 2C). Figura 2 Morfologia delle macchie biancastre. (A-B) La grande omento dei topi 615 è stata delimitata da una striscia stretta tessuto adiposo (ingrandimento, 50X), lungo il quale aggregati cellulari, noto come macchie lattiginose, sono stati osservati. (C) i capillari sanguigni e vasi arteriole si trovano all'interno delle aree del punto Lattea (ingrandimento, 200X).
Visualizzazione delle cellule tumorali nel omento in momenti primi
MFC ha cominciato ad aderire alle macchie biancastre omentali a 4 ore post-iniezione. A 12 ore dopo l'iniezione, MFC erano particolarmente concentrati nelle macchie biancastre (Figura 3a), mentre non le cellule tumorali sono stati trovati in zone a pronti non lattiginoso del omento (Figura 3B). Figura 3 cellule di cancro gastrico aderiscono alle aree Spot latteo omentali in diversi momenti. (A-B) Immagine di macrofagi lattee Spot (verde) e un gran numero di DII-MFC (rosso) concentrati nelle aree del punto latteo 12 ore dopo l'iniezione intraperitoneale. (C-D) Dopo 72 h, il numero di DII-MFC diminuita in zone piatte latteo mentre proliferazione delle cellule tumorali nei punti di latte e si è osservata la formazione di micrometastasi. le cellule tumorali sporadici sono stati trovati in zone a pronti non latteo omentali. (E-F) Due settimane dopo l'iniezione intraperitoneale, le zone del punto latteo erano completamente occupata dai proliferanti cellule di cancro gastrico e si è osservata la cella di cluster di tipo metastasi. Proliferanti ammassi di cellule di cancro non sono stati osservati nelle zone a pronti non latteo e le cellule tumorali formarono singole metastasi delle cellule-tipo. (Ingrandimento, × 200).
Dopo 72 ore, la proliferazione delle cellule tumorali e la formazione di micrometastasi sono stati notati nelle zone del punto Lattea (Figura 3C). Al contrario, a 72 ore dopo l'iniezione, le cellule tumorali sporadici sono stati trovati in zone a pronti non latteo, mentre non gruppi di cellule sono state rilevate (Figura 3D).
A 2 settimane dopo l'iniezione intraperitoneale, le zone del punto latteo erano completamente occupata dalle proliferanti cellule di cancro gastrico e delle cellule di cluster di tipo metastasi sono stati osservati (Figura 3E). Al contrario, gruppi di cellule tumorali proliferano non sono stati osservati nelle zone a pronti non latteo e le cellule tumorali formarono singola cellula-tipo di metastasi (Figura 3F). Espressione
CCR4 in cellule di cancro gastrico
MFC chiaramente espresso CCR4 mRNA (Figura 4A). L'espressione proteica di CCR4 è stata esaminata anche da Western blot (Figura 4B). MFC espresso proteine ​​CCR4, che localizzato alla superficie cellulare e /o nel citoplasma (Figura 4C). Figura espressione 4 CCR4 in cellule di cancro gastrico. (A) MFC chiaramente espressi CCR4 mRNA. (B) L'espressione proteica di CCR4 è stata esaminata anche da Western blot. (C) MFC espressa proteine ​​CCR4 e il suo è stato localizzato sulla superficie cellulare e /o nel citoplasma delle MFC.
Gli effetti della CCL22 sulla proliferazione e l'invasione di MFC
Gli effetti della CCL22 sulla proliferazione di MFC sono stati valutati da un saggio MTT. CCL22 aumentato significativamente la capacità di proliferazione a diverse concentrazioni (1-100 ng /ml) rispetto al gruppo di controllo (P < 0,05) (Figura 5A). Figura 5 Gli effetti della CCL22 sulla proliferazione e l'invasione di MFC. (A) CCL22 aumentato significativamente la capacità di proliferazione a diverse concentrazioni (1-100 ng /ml) rispetto al gruppo di controllo (P < 0.05). (BC) Concentrazione di CCL22 tra 10-100 ng /mL ha aumentato significativamente la migrazione di MFC, con la risposta ottimale è di 10 ng /ml (P < 0,01).
Una concentrazione di CCL22 tra 10-100 ng /ml in modo significativo aumento della migrazione di MFC, con la risposta ottimale è di 10 ng /ml. (P < 0,05 rispetto al mezzo da solo) (Figura 5B-C)
CCL22 ed espressione CCR4 nelle micrometastasi piatte latteo omentali
nella omentali macchie biancastre, CCL22 stata osservata principalmente sulla superficie cellulare e o nel citoplasma delle cellule costituenti (Figura 6A). Nei omentali micrometastasi a pronti latteo 12 ore, 7 giorni e 14 giorni dopo l'iniezione intraperitoneale, CCR4 è stato osservato sopra o nelle cellule di cancro gastrico, cellule che costituiscono il punto di latte, cellule mesoteliali, le cellule del sangue e delle cellule endoteliali nel sangue (Figura 5B-D ). Figura 6 CCL22 e di espressione CCR4 nelle micrometastasi Spot latteo omentali. (A) Nella sezione delle macchie biancastre omentali, CCL22 era localizzata principalmente sulla superficie cellulare e o nel citoplasma delle cellule costituenti. (B-D) Nella sezione delle micrometastasi Spot latteo omentali (12 ore dopo l'iniezione intraperitoneale), CCR4 era localizzata o nelle cellule di cancro gastrico, le cellule costitutive del posto lattea, cellule mesoteliali, le cellule del sangue e le cellule endoteliali del sangue. (C) Sette giorni dopo l'iniezione intraperitoneale. (D) Quattordici giorni dopo l'iniezione intraperitoneale.
Discussione
L'eziologia di metastasi peritoneale nel carcinoma gastrico resta da chiarire. Il rilascio delle cellule tumorali libere da una lesione in cui un tumore primario invade la sierosa è considerato l'origine di metastasi peritoneale [26]. Più di un secolo è trascorso da quando Paget ha sviluppato la teoria del `seme e terreno '[27]. Si ipotizza che alcune cellule tumorali (semi) colonizzano selettivamente organi distanti (suolo), in un ambiente favorevole che facilita la sopravvivenza delle cellule tumorali. In questo studio, abbiamo scoperto che erano macchie biancastre omentali microambienti congeniali a causa delle loro proprietà fisiche e chimiche, per le cellule di cancro gastrico liberi peritoneale di migrare, di sopravvivere, crescere e formare metastasi solide.
Microscopio elettronico a scansione ha rivelato che la superficie di questi macchie biancastre era morfologicamente distinta da quella delle aree a pronti non lattiginoso del omento. Le cellule dello strato di superficie consisteva di macrofagi, linfociti e cellule mesoteliali discontinui e sono state separate da molte lacune intercellulari o pori. Le lacune intercellulari prominenti o pori causato il tessuto connettivo sottomesoteliale e le cellule di essere esposti alla superficie peritoneale, che si propone di rappresentare un percorso preferenziale per l'adesione delle cellule tumorali.
Micrometastasi sono attualmente classificati in cella singola e cluster di piccole cellule le tipologie [28]. Il presente studio ha trovato un diverso tipo di metastasi delle cellule tumorali in macchie biancastre rispetto alle zone del punto non latteo. Due settimane dopo l'iniezione intraperitoneale, le zone del punto latteo erano completamente occupati dai proliferanti cellule di cancro gastrico, e cellule di cancro gastrico formate cellule cluster di tipo metastasi. Tuttavia, proliferanti le cellule tumorali non sono stati osservati nelle zone a pronti non latteo nella stessa fase, e le cellule tumorali formarono singole metastasi delle cellule-tipo. Questo fenomeno può essere spiegato con le numerose capillari sanguigni e vasi arteriosi presenti nelle zone piatte latteo omentali, che forniscono un apporto di sangue sufficiente per la crescita delle cellule di cancro gastrico.
Alcuni studi hanno indicato che il processo di crescita tumorale e metastasi coinvolge una varietà di cellula-cellula e le interazioni cellula-matrice che sono mediati da molecole di adesione cellulare. Ogni passo richiede molecole di adesione delle cellule e recettori [29]. cellule mesoteliali che rivestono macchie biancastre producono alti livelli di molecole di adesione cellulare (vale a dire, ICAM-1) rispetto alle aree a pronti non lattee, contribuendo così ad una maggiore adesione [11], [12]. Il ruolo delle chemochine in cellule di cancro gastrico infiltrarsi selettivamente nel macchie lattiginose non è stato ancora identificato. macchie biancastre comprendono numerosi macrofagi che producono la chemochina MDC /CCL22 [30]. CCL22 e la sua 'recettore CCR4 sono coinvolti in una vasta gamma di patologie. malattie infiammatorie CCL22 è altamente espresso nelle lesioni create da T cellulo-mediata [29]. CCR4 è stato segnalato prima ad essere preferenzialmente espressi dalle cellule Th2, che sono coinvolti nella immunità umorale e reazioni allergiche [30]. CCL22 e CCR4 svolgono un ruolo importante nella crescita del cancro e metastasi [17] - [21], in tal modo molti antagonisti dei recettori CCR4 così come un anticorpo anti-CCR4 sono in fase di sviluppo nel settore farmaceutico [31], [32]. In questo studio, abbiamo scoperto che le MFC chiaramente espressi CCR4 mRNA. proteine ​​CCR4 è stata esaminata anche da Western blot. CCR4 è stata espressa o nelle cellule di cancro gastrico nella sezione delle omentali micrometastasi a pronti latteo 12 ore, 7 giorni e 14 giorni dopo l'iniezione intraperitoneale. CCL22 stato espresso principalmente sulla superficie cellulare e o nel citoplasma dei macrofagi. CCL22 è aumentato in modo significativo la capacità proliferazione delle cellule di cancro gastrico, e le concentrazioni di CCL22 tra 10-100 ng /mL ha aumentato significativamente la migrazione di MFC. I macrofagi in macchie biancastre omentali non solo hanno proprietà citotossiche contro le cellule tumorali, ma producono anche CCL22, che aiuta le cellule di cancro gastrico sopravvivere e crescere in metastasi solide. L'asse MDC /CCL22-CCR4 svolge un ruolo importante in cellule di cancro gastrico selettivamente infiltrarsi in macchie biancastre omentali e formare metastasi solide.
Conclusione
cellule tumorali libere gastrica (semi) individuare un microambiente che contiene proprietà fisiche e chimiche favorevoli all'interno macchie biancastre in cui sono in grado di sopravvivere e crescere, stabilire delle cellule cluster di tipo metastasi. L'asse CCL22-CCR4 contribuisce a questa infiltrazione selettiva. Informazioni
Autori '
Yi Zhang Liang e Cao sono elencati come co-autori prima
Dichiarazioni
Ringraziamenti.
Questo progetto è stato sostenuto dal Fondazione nazionale di Scienze naturali della Cina (codice di autorizzazione: 81.101.633), la Fondazione di Scienze naturali della Provincia di Liaoning (codice di autorizzazione: 201.202.047), il progetto Scienza e della Tecnologia di Dalian (codice di autorizzazione: 2012E15SF142)
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Tutti autori dichiarano di non avere interessi in gioco.

• Associazione di LEC e tnpA Helicobacter pylori geni con cancro gastrico in un population
• livelli di espressione di mRNA del plasma di BRCA1 e TS come potenziali biomarcatori predittivi per chemioterapia nel cancro gastrico