A szerepe a CCL22-CCR4 tengelyt a metasztázis gyomorrák sejtek cseplesz tejes foltok

A szerepe a CCL22-CCR4 tengelyt a metasztázis gyomorrák sejtek cseplesz tejes foltok
Abstract
alapon
a cseplesz egyike a kezdeti helyek peritoneális metasztázis, mert rendelkezik tejes foltok, amelyek egy mikrokörnyezet a rákos sejtek könnyen vándorolnak, és növekszik a mikrometasztázi-. Ebben a vizsgálatban a szerepe a CCL22-CCR4 tengely gyomorrák sejtek szelektíven beszivárgó tejfehér foltok. Katalógusa módszerek
Gyomorrák MFC sejtek jelzett DiI intraperitoneálisan törzsbe 615 egerekben. Az egereket altatni meghatározott időközönként és a cseplesz kivágtuk immunhisztokémiai. A hatások a CCL22 a proliferációját és migrációját MFC értékelték MTT és transz-jól vizsgálatokban. RT-PCR és Western blot analízissel detektált CCR4 mRNS és fehérje expressziós szinteket MFC. Immunhisztokémiai elemzéséhez használt CCL22 és CCR4 kifejezést a tejes folt mikrometasztázist. Katalógusa Eredmények katalógusa után két héttel hasüregbe adott injekció, a tejes folt területeket teljesen elfoglalták elszaporodik gyomorrák sejtek és a klaszter típusú mikrometasztázi- észleltek. Ezzel szemben, a rákos sejtek kialakítva egyetlen sejttípus mikrometasztázisok a nem-tejes folt területeken. MFC kifejezve CCR4, melyet lokalizált a sejtfelszínen, és vagy a citoplazmában. Különböző koncentrációjú CCL22 jelentősen növelte a proliferációt képességét MFC. Továbbá, koncentrációi CCL22 10-100 ng /ml jelentősen növelte a migráció a MFC. Belül cseplesz tejes foltok, CCL22 lokalizálódott elsősorban a sejtfelszínen, és vagy a citoplazmában. Belül szakaszai Cseplesz tejes folt mikrometasztázist, CCR4 került elszámolásra, vagy a gyomorrák sejtek alkotó sejtek tejes foltok, vérsejtek és endothel sejtek. Katalógusa Következtetések katalógusa cseplesz tejfehér foltok egy kellemes mikrokörnyezet peritoneális szabad gyomorrák sejtek vándorolnak, a túlélésre, és létrehozza sejt klaszter típusú áttétek. A CCL22-CCR4 tengely hozzájárul ehhez a szelektív beszivárgási folyamat. Katalógusa Kulcsszavak katalógusa Gyomorrák cseplesz tejes folt peritoneális áttét CCL22 CCR4 Bevezetés katalógusa peritoneális áttét mintázata általában a távoli áttétek a gyomorrák. Számos tanulmány igazolta, hogy a gyomorrák prognózisa betegek peritoneális metasztázis gyenge, még azokban kezelt betegek radikális sebészeti [1]. Peritoneális metasztázis fejlődik mikrometasztázisok származó szabad peritonealis rákos sejteket [2]. Ezért fontos megérteni a jellemzők és a mechanizmusok a kialakulását a peritoneális mikrometasztázisok. Ezt a megértést segíteni fogja a megelőzés és megismétlődésének peritoneális áttétek, ezáltal javítva a gyomorrák prognózisa betegek.
Tejfehér foltok primitív limfoid szövetek a hasüregben az emberek és állatok, ami létezik, elsősorban a cseplesz. Ezzel ellentétben, viszonylag kevés tejes foltok találhatók a mesenterium és medencefenék, és nem tejes folt található más területeken a hashártya [3]. Tejfehér foltok tartalmazhat számos makrofág és lymphocyta aggregációk és részt vesznek a clearance-részecskék, baktériumok és a daganatos sejtek a hasüregből, fontos szerepet játszik a peritoneális védelmi [4] - [6]. Közelebbről, cseplesz makrofágok találták citotoxikus tumorsejtek ellen [7], [8]. Egyes tanulmányok kimutatták, hogy a cseplesz tejes foltok jól ismert helyek metasztázisok karcinómák a petefészkek, a gyomor és a vastagbél [9]. A rákos sejtek szelektíven hatolni a tejes foltok a korai szakaszában a hasnyálmirigy-rák terjesztése és keresse meg a mikrokörnyezet, amelyben képesek túlélni, nő és a forma szilárd áttétek [10]. Ez a preferenciális kapcsolódást is magyarázható a létezését bizonyos különleges jellemzőinek tejes foltok, beleértve a magasabb szintű celluláris adhéziós molekulák és a növekedés-stimuláló faktorok [11], [12]. Ezért, miközben tejes foltok citotoxikus tulajdonságokkal tumorsejtek ellen, és fontos szerepet játszanak a peritoneális védelem is nyújtanak területek, ahol a daganatos sejtek proliferációját és mikrometasztázisok fordul elő.
A kemokinek kis szekretált fehérjék sorolni a négy alcsalád alapuló szekvenciája konzervált N-terminális cisztein maradékok: CXC, CC, C és CX3C [13], [14]. Számos tanulmány bizonyította, hogy a kemokinek és a kemokinreceptorok oksági részt vesz a metasztázis a rákos [15] - [21]. A makrofág-eredetű kemokin MDC /CCL22 egyike a CC kemokinek által termelt makrofágok és CCR4 azonosítottuk, mint a specifikus receptor [17] - [21], ami egyben a funkcionális receptora más CC kemokinek. A kifejezés a kemokinreceptor ismert, hogy rákkal áttétek, mint például a CXCR4, CCR7 és CCR10 emlőrákban [16] és CXCR5, CCR6, CCR7, és CCR4 hasnyálmirigy, gyomor és prosztatarák [22], [23] . Egyes tanulmányok véglegesen kimutatták, hogy a CXCR4 és CXCL12 fontos szerepet játszanak a metasztázis gyomorrák-sejtek a hasüregbe [23] - [25].
Cseplesz tejes foltok tartalmazhat számos makrofágok, de a szerepe az MDC /CCL22- CCR4 tengely gyomorrák sejtek szelektíven beszivárgó tejfehér foltok még nem azonosították. Ezért kifejeződését vizsgáltuk MDC /CCL22 és CCR4 a tejes folt mikrometasztázisok, azzal a céllal, hogy létrehozzon egy új kezelési módszer megelőzésére hashártya áttét összpontosítva kemotaxisában gyomorrák sejtek. Katalógusa Anyagok és módszerek katalógusa tumor sejt vonal és az állatok katalógusa rágcsáló gyomorrák MFC származó törzs 615 rágcsáló carcinoma a proximális gyomor, kaptuk a központi laboratórium a Frist Kapcsolt Kórház Dalian Orvostudományi Egyetem. MFC RPMI-1640 (Gibco), kiegészítve 10% magzati borjúszérumot (Sigma) egy inkubátorban, 5% CO 2 37 ° C-on. Miután konfluens, a sejteket tripszinnel kezeltük, majd leöblítik a D-Hanks médiában. Egy életképes sejtszám végeztünk tripánkékkizárással. Katalógusa hat hetes törzs 615 egereket a Dalian Medical University of China. Az egereket tartjuk standard laboratóriumi körülmények között, és szabadon hozzáférnek az standard laboratóriumi táplálékot és vizet. Vizsgálati protokoll hagyta jóvá a Bizottság az Állat-kutatás a Dalian Orvosi Egyetem Kína szerint a nemzeti irányelveknek (engedély száma: SYXK2008-0002). Minden intézkedést megtettek, hogy minimalizálják a fájdalmat vagy kellemetlenséget. Katalógusa pásztázó elektronmikroszkópos katalógusa cseplesz vettünk, fix éjszakán 2,5% glutáraldehid 0,1 M PIPES puffert (pH = 6,9), háromszor mostuk friss Pipes puffer (pH 6,9), és a poszt-fix 1,5 órán át 1% -os ozmium-tetroxid 0,1 M Pipes-puffer (pH = 6,9). A mintákat mossuk dH 2O háromszor, majd dehidratáltuk növekvő koncentrációjú etanolban (50, 70, 90 és 100%). A mintákat kritikus pont-szárított származó folyékony szén-dioxid, bevonva a vastagsága 3 nm, ozmium plazma bevonót, és a megfigyelt egy Hitachi S-520 pásztázó elektronmikroszkóppal.
Transzmissziós elektronmikroszkópos
Hat cseplesz zsír kapott sávok három 615 egerek mindkét nem használták. A sávokat merítettük rögzítő oldatban, amely 2% glutáraldehidet 2 órán át, majd utólag fixáljuk tartalmazó oldatban 2% ozmium-tetroxidot és 1,5% szacharóz 0,05 M foszfát pufferben, 2 órán át 4 ° C-on. A mintákat dehidrált egy fokozatos sor etanol. Behelyettesítése után acetonnal etanol, az egyedeket ágyazott epoxigyanta blokkokat. Ultra-vékony metszeteket uranil-acetáttal és ólom-citráttal megfigyelt transzmissziós elektronmikroszkóp (JEM-2000EX).
Tumor sejt kötődés a cseplesz
Az MFC sejteket komplett RPMI-1640-ben olyan koncentrációban 2 mg /l DiI (Sigma) 60 percen át 37 ° C-on. A sejteket háromszor mostuk Hanks-féle kiegyensúlyozott só-oldattal. A sejt-címkézés aránya 100% volt, és 1 × 10 4 sejteket intraperitoneálisan. Az egereket eutanáziát 4, 12, 36, 48, 72 és 120 óra, és a 7., 10., és 14 nap elteltével intraperitoneális injekció. A cseplesz kivágtuk és feszített mikroszkóp tárgylemezek további feldolgozásra.
HE és immunhisztokémiai festéssel
cseplesz mintát gyűjtöttünk, fix 4% -os formaldehid oldatot (pH = 7,4), 4 ° C-on 24 órán át, háromszor öblítjük foszfáttal pufferolt sóoldattal (pH = 7,4) 3 órán át, dehidratált egy fokozatos sorozat etanol, és paraffinba ágyaztuk. Ezután, 5 um vastag, egymást követő metszeteket feldolgozott HE és immunfestést által deparaffinisation xilollal és rehidratáló osztályozott szemcseméretű etanol.
Növelni a expressziójának antigén szövetekben, citrát-puffer-oldatot adunk a mintákhoz, és azokat főtt egy mikrohullámú sütő. A mintákat kezeljük 3% -os hidrogén-peroxid-oldatot 10 percig, hogy elnyomja az endogén peroxidáz aktivitást, majd öblítjük foszfáttal puffereit sóoldattal (PBS). Hogy elkerüljék a nem specifikus immunreakciók a mintákat kezeltük 3% -os normál kecske szérummal 10 percig, és öblítjük PBS-sel. Az elsődleges poliklonális nyúl anti-egér CCL22 antitesttel (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), és nyúl anti-egér CCR4 antitest (ABCAM, Cambridge, UK) adtunk 1: 100 hígításban kecske szérummal, és inkubáltuk szobahőmérsékleten 1 óra. Miután három 2 percig PBS, a metszeteket biotinilált kecske szekunder antitest 30 percig (DAKO, Carpinteria, CA, USA). Miután három 2 percig PBS-sztreptavidin -horseradish peroxidáz (DAKO) adunk a szakasz 30 percig, majd egy másik három 2 perc mosás PBS-sel. A mintákat kifejlesztett 3,3'-diaminobenzidin szubsztrátot (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Kanada) 1 percig és kontrasztfestést Mayer hematoxilin. A lemezeket dehidrált követően a szokásos eljárás, és lezárjuk fedőlemezeket. A negatív kontroll állítottuk elő ugyanazt az eljárást használva PBS helyett az elsődleges antitesttel. Normál gyomor szöveteket használtunk pozitív kontrollként.
Immuncitokémia festődése CCR4 katalógusa Gyomorrák sejteket szélesztünk kamrában diák bevont poli-L-lizin, hagyjuk megtapadni 48 órán át, majd használt immuncitokémiai. A sejteket rögzítettük 0,3% H 2 O 2 metanolban 60 percig szobahőmérsékleten, 4-szer mostuk PBS-ben, blokkoltuk 3% BSA-t és permeabilizáltuk tartalmazó PBS 0,1% Triton X-100-on 60 percig szobahőmérsékleten. Az antitest, FITC-konjugált anti-egér-CCR4 poliklonális antitesttel (1 ug /ml, eBioscience),-on inkubáltuk 60 percig 37 ° C-on, 4-szer megmostuk, és ellenőrizni fluoreszcens mikroszkóp alatti (BX-51 TR32000, Olympus).
immunfluoreszcensen a makrofágok cseplesz tejes foltok
Immunhisztokémiához, a cseplesz ben formaiinban rögzítettük 60 percig és háromszor mossuk foszfáttal pufferolt sóoldattal. A cseplesz-on inkubáljuk 60 percig 37 ° C-on egy FITC-konjugált anti-egér-F4 /80 rágcsáló makrofág markert (1 ug /ml; Biolegend), háromszor mostuk foszfáttal pufferolt sóoldattal, majd levegőn szárítjuk egy sötét szoba 12 órán át. Immunhisztokémiai festődést közvetlenül szerzett és képek fogták fluoreszcens mikroszkóppal (BX-51 TR32000; Olympus).
Reverz transzkripciós PCR-analízis
teljes RNS-t kinyertük és megtisztítottuk tenyésztett MFC alkalmazásával RNeasy Mini Kit (Qiagen, Milánó, Olaszország). Az extrakciós közé tartozik a DNáz I feltárási lépést. RNS mennyiségét és minőségét értékeltük UV spektrofotometriával. Az RNS-t cDNS-be a SuperScript First-Strand szintézis rendszer (Invitrogen). RT-PCR-t végeztünk a SuperScript One-Step (Invitrogen). A használt primerek a következők voltak: CCR4 szensz láncindító 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 antiszensz láncindító 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH forward primer 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', és a GAPDH reverz láncindító 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
Western blot analízis
sejteket mostuk foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS), és lizáltuk radioimmunprecipitációs assay (RIPA) lízispufferben (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCI, 0,1% nátrium-dodecil-szulfát, 1% Nonidet P-40, 1 mM fenil-metil-szulfonil-fluorid). A lizátumokat centrifugálással (15000 rpm, 5 perc), és a fehérje koncentrációkat határoztuk meg bicinchoninsav- módszer tárolás előtt -80 ° C-on. Egyenértékű mennyiségű fehérjét SDS-poliakrilamid gél elektroforézis (PAGE) és polivinilidén-difluorid membránokra. A membránokat blokkoltuk 5% zsírmentes tej Tris-pufferolt sóoldat 0,1% Tween 20-at, és inkubáltuk a primer antitest egy éjszakán át 4 ° C hőmérsékleten. Immunkomplexeket majd alkalmazásával detektáltuk a fokozott kemilumineszcencia rendszer (Amersham, Buckinghamshire, Egyesült Királyság).
Cell proliferációs vizsgálati
MFC beoltunk 96 lyukú lapokra, a sejtsűrűség 1 × 10 4 sejt per lyuk ( 200 ml), és inkubáltuk komplett tápközegben 24 órán keresztül. A tápközeget helyettesítettük szérummentes tápközeggel különböző koncentrációban tartalmazó CCL22, RPMI 1640-nel szolgáló negatív kontrollként. Inkubálás után 24 órán át, 20 pl MTT reagenst (5 mg /ml; Sigma-Aldrich Co.) adtunk, és 4 órán át inkubáljuk. Ezután 100 ul detergens reagenst adunk, szobahőmérsékleten hagyjuk, sötétben 2 órán keresztül, és az abszorbanciát 492 nm-en felvett.
Migrációs vizsgálata
sejtmigrációt vizsgálatokat végeztünk 6,4 mm átmérőjű kamrák 8 mm-es pórus szűrők (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ). MFC helyeztünk a felső kamrába (100 sejt per lyuk), míg az alsó kamra tele volt DMEM különböző koncentrációban tartalmazó CCL22 (0, 1, 10 és 100 ng /ml). A sejteket 24 órán keresztül inkubáltuk 37 ° C hőmérsékleten, 5% CO2. A sejtek, amelyek nem halad át a membránon pórusokon eltávolítottuk. A migrált sejteket fixáltuk és megfestettük. Cell számok az alsó kamrában megszámoljuk 10 véletlen mezők (× 200), és kifejezhető, mint az átlagos sejtek száma látómezőben. Az adatokat képviselte, mint az átlagosan három független kísérlet során.
Eredménye
morfológiája a tejes foltok
elektronmikroszkópos kiderült, hogy a tejes foltok nagyrészt tagjai bőséges makrofágok (1a ábra), néhány limfociták, neutrofilek és a különböző stromális sejtek (1B ábra). 1. ábra Az átviteli és pásztázó elektronmikroszkópos cseplesz tejfehér foltok. (A) Elektronmikroszkópos feltárta, hogy a cella összetétele a tejes foltok nagyrészt tagjai bőséges makrofágok (M). (B) Néhány limfociták (L) és a neutrofil granulociták (N) is megjegyezte (nagyítás, 4,000X). (C) a tejes folt területeken, a felületi réteg sejtek állt makrofágok, limfociták és folytonos mesotheliális sejteket és voltak elválasztva intercelluláris rések vagy pórusok. (D) A nem-tejes folt területeken, intercelluláris rések vagy pórusok nem figyeltünk meg (nagyítás, 500X).
Pásztázó elektronmikroszkópia feltárta, hogy a felület ezek tejes foltok volt morfológiailag elkülönül a nem-tejes folt területeken a cseplesz. A felületi réteg sejtek állt makrofágok, limfociták és szakaszos mesothel sejteket, melyek szétválasztása intercelluláris rések vagy pórusok (1C). A nem-tejes folt területeken, az intercelluláris rések vagy pórusok nem volt megfigyelhető (1D ábra).
Immunfluoreszcens és HE a cseplesz tejes foltok
Az egész cseplesz a 615 egerek határolt caudally egy szűk zsírszövet csík (2A ábra), amely mentén a celluláris aggregátumokat (zöld), ismert, mint tejes foltok, észleltek (2b ábra). Hajszálerek, arteriolák és lymphocapillary edényeket találtak a tejes folt területek (2C ábra). 2. ábra morfológiája tejfehér foltok. (A-B) a cseplesz a 615 egerek által határolt keskeny zsírszövet csík (nagyítás, 50X), amely mentén a celluláris aggregátumokat, úgynevezett tejes foltok voltak megfigyelhetők. (C) A vér kapillárisok és arteriolák hajók találtak a tejes folt területek (nagyítás, 200X). Katalógusa vizualizálása a tumoros sejtekben a cseplesz korai időpontokban katalógusa MFC kezdett, hogy tartsák be a lebeny tejfehér foltok 4 óra injekció beadása után. 12 órával az injekció után, MFC között különösen koncentrálódik a tejes foltok (3A), míg a nem daganatos sejtek találtak a nem-tejes folt területein a cseplesz (3B ábra). 3. ábra A gyomorrák sejtek tapadnak a lebeny tejes folt területen, különböző időpontokban. (A-B) képe tejes folt makrofágok (zöld) és nagyszámú DiI-MFC (piros) koncentráljuk, tejes folt területeken 12 óra után intraperitoneális injekció. (C-D) 72 óra elteltével, a szám a DiI-MFC csökkent tejes folt területeken, miközben proliferáló tumorsejteket a tejes foltok és a kialakulása a mikrometasztázisok volt megfigyelhető. A sporadikus tumorsejteket találtak a cseplesz nem-tejes folt területeken. (E-F) után két héttel intraperitoneális injekció, a tejes folt területeken teljesen által elfoglalt proliferáló gyomor rákos sejtek és a sejt klaszter típusú metasztázis volt megfigyelhető. A proliferáló ráksejteket klaszterek nem voltak megfigyelhetők a nem-tejes folt területek és a rákos sejtek kialakítva egyetlen sejttípus-áttétek. (Nagyítás, x 200).
72 óra elteltével, szaporodó tumorsejtek és a kialakulását mikrometasztázist észleltek a tejes folt területek (3C, ábra). Ezzel ellentétben, 72 órával az injekció után, szórványos tumorsejteket találtak a nem-tejes folt területeken, ugyanakkor nem sejtcsomók detektáltunk (ábra 3D).
Után 2 héttel intraperitoneális injekció, a tejes folt területek voltak teljesen által elfoglalt szaporodó gyomorrák sejtek és a klaszter típusú áttétek figyelték meg (ábra 3E). Ezzel szemben, a proliferáló ráksejteket klaszterek nem voltak megfigyelhetők a nem-tejes folt területek és a rákos sejtek kialakítva egyetlen sejttípus-metasztázis (ábra 3F).
CCR4 expresszió gyomor rákos sejtekben
MFC világosan kifejezésre CCR4 mRNS (ábra 4A). Fehérjeexpresszióját CCR4 is vizsgáltuk Western blot (4B ábra). MFC expresszált CCR4 fehérje, amely lokalizált a sejt felszínére és /vagy a citoplazmában (4C). 4. ábra CCR4 kifejezés a gyomor rákos sejteket. (A) MFC egyértelműen kifejezte CCR4 mRNS. (B) fehérje kifejeződését CCR4 is vizsgáltuk Western blot. (C) MFC expresszált CCR4 fehérje és annak lokalizálódott a sejtek felszínén és /vagy a citoplazmában, a MFC.
A hatásait CCL22 a proliferáció és invázió MFC katalógusa hatásai CCL22 a proliferációját MFC értékelték MTT assay. CCL22 jelentősen növelte a proliferációt képessége különböző koncentrációkban (1-100 ng /ml), amikor összehasonlítjuk a kontroll csoportban (P < 0,05) (5A ábra). 5. ábra A hatások a CCL22 a proliferáció és invázió MFC. (A) CCL22 szignifikánsan növelte a proliferációt képessége különböző koncentrációkban (1-100 ng /ml), mint a kontroll csoportban (P < 0,05). (BC) koncentrációja CCL22 10-100 ng /ml jelentősen megnövekedett migráció a MFC, az optimális válasz, hogy 10 ng /ml (P < 0,01).
A koncentráció CCL22 10-100 ng /ml jelentősen fokozott migrációja MFC, az optimális válasz, hogy 10 ng /ml (p < 0,05 összehasonlítva a közepes egyedül) (5B ábra-C).
CCL22 és CCR4 kifejezést a cseplesz tejes folt mikrometasztázisok
a cseplesz tejes foltok, CCL22 volt megfigyelhető elsősorban a sejtfelszínen, és vagy a citoplazmában alkotó sejtek (6a ábra). A cseplesz tejes folt mikrometasztázisok 12 óra, 7 nap és 14 nap után intraperitoneális injekció, CCR4 volt megfigyelhető, vagy a gyomor rákos sejtek, a rendszerelemek sejtek a tejes folt, mesothelialis, vérsejteket és a vér endoteliális sejteket (5B, ábra D- ). 6. ábra CCL22 és CCR4 kifejezést a cseplesz tejes folt mikrometasztázi-. (A) A részben a cseplesz tejes foltok, CCL22 lokalizálódott elsősorban a sejtfelszínen, és vagy a citoplazmában alkotó sejteket. (B-D) A részben a cseplesz tejes folt mikrometasztázisok (12 h után intraperitoneális injekció), CCR4-ben lokalizálódik, vagy a gyomor rákos sejtek, a rendszerelemek sejtek tejes folt, mesothelialis, vérsejteket és a vér endoteliális sejtekben. (C) után hét nappal intraperitoneális injekció. (D) Tizennégy nap elteltével hasüregbe adott injekció. Katalógusa Megbeszélés katalógusa etiológiája hashártya áttét gyomorrák még nem tisztázott. A kiadás szabad rákos sejtek elváltozás ahol primer tumor ráterjed serosa kell tekinteni az eredete peritoneális áttétek [26]. Több mint egy évszázada óta eltelt Paget kidolgozott elmélet `vetőmag és a talaj" [27]. Azt feltételezik, hogy bizonyos tumor sejtek (mag) szelektíven megtelepedni távoli szervekben (talaj), a kedvező környezet, amely megkönnyíti a túlélés a tumorsejtek. Ebben a vizsgálatban azt találtuk, hogy cseplesz tejes foltok voltak, kellemes mikrokörnyezetet, mert a fizikai és kémiai tulajdonságai, a peritoneális szabad gyomorrák sejtek vándorlását, a túlélésre, növekedni és alkotnak szilárd áttétek.
Scanning elektronmikroszkópos kiderült, hogy a felületi ezeknek tejes foltok volt morfológiailag elkülönül a nem-tejes folt területeken a cseplesz. A felületi réteg sejtek állt makrofágok, limfociták és folytonos mesotheliális sejteket és elválasztottuk sok intercelluláris rések vagy pórusok. A kiemelkedő intercelluláris rések vagy pórusok miatt a submesothelial kötőszövet és sejtek ki vannak téve a peritoneális felület, amely esetében javasolják, hogy képviselje a preferenciális helyét a tumor sejt adhézió.
Mikrometasztázisok jelenleg sorolják egysejtű és kissejtes klaszter típusok [28]. A jelen tanulmány talált más típusú tumorsejt-metasztázis a tejes foltok, mint a nem-tejes folt területeken. Két héttel azután, az intraperitoneális injekció, a tejes folt területeken teljesen által elfoglalt proliferáló gyomorrák-sejtek, és a gyomorrák sejtek kialakult sejt klaszter típusú áttétek. Azonban, szaporodó rákos sejteket nem figyeltünk meg a nem-tejes folt területek ugyanazon szakaszában, és a rákos sejtek kialakítva egyetlen sejttípus-áttétek. Ez a jelenség azzal magyarázható, hogy sok vér kapillárisokban és az artériás hajók jelen a cseplesz tejes folt területeket tartalmaz, amelynek segítségével megfelelő vérellátás a növekedés a gyomor rákos sejtek.
Egyes vizsgálatok kimutatták, hogy a folyamat a tumor növekedés és metasztázis magában foglalja a különböző sejt-sejt és sejt-extracelluláris mátrix kölcsönhatásokat, amelyek által közvetített sejt adhéziós molekulák. Minden lépés igényel sejtadhéziós molekulák és receptorok [29]. Mesothelialis bélelő sejtek tejes foltok termelnek magasabb szintű celluláris adhéziós molekulák (azaz, az intercelluláris adhéziós molekula-1), mint a nem-tejes folt területeken, és így hozzájárul a fokozott tapadás [11], [12]. A szerepe a kemokinek gyomorrák-sejtek szelektíven infiltráló a tejes foltok még nem azonosították. Tejfehér foltok tartalmaznak számos makrofágok, melyek a kemokinek MDC /CCL22 [30]. CCL22 és "receptor CCR4 vesznek részt a legkülönbözőbb betegségek. CCL22 erősen expresszálódik elváltozások által létrehozott T-sejt által közvetített gyulladásos betegségek [29]. CCR4 először számolt módon preferenciálisan expresszálódnak az a Th2 sejtek, amelyek részt vesznek a humorális immunitás és allergiás válaszok [30]. CCL22 és CCR4 szintén fontos szerepet játszanak a rák növekedését és a metasztázist [17] - [21], és így sok CCR4-receptor-antagonisták, valamint egy anti-CCR4 antitest fejlesztettek a gyógyszeriparban [31], [32]. Ebben a vizsgálatban azt találtuk, hogy az MFC egyértelműen kifejezte CCR4 mRNS-t. CCR4 fehérjét is vizsgáltuk Western blot. CCR4 fejeztük be, vagy a gyomor rákos sejtek abban a részében, a cseplesz tejes folt mikrometasztázisok 12 óra, 7 nap és 14 nap után intraperitoneális injekció. CCL22 fejeztük elsősorban a sejtfelszínen, és vagy a citoplazmában a makrofágok. CCL22 jelentősen megnövekedett proliferációs képességét gyomorrák sejtek és koncentrációját CCL22 10-100 ng /ml jelentősen megnövekedett migráció a MFC. Makrofágok cseplesz tejfehér foltok nem csak citotoxikus tulajdonságokkal tumorsejtek ellen, de ők is termelnek CCL22, amely segít a gyomor rákos sejtek életben maradni, és növekszik a szilárd áttétek. Az MDC /CCL22-CCR4 tengely fontos szerepet játszik a gyomorrák sejtek szelektíven beszivárgó cseplesz tejfehér foltok és alkotnak szilárd áttétek. Katalógusa Következtetés
Gyomor szabad rákos sejtek (mag) keresse meg a mikrokörnyezet tartalmazó kedvező fizikai és kémiai tulajdonságai belül tejfehér foltok, ahol képesek a túlélésre és a nő, létrehozó sejt klaszter típusú áttétek. A CCL22-CCR4 tengely hozzájárul ehhez a szelektív beszivárgás. Katalógusa Szerzők információk
Yi Zhang és Liang Cao szerepelnek, mint társ-szerzők először. Katalógusa nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás katalógusa A projekt által támogatott nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (Grant szám: 81101633), a Természettudományi Alapítvány Liaoning tartomány (Grant szám: 201202047), a Tudományos és Technológiai projekt Dalian (Grant száma: 2012E15SF142). katalógusa a szerzők eredeti benyújtott fájlok képek
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif A szerzők eredeti fájl 2. ábrán 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif A szerzők eredeti fájl 3. ábra 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif A szerzők eredeti fájl 4. ábra 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif A szerzők eredeti fájl 5. ábra 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif a szerzők eredeti fájl 6. ábra Érdekütközés Tanuld az összes szerzők kijelentik, hogy nem ellentétes érdekek. katalógusa

• Egyesület LEC és tnpA Helicobacter pylori gének gyomorrák egy brazil population
• Plazma mRNS expressziós a BRCA1 és a TS potenciális prediktív biomarkerek kemoterápia gyomor cancer