De rol van de CCL22-CCR4 as in de metastase van maagkanker cellen in omental melkachtige spots

De rol van de CCL22-CCR4 as in de metastase van maagkanker cellen in omental melkachtige vlekken
Abstracte achtergrond
de omentum is één van de eerste locaties voor peritoneale metastasen omdat zij over melkachtige plekken die een micro kankercellen gemakkelijk migreren en groeien tot micrometastasen verschaffen. Deze studie onderzocht de rol van de CCL22-CCR4 as maagkanker cellen selectief infiltreren in melkachtige vlekken.
Methods
Maagkanker MFC cellen gekenmerkt met Dil werden intraperitoneaal geïnjecteerd in stam 615 muizen. De muizen werden geëuthanaseerd op bepaalde tijdstippen en de omentum werd uitgesneden voor immunohistochemie. De effecten van CCL22 op de proliferatie en migratie van MFC werden door MTT en trans-well assays. RT-PCR en Western-blotanalyse gedetecteerd CCR4 mRNA en proteïne expressieniveaus in MFCs. Immunohistochemie werd gebruikt om CCL22 en CCR4 expressie te analyseren in de melkachtige plek micrometastasen.
Resultaten
Twee weken na intraperitoneale injectie werden de melkachtige spot gebieden volledig bezet door woekerende maagkanker cellen en cel cluster-type micrometastasen werden waargenomen. Daarentegen kankercellen vormden één celtype micrometastasen in de niet-melkachtige spot gebieden. MFC uitgedrukt CCR4, die is gelokaliseerd op het celoppervlak of in het cytoplasma. Verschillende concentraties van CCL22 aanzienlijk toegenomen proliferatie vermogen MFC's. Bovendien concentraties CCL22 tussen 10-100 ng /ml sterk toegenomen migratie MFC's. Binnen omental melkachtige vlekken, CCL22 werd voornamelijk gelokaliseerd op het celoppervlak en of het cytoplasma. In delen van omental melkachtig spot micrometastasen werd CCR4 verantwoord op of bij maagkanker cellen, samenstellende cellen melkachtige vlekken, bloedcellen en endotheelcellen.
Conclusies
omental melkachtige vlekken zijn een sympathieke micro-omgeving voor peritoneale gratis maagkanker cellen migreren, overleven, en stellen cel cluster-type metastasen. De CCL22-CCR4 as draagt ​​bij aan deze selectieve infiltratie proces.
Sleutelwoorden
Maagkanker omental melkachtige spot peritoneale uitzaaiingen CCL22 CCR4 Inleiding
peritoneale metastase is een algemeen patroon van metastasen op afstand bij maagkanker. Talrijke studies hebben bevestigd dat de prognose van patiënten met maagkanker peritoneale metastasen slecht, ook bij patiënten behandeld met radicale chirurgie [1]. Peritoneale metastasen ontwikkelt zich van micrometastasen die afkomstig zijn uit vrije peritoneale cellen van kanker [2]. Daarom is het belangrijk om de kenmerken en mechanismen betrokken bij de vorming van peritoneale micrometastasen begrijpen. Dit inzicht zal helpen bij het voorkomen en herhaling van peritoneale metastasen, waardoor de prognose van maagkanker patiënten verbeteren.
Melkachtige vlekken zijn primitieve lymfoïde weefsels in de peritoneale holte van mensen en dieren, die bestaat hoofdzakelijk in het omentum majus. Daarentegen wordt relatief weinig melkachtige vlekken in het mesenterium en bekkenbodem en geen melkachtige vlekken zijn in andere gebieden van het peritoneum [3]. Melkachtige vlekken omvatten talrijke macrofagen en lymfocyten aggregaties en zijn betrokken bij de klaring van deeltjes, bacteriën en tumorcellen uit de buikholte, speelt een belangrijke rol bij peritoneale verdediging [4] - [6]. In het bijzonder werden omental macrofagen gevonden cytotoxisch tegen tumorcellen [7], [8]. Sommige studies hebben aangetoond dat omental melkachtige vlekken zijn bekende plaatsen van metastasen van carcinomen van de eierstokken, maag en colon [9]. Kankercellen selectief infiltreren in de melkachtige plekken in de vroege stadia van peritoneale kanker verspreiding en zoek een micro-omgeving waarin zij kunnen overleven, te groeien en vormen vaste metastasen [10]. Deze preferentiële hechting kan worden verklaard door het bestaan ​​van bepaalde bijzondere kenmerken melkachtige plaatsen, met inbegrip hogere cellulaire adhesiemoleculen en groeistimulerende factoren [11], [12]. Terwijl dus melkachtige vlekken zijn cytotoxische eigenschappen tegen tumorcellen en spelen een belangrijke rol in de verdediging peritoneale, zij ook plaatsen waar tumorcelproliferatie en micrometastasen optreden.
Chemokinen zijn kleine uitgescheiden eiwitten ingedeeld in vier subfamilies op basis van de sequentie van geconserveerde N-terminale cysteïneresten: CXC, CC, C en CX3C [13], [14]. Vele studies hebben aangetoond dat chemokinen en chemokinereceptoren causaal betrokken bij de metastase van kanker [15] - [21]. De macrofaag afgeleid chemokine MDC /CCL22 één van de CC-chemokinen geproduceerd door macrofagen en CCR4 werd geïdentificeerd als de specifieke receptor [17] - [21], die ook de functionele receptor voor andere CC-chemokinen. De expressie van chemokine receptoren die zijn geassocieerd met kanker uitzaaiingen, zoals CXCR4, CCR7 en CCR10 bij borstkanker [16] en CXCR5, CCR6, CCR7, en CCR4 in pancreas-, maag- en prostaatkanker [22], [23] . Sommige studies definitief aangetoond dat CXCR4 en CXCL12 spelen een belangrijke rol in metastase van maagkanker cellen in de peritoneale holte [23] - [25]
omentalis melkachtige vlekken omvatten talrijke macrofagen, maar de rol van de MDC /CCL22-. CCR4 as maagkanker cellen selectief infiltreren in melkachtige vlekken nog niet geïdentificeerd. We hebben daarom gekeken naar de expressie van MDC /CCL22 en CCR4 in melkachtig spot micrometastasen, met het oog op de oprichting van een nieuwe behandelmethode voor het voorkomen van peritoneale metastase door te focussen op de chemotaxis van maagkanker cellen.
Materialen en methoden
Tumor cel lijn en dieren
muizen maagkanker MFC's, afgeleid van de stam 615 muizen-carcinoom van de proximale maag, werden verkregen uit het centrale laboratorium van het Frist Affiliated Hospital van de Dalian Medische Universiteit. MFC's werden gekweekt in RPMI-1640 (Gibco) aangevuld met 10% foetaal runderserum (Sigma) in een incubator met 5% CO 2 bij 37 ° C. Eenmaal confluent werden de cellen getrypsiniseerd en gespoeld in D-Hanks media. Een levensvatbare celtelling werd uitgevoerd met behulp van trypan blauw uitsluiting.
Zes weken oude stam 615 muizen werden verkregen van de Dalian Medische Universiteit van China. De muizen werden onder standaard laboratoriumomstandigheden gehouden en hadden vrije toegang tot standaard laboratorium eten en water. Studie protocollen werden goedgekeurd door het Comité voor Animal Research van de Dalian Medische Universiteit van China volgens de nationale richtlijnen (Permit Number: SYXK2008-0002). Alle maatregelen zijn genomen om pijn of ongemak te minimaliseren.
Scanning elektronenmicroscopie
omental monsters werden verzameld, overnacht gefixeerd met 2,5% glutaaraldehyde in 0,1 M PIPES buffer (pH 6,9), drie keer gewassen in vers Pipes buffer (pH 6.9), en achteraf vastgesteld voor 1,5 uur in 1% osmiumtetroxide in 0,1 M Pipes buffer (pH 6,9). De monsters werden gewassen in dH 2O driemaal en vervolgens gedehydrateerd in toenemende concentraties ethanol (50, 70, 90 en 100%). Monsters werden kritisch-punt gedroogd uit vloeibaar kooldioxide, bekleed tot een dikte van 3 nm met osmium plasma coater, en waargenomen met een Hitachi S-520 rasterelektronenmicroscoop.
Transmissie elektronenmicroscopie
Zes omental vet banden verkregen van drie 615 muizen van elk geslacht werden gebruikt. De banden werden ondergedompeld in een fixatie-oplossing die 2% glutaaraldehyde gedurende 2 uur, vervolgens nagefixeerd in een oplossing die 2% osmiumtetroxide en 1,5% sucrose in een 0,05 M fosfaatbuffer gedurende 2 uur bij 4 ° C. De monsters werden gedehydrateerd in een gegradeerde reeks van ethanol. Na vervanging aceton ethanol, werden de monsters ingebed in epoxyhars blokken. Ultradunne secties werden gekleurd met uranyl acetaat en lood citraat en waargenomen met een transmissie-elektronenmicroscoop (JEM-2000EX).
Tumor cel gehechtheid aan het omentum
De MFC cellen werden in compleet RPMI-1640 in een concentratie van 2 mg /L Dil (Sigma) gedurende 60 min bij 37 ° C. De cellen werden driemaal gewassen met Hanks 'gebalanceerde zoutoplossing. De cel-labeling bedroeg 100% en 1 x 10 4 cellen werden intraperitoneaal geïnjecteerd. De muizen werden geëuthanaseerd op 4, 12, 36, 48, 72 en 120 uur en 7, 10 en 14 dagen na intraperitoneale injectie. Het omentum werd uitgesneden en gespannen op microscoopglaasjes voor verdere verwerking.
HE en immunohistochemische kleuring
omentalis werden verzameld, in een 4% formaldehyde-oplossing (pH 7,4) gedurende 24 uur gefixeerd bij 4 ° C, drie keer gespoeld met fosfaatgebufferde zoutoplossing (pH 7,4) gedurende 3 uur, gedehydrateerd in een gegradeerde reeks van ethanol en ingebed in paraffine. Vervolgens werden 5 pm dikke secties opeenvolgende bewerkt voor HE en immunokleuring door deparaffinisation met xyleen en rehydratatie met gegradeerde ethanol. Belgique Om de expressie van antigeen in weefsels citraatbuffer werd toegevoegd aan de monsters te vergroten en ze werden gekookt in een magnetron oven. De monsters werden behandeld met een 3% waterstofperoxide-oplossing 10 minuten tot de endogene peroxidase-activiteit te onderdrukken en vervolgens gespoeld met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). Om niet-specifieke immune reacties te voorkomen, werden de monsters behandeld met 3% normaal geit serum gedurende 10 min, en gespoeld met PBS. De primaire polyklonale konijn-antimuis CCL22 antilichaam (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) en konijn anti-muis CCR4-antilichaam (Abcam, Cambridge, UK) werden verdund 1: 100 met behulp geit serum en geïncubeerd bij kamertemperatuur gedurende 1 uur. Na drie 2 minuten wassen met PBS werden de secties geïncubeerd met een gebiotinyleerd geit secundair antilichaam gedurende 30 min (DAKO, Carpinteria, CA, USA). Na drie 2 minuten wassen met PBS, -horseradish streptavidine peroxidase (DAKO) werd toegevoegd aan het gedeelte voor 30 minuten, gevolgd door nog drie 2 minuten wassen met PBS. De monsters werden ontwikkeld met 3,3'-diaminobenzidine substraat (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Canada) gedurende 1 min en tegengekleurd met Mayer's haemotoxyline. De schijfjes werden gedehydrateerd volgens een standaardprocedure en verzegeld met dekglaasjes. De negatieve controle werd bereid volgens dezelfde werkwijze met PBS in plaats van het primaire antilichaam. Normale maag weefsels werden gebruikt als positieve controle.
Immunocytochemie kleuring van CCR4
Maagkanker cellen werden uitgeplaat in kamer objectglaasjes bekleed met poly-L-lysine, liet hechten gedurende 48 uur en vervolgens voor immunocytochemie. De cellen werden gefixeerd met 0,3% H 2O 2 in methanol gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur, 4 keer gewassen in PBS, geblokkeerd met 3% BSA en gepermeabiliseerd met PBS dat 0,1% Triton X-100 gedurende 60 min op kamertemperatuur. Het antilichaam FITC-geconjugeerd anti-muis CCR4 polyklonaal antilichaam (1 ug /ml, eBioscience), werd gedurende 60 minuten bij 37 ° C, 4 keer gewassen en onder een fluorescentiemicroscoop onderzocht (BX-51 TR32000, Olympus).
Immunofluorescente kenmerken van macrofagen in omental melkachtige vlekken
voor immunohistochemie werd het omentum gefixeerd in formaline gedurende 60 minuten en driemaal gewassen met fosfaatgebufferde zoutoplossing. Het omentum werd gedurende 60 min bij 37 ° C met een FITC-geconjugeerd anti-muis F4 /80 murine macrofaag marker (1 ug /ml; Biolegend), drie keer gewassen in fosfaat gebufferde zoutoplossing en vervolgens aan de lucht gedroogd in een donkere voor 12 uur. Immunohistochemische kleuring werd direct gescoord en beelden werden opgenomen met een fluorescentiemicroscoop. (BX-51 TR32000; Olympus)
reverse transcriptie-PCR analyse
Totaal RNA werd geëxtraheerd en gezuiverd uit gekweekte MFC's met behulp van een RNeasy Mini Kit (Qiagen, Milaan, Italië). De extractie omvatten een DNase I digestiestap. RNA kwantiteit en kwaliteit werd beoordeeld door UV spectrofotometrie. Het RNA werd getranscribeerd in cDNA met de SuperScript First-Strand Synthesis System (Invitrogen). RT-PCR werd uitgevoerd met SuperScript One-Step (Invitrogen). De gebruikte primers waren als volgt: CCR4 sense primer 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 antisense primer 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH voorwaartse primer 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 'en reverse primer 5'GAPDH-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
Western blotanalyse
cellen werden gewassen met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en gelyseerd in radio-immunoprecipitatie assay (RIPA) lysisbuffer (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 0,1% natriumdodecylsulfaat, 1% Nonidet P-40, 1 mM fenylmethylsulfonylfluoride). De lysaten werden geklaard door centrifugatie (15.000 rpm gedurende 5 min) en de eiwitconcentraties werden bepaald met behulp van de bicinchoninezuur-methode voor opslag bij -80 ° C. Equivalente hoeveelheden eiwit werden gescheiden op SDS-polyacrylamidegelelektroforese (PAGE) en overgebracht op polyvinylideen difluoride membranen. Membranen werden geblokkeerd in 5% vetvrije melk in Tris-gebufferde zoutoplossing met 0,1% Tween 20 en geïncubeerd met het primaire antilichaam overnacht bij 4 ° C. Immuuncomplexen werden vervolgens gedetecteerd met de versterkte chemiluminescentie (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Celproliferatie assay
MFC's werden uitgezet in 96-wells platen met een dichtheid van 1 x 10 4 cellen per putje ( 200 mL) en geïncubeerd in compleet medium gedurende 24 uur. Het medium werd vervangen met serumvrij medium dat verschillende concentraties CCL22, met RPMI 1640 dat dient als de negatieve controle. Na incubatie gedurende 24 uur, 20 pl MTT reagens, werd (5 mg /ml Sigma-Aldrich Co.) toegevoegd en gedurende 4 uur. Vervolgens werd 100 ui detergens reagens werd toegevoegd, op kamertemperatuur in het donker gedurende 2 uur en de absorptie bij 492 nm geregistreerd.
Migratie assay
Celmigratie werden uitgevoerd in 6,4 mm diameter kamers met 8-mm poriën filters (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ). MFC's werden in de bovenste kamer (100 cellen per putje), terwijl de onderste kamer werd gevuld met DMEM met diverse concentraties CCL22 (0, 1, 10 en 100 ng /ml). Cellen werden gedurende 24 uur bij 37 ° C in 5% CO2. De cellen die niet door het membraan poriën heeft passen verwijderd. Gemigreerd cellen werden gefixeerd en gekleurd. Celaantallen in de onderste kamer werden geteld in 10 willekeurige velden (× 200) en uitgedrukt als het gemiddelde aantal cellen per veld. De gegevens werden voorgesteld als het gemiddelde van drie onafhankelijke experimenten.
Resultaten
morfologie van de melkachtige vlekken
Elektronenmicroscopie gebleken dat de melkachtige vlekken grotendeels waren samengesteld uit overvloedige macrofagen (figuur 1A), met een aantal lymfocyten, neutrofielen en diverse stromacellen (Figuur 1B). Figuur 1 transmissie en scanning electron microscopie van omental melkachtige vlekken. (A) Elektronenmicroscopie gebleken dat de celsamenstelling van de melkachtige vlekken grotendeels uit overvloedige macrofagen (M). (B) Een aantal lymfocyten (L) en neutrofielen (N) werden ook opgemerkt (vergroting, 4,000X). (C) In de melkachtige vlek gebieden, de oppervlaktelaag bestond cellen van macrofagen, lymfocyten en discontinue mesotheelcellen en werden door intercellulaire openingen of poriën. (D) In ​​de niet-melkachtige spot gebieden intercellulaire openingen of poriën werden niet waargenomen (vergroting 500X).
Scanning elektronenmicroscopie toonde dat het oppervlak van deze melkachtige vlekken was morfologisch onderscheiden van die van de niet-melkachtige spot gebieden van het omentum. De oppervlaktelaag bestond cellen van macrofagen, lymfocyten en discontinue mesotheelcellen, die werden gescheiden door intercellulaire openingen of poriën (Figuur 1C). In de niet-melkachtige spot gebieden werden de intercellulaire openingen of poriën niet waargenomen (figuur 1D).
Immunofluorescentie en HE voor omental melkachtige vlekken
hele omentum majus van 615 muizen caudaal begrensd door een smalle vetweefsel streep (Figuur 2A), waarlangs celaggregaten (groen), bekend als melkachtige vlekken werden waargenomen (figuur 2B). Bloedvaten, slagaders en lymphocapillary schepen werden gevonden binnen de melkachtige spot gebieden (figuur 2C). Figuur 2 morfologie van de melkachtige vlekken. (A-B) Het omentum majus van 615 muizen begrensd door een smalle strook vetweefsel (vergroting 50X), waarlangs celaggregaten, bekend als melkachtige vlekken werden waargenomen. (C) van het bloed haarvaten en arteriole schepen zijn te vinden in de melkachtige spot gebieden (vergroting, 200X).
Visualisatie van tumorcellen op het omentum op vroege tijdstippen
MFC's begon zich te houden aan de omentale melkachtige vlekken op 4 uur na de injectie. Op 12 uur na injectie werden MFC's in hoge concentraties in de melkachtige vlekken (figuur 3A), terwijl er geen tumorcellen gevonden in de niet-melkachtige spot gebieden van het omentum (Figuur 3B). Figuur 3 Maagkanker cellen hechten aan de omentale melkachtige vlek gebieden op verschillende tijdstippen. (A-B) Beeld van melkachtige spot macrofagen (groen) en grote aantallen Dii-MFC's (rood) geconcentreerd in melkachtige spot gebieden 12 uur na intraperitoneale injectie. (C-D) na 72 uur, het aantal Dil-MFC afgenomen melkachtige spot gebieden, terwijl prolifererende tumorcellen in het melkachtige vlekken en de vorming van micrometastasen waargenomen. Sporadische tumorcellen werden gevonden in het omentale niet-melkachtige spot gebieden. (E-F) Twee weken na de intraperitoneale injectie, werd het melkachtige spot gebieden volledig omgezet in de prolifererende maagkanker cellen en de cel cluster-type metastase waargenomen. Prolifererende kankercel clusters werden niet waargenomen in de niet-melkachtige spot ruimtes kankercellen vormden één celtype metastasen. (Vergroting x 200).
Na 72 uur prolifererende tumorcellen en de vorming van micrometastasen werden genoteerd in de melkachtige spot gebieden (figuur 3C). Daarentegen, bij 72 uur na injectie werden sporadisch tumorcellen gevonden in de niet-melkachtige spot gebieden, terwijl geen celgroepen gedetecteerd (Figuur 3D).
2 weken na intraperitoneale injectie, de melkachtige vlek ruimtes waren volledig bezet door de prolifererende cellen en maagkanker celcluster type metastasen werden waargenomen (figuur 3E). Daarentegen werden prolifererende kankercel clusters niet waargenomen in de niet-melkachtige spot ruimtes kankercellen vormden één celtype metastase (Figuur 3F).
CCR4 expressie in maagkanker cellen
MFC's duidelijk tot uitdrukking CCR4 mRNA (Figuur 4A). Eiwit expressie van CCR4 werd ook onderzocht door Western blots (Figuur 4B). MFC CCR4 tot expressie gebracht eiwit dat gelokaliseerd op het celoppervlak en /of in het cytoplasma (Figuur 4C). Figuur 4 CCR4 expressie in maagkanker cellen. (A) MFC's duidelijk tot uitdrukking CCR4 mRNA. (B) Protein expressie van CCR4 werd ook onderzocht door Western blots. (C) MFC expressie CCR4 eiwit en is gelokaliseerd op het celoppervlak en /of in het cytoplasma van de MFC. Ondernemingen De effecten van CCL22 op de proliferatie en de invasie van MFC
De effecten van CCL22 op de proliferatie van MFC's werden beoordeeld door een MTT assay. CCL22 sterk toegenomen proliferatievermogen in verschillende concentraties (1-100 ng /ml) in vergelijking met de controlegroep (P < 0,05) (Figuur 5A). Figuur 5 Effecten van CCL22 op de proliferatie en invasie MFC's. (A) CCL22 sterk toegenomen proliferatievermogen in verschillende concentraties (1-100 ng /ml) vergeleken met de controlegroep (P < 0,05). (BC) Concentratie van CCL22 tussen 10-100 ng /ml significant toegenomen migratie MFC's, de optimale reactie wordt 10 ng /ml (P < 0,01).
Een concentratie CCL22 tussen 10-100 ng /ml significant toegenomen migratie MFC's, de optimale reactie wordt 10 ng /ml. (P < 0,05 vergeleken met medium alleen) (Figuur 5B-C)
CCL22 en CCR4 expressie in de omentale melkachtige plaatse micrometastasen
in de omental melkachtige vlekken, CCL22 werd voornamelijk gezien op het celoppervlak of in het cytoplasma van de samenstellende cellen (Figuur 6A). In de omentale melkachtige plaatse micrometastasen 12 uur, 7 dagen en 14 dagen na intraperitoneale injectie, werd CCR4 waargenomen op of in de gastrische kankercellen, samenstellende cellen van de melkachtige vlek, mesotheelcellen, bloedcellen en endotheelcellen (Figuur 5B-D ). Figuur 6 CCL22 en CCR4 uitdrukking in het omentale melkachtige spot micrometastasen. (A) in de sectie van de omentale melkachtige vlekken, CCL22 werd hoofdzakelijk gelokaliseerd op het celoppervlak of in het cytoplasma van de samenstellende cellen. (B-D) in de sectie van de omentale melkachtige vlek micrometastasen (12 uur na intraperitoneale injectie), CCR4 werd gelokaliseerd op of in de gastrische kankercellen, samenstellende cellen melkachtige vlek, mesotheelcellen, bloedcellen en endotheelcellen. (C) Zeven dagen na intraperitoneale injectie. (D) Veertien dagen na intraperitoneale injectie.
Discussie
De etiologie van peritoneale uitzaaiing in maagkanker nog worden opgehelderd. De afgifte van vrije kankercellen van een laesie Indien een primaire tumor binnenvalt de serosa wordt beschouwd als de oorzaak van peritoneale metastasen [26] zijn. Meer dan een eeuw is verstreken sinds de theorie van Paget 'zaad en bodem "[27] ontwikkeld. Hij verondersteld dat bepaalde tumorcellen (zaden) selectief koloniseren verre organen (bodem) met een gunstige omgeving die het overleven van tumorcellen vergemakkelijkt. In deze studie hebben we vastgesteld dat omental melkachtige vlekken waren prettige micromilieu vanwege hun fysische en chemische eigenschappen voor peritoneale vrij maagkanker cellen migreren overleven, te groeien en vormen vaste metastasen.
Scanning elektronenmicroscopie toonde dat het oppervlak van deze melkachtige vlekken was morfologisch onderscheiden van dat van de niet-melkachtige spot gebieden van het omentum. De oppervlaktelaag bestond cellen van macrofagen, lymfocyten en discontinue mesotheelcellen en werden gescheiden door vele intercellulaire openingen of poriën. De prominente intercellulaire openingen of poriën veroorzaakt de submesothelial bindweefsel en cellen worden blootgesteld aan het peritoneale oppervlak, dat wordt voorgesteld een bevoorrechte plaats voor tumorceladhesie vertegenwoordigen.
Micrometastasen worden momenteel ingedeeld in eencellige en kleincellige cluster soorten [28]. Deze studie vond een ander type tumorcel métastase in melkachtige vlekken vergeleken met de niet-melkachtige spot gebieden. Twee weken na de intraperitoneale injectie, werd het melkachtige spot gebieden volledig omgezet in de prolifererende cellen maagkanker en maagkanker cellen gevormd cell cluster-type metastasen. Echter, werden prolifererende kankercellen niet waargenomen in de niet-melkachtige spot gebieden in hetzelfde stadium en kankercellen vormden één celtype metastasen. Dit verschijnsel kan worden verklaard door de vele bloedvaten en slagaders in de omentale melkachtige spot gebieden, die voldoende bloedtoevoer voor de groei van maagkanker cellen.
Sommige studies hebben aangegeven dat het proces van tumorgroei en metastase omvat een verscheidenheid van cel-cel en cel-extracellulaire matrix interacties worden gemedieerd door celadhesiemoleculen. Elke stap vereist celadhesie moleculen en receptoren [29]. Mesotheelcellen voering melkachtige vlekken geven hogere niveaus van cellulaire adhesiemoleculen (d.w.z. intercellulaire adhesiemolecuul-1) dan niet-melkachtige spot gebieden en daardoor tot verbeterde hechting [11], [12]. De rol van chemokinen bij maagkanker cellen selectief infiltreren in de melkachtige vlekken nog niet geïdentificeerd. Melkachtige vlekken bestaan ​​uit een groot aantal macrofagen dat de chemokine MDC /CCL22 [30] te produceren. CCL22 en zijn 'receptor CCR4 zijn betrokken bij een breed scala van aandoeningen. CCL22 wordt sterk tot expressie gebracht in laesies die door T-cel gemedieerde ontstekingsziekten [29]. CCR4 werd voor het eerst preferentieel tot expressie worden gebracht door Th2-cellen, die betrokken zijn bij humorale immuniteit en allergische reacties [30]. [21], waardoor veel CCR4 receptorantagonisten en een anti-CCR4-antilichaam worden ontwikkeld in de farmaceutische industrie [31], [32] - CCL22 en CCR4 ook een belangrijke rol bij de groei en metastase van kanker [17] spelen. In deze studie hebben we vastgesteld dat de MFC's duidelijk tot uitdrukking CCR4 mRNA. CCR4 eiwit werd ook onderzocht door Western blots. CCR4 werd uitgedrukt op of in de gastrische kankercellen in het gedeelte van de omentale melkachtige plaatse micrometastasen 12 uur, 7 dagen en 14 dagen na intraperitoneale injectie. CCL22 werd hoofdzakelijk uitgedrukt op het celoppervlak of in het cytoplasma van de macrofagen. CCL22 sterk toegenomen proliferatievermogen van maagkanker cellen en CCL22 concentraties tussen 10-100 ng /ml significant toegenomen migratie MFC's. Macrofagen in omental melkachtige vlekken niet alleen cytotoxische eigenschappen tegen de tumorcellen, maar ze produceren ook CCL22, die helpt maagkanker cellen te overleven en te groeien tot vaste metastasen. De MDC /CCL22-CCR4 as speelt een belangrijke rol in de maag kankercellen op selectieve wijze infiltreren in omental melkachtige vlekken en vorm solide metastasen.
Conclusie
Gastric gratis kankercellen (zaden) te lokaliseren een micro-omgeving met gunstige fysische en chemische eigenschappen binnen melkachtige plekken waar ze in staat zijn om te overleven en te groeien, tot oprichting van cel cluster-type metastasen. De CCL22-CCR4 as draagt ​​bij aan deze selectieve infiltratie. Informatie
Authors '
Yi Zhang Liang en Cao zijn opgenomen als eerste co-auteurs.
Verklaringen
Dankwoord
Dit project werd gesteund door de National Natural Science Foundation of China (Grant nummer: 81.101.633), de Natural Science Foundation van de provincie Liaoning (Grant nummer: 201.202.047), het Science and Technology project van Dalian (Grant nummer: 2012E15SF142)
Authors 'originele bestanden voorgelegd. images
Hieronder staan ​​de links naar originele ingediende dossiers van de auteurs voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif Authors' 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif Auteurs originele bestand voor 'originele bestand voor figuur 3 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif Authors' figuur 2 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif Auteurs originele bestand voor figuur 4 originele bestand 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif Authors 'voor figuur 5 oorspronkelijke bestand 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif Authors 'voor figuur 6 concurrerende belangen Leer Alle auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.

• Vereniging van LEC en TNPA Helicobacter pylori genen met maagkanker in een Braziliaanse bevolking
• Plasma mRNA expressie niveaus van BRCA1 en TS als potentieel predictieve biomarkers voor chemotherapie bij maagkanker