Rooli CCL22-CCR4 akselia etäpesäkkeiden mahalaukun syövän solujen omental valkoisia täpliä

Rooli CCL22-CCR4 akselia etäpesäkkeiden mahalaukun syövän solujen omental valkoisia täpliä
Abstract
tausta
omentum on yksi ensimmäisistä sivustoja vatsakalvon etäpesäke, koska sillä on valkoisia täpliä, jotka tarjoavat mikroympäristön syövän solujen helposti siirtyä ja kasvaa micrometastases. Tässä tutkimuksessa selvitettiin roolia CCL22-CCR4 akseli mahalaukun syöpäsoluissa selektiivisesti päätymisen valkoisia täpliä. Tool Menetelmät
Mahasyöpää MFC solut leimattiin Dil ruiskutettiin vatsaonteloon kannan 615 hiiriin. Hiiret lopetettiin määrätyin väliajoin ja omentum irrotettiin immunohistokemiaa. Vaikutukset CCL22 proliferaatioon ja migraatio MFC arvioitiin MTT ja trans-hyvin määrityksiä. RT-PCR ja Western blot-analyysi havaittu CCR4 mRNA ja proteiini ekspressiotasot MFC. Immunohistokemiaa käytetään analysoida CCL22 ja CCR4 ilmaisun maitomaista paikalla mikrometastaa-.
Tulokset
Kahden viikon kuluttua vatsaonteloon, maitomaista spot alueet täysin miehitetty lisääntyvien mahasyövässä solujen ja klusteri-tyyppinen micrometastases havaittu. Sen sijaan, syövän solut muodostivat yhden solutyypin mikrometastaasien ei-maitomainen paikalla alueilla. MFC ilmaistuna CCR4, joka paikallistettiin solun pinnalla ja tai sytoplasmassa. Eri pitoisuuksia CCL22 huomattavasti leviämisen kykyä MFC. Lisäksi pitoisuudet CCL22 välillä 10-100 ng /ml lisäsi merkittävästi muuttoa MFC. Sisällä omental valkoisia täpliä, CCL22 paikallistettiin pääasiassa solun pinnalla ja tai sytoplasmassa. Sisällä osat omental maitomaista spot micrometastases, CCR4 kirjattiin tai mahalaukun syöpäsoluissa, osatekijöiden solut maitomainen paikkoja, verisolujen ja veren endoteelisolujen.
Johtopäätökset
Omental maitomaista täplät ovat miellyttävässä mikroympäristön vatsakalvon ilmaiseksi mahalaukun syöpäsoluja siirtyä, hengissä, ja vahvistaa soluklusterin-tyyppinen etäpesäkkeitä. CCL22-CCR4 akseli vaikuttaa tähän valikoiva tunkeutuminen prosessi.
Avainsanat
Mahasyöpää Omental maitomaista paikalla Peritoneaalisille etäpesäke CCL22 CCR4 Johdanto
Peritoneaalisille etäpesäke on yleinen malli kaukaisten metastaasien mahasyövässä. Lukuisat tutkimukset ovat vahvistaneet, että ennustetta mahasyöpäpotilaista vatsakalvon etäpesäkkeitä on huono, jopa niissä hoidetuilla potilailla radikaaleja [1]. Vatsakalvon etäpesäke kehittyy micrometastases peräisin vapailta vatsakalvon syöpäsolujen [2]. Siksi on tärkeää ymmärtää ominaisuudet ja mekanismit muodostumista vatsakalvon micrometastases. Tällainen ymmärrys auttaa estämään ja toistumisen vatsakalvon etäpesäkkeitä, mikä parantaa ennustetta mahasyövän potilaista.
Linnunradan täplät ovat alkeellisia imukudoksen vatsaontelossa ihmisten ja eläinten, joka on olemassa pääasiassa suurempi omentum. Sitä vastoin suhteellisen vähän maitomaista paikkoja löytyy suoliliepeessä ja lantionpohjan, eikä maitomaista paikkoja löytyy muilla vatsakalvon [3]. Milky täplät käsittävät lukuisia makrofagien ja lymfosyyttien aggregoinnit ja osallistuvat puhdistumaan hiukkasista, bakteerien ja syöpäsolujen vatsaontelossa, jolla on tärkeä rooli vatsakalvon puolustus [4] - [6]. Erityisesti, omental makrofageja havaittiin olevan sytotoksisia kasvainsoluja vastaan ​​[7], [8]. Jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että omental maitomaista täplät ovat tunnettuja sivustoja etäpesäkkeiden syöpäkasvainten munasarjat, vatsa ja paksusuolen [9]. Syöpäsolut selektiivisesti tunkeutuu maitomaista paikkoja alkuvaiheessa vatsakalvon syöpää levittämiseen ja paikallistaa mikroympäristön jossa he ovat selvinneet, kasvaa ja muodostavat kiinteitä etäpesäkkeitä [10]. Tällainen edullinen kiinnitys voidaan selittää että on tiettyjä erityispiirteitä maitomaista paikkoja, mukaan lukien korkeampi solun adheesiomolekyylien ja kasvua stimuloiva tekijät [11], [12]. Näin ollen, vaikka maitomainen täplät ovat sytotoksisia ominaisuuksia kasvainsoluja vastaan ​​ja niillä on tärkeä rooli vatsakalvon puolustukseen, ne tarjoavat myös paikkoihin, joissa kasvainsoluproliferaation ja mikrometastaasin esiintyä.
Kemokiinit ovat pieniä erittyviä proteiineja luokiteltu neljään subfamilies perustuu sekvenssin konservoitunut N-terminaalista kysteiinitähdettä: CXC, CC, C ja CX3C [13], [14]. Monet tutkimukset ovat osoittaneet, että kemokiinien ja kemokiinin reseptorit ovat kausaalisesti mukana etäpesäke syövän [15] - [21]. Makrofagi-johdettu kemokiini MDC /CCL22 on yksi CC-kemokiinien on tuotettu makrofagien ja CCR4 tunnistettiin sen spesifisen reseptorin [17] - [21], joka on myös toiminnallinen reseptorin muiden CC-kemokiinien. Ilmaisu kemokiinireseptoreiden tiedetään liittyvän syöpään etäpesäkkeitä, kuten CXCR4, CCR7- ja CCR10: n rintasyövässä [16] ja CXCR5, CCR6, CCR7, ja CCR4 haiman, mahalaukun ja eturauhasen syöpiä [22], [23] . Joissakin tutkimuksissa lopullisesti osoitettu, että CXCR4 ja CXCL12 tärkeä rooli etäpesäkkeiden mahasyövän solujen vatsaonteloon [23] - [25].
Omental valkoisia täpliä käsittää lukuisia makrofageja, mutta rooli MDC /CCL22- CCR4 akseli mahalaukun syöpäsoluissa selektiivisesti päätymisen valkoisia täpliä ei ole vielä tunnistettu. Siksi tarkasteltiin ilmentymisen MDC /CCL22 ja CCR4 sameat paikalla micrometastases, jonka tavoitteena on luoda uusi hoitomuoto estämiseksi vatsakalvon etäpesäke keskittymällä kemotaksista mahalaukun syöpäsoluja.
Materiaalit ja menetelmät
Syöpäsolujen line ja eläimet
hiiren mahasyövän MFC, johdettu kannasta 615 hiiren syöpä proksimaalisen vatsa, saatiin keskeinen laboratorio Frist Affiliated sairaala Dalian Medical University. MFC viljeltiin RPMI-1640 (Gibco), jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia (Sigma) inkubaattorissa 5% CO 2 37 ° C: ssa. Kun konfluentteja soluja trypsinoitiin ja huuhdeltiin D-Hanksin media. Toimiva solujen määrä suoritettiin käyttäen trypaanisinieksluusiolla.
Kuuden viikon ikäisiä kannan 615 hiiret saatiin Dalian Medical University of China. Hiiriä pidettiin normaaleissa laboratorio-olosuhteissa ja niillä oli vapaa pääsy standardia laboratorio- ruokaa ja vettä. Tutkimus pöytäkirjat hyväksyttiin komitean Eläinten Research Dalian Medical University of China mukaisesti kansallisten ohjeiden (Luvan numero: SYXK2008-0002). Kaikki toimenpiteet toteutettiin minimoimaan kipua tai epämukavuutta.
Pyyhkäisyelektronimikrosko-
Omental kerättiin, kiinteä yön yli 2,5% glutaraldehydillä 0,1 M PIPES-puskurissa (pH 6,9), pestiin kolme kertaa tuoreessa Pipes puskuri (pH 6.9), ja post-kiinteä 1,5 tuntia 1% osmiumtetroksidin 0,1 M Pipes puskuri (pH 6,9). Näytteet pestiin dH 2O kolme kertaa ja sitten kuivattu kasvavia pitoisuuksia etanolia (50, 70, 90 ja 100%). Näytteet olivat kriittinen piste-kuivataan nestemäistä hiilidioksidia, pinnoitetaan paksuus 3 nm ja osmium plasma päällystys- ja havaitaan Hitachi S-520 pyyhkäisyelektronimikroskoopilla.
Transmissioelektronimikroskopia
Kuusi omental rasvaa bändejä saatu kolmesta 615 hiiristä kummankin sukupuolen käytettiin. Taajuusalueiden upotettiin kiinnitys, joka sisälsi 2% glutaraldehydiä 2 tunnin ajan, sitten post-kiinteä liuos, joka sisälsi 2% osmiumtetroksidilla ja 1,5% sakkaroosia 0,05 M fosfaattipuskuria 2 tunnin ajan 4 ° C: ssa. Näytteet dehydratoidaan luokiteltujen sarjojen etanolia. Sen jälkeen korvaamalla asetoni etanolille, näytteet upotettiin epoksihartsiin lohkoissa. Ultra-ohuet leikkeet värjättiin uranyyliasetaatilla ja lyijyn sitraatti ja havaittu transmissioelektronimikroskoopilla (JEM-2000EX).
Syöpäsolujen kiinnityksen omentum
MFC-soluja inkuboitiin täydellisessä RPMI-1640 pitoisuutena 2 mg /l Dil (Sigma) 60 min 37 ° C: ssa. Solut pestiin kolme kertaa Hanksin tasapainotetulla suolaliuoksella. Solu-merkintöjä oli 100% ja 1 x 10 4 solua injektoitiin vatsaonteloon. Hiiret lopetettiin 4, 12, 36, 48, 72 ja 120 tuntia, ja 7, 10 ja 14 päivää intraperitoneaalisen injektion jälkeen. Omentum leikattiin ja venytetään mikroskoopin jatkokäsittelyyn.
HE ja immunohistokemiallisella värjäyksellä
Omental kerättiin, kiinnitettiin 4% formaldehydiliuosta (pH 7,4) 4 ° C: ssa 24 tunnin ajan, huuhdeltiin kolme kertaa fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (pH 7,4), 3 tuntia, kuivattu luokiteltujen sarjojen etanolia, ja upotettiin parafiiniin. Sitten, 5 um: n paksuinen peräkkäistä leikettä käsiteltiin HE ja immunovärjäys mukaan deparaffinisation ksyleenillä ja nesteytys asteittaisella etanolilla.
Haluat lisätä ilmentymisen antigeenin kudoksissa, sitraattipuskurissa lisättiin näytteet ja ne keitettiin mikroaaltouunissa uuni. Näytteet käsiteltiin 3% vetyperoksidiliuosta 10 minuutin tukahduttaa endogeenisen peroksidaasin aktiivisuus ja sitten huuhdottiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS). Estämään ei-spesifinen immuunireaktioita, näytteet käsiteltiin 3% normaalia vuohen seerumia 10 min, ja huuhdeltiin PBS: lla. Ensisijainen polyklonaalista kanin anti-hiiri-CCL22-vasta-ainetta (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) ja kanin anti-hiiri-CCR4-vasta-aineen (Abcam, Cambridge, UK) laimennettiin 1: 100 käyttäen vuohen seerumia ja inkuboitiin huoneen lämpötilassa 1 tunnin. Kolmen 2 minuutin pesua PBS: llä, leikkeitä inkuboitiin biotinyloidun vuohen sekundäärisellä vasta-aineella 30 minuutin ajan (DAKO, Carpinteria, CA, USA). Kolmen 2 minuutin pesua PBS: llä, streptavidiini -piparjuuriperoksidaasi (DAKO) lisättiin kohdassa 30 min, jota seurasi toinen kolmen 2 min pesua PBS: llä. Näytteet kehitettiin 3,3'-diaminobentsidiini alustan (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Canada) 1 min ja vastavärjättiin Mayerin hematoksyliinillä. Levyt dehydratoitiin seuraavaa vakiomenettely ja sinetöity peitinlasit. Negatiivinen kontrolli valmistettiin samaa menettelyä käyttäen PBS: ää sen sijaan, että ensisijainen vasta-aine. Normaali mahan kudoksissa käytettiin positiivisena kontrollina.
Immunosytokemia värjäys CCR4
Mahasyöpää solut maljattiin kammiossa levyt on päällystetty poly-L-lysiiniä, annettiin kiinnittyä 48 tunnin ajan ja käytettiin sitten immunosytokemian. Solut kiinnitettiin 0,3% H 2O 2 metanolissa 60 min ajan huoneen lämpötilassa, pestiin 4 kertaa PBS: ssä, blokattiin 3% BSA: ta ja permeabilised PBS: llä, joka sisälsi 0,1% Triton X-100: ssa 60 minuuttia huoneen lämpötilassa. Vasta-aine, FITC-konjugoitu anti-hiiri-CCR4-polyklonaalisella vasta-aineella (1 ug /ml, eBioscience), inkuboitiin 60 min 37 ° C: ssa, pestiin 4 kertaa ja tarkastetaan fluoresenssimikroskoopilla (BX-51 TR32000, Olympus).
Immunofluoresoivat merkintöjä makrofagien omental valkoisia täpliä
immunohistokemiaa varten omentum kiinnitettiin formaliiniin 60 min ja pestiin kolme kertaa fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella. Omentum inkuboitiin 60 min 37 ° C: ssa FITC-konjugoidun anti-hiiri-F4 /80 hiiren makrofagimarkkeri (1 ug /ml; Biolegend), pestiin kolme kertaa fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella ja sitten kuivattiin ilmassa pimeässä tilaa 12 tuntia. Immunohistokemiallinen värjäys oli suoraan teki maalin ja kuvat otettiin käyttäen fluoresenssimikroskooppia (BX-51 TR32000, Olympus).
Käänteinen transkriptio-PCR-analyysi
Kokonais-RNA uutettiin ja puhdistettiin viljeltiin MFC käyttämällä RNeasy Mini Kit (Qiagen, Milano, Italia). Uutto sisältävät DNaasi I digestiovaiheen. RNA määrän ja laadun arvioitiin UV-spektrofotometrillä. RNA cDNA: ksi käyttäen SuperScript Ensimmäisen Strand Synthesis System (Invitrogen). RT-PCR suoritettiin SuperScript One-Step (Invitrogen). Käytetyt alukkeet olivat seuraavat: CCR4 sense-aluke 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', CCR4 antisense-aluke 5'-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH forward-aluketta 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', ja GAPDH reverse-aluke 5'-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
Western blot-analyysi
Solut pestiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ja hajotettiin radioimmunosaostuskokeella (RIPA) lyysipuskuria (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCI, 0,1% natriumdodekyylisulfaattia, 1% Nonidet P-40, 1 mM fenyylimetyylisulfonyylifluoridia). Lysaatit kirkastettiin sentrifugoimalla (15000 rpm, 5 min) ja proteiinikonsentraatiot määritettiin käyttämällä bikinkoniini- happoa menetelmällä ennen varastointia -80 ° C: ssa. Yhtä suuret määrät proteiinia erotettiin SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesilla (PAGE) ja siirrettiin polyvinylideenidifluoridi kalvoja. Membraanit blokattiin 5% rasvattomalla maitoa Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa, jossa oli 0,1% Tween 20 ja inkuboitiin primaarisen vasta-aineen yön yli 4 ° C: ssa. Immuunikompleksit detektoitiin sitten käyttäen tehostettua kemiluminesenssia (Amersham, Buckinghamshire, UK).
Soluproliferaatiomääritys
MFC ympättiin 96-kuoppalevyille tiheyteen 1 x 10 4 solua kuoppaa kohti ( 200 ml), ja niitä inkuboitiin täydellisessä elatusaineessa 24 tuntia. Väliaine korvattiin seerumittomalla alustalla, joka sisälsi erilaisia ​​pitoisuuksia CCL22, RPMI 1640, joka toimii negatiivisena kontrollina. Inkuboimisen jälkeen 24 tunnin, 20 ui MTT-reagenssia (5 mg /ml; Sigma-Aldrich) lisättiin ja inkuboitiin 4 tuntia. Sitten 100 ui pesuainetta reagenssia lisättiin, jätettiin huoneenlämpötilaan pimeään 2 tunnin ajan ja absorbanssi 492 nm: ssä tallennetaan.
Migration määrityksessä
solumigraation määritykset suoritettiin 6,4 mm kammiot 8 mm huokosten suodattimet (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ). MFC sijoitettiin ylempään kammioon (100 solua kuoppaa kohti), kun taas alempi kammio täytettiin DMEM, joka sisälsi eri pitoisuuksia CCL22 (0, 1, 10, ja 100 ng /ml). Soluja inkuboitiin 24 tunnin ajan 37 ° C: ssa 5% CO2: ta. Solut, jotka eivät läpäisseet kalvon huokosten läpi poistettiin. Siirtyneet solut kiinnitettiin ja värjättiin. Solujen määrä alemmassa kammiossa laskettiin 10 satunnaisessa aloilla (x 200) ja ilmaistiin keskimäärin solua näkökentän. Tiedot olivat edustettuina keskiarvo kolmen erillisen kokeen.
Tulokset
morfologiaa valkoisia täpliä
Elektronimikroskopoimalla paljasti, että maitomaista täplät koostuu pääosin runsas makrofagien (kuvio 1A), joidenkin lymfosyyttien, neutrofiilien ja eri stroomasolut (kuvio 1 B). Kuvio 1 Transmission ja pyyhkäisyelektronimikrosko- omental maitomaista paikkoja. (A) Elektronimikroskopoimalla paljasti, että solun koostumus maitomaista spotti koostuu pääosin runsas makrofageja (M). (B) Jotkin lymfosyyttien (L) ja neutrofiilien (N) havaittiin myös (suurennos, 4,000X). (C) In maitomaista paikalla alueilla, pintakerroksen solujen koostuivat makrofagien, lymfosyyttien ja epäjatkuvia mesoteelisolujen ja erotettiin solujen välistä aukkoja tai huokosia. (D) Ei-maitomainen paikalla alueilla, solujen välinen rakoja tai huokosia ei havaittu (suurennos, 500X).
Pyyhkäisyelektronimikrosko- paljasti, että pinta näiden valkoisia täpliä oli morfologisesti eroaa ei-maitomainen paikalla alueet ja omentum. Pintakerroksen, jotka koostuivat makrofagien, lymfosyyttien ja epäjatkuva mesoteelisolujen, jotka erotettiin solujen väliset aukot tai huokoset (kuvio 1C). Ei-maitomainen paikalla alueilla, solujen väliseen rakoja tai huokosia ei havaittu (kuvio 1 D).
Immunofluoresenssi ja HE omental valkoisia täpliä
Koko suurempi omentum on 615 hiirten reunustaa kaudaalisuun- kapealla rasvakudokseen raita (kuvio 2A), jota pitkin soluaggregaateiksi (vihreä), joka tunnetaan nimellä maitomainen paikkoja, havaittiin (kuvio 2B). Veri kapillaareja, arterioles ja lymphocapillary alukset tavataan maitomaista spot alueet (kuvio 2C). Kuvio 2 morfologiaa maitomaista paikkoja. (A-B) suurempi omentum on 615 hiirien reunustaa kapea rasvakudosta raita (suurennos, 50X), jota pitkin soluaggregaateiksi, tunnettu maitomainen paikkoja, havaittiin. (C) Veri kapillaareja ja arteriole aluksia tavataan maitomaista spot alueilla (suurennos, 200X).
Visualisointi syöpäsolujen on omentum varhaisessa ajankohtina
MFC alkoivat noudattaa omental maitomaista täplät 4 tuntia injektion. 12 tuntia injektion jälkeen MFC oli erityisen keskittynyt valkoisia täpliä (kuvio 3A), kun taas mitään kasvainsoluja löydettiin ei-maitomaista paikalla alueilla omentum (kuva 3B). Kuvio 3 Mahalaukun syöpäsolujen kiinni omental maitomaista paikalla alueilla eri ajankohtina. (A-B) Kuva maitomaista spot makrofageja (vihreä) ja lukuisten Dil-MFC (punainen) keskittynyt maitomaista spot-alueilla 12 tunnin kuluttua injektiona vatsaonteloon. (C-D) 72 tunnin kuluttua määrä Dil-MFC laski maitomaista spot-alueilla, kun taas lisääntyvien kasvainsolujen valkoisia täpliä ja muodostumista mikrometastaa- havaittiin. Satunnaista kasvainsoluja löydettiin omental ei-maitomainen paikalla alueilla. (E-F) Kahden viikon kuluttua intraperitoneaalisen injektion, maitomaista spot-alueet kokonaan käytössä lisääntyvien mahasyövän solujen ja solun klusteri-tyyppinen etäpesäkkeiden havaittiin. Lisääntyvät syöpäsolun klustereita ei havaittu ei-maitomainen paikalla alueilla ja syöpäsolujen muodostivat yksisoluisia-tyyppinen etäpesäkkeitä. (Suurennus, x 200).
72 tunnin kuluttua lisääntyvien kasvainsoluja ja muodostumista mikrometastaasien havaittiin maitomainen paikalla alueilla (kuvio 3C). Sen sijaan 72 tuntia injektion jälkeen, satunnaista kasvainsoluja löydettiin ei-maitomainen paikalla alueilla, kun taas mitään soluklusterien havaittu (kuvio 3D).
Klo 2 viikon kuluttua vatsaonteloon, maitomaista spot alueet olivat täysin viemä lisääntyvien mahasyövän solujen ja klusteri-tyyppinen etäpesäkkeitä havaittiin (kuvio 3E). Sen sijaan, jakautuvat syöpäsolun klustereita ei havaittu ei-maitomainen paikalla alueilla ja syöpäsolujen muodostivat yksisoluisia-tyyppinen etäpesäkkeitä (kuvio 3F).
CCR4 ilmentyminen mahasyövässä soluissa
MFC selvästi ilmaistu CCR4 mRNA (kuva 4A). Proteiinin ilmentyminen CCR4 tutkittiin myös Western blotteja (kuvio 4B). MFC ilmaistuna CCR4-proteiinia, joka lokalisoitu solun pintaan ja /tai sytoplasmassa (kuvio 4C). Kuva 4 CCR4 ilmaisun mahalaukun syöpäsoluja. (A) MFC selvästi ilmaistu CCR4 mRNA. (B) Proteiinin ilmentymistä CCR4 tutkittiin myös Western-blotit. (C) MFC ilmaistuna CCR4-proteiinia ja sen paikallistettiin solun pinnalla ja /tai sytoplasmassa MFC.
Vaikutukset CCL22 proliferaatioon ja hyökkäys MFC
vaikutukset CCL22 proliferaatioon MFC arvioitiin MTT-määritys. CCL22 huomattavasti leviämisen mahdollisuus eri pitoisuuksilla (1-100 ng /ml) verrattuna kontrolliryhmään (P < 0,05) (kuvio 5A). Kuva 5 vaikutukset CCL22 proliferaatioon ja hyökkäys MFC. (A) CCL22 huomattavasti leviämisen mahdollisuus eri pitoisuuksilla (1-100 ng /ml) verrattuna kontrolliryhmään (P < 0,05). (BC) pitoisuus CCL22 välillä 10-100 ng /ml merkittävästi lisääntynyt migraatio MFC, jossa optimaalinen vaste on 10 ng /ml (P < 0,01).
Konsentraatio CCL22 välillä 10-100 ng /ml merkittävästi lisääntynyt migraatio MFC, jossa optimaalinen vaste on 10 ng /ml (P < 0,05 verrattuna pelkästään väliainetta) (Kuva 5B-C).
CCL22 ja CCR4 ilmaisun omental maitomaista paikalla micrometastases
vuonna omental valkoisia täpliä, CCL22 havaittiin pääasiassa solun pinnalla ja tai sytoplasmassa muodostavien solujen (kuvio 6A). Vuonna omental maitomaista paikalla micrometastases 12 tuntia, 7 päivää ja 14 päivää intraperitoneaalisen injektion jälkeen, CCR4 havaittiin tai mahalaukun syöpäsolut, osatekijöiden soluja maitomaista paikalla, mesoteelisolujen, verisolujen ja veren endoteelisolujen (kuva 5B-D ). Kuva 6 CCL22 ja CCR4 ilmaisun omental maitomaista paikalla micrometastases. (A) osassa omental valkoisia täpliä, CCL22 paikallistettiin pääasiassa solun pinnalla ja tai sytoplasmassa muodostavien solujen. (B-D) Kun osassa omental maitomaista paikalla micrometastases (12 h intraperitoneaalisen injektion jälkeen), CCR4 paikannettiin tai mahalaukun syövän solut, osatekijöiden solut maitomaista spot, mesoteelisolujen, verisolujen ja veren endoteelisolujen. (C) Seitsemän päivää intraperitoneaalisen injektion jälkeen. (D) Neljäntoista vuorokauden kuluttua injektiona vatsaonteloon.
Keskustelu
etiologia vatsakalvon etäpesäkkeiden mahasyövän vielä selvittämättä. Vapauttamaan vapaa syöpäsolujen vaurion, jossa ensisijainen kasvain tunkeutuu herakalvojen pidetään alkuperä vatsakalvon etäpesäkkeiden [26]. Yli sata vuotta on kulunut Paget kehitti teorian `siementen ja maaperän" [27]. Levy pohtii, että tietyt kasvainsolut (siemenet) valikoivasti asuttaa kaukainen elimet (maaperä), jossa on suotuisa ympäristö, joka helpottaa selviytymistä syöpäsoluja. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että omental valkoisia täpliä oli miellyttävä mikroympäristöihin koska niiden fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet, vatsakalvon ilmaiseksi mahalaukun syöpäsolujen siirtyä, hengissä, kasvaa ja muodostavat kiinteitä etäpesäkkeitä.
Pyyhkäisyelektronimikrosko- paljasti, että pinta näiden valkoisia täpliä oli morfologisesti eroaa ei-maitomaista paikalla alueilla omentum. Pintakerros solut koostuivat makrofagien, lymfosyyttien ja epäjatkuvia mesoteelisolujen ja erotettiin monet solujen välistä aukkoja tai huokosia. Näkyvä solujen välinen aukkoja tai huokosia aiheuttanut submesothelial sidekudoksen ja solujen altistua vatsakalvon pintaan, jota on ehdotettu edustavan etuoikeutettu paikka kasvain soluadheesiota.
Micrometastases nykyisin luokitellaan yksisoluiset ja pienisoluinen klusterin tyypit [28]. Tässä tutkimuksessa löytyi erityyppinen tuumorisolujen etäpesäkkeiden valkoisia täpliä verrattuna ei-maitomainen paikalla alueilla. Kahden viikon kuluttua intraperitoneaalisen injektion, maitomaista spot-alueet kokonaan käytössä lisääntyvien mahasyövän soluja, ja mahalaukun syövän solut muodostivat solun klusteri-tyyppinen etäpesäkkeitä. Kuitenkin lisääntyvien syöpäsolut ei havaittu ei-maitomaista paikalla alueilla samassa vaiheessa, ja syöpäsolut muodostivat yksisoluisia-tyyppinen etäpesäkkeitä. Tämä ilmiö voidaan selittää monia veren kapillaareja ja valtimoiden alusten läsnä omental maitomainen paikalla alueita, jotka tarjoavat riittävän verenkierron kasvulle mahalaukun syöpäsoluja.
Jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että prosessi kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden liittyy erilaisia ​​solu- solu- ja solu-soluväliainevuorovaikutuksia, jotka välittävät solu- adheesiomolekyylien. Jokainen vaihe vaatii Soluadheesiomolekyylien ja reseptorit [29]. Mesoteelisolujen vuori valkoisia täpliä tuottaa suurempia solun adheesiomolekyylien (ts adheesiomolekyylien-1) kuin ei-maitomainen paikalla alueilla, mikä osaltaan parantaa tarttuvuutta [11], [12]. Rooli kemokiinien mahalaukun syöpäsoluissa selektiivisesti päätymisen valkoisia täpliä ei ole vielä tunnistettu. Valkoisia täpliä käsittävät useita makrofageja, jotka tuottavat kemokiini MDC /CCL22 [30]. CCL22 ja sen "reseptori CCR4 osallistuvat monipuolisia sairauksista. CCL22 ilmentyy erittäin vaurioita kirjoittaja T-soluvälitteinen tulehdussairauksien [29]. CCR4 ensin raportoitu ensisijaisesti ilmaistaan ​​Th2-solujen, jotka ovat mukana humoraalinen immuniteetti ja allergisia vasteita [30]. CCL22 ja CCR4 myös tärkeä rooli syövän kasvua ja etäpesäkkeiden [17] - [21], mikä monet CCR4 reseptoriantagonisteja sekä anti-CCR4-vasta kehitetään lääketeollisuuden [31], [32]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että MFC selvästi ilmaistu CCR4 mRNA. CCR4-proteiinia tutkittiin myös Western-blotit. CCR4 ilmentyi tai mahasyövän solut osassa omental maitomaista paikalla micrometastases 12 tuntia vuorokaudessa, 7 päivää ja 14 päivän kuluttua injektiona vatsaonteloon. CCL22 ilmentyi pääasiassa solun pinnalla ja tai sytoplasmassa makrofageissa. CCL22 huomattavasti leviämisen kyky mahalaukun syöpäsoluja, ja pitoisuudet CCL22 välillä 10-100 ng /ml lisäsi merkittävästi migraation MFC. Makrofaagien omental valkoisia täpliä ei vain ole sytotoksisia ominaisuuksia kasvainsoluja vastaan, mutta ne tuottavat myös CCL22, joka auttaa mahasyövän solujen hengissä ja kasvaa kunnollisia etäpesäkkeitä. MDC /CCL22-CCR4 akseli on tärkeä rooli mahalaukun syöpäsoluissa selektiivisesti päätymisen omental valkoisia täpliä ja muodostavat kiinteitä etäpesäkkeitä.
Päätelmä
Mahalaukun vapaa syöpäsoluja (siemenet) paikantaa mikroympäristön sisältävä suotuisa fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet sisällä maitomainen paikkoja, joissa he voivat selviytyä ja kasvaa perustamisesta soluklusterin-tyyppinen etäpesäkkeitä. CCL22-CCR4 akseli vaikuttaa tähän valikoiva tunkeutuminen.
Kirjoittajien tiedot
Yi Zhang ja Liang Cao luetellaan toisena ensin kirjoittajat.
Julistukset
Kiitokset
Hanke tukee National Natural Science Foundation of China (Grant numero: 81101633), Natural Science Foundation of Liaoningin maakunnassa (Grant numero: 201202047), tieteen ja teknologian hanke Dalian (Grant numero: 2012E15SF142).
Kirjoittajien alkuperäinen toimitettu tiedostot kuvien
Alla linkkejä kirjoittajien alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville. 12967_2014_267_MOESM1_ESM.gif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 12967_2014_267_MOESM2_ESM.gif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 2 12967_2014_267_MOESM3_ESM.gif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 3 12967_2014_267_MOESM4_ESM.gif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 4 12967_2014_267_MOESM5_ESM.gif Kirjoittajien alkuperäisen tiedoston luku 5 12967_2014_267_MOESM6_ESM.gif kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 6 kilpailevat edut
Kaikki kirjoittajat julistaa, että heillä ei ole kilpailevia intressejä.

• Association of LEC ja TnpA Helicobacter pylori geenejä mahalaukun syövän Brasilian population
• Plasman mRNA ekspressiotasot BRCA1 ja TS mahdollisina ennustavan biomarkkereita kemoterapiaa mahalaukun cancer