Роль оси CCL22-CCR4 в метастазировании клеток рака желудка в сальника белесые пятна

Роль оси CCL22-ccr4 в метастазирование рака желудка клеток в белесые пятна сальника
Аннотация
фон
Сальник является одним из первых участков для перитонеального метастазирования, поскольку он обладает белесые пятна, которые обеспечивают микросреду для раковых клеток легко мигрируют и растут в микрометастазов. В данном исследовании изучали роль оси CCL22-ccr4 в желудочном раковых клеток избирательно проникающих в молочно-белых пятен.
Методы
рака желудка MFC клетки, меченные DiI внутрибрюшинно вводили в штамм 615 мышей. Мыши были подвергнуты эвтаназии через определенные промежутки времени и Сальник был вырезан для иммуногистохимии. Эффекты CCL22 на пролиферацию и миграцию МФЦ оценивали с помощью МТТ и анализов транс ямами. RT-PCR и Вестерн-блот анализ мРНК обнаружен CCR4 и уровни экспрессии белка в МФЦ. Иммуногистохимия была использована для анализа CCL22 и экспрессию CCR4 в Млечном спотовых микрометастазов.
Результаты
Через две недели после внутрибрюшинного введения, Млечного площади пятен были полностью заняты пролиферирующих клеток рака желудка и микрометастазов клеток кластерного типа наблюдались. В отличие от этого, раковые клетки образуются одиночные микрометастазов типа клеток не-молочными площадей пятен. МФЦ выразил ccr4, который был локализован на поверхности клеток и или в цитоплазме. Различные концентрации CCL22 значительно возросла способность пролиферации СКМП. Кроме того, концентрации CCL22 между 10-100 нг /мл значительно увеличили миграцию МФЦ. В пределах белесые пятна сальника, CCL22 был локализован в основном на поверхности клетки, и или в цитоплазме. В разделах сальниковой молочно-белых пятен микрометастаз, CCR4 был признан или в желудочном раковых клеток, составляющих клетки белесые пятна, клетки крови и эндотелиальные клетки крови.
Выводы
сальниковой белесые пятна являются благоприятной микросреды для перитонеального свободных клеток рака желудка мигрировать, выжить, и установить метастаз клеток кластерного типа. Ось CCL22-CCR4 способствует этому избирательного процесса инфильтрации.
Ключевые слова
Рак желудка пятна Молочно сальника перитонеального метастазирования CCL22 ccr4 Введение
перитонеальный метастаз является общей картины отдаленных метастазов при раке желудка. Многочисленные исследования подтвердили, что прогноз у больных раком желудка с метастазами в брюшную беден, даже у тех, у пациентов, получавших радикальной операции [1]. Перитонеальный метастаз развивается из микрометастазов, происходящих из свободных перитонеальных клеток рака [2]. Поэтому, важно, чтобы понять характеристики и механизмы, участвующие в формировании перитонеальных микрометастазов. Такое понимание поможет в профилактике и рецидива перитонеальных метастазов, тем самым улучшая прогноз больных раком желудка.
Белесые пятна примитивные лимфоидной ткани в брюшной полости человека и животных, который существует в основном в большим сальником. В противоположность этому, относительно небольшое число белесые пятна встречаются в брыжейки и тазового дна, и никакие белесые пятна не встречаются в других областях брюшины [3]. Белесые пятна содержат многочисленные макрофаги и лимфоциты агрегирование и участвуют в зазоре частиц, бактерий и опухолевых клеток из брюшной полости, играет важную роль в брюшную обороны [4] - [6]. В частности, были обнаружены макрофаги сальника цитотоксичность против опухолевых клеток [7], [8]. Некоторые исследования показали, что белесые пятна сальника хорошо известные участки метастазов рака яичников, желудка и толстой кишки [9]. Раковые клетки селективно проникают в молочно-белых пятен на ранних стадиях распространения рака брюшины и найти микросреду, в которой они способны выживать, расти и образовывать твердые метастазы [10]. Это льготное вложение может быть объяснено наличием определенных особых характеристик молочно-белых пятен, в том числе более высокие уровни клеточных молекул адгезии и факторов роста, стимулирующими [11], [12]. Таким образом, в то время как белесые пятна имеют цитотоксическими свойствами по отношению к опухолевым клеткам и играют важную роль в брюшную обороны, они также обеспечивают сайты, где происходит распространение опухолевых клеток и микрометастазов.
Хемокины являются небольшие секретируемые белки подразделяются на четыре подсемейства на основе последовательности из законсервированный N-концевые остатки цистеина: CXC, CC, C и CX3C [13], [14]. Многие исследования доказали, что хемокины и рецепторы хемокинов каузально вовлечены в метастазирование рака [15] - [21]. Макрофагального происхождения хемокин MDC /CCL22 является одним из CC хемокинов, производимых макрофагами и CCR4 был идентифицирован как его специфическим рецептором [17] - [21], который также является функциональным рецептором для других CC хемокинов. Экспрессия рецепторов хемокинов, как известно, связаны с метастазами рака, такими как CXCR4, CCR7 и CCR10 при раке молочной железы [16] и CXCR5, CCR6, CCR7, и CCR4 в панкреатических, желудочных и рака простаты [22], [23] , Некоторые исследования показали, что окончательно CXCR4 и CXCL12 играют важную роль в метастазировании раковых клеток желудка в брюшную полость [23] - [25]
сальниковый белесые пятна включают в себя многочисленные макрофаги, но роль КМР /CCL22-. ось ccr4 в желудочном раковых клеток избирательно проникающих в молочно-белых пятен еще не идентифицированы. Поэтому мы исследовали экспрессию MDC /CCL22 и CCR4 в молочно-белых пятен микрометастаз, с целью создания нового метода лечения для профилактики перитонеальный метастаз, сосредоточив внимание на хемотаксис клеток рака желудка.
Материалы и методы
Опухоль клеток Линия и животных
Мышиные желудка, рак МФЦ, полученные из штамма 615 мышиной карциномы проксимального отдела желудка, были получены из центральной лаборатории филиал больницы Frist Далянь медицинского университета. МФЦ культивировали в среде RPMI-1640 (Gibco) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (Sigma) в инкубаторе с 5% CO <югу> 2 при 37 ° С. После того, как сливающиеся, клетки обрабатывали трипсином и промывали в среде D-Хэнкса. Приемлемая подсчет клеток проводили с использованием трипанового синего.
Шесть-недельных мышей штамма 615 были получены из Далянь медицинского университета Китая. Мышей содержали в стандартных лабораторных условиях и имели свободный доступ к стандартной лабораторной пище и воде. Протоколы исследований были одобрены Комитетом по исследованию животных в Далянь медицинского университета Китая в соответствии с национальными рекомендациями по формуле (разрешение номер: SYXK2008-0002). Были приняты все меры, чтобы свести к минимуму любую боль или дискомфорт. Собирали
Сканирующая электронная микроскопия
образцов сальниковый, фиксировали в течение ночи с 2,5% глутаральдегида в 0,1 М PIPES буфера (рН 6,9), промывают три раза в свежем виде труб буфера (рН 6.9), и фиксировали в течение 1,5 ч в 1% осмия в 0,1 М Трубы буфера (рН 6,9). Образцы промывают в дН <суб> 2O в три раза, а затем обезвоживали в возрастающих концентрациях этанола (50, 70, 90 и 100%). Образцы были критическую точку высушенных из жидкой двуокиси углерода, покрытие толщиной 3 нм с тетраоксидом плазменного нанесения покрытий, и наблюдали с Hitachi S-520 сканирующего электронного микроскопа.
Просвечивающей электронной микроскопии
полученной Шесть жира полосы сальника от трех использовали 615 мышей каждого пола. Полосы были погружены в раствор, содержащий фиксации 2% глутаральдегида в течение 2-х часов, а затем фиксировали в растворе, содержащем 2% тетроксид осмия и 1,5% сахарозы в 0,05 М фосфатном буфере в течение 2-х часов при температуре 4 ° С. Образцы дегидратируют в серии градуированных этанола. После подстановки ацетона для этанола, образцы были встроены в эпоксидных смол блоков. Ультратонкие срезы окрашивали уранилацетатом и цитратом свинца, и наблюдали с помощью просвечивающего электронного микроскопа (JEM-2000EX).
Крепление опухолевая клетка на сальнике
МФЦ клетки инкубировали в полной среде RPMI-1640 при концентрации 2 мг /л DiI (Sigma) в течение 60 мин при 37 ° С. Клетки промывали три раза сбалансированным солевым раствором Хэнкса. Скорость ячеек маркировка была 100% и 1 × 10 4 клетки вводили внутрибрюшинно. Мыши были подвергнуты эвтаназии на 4, 12, 36, 48, 72 и 120 часов, и 7, 10 и 14 дней после внутрибрюшинного введения. Сальник был вырезан и натянут на предметные стекла микроскопа для дальнейшей обработки.
Он и иммуногистохимическое окрашивание образцов
сальниковый были собраны, фиксированные в 4% -ный раствор формальдегида (рН 7,4) при 4 ° С в течение 24 ч, промывают три раза фосфатно-буферным раствором (рН 7,4) в течение 3-х часов, обезвожены в градуированных серии этаноле и заливали в парафин. Затем, 5 мкм последовательные срезы были обработаны для HE и иммунное окрашивание по deparaffinisation с ксилолом и регидратации с градуированными этанолом.
Увеличить экспрессию антигена в тканях, цитрат буферный раствор добавляли к образцам и они кипятили в микроволновой печи духовой шкаф. Образцы обрабатывали 3% -ным раствором перекиси водорода в течение 10 мин для подавления эндогенной активности пероксидазы и затем промывали фосфатно-солевым буфером (PBS). Для того, чтобы предотвратить неспецифические иммунные реакции, образцы обрабатывали с 3% нормальной козьей сывороткой в ​​течение 10 мин, и промывали PBS. Первичный кроличьи поликлональные антитела против мышиных CCL22 антител (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, США) и кроличьи антитела против мышиных CCR4 антитела (Abcam, Кембридж, Великобритания) разводили 1: 100 с использованием козьей сыворотки, и инкубируют при комнатной температуре в течение 1 час. После трех мин 2 промывок PBS, срезы инкубировали с биотинилированным козьим вторичным антителом в течение 30 мин (DAKO, Carpinteria, CA, США). После трех мин 2 промывок PBS, стрептавидин -horseradish пероксидаза (Dako) добавляли к секции в течение 30 мин, а затем еще на три 2 мин промывок PBS. Образцы были разработаны с 3,3'-диаминобензидина субстрат (Vector Laboratories, Берлингтон, Онтарио, Канада) в течение 1 мин и контрастно гематоксилином Майера. Слайды были обезвожены по стандартной методике и скреплено покровные. Отрицательный контроль был приготовлен по той же методике с использованием PBS вместо первичного антитела. Нормальные ткани желудка, использовали в качестве положительного контроля.
Иммуноцитохимию окрашивание ccr4
клеток рака желудка, высевали в камере предметные стекла, покрытые поли-L-лизин, позволяли закрепляться в течение 48 часов, а затем используется для иммуногистохимии. Клетки фиксировали 0,3% Н <к югу> 2O в метаноле в течение 60 мин при комнатной температуре <к югу> 2, промывают 4 раза в PBS, блокировали 3% БСА и permeabilised с PBS, содержащим 0,1% Тритон Х-100 в течение 60 мин при комнатной температуре. Антитело, ФИТЦ-конъюгированное антитело против мышиных CCR4 поликлональные антитела (1 мкг /мл, eBioscience), инкубировали в течение 60 мин при 37 ° С, промывают 4 раза и осмотрены под флуоресцентным микроскопом (BX-51 TR32000, Olympus).
иммунофлуоресцентного маркировка макрофагов в белесые пятна сальника
для иммуногистохимии сальнике фиксировали в формалине в течение 60 мин и промывают три раза фосфатным буферным солевым раствором. Сальник инкубировали в течение 60 мин при 37 ° С с FITC-конъюгированным антителом против мышиного F4 /80 мышиной макрофагальной маркеру (1 мкг /мл; BioLegend), трижды промывали в фосфатно-солевом буферном растворе и затем сушили на воздухе в темноте помещение в течение 12 часов. Иммуногистохимическое окрашивание непосредственно забитых и изображения были получены с помощью флуоресцентного микроскопа. (BX-51 TR32000, Olympus)
анализу обращенно транскрипции-ПЦР
Суммарную РНК экстрагировали и очищали из культивируемых МФЦ с использованием набора RNeasy Mini Kit (Qiagen, Милан, Италия). Экстракции включает стадию пищеварения ДНКазы I. Количество и качество РНК оценивали с помощью УФ-спектрофотометрии. РНК транскрибируется в кДНК с использованием системы синтеза первой цепи SuperScript (Invitrogen). ОТ-ПЦР проводили с SuperScript One-Step (Invitrogen). Праймеры, использованные были следующими: CCR4 смысловой праймер 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 антисмысловой праймер 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH, прямой праймер 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', и GAPDH обратный праймер 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
Вестерн-блот-анализ
клетки промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) и лизируют в радиоиммуноосажден анализе (RIPa) буфера для лизиса (150 мМ NaCl, 50 мМ Трис-HCl, 0,1% додецилсульфата натрия, 1% Нонидет Р-40, 1 мМ фенилметилсульфонилфторид). Лизаты осветляли центрифугированием (15000 оборотов в минуту в течение 5 мин) и концентрации белка определяли с использованием метода с применением бицинхониновой кислоты перед хранением при -80 ° С. Эквивалентные количества белка разделяли на SDS-электрофорез в полиакриламидном геле (PAGE) и переносили на поливинилидендифторидную мембран. Мембраны блокировали в 5% обезжиренном молоке в Трис-буферном солевом растворе с 0,1% твина 20 и инкубировали с первичным антителом в течение ночи при температуре 4 ° С. Иммунные комплексы детектируют с помощью системы усиленной хемилюминесценции (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Cell анализа пролиферации
МФЦ были посеяны в 96-луночные планшеты при плотности 1 × 10 4 клеток на лунку ( 200 мл), и инкубировали в полной среде в течение 24 часов. Среду заменяли не содержащей сыворотки среде, содержащей различные концентрации CCL22, с RPMI 1640, выступающей в качестве отрицательного контроля. После инкубации в течение 24 ч, добавляли 20 мкл МТТ реагента; добавляли (5 мг /мл Sigma-Aldrich Co.) и инкубируют в течение 4-х часов. Затем 100 мкл реагента для моющего средства добавляли, оставляют при комнатной температуре в темноте в течение 2-х часов и оптической плотности при 492 нм записанном. Анализ
миграции
миграции клеток Анализы проводили в камерах диаметром 6,4 мм с 8-мм поровые фильтры (Becton Dickinson Лабораторное оборудование, Franklin Lakes, NJ). МФЦ были размещены в верхней камере (100 клеток на лунку) в то время как нижняя камера была заполнена DMEM, содержащей различные концентрации CCL22 (0, 1, 10, и 100 нг /мл). Клетки инкубировали в течение 24 часов при температуре 37 ° С в 5% СО2. Клетки, которые не проходят через поры мембраны были удалены. Мигрировавших клеток фиксировали и окрашивали. Число клеток в нижней камере подсчитывали в 10 случайных полей (х200), и выражали как среднее число клеток в поле зрения. Данные были представлены как среднее из трех независимых экспериментов.
Результаты
морфологию белесые пятна
С помощью электронной микроскопии показало, что белесые пятна были в основном состоит из обильных макрофагов (Фигура 1А), с некоторыми лимфоцитами, нейтрофилами и различные стромальные клетки (Фигура 1В). На рисунке 1 просвечивающей и сканирующей электронной микроскопии сальниковой молочно-белых пятен. (А) С помощью электронной микроскопии показало, что клетка состав белесые пятна в основном состоит из обильных макрофагов (M). (B) Некоторые лимфоциты (L) и нейтрофилы (N) было также отмечено (увеличение, 4,000X). (С) в молочно-белых пятен областях, клетки поверхностный слой состоял из макрофагов, лимфоцитов и разрывных мезотелиальных клеток и были разделены межклеточные промежутки или поры. (D) В не млечного площади пятен, межклеточные промежутки или поры не наблюдалось (увеличение, 500x).
Сканирующая электронная микроскопия показала, что поверхность этих пятен молочно-белых был морфологически отличается от такового не-молочными площадей пятен из сальником. Клетки поверхностный слой состоял из макрофагов, лимфоцитов и разрывных мезотелиальных клеток, которые были разделены межклеточных промежутков или пор (Рисунок 1C). В не-молочными площадей пятен, межклеточные промежутки или поры не наблюдалось (рис 1D).
Иммунофлуоресценции и он для белесые пятна сальника
Весь большим сальником мышей 615 был ограничен каудально узким жировой ткани полоса (рисунок 2А), вдоль которых наблюдались клеточные агрегаты (зеленый), известный как молочно-белых пятен, (Фигура 2В). Кровеносные капилляры, артериолы и lymphocapillary сосуды были обнаружены в пределах Млечного площадей пятен (рис 2С). Рисунок 2 Морфология молочно-белых пятен. (А-В) большим сальником мышей 615 был граничит с узкой полосой жировой ткани (увеличение, 50Х), вдоль которых наблюдались клеточные агрегаты, известные как белесые пятна,. (C) капилляры и артериолы сосуды находятся в пределах Млечного площадей пятен (увеличение, 200X).
Visualisation опухолевых клеток на сальнике в ранние моменты времени
МФЦ начал придерживаться сальниковой белесые пятна на 4 часа после инъекции. Через 12 часов после инъекции, в частности, были МФЦ сосредоточены в молочно-белых пятен (рис 3А), в то время как не опухолевые клетки не были найдены в не-молочными спотовых районах сальником (рис 3B). Рисунок 3 желудочные раковые клетки придерживаться сальниковой молочными площадей пятен в различные моменты времени. (A-B) Изображение молочно-белых пятен макрофагов (зеленый) и большого количества DiI-МФЦ (красный) сосредоточены в молочно-белых пятен областях через 12 ч после внутрибрюшинной инъекции. (C-D) Через 72 часа количество DiI-МФЦ уменьшилось в молочно-белых пятен районах, а пролиферирующие опухолевые клетки в белесые пятна и наблюдали образование микрометастазов. Единичные опухолевые клетки были обнаружены в сальниковой без молочно-белых пятен областях. (Е-F), через две недели после внутрибрюшинного введения, млечный точки, подвергавшиеся были полностью заняты пролиферирующих клеток рака желудка и наблюдали клетка кластерного типа метастаз. Пролиферирующие скопления раковых клеток не наблюдалось в не-молочными площадей пятен и раковые клетки формируются единичные метастазы типа клеток. (Увеличение, × 200).
Через 72 часа, пролиферирующих опухолевых клеток и образование микрометастазов были отмечены в молочно-белых пятен областях (рис 3C). В противоположность этому, через 72 ч после инъекции, спорадические опухолевые клетки обнаружены в не-молочно-белых пятен областей, в то время как не клеточные кластеры не было обнаружено (рис 3D).
Через 2 недели после внутрибрюшинного введения, млечный точки, подвергавшиеся были полностью занятая пролиферирующих клеток рака желудка и метастазов клеток кластерного типа наблюдались (рис 3Е). В противоположность этому, кластеры пролиферирующих клеток рака не наблюдалось в не молочно-белых пятен областей и раковые клетки формируются одного типа клеток метастазирование (рис 3F). Выражение
CCR4 в желудочном раковых клеток
МФЦ четко выраженных мРНК CCR4 (рис 4А). Протеин экспрессия CCR4 также был осмотрен Вестерн-блоттинга (рис 4б). МФЦ выраженный CCR4 белок, который локализуется на клеточной поверхности и /или в цитоплазме (фиг.4С). Рисунок 4 Выражение CCR4 в клеток рака желудка. (A) МФЦ ярко выраженный CCR4 мРНК. (B) экспрессии белка в CCR4 также был осмотрен Вестерн-блоттинга. (C) МФК выразил CCR4 белка и его был локализован на поверхности клеток и /или в цитоплазме МФЦ.
Эффекты CCL22 на пролиферацию и вторжения в МФЦ
Эффекты CCL22 на пролиферацию МФЦ оценивали с помощью анализа МТТ. CCL22 значительно увеличило способность пролиферацию при различных концентрациях (1-100 нг /мл) по сравнению с контрольной группой (Р &ЛТ; 0,05) (рис 5А). Рисунок 5 Влияние CCL22 на пролиферацию и вторжения в МФЦ. (А) CCL22 значительно увеличило способность пролиферацию при различных концентрациях (1-100 нг /мл) по сравнению с контрольной группой (Р &ЛТ; 0,05). (БК) Концентрация CCL22 между 10-100 нг /мл значительно увеличена миграцию МФЦ, с оптимальным ответом длительность которого составляет 10 нг /мл (P ≪ 0,01).
Концентраци CCL22 между 10-100 нг /мл значительно Рост миграции МФЦ, с оптимальным ответом длительность которого составляет 10 нг /мл. (P &ЛТ; 0,05 по сравнению с только питательной среды) (рис 5B-C)
CCL22 и выражение CCR4 в сальниковой молочно-белых пятен микрометастаз
в белесые пятна сальника, CCL22 наблюдалось в основном на поверхности клетки, и или в цитоплазме клеток, составляющих (6А). В сальниковой молочными спотовых микрометастаз 12 часов, 7 дней и 14 дней после внутрибрюшинного введения, CCR4 наблюдалось или в желудочном раковых клеток, составляющих клетки молочного цвета пятна, мезотелиальной клетки, клетки крови и эндотелиальных клеток крови (рис 5B-D ). Рисунок 6 CCL22 и экспрессия CCR4 в сальниковой молочными спотовых микрометастазов. (А) В секции сальниковой белесые пятна, CCL22 был локализован в основном на поверхности клетки, и или в цитоплазме клеток, составляющих. (Б-Д) В секции сальниковой молочными пятна микрометастазов (через 12 ч после внутрибрюшинного введения), CCR4 был локализован на или в желудочном раковых клеток, соответствующими клетками молочного цвета пятна, мезотелиальных клеток, клеток крови и эндотелиальных клеток крови. (С) Через семь дней после внутрибрюшинного введения. (D) Через четырнадцать дней после внутрибрюшинного введения.
Обсуждение
Этиология перитонеального метастазирования при раке желудка еще предстоит выяснить. Выделение свободных раковых клеток от поражения, где первичная опухоль прорастает серозной считается происхождение перитонеального метастазирования [26]. Более ста лет прошло с тех пор Паже разработал теорию `семян и почвы» [27]. Он выдвинули гипотезу, что некоторые опухолевые клетки (семена) селективно колонизировать отдаленные органы (почву) с благоприятной средой, которая способствует выживанию опухолевых клеток. В этом исследовании мы обнаружили, что белесые пятна сальника были Благоприятные микросреды из-за их физико-химических свойств, для перитонеального свободных клеток рака желудка мигрировать, выживают, растут и образуют твердые метастазы.
Сканирующая электронная микроскопия показала, что поверхность из них белесые пятна был морфологически отличается от такового не-молочными точечных районах сальником. Клетки поверхностный слой состоял из макрофагов, лимфоцитов и разрывных мезотелиальных клеток и были разделены многими межклеточных промежутков или пор. Видные межклеточные щели или поры вызвали submesothelial соединительной ткани и клетки, которые будут подвергаться воздействию брюшную поверхность, которую предлагается представлять преимущественное расположение на адгезию опухолевых клеток.
Микрометастазов в настоящее время классифицируются в одноклеточных и кластером мелкоклеточный типы [28]. Настоящее исследование показало, другой тип метастазов опухолевых клеток в молочно-белых пятен по сравнению с не-молочными площадей пятен. Через две недели после внутрибрюшинного введения, млечный точки, подвергавшиеся были полностью заняты пролиферирующих клеток рака желудка, и желудочный раковые клетки образуются метастазы клеток кластерного типа. Тем не менее, пролиферирующие раковые клетки не были замечены в не-молочными площадей пятен на той же стадии, и раковые клетки формируются единичные метастазы типа клеток. Это явление можно объяснить многими кровеносными капиллярами и артериальных сосудов, присутствующих в сальниковой молочными площадей пятен, которые обеспечивают достаточный запас крови для роста клеток рака желудка.
Некоторые исследования показали, что процесс роста опухоли и метастазирование включает в себя множество клеток-клеток и клеток с внеклеточным матриксом, которые опосредуются молекул клеточной адгезии. Каждый шаг требует молекул клеточной адгезии и рецепторов [29]. Мезотелиальной клетки, выстилающие белесые пятна производят более высокие уровни молекул клеточной адгезии (т.е. межклеточной адгезии-1), чем не-молочными площадей пятен, тем самым способствуя повышенной адгезии [11], [12]. Роль хемокинов в Клетки рака желудка избирательно проникать в молочно-белых пятен еще не идентифицированы. Белесые пятна содержат многочисленные макрофаги, которые производят хемокин КМР /CCL22 [30]. CCL22 и его 'CCR4 рецептора участвуют в разнообразных патологий. CCL22 высоко выражается в поражении, созданных Т-клеток-опосредованных воспалительных заболеваний [29]. CCR4 был впервые сообщалось, преимущественно экспрессируется Th2-клетками, которые участвуют в гуморальном иммунитете и аллергических реакций [30]. CCL22 и CCR4 также играют важную роль в росте рака и метастазированию [17] - [21], таким образом, многие антагонисты рецепторов CCR4, а также анти-CCR4 антитела развиваются в фармацевтической промышленности [31], [32]. В этом исследовании мы обнаружили, что МФЦ четко выражены мРНК CCR4. CCR4 белок также был осмотрен Вестерн-блоттинга. Была выражена CCR4 или в желудочном раковых клеток в участке сальниковой молочными спотовых микрометастаз 12 часов, 7 дней и 14 дней после внутрибрюшинной инъекции. была выражена CCL22 главным образом, на поверхности клетки и, или в цитоплазме макрофагов. CCL22 значительно увеличилась способность пролиферативную клеток рака желудка, а также концентрации CCL22 между 10-100 нг /мл значительно увеличена миграцию МФЦ. Макрофаги в белесые пятна сальника не только имеют цитотоксическими свойствами против опухолевых клеток, но они также производят CCL22, который помогает Клетки рака желудка выживать и расти в твердых метастазов. Ось MDC /CCL22-CCR4 играет важную роль в желудочном раковых клеток избирательно проникать в молочно-белых пятен сальника и образуют твердые метастазы.
Заключение
Желудочный свободные раковые клетки (семена) найти микросреду, содержащий благоприятные физические и химические свойства в пределах белесые пятна, в которых они способны выживать и расти, устанавливая метастаз клеток кластерного типа. Ось CCL22-CCR4 способствует этому селективному инфильтрации. Информация
авторов
Yi Чжан Лян и Цао перечислены в качестве со-первых авторов.
Декларациях
Выражение признательности
Этот проект был поддержан Национальный фонд естественных наук Китая (номер гранта: 81101633), то фонд естественных наук провинции Ляонин (номер гранта: 201202047), проект по науке и технологиям Далянь (номер гранта: 2012E15SF142)
Авторы 'оригинальные файлы, представленные на. изображения
Ниже приведены ссылки на оригинальные файлы представленных авторов для изображений. 'Исходный файл для Рисунок 1 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif Авторского 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif авторов исходного файла для "исходного файла для фигурного 3 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif Авторского Рисунок 2 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif Авторского исходного файла для фигурного 4 исходного файла 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif Авторского на рисунке 5 Исходный файл 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif авторов для фигурного 6 конкурирующими интересами
Все авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

• Ассоциация LEC и tnpA хеликобактерной генов с раком желудка в бразильских population
• уровни экспрессии мРНК в плазме BRCA1 и TS в качестве потенциальных прогностических биомаркеров для химиотерапи…