Rolle CCL22-CCR4 akse i metastase af gastriske cancerceller i oment matte pletter

Rolle CCL22-CCR4 akse i metastaser af gastriske kræftceller i oment matte pletter
Abstract
Baggrund
omentum er et af de første steder for peritoneal metastaser fordi det besidder matte pletter, der giver en mikromiljø for kræftceller til let at migrere og vokse ind micrometastases. Dette studie undersøgte rolle CCL22-CCR4 aksen i gastriske cancerceller selektivt infiltrerer ind matte pletter.
Metoder
mavekræft MFC celler mærket med Dil blev injiceret intraperitonealt i stammen 615 mus. Musene blev aflivet med bestemte intervaller, og omentum blev skåret ud til immunhistokemi. Virkningerne af CCL22 om spredning og migration af MFC'er blev vurderet ved MTT og trans-godt-analyser. RT-PCR og Western blot-analyse detekterede CCR4 mRNA og protein-ekspressionsniveauer i MFC'er. Immunhistokemi blev anvendt til at analysere CCL22 og CCR4 udtryk i mælkeagtige spot mikrometastaser.
Resultater
To uger efter intraperitoneal injektion blev de mælkeagtige spot områder helt besat af prolifererende gastriske kræftceller og celler klynge-type mikrometastaser blev observeret. I modsætning hertil cancerceller dannet enkelt celle-type mikrometastaser i ikke-mælkeagtig spot områder. MFC'er udtrykt CCR4, som blev lokaliseret på celleoverfladen og eller i cytoplasmaet. Forskellige koncentrationer af CCL22 signifikant øget spredning evne MFC'er. Derudover koncentrationer af CCL22 mellem 10-100 ng /ml signifikant øget migration af MFC'er. Inden oment matte pletter, blev CCL22 lokaliseret hovedsageligt på celleoverfladen og eller i cytoplasmaet. Inden sektioner af oment mælkeagtig spot mikrometastaser blev CCR4 anerkendt på eller i gastrisk cancerceller, konstituerende celler mælkeagtig spots, blodlegemer og endotelceller.
Konklusioner
oment mælkeagtige pletter er en rar mikromiljø for peritoneale gratis gastriske kræftceller at migrere, overleve og etablere celle klynge-type metastaser. Den CCL22-CCR4 aksen bidrager til denne selektive infiltration proces.
Nøgleord
mavekræft oment mælkeagtig spot peritoneal metastaser CCL22 CCR4 Introduktion
Peritoneal metastaser er et fælles mønster af fjernmetastaser i mavekræft. Talrige undersøgelser har bekræftet, at prognosen for mavecancerpatienter med peritoneal metastaser er dårlig, selv i de patienter, der behandles med radikal [1] kirurgi. Peritoneal metastase udvikler sig fra micrometastases oprindelse fra frie peritoneale cancerceller [2]. Derfor er det vigtigt at forstå de særlige kendetegn og mekanismer, der er involveret i dannelsen af ​​peritoneale mikrometastaser. En sådan forståelse vil støtte i forebyggelse og gentagelse af peritoneale metastaser og dermed forbedre prognosen for mavecancerpatienter.
Milky pletter er primitive lymfoide væv i bughulen af ​​mennesker og dyr, der findes primært i større omentum. Derimod er relativt få matte pletter fundet i mesenteriet og bækkenbunden, og ingen matte pletter findes i andre områder af bughinden [3]. Matte pletter omfatter talrige makrofag og lymfocyt aggregeringer og er involveret i clearance af partikler, bakterier og tumorceller fra bughulen, spiller en vigtig rolle i peritoneal forsvar [4] - [6]. Især blev oment makrofager fundet at være cytotoksisk over for tumorceller [7], [8]. Nogle undersøgelser har vist, at oment mælkeagtige pletter er velkendte lokaliteter af metastaser af carcinomer i æggestokkene, maven og kolon [9]. Kræftceller selektivt infiltrere de matte pletter i de tidlige stadier af formidling peritoneal cancer og find et mikromiljø, hvor de er i stand til at overleve, vokse og danne faste metastaser [10]. Denne præferentielle vedhæftning kan forklares ved eksistensen af ​​visse særlige karakteristika matte pletter, herunder højere niveauer af cellulære adhæsionsmolekyler og vækst-stimulerende faktorer [11], [12]. Derfor, mens matte pletter har cytotoksiske egenskaber mod tumorceller og spille en vigtig rolle i peritoneal forsvar, de giver også steder, hvor tumorcelleproliferation og mikrometastase forekomme. Salg Kemokiner er små secernerede proteiner klassificeret i de fire underfamilier baseret på sekvensen af konserverede N-terminale cysteinrester: CXC, CC, C, og CX3C [13], [14]. Mange undersøgelser har vist, at chemokiner og chemokinreceptorer kausalt er involveret i metastase af cancer [15] - [21]. Makrofagen-afledt chemokin MDC /CCL22 er en af ​​de CC-kemokiner produceret af makrofager og CCR4 blev identificeret som dens specifikke receptor [17] - [21], som også er den funktionelle receptor for andre CC-kemokiner. Ekspressionen af ​​chemokinreceptorer vides at være associeret med cancer metastaser, såsom CXCR4, CCR7 og CCR10 i brystcancer [16] og CXCR5, CCR6, CCR7, og CCR4 i pancreas, gastriske og prostatacancer [22], [23] . Nogle undersøgelser endeligt vist, at CXCR4 og CXCL12 spille en vigtig rolle i metastasen af ​​gastriske cancerceller i peritonealhulen [23] - [25]
oment matte pletter omfatter talrige makrofager, men rolle MDC /CCL22-. CCR4 akse i gastrisk kræftceller selektivt infiltrerer ind matte pletter er endnu ikke blevet identificeret. derfor Vi undersøgte udtryk for MDC /CCL22 og CCR4 i mælkeagtig spot mikrometastaser, med det formål at skabe en ny behandlingsmetode til forebyggelse peritoneal metastase ved at fokusere på kemotaksi af gastriske kræftceller.
Materialer og metoder
Tumor celle line og dyr
murine mavekræft MFC'er, afledt af stammen 615 murine karcinom i proksimale mave, blev opnået fra den centrale laboratorium Frist Tilknyttede Hospital i Dalian Medical University. MFC'er blev dyrket i RPMI-1640 (Gibco) suppleret med 10% føtalt bovint serum (Sigma) i en inkubator med 5% CO 2 ved 37 ° C. Når sammenflydende, blev cellerne trypsiniseret og skyllet i D-Hanks medier. En levedygtig tælling celle blev udført under anvendelse trypanblåteksklusion. Salg Seks uger gamle stamme 615 mus blev opnået fra Dalian Medical University of China. Musene blev opretholdt under standard laboratorieforhold og havde fri adgang til standard laboratorie- foder og vand. Undersøgelse protokoller blev godkendt af udvalget for Animal Research i Dalian Medical University i Kina i henhold til nationale retningslinier (Permit Nummer: SYXK2008-0002). alt er gjort for at minimere enhver smerte eller ubehag.
Scanningselektronmikroskopi
oment blev udtaget, fikseret natten over med 2,5% glutaraldehyd i 0,1 M PIPES-buffer (pH 6,9), vasket tre gange i frisk Pipes puffer (pH 6.9), og post-fikseret i 1,5 timer i 1% osmiumtetroxid i 0,1 M Pipes puffer (pH 6,9). Prøverne blev vasket i dH 2O tre gange og derefter dehydreret i stigende koncentrationer af ethanol (50, 70, 90 og 100%). Prøver blev kritisk punkt-tørret fra flydende carbondioxid, overtrukket til en tykkelse på 3 nm med en osmium plasma coater og observeret med et Hitachi S-520 scanningselektronmikroskop.
Transmissionselektronmikroskopi
Seks oment fedt bands opnået fra tre 615 mus af hvert køn blev anvendt. Båndene blev nedsænket i en fikseringsopløsning indeholdende 2% glutaraldehyd i 2 timer, derpå postfikseret i en opløsning indeholdende 2% osmiumtetroxid og 1,5% saccharose i en 0,05 M phosphatbuffer i 2 timer ved 4 ° C. Prøverne blev dehydreret i en gradueret serie af ethanol. Efter at erstatte acetone for ethanol, blev prøverne indlejret i epoxy harpiks blokke. Ultra-tynde snit blev farvet med uranylacetat og bly citrat og iagttages med et transmissions- elektronmikroskop (JEM-2000EX).
Tumor cellebinding til omentum Salg The MFC-celler blev inkuberet i komplet RPMI-1640 ved en koncentration på 2 mg /l Dil (Sigma) i 60 minutter ved 37 ° C. Celler blev vasket tre gange med Hanks balancerede saltopløsning. Satsen celle-mærkning var 100% og 1 × 10 4 celler blev injiceret intraperitonealt. Musene blev aflivet efter 4, 12, 36, 48, 72 og 120 timer, og 7, 10 og 14 dage efter intraperitoneal injektion. Omentum blev udskåret og strakt på objektglas til yderligere bearbejdning.
HE og immunhistokemisk farvning
oment blev udtaget, fikseret i 4% formaldehyd-opløsning (pH 7,4) ved 4 ° C i 24 timer, skyllet tre gange med phosphatbufret saltvand (pH 7,4) i 3 timer, dehydreres i en gradueret serie af ethanol og indlejret i paraffin. Derefter blev 5 um tykke sammenhængende dele, forarbejdet til HE og immunfarvning ved deparaffinisation med xylen og rehydrering med gradueret ethanol.
At forøge ekspressionen af ​​antigen i væv, citratbufferopløsning blev tilsat til prøverne, og de blev kogt i en mikrobølgeovn ovn. Prøverne blev behandlet med en 3% hydrogenperoxid-opløsning i 10 min for at undertrykke den endogene peroxidase aktivitet og derefter skyllet med phosphatbufret saltvand (PBS). At forhindre ikke-specifikke immunreaktioner, blev prøverne behandlet med 3% normalt gedeserum i 10 minutter og skyllet med PBS. Den primære polyklonale kanin-anti-muse CCL22 antistof (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) og kanin-anti-muse CCR4 antistof (Abcam, Cambridge, UK) blev fortyndet 1: 100 ved anvendelse af gedeserum og inkuberet ved stuetemperatur i 1 time. Efter tre 2 minutters vaske med PBS blev snittene inkuberet med et biotinyleret gede-sekundært antistof i 30 minutter (DAKO, Carpinteria, CA, USA). Efter tre 2 min vaske med PBS, blev streptavidin -horseradish peroxidase (DAKO) til afsnittet for 30 minutter, efterfulgt af yderligere tre 2 min vaske med PBS. Prøverne blev fremkaldt med 3,3'-diaminobenzidin-substrat (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Canada) i 1 minut og modfarvet med Mayers hæmatoxylin. Objektglassene blev dehydreret efter en standardprocedure og forseglet med dækglas. Den negative kontrol blev fremstillet ved den samme procedure under anvendelse af PBS i stedet for det primære antistof. Normale mave væv blev anvendt som den positive kontrol.
Immuncytokemi farvning af CCR4
mavekræft celler blev udpladet i kammerskiver overtrukket med poly-L-lysin, lov til at fæstne i 48 timer og derefter anvendt til immuncytokemi. Cellerne blev fikseret med 0,3% H 2O 2 i methanol i 60 minutter ved stuetemperatur, vasket 4 gange i PBS, blokeret med 3% BSA og permeabiliseres med PBS indeholdende 0,1% Triton X-100 i 60 min ved stuetemperatur. Antistoffet, FITC-konjugeret anti-muse CCR4 polyklonalt antistof (1 pg /ml, eBioscience), blev inkuberet i 60 minutter ved 37 ° C, vasket 4 gange og inspiceret under et fluorescensmikroskop (BX-51 TR32000, Olympus).
Immunfluorescerende mærkning af makrofager i oment matte pletter Hus til immunhistokemi blev omentum fikseret i formalin i 60 minutter og vasket tre gange med phosphatbufret saltvand. Omentum blev inkuberet i 60 minutter ved 37 ° C med et FITC-konjugeret anti-muse F4 /80 murine makrofag markør (1 ug /ml; Biolegend), vasket tre gange i phosphatbufret saltvand og derefter lufttørret i en mørk rum i 12 timer. Immunhistokemisk farvning blev direkte scorede og billeder blev taget med et fluorescensmikroskop. (BX-51 TR32000; Olympus)
revers transkription-PCR-analyse
Totalt RNA blev ekstraheret og oprenset fra dyrkede MFC'er under anvendelse af et RNeasy Mini Kit (Qiagen, Milano, Italien). Ekstraktionen omfatter en DNase I fordøjelsen trin. RNA kvantitet og kvalitet blev vurderet ved UV spektrofotometri. RNA'et blev transkriberet til cDNA under anvendelse af SuperScript First-Strand Synthesis System (Invitrogen). RT-PCR blev udført med SuperScript One-Step (Invitrogen). De anvendte primere var som følger: CCR4 sense primer 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 antisense-primer 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH fremadrettet primer 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', og GAPDH revers primer 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
Western blot-analyse
Celler blev vasket med phosphatbufret saltvand (PBS) og lyseret i radioimmunpræcipitationsanalyse (RIPA) lysepuffer (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCI, 0,1% natriumdodecylsulfat, 1% Nonidet P-40, 1 mM phenylmethylsulfonylfluorid). Lysaterne blev klaret ved centrifugering (15.000 rpm i 5 min) og proteinkoncentrationer blev bestemt under anvendelse af bicinchoninsyre-metoden før opbevaring ved -80 ° C. Ækvivalente mængder af protein blev separeret på SDS-polyacrylamid-gelelektroforese (PAGE) og overført til polyvinylidendifluorid-membraner. Membraner blev blokeret i 5% fedtfri mælk i Tris-bufret saltvand med 0,1% Tween 20 og inkuberet med det primære antistof natten over ved 4 ° C. Immunkomplekser blev derefter detekteret under anvendelse af forøget kemiluminescens-systemet (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Celleproliferationsassay
MFC'er blev podet i plader med 96 brønde ved en densitet på 1 x 10 4 celler per brønd ( 200 ml) og inkuberet i komplet medium i 24 timer. Mediet blev erstattet med serum-frit medium indeholdende forskellige koncentrationer af CCL22, med RPMI 1640 tjener som negativ kontrol. Efter inkubering i 24 timer, 20 pi MTT-reagens; blev (5 mg /ml Sigma-Aldrich Co.) tilsat og inkuberet i 4 timer. Derefter blev der tilsat 100 pi detergent reagens, efterladt ved stuetemperatur i mørke i 2 timer, og absorbansen ved 492 nm registreres.
Migration assay
cellemigration assays blev udført i kamrene diameter 6,4 mm med 8 mm porefiltre (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ). MFC'er blev anbragt i det øvre kammer (100 celler per brønd), medens det nedre kammer blev fyldt med DMEM indeholdende forskellige koncentrationer af CCL22 (0, 1, 10 og 100 ng /ml). Celler blev inkuberet i 24 timer ved 37 ° C i 5% CO2. De celler, som ikke passerer gennem membranen porer blev fjernet. Migrerede celler blev fikseret og farvet. Celleantal i det nedre kammer, blev talt i 10 tilfældige felter (× 200) og udtrykt som det gennemsnitlige antal celler pr synsfelt. Dataene blev repræsenteret som gennemsnittet af tre uafhængige forsøg.
Resultater
morfologi matte pletter
Elektronmikroskopi viste, at de matte pletter i høj grad bestod af rigelige makrofager (figur 1A), med nogle lymfocytter, neutrofile og forskellige stromaceller (figur 1B). Figur 1 Transmission og scanning elektronmikroskopi af oment matte pletter. (A) Elektronmikroskopi viste, at cellen sammensætningen af ​​matte pletter overvejende bestod af rigelige makrofager (M). (B) Nogle lymfocytter (L) og neutrofiler (N) blev også bemærket (forstørrelse, 4,000X). (C) I de mælkeagtige spot områder, overfladelaget celler bestod af makrofager, lymfocytter og diskontinuerlige mesotelceller og blev adskilt af intercellulære huller eller porer. (D) I den ikke-mælkeagtig spot områder blev intercellulære huller eller porer ikke observeret (forstørrelse, 500X).
Scanning elektronmikroskopi viste, at overfladen af ​​disse matte pletter var morfologisk forskellig fra de ikke-mælkeagtig spot områder af omentum. Overfladelaget celler bestod af makrofager, lymfocytter og diskontinuerlige mesotelceller, der var adskilt af intercellulære huller eller porer (Figur 1C). I de ikke-mælkeagtig spot områder blev de intercellulære huller eller porer ikke observeret (figur 1D).
Immunofluorescens og HE for oment matte pletter
Hele større omentum af 615 mus omkranset kaudalt ved en smal fedtvæv stribe (figur 2A), langs hvilken cellulære aggregater (grøn), kendt som matte pletter, blev observeret (figur 2B). Blod kapillærer, arterioler og lymphocapillary skibe blev fundet inden for de mælkeagtige spot områder (Figur 2C). Figur 2 Morfologi af de matte pletter. (A-B) Den større omentum af 615 mus blev omkranset af en smal stribe fedtvæv (forstørrelse, 50X), langs hvilke cellulære aggregater, kendt som matte pletter, blev observeret. (C) Blod kapillærer og arteriole fartøjer findes inden for de mælkeagtige spot områder (forstørrelse, 200X).
Visualisering af tumorceller på omentum på tidlige tidspunkter
MFC'er begyndte at overholde de oment matte pletter på 4 timer efter injektion. Ved 12 timer efter injektion, blev MFC'er især koncentreret i de matte pletter (figur 3A), mens der ikke tumorceller blev fundet i de ikke-mælkeagtig spot områder af omentum (figur 3B). Figur 3 Gastric kræftceller overholde de oment mælkeagtigt spot områder på forskellige tidspunkter. (A-B) Billede af mælkeagtige spot makrofager (grøn) og et stort antal Dil-MFC'er (rød) koncentreret i mælkeagtige spot områder 12 timer efter intraperitoneal injektion. (C-D) Efter 72 timer er antallet af DiI-MFC'er faldt i mælkeagtige spot områder, samtidig prolifererende tumorceller i de matte pletter og dannelsen af ​​mikrometastaser blev observeret. Sporadiske tumorceller blev fundet i oment ikke-mælkeagtig spot områder. (E-F) To uger efter den intraperitoneale injektion blev mælkeagtige spot områder fuldstændigt optaget af de prolifererende gastriske cancerceller og celle klynge-typen metastase blev observeret. Prolifererende kræft celle klynger blev ikke observeret i de ikke-mælkeagtig spot områder og kræftceller dannet enkelt celle-type metastaser. (Forstørrelse, × 200).
Efter 72 timer prolifererende tumorceller og dannelsen af ​​mikrometastaser blev bemærket i den mælkede spot områder (figur 3C). I modsætning hertil efter 72 timer efter injektion blev sporadiske tumorceller fundet i de ikke-mælkeagtig spot områder, mens der ikke celleklynger blev detekteret (figur 3D).
2 uger efter intraperitoneal injektion; mælkeagtige spot områder var fuldstændig besat af de prolifererende gastriske cancerceller og celle klynge-type metastaser blev observeret (figur 3E). I modsætning hertil blev prolifererende cancer celleklynger ikke observeret i de ikke-mælkeagtig spot områder og cancerceller dannet enkelt celletype metastase (figur 3F).
CCR4 ekspression i gastriske cancerceller
MFC'er klart udtrykte CCR4 mRNA (figur 4A). Protein udtryk for CCR4 blev også undersøgt af Western blots (figur 4B). MFC'er udtrykte CCR4 protein, som er lokaliseret til celleoverfladen og /eller i cytoplasmaet (figur 4C). Figur 4 CCR4 ekspression i gastriske cancerceller. (A) MFC'er klart udtrykt CCR4 mRNA. (B) Protein udtryk for CCR4 blev også undersøgt af Western blotting. (C) MFC'er udtrykte CCR4 protein og dets blev lokaliseret på celleoverfladen og /eller i cytoplasmaet af MFC'er.
Virkningerne af CCL22 på proliferationen og invasion af MFC Salg Virkningerne af CCL22 om spredning af MFC'er blev vurderet af en MTT assay. CCL22 signifikant øget proliferation evne ved forskellige koncentrationer (1-100 ng /ml) i sammenligning med kontrolgruppen (P < 0,05) (figur 5A). Figur 5 Virkningerne af CCL22 på spredning og invasion af MFC'er. (A) CCL22 signifikant forøgede proliferation evne ved forskellige koncentrationer (1-100 ng /ml) sammenlignet med kontrolgruppen (P <0,05). (BC) Koncentration af CCL22 mellem 10-100 ng /ml signifikant øget migration af MFC'er, med den optimale respons er 10 ng /ml (P < 0,01).
En koncentration af CCL22 mellem 10-100 ng /ml betydeligt øget migration af MFC'er, med det optimale respons er 10 ng /ml. (P < 0,05 sammenlignet med medium alene) (figur 5B-C)
CCL22 og CCR4 ekspression i de oment mælkeagtig spot mikrometastaser
i oment matte pletter, CCL22 blev observeret hovedsagelig på celleoverfladen og eller i cytoplasmaet af de indgående celler (figur 6A). I de oment mælkeagtigt spot mikrometastaser 12 timer, 7 dage og 14 dage efter intraperitoneal injektion blev CCR4 observeret på eller i de gastriske cancerceller, konstituerende Celler af den mælkede stedet, mesotelceller, blodlegemer og blod endotelceller (Figur 5B-D ). Figur 6 CCL22 og CCR4 udtryk i oment mælkeagtig spot mikrometastaser. (A) I den del af de oment matte pletter, blev CCL22 lokaliseret primært på celleoverfladen og eller i cytoplasmaet af de indgående celler. (B-D) I den del af de oment mælkeagtigt spot mikrometastaser (12 timer efter intraperitoneal injektion), blev CCR4 lokaliseret på eller i mavens kræftceller, konstituerende celler af mælkeagtig spot, mesotelceller, blodceller og blod endotelceller. (C) Syv dage efter intraperitoneal injektion. (D) Fjorten dage efter intraperitoneal injektion.
Diskussion
ætiologi peritoneale metastaser i mavekræft er endnu ikke klarlagt. Frigivelsen af ​​frie cancerceller fra en læsion, hvor en primær tumor invaderer serosa anses for at være oprindelsen af ​​peritoneale metastaser [26]. Mere end et århundrede er gået, siden Paget udviklede teorien om `frø og jord" [27]. Han antaget, at visse tumorceller (frø) selektivt kolonisere fjerntliggende organer (jord) med et gunstigt miljø, der letter overlevelsen af ​​tumorceller. I denne undersøgelse fandt vi, at oment mælkeagtige pletter var RAR mikromiljøer grund af deres fysiske og kemiske egenskaber, for peritoneale frie gastriske cancerceller til at migrere, overleve, vokse og danne faste metastaser.
Scanning elektronmikroskopi viste, at overfladen af ​​disse matte pletter var morfologisk forskellig fra de ikke-mælkeagtig spot områder af omentum. Overfladelaget celler bestod af makrofager, lymfocytter og diskontinuerlige mesotelceller og blev separeret ved mange intercellulære huller eller porer. De fremtrædende intercellulære mellemrum eller porer forårsaget submesothelial bindevæv og celler, der skal udsættes for den peritoneale overflade, som foreslås at repræsentere en præferentiel placering for tumorcelleadhæsion. Salg mikrometastaser øjeblikket klassificeres i enkelt-celle og småcellet klynge typer [28]. Den foreliggende undersøgelse fandt en anden type tumorcellemetastase i matte pletter i forhold til de ikke-mælkeagtig spot områder. To uger efter den intraperitoneale injektion blev mælkeagtige spot områder fuldstændigt optaget af de prolifererende gastriske cancerceller, og gastriske cancerceller dannet celle klynge-type metastaser. Imidlertid blev prolifererende cancerceller ikke observeret i de ikke-mælkeagtig spot områder på samme stadium, og cancerceller dannet enkelt celletype-metastaser. Dette fænomen kan forklares ved de mange blod- kapillærer og blodkar til stede i de oment mælkeagtig spot områder, der giver en tilstrækkelig blodforsyning for væksten af ​​gastriske cancerceller.
Nogle undersøgelser har indikeret, at processen med tumorvækst og metastase involverer en række celle-celle og celle-ekstracellulær matrix-interaktioner, der medieres af celleadhæsionsmolekyler. Hvert trin kræver celleadhæsionsmolekyler og receptorer [29]. Mesotelceller foring matte pletter producere højere niveauer af cellulære adhæsionsmolekyler (dvs. intercellulært adhæsionsmolekyle-1) end ikke-mælkeagtig spot områder og derved bidrage til forbedret vedhæftning [11], [12]. Rolle kemokiner i gastriske cancerceller selektivt infiltrere ind i de matte pletter er endnu ikke blevet identificeret. Matte pletter omfatter talrige makrofager, der producerer chemokin MDC /CCL22 [30]. CCL22 og dets "receptor CCR4 er involveret i en bred vifte af patologier. CCL22 udtrykkes kraftigt i læsioner skabt af T-celle-medierede inflammatoriske sygdomme [29]. CCR4 blev først rapporteret at være fortrinsvis udtrykkes af Th2-celler, der er involveret i humoral immunitet og allergiske responser [30]. CCL22 og CCR4 spiller også en vigtig rolle i cancervækst og metastase [17] - [21], således mange CCR4 receptorantagonister samt et anti-CCR4 antistof er under udvikling i den farmaceutiske industri [31], [32]. I denne undersøgelse fandt vi, at de MFC'er klart udtrykt CCR4 mRNA. CCR4 protein blev også undersøgt af Western blotting. CCR4 blev udtrykt på eller i mavens kræftceller i afsnittet af oment mælkeagtigt spot mikrometastaser 12 timer, 7 dage og 14 dage efter intraperitoneal injektion. CCL22 blev udtrykt primært på celleoverfladen og eller i cytoplasmaet af makrofagerne. CCL22 signifikant øget spredning evne gastriske kræftceller, og koncentrationer af CCL22 mellem 10-100 ng /ml signifikant øget migration af MFC'er. Makrofager i oment matte pletter har ikke kun cytotoksiske egenskaber mod tumorceller, men de også producere CCL22, som hjælper gastriske kræftceller overleve og vokse ind solide metastaser. MDC /CCL22-CCR4 aksen spiller en vigtig rolle i gastrisk cancerceller selektivt infiltrere ind oment matte pletter og danne faste metastaser.
Konklusion
Gastric gratis kræftceller (frø) finde en mikromiljø indeholder gunstige fysiske og kemiske egenskaber inden for matte pletter, hvor de er i stand til at overleve og vokse, oprettelse celle klynge-type metastaser. Den CCL22-CCR4 aksen bidrager til denne selektive infiltration.
Forfatternes information
Yi Zhang og Liang Cao er opført som co-første forfattere.
Erklæringer
Tak
Dette projekt blev støttet af National Natural Science Foundation of China (Grant nummer: 81.101.633), Natural Science Foundation i Liaoning-provinsen (Grant nummer: 201.202.047), videnskab og teknologi projekt af Dalian (Grant nummer: 2012E15SF142)
Authors 'oprindelige indsendte filer til. Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif Forfatternes oprindelige fil til figur 2 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif Forfatternes oprindelige fil til figur 3 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif Forfatternes oprindelige fil til figur 4 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif Forfatternes oprindelige fil til figur 5 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif forfatternes oprindelige fil til figur 6 konkurrerende interesser
Alle forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.

• Foreningen af ​​LEC og tnpA Helicobacter pylori gener med mavekræft i en brasilianske population
• Plasma-mRNA ekspressionsniveauer af BRCA1 og TS som potentielle prædiktive biomarkører for kemoterapi i gastrisk kræft