Le rôle de l'axe CCL22-CCR4 dans la métastase des cellules cancéreuses gastriques dans des taches laiteuses omentales

Le rôle de l'axe CCL22-CCR4 dans la métastase des cellules de cancer gastrique dans des taches laiteuses épiploïques
Résumé de l'arrière-plan
Le épiploon est l'un des premiers sites de métastases péritonéales parce qu'il possède des taches laiteuses qui fournissent un microenvironnement pour les cellules cancéreuses de migrer facilement et se transforment en micrométastases. Cette étude a examiné le rôle de l'axe CCL22-CCR4 dans les cellules cancéreuses gastriques infiltrant sélectivement dans des taches laiteuses.
Méthodes
cancer gastrique cellules MFC marquées avec Dil ont été injectés par voie intrapéritonéale dans la souche 615 souris. Les souris ont été euthanasiés à des intervalles déterminés et l'épiploon a été excisé pour l'immunohistochimie. Les effets de CCL22 sur la prolifération et la migration des MFCs ont été évalués par MTT et analyses trans puits. RT-PCR et analyse par transfert Western détectés CCR4 l'ARNm et les niveaux d'expression des protéines dans MFCs. L'immunohistochimie a été utilisé pour analyser les CCL22 et l'expression de CCR4 dans les micrométastases spot laiteux.: Résultats
Deux semaines après l'injection intrapéritonéale, les zones ponctuelles laiteux ont été entièrement occupés par la prolifération des cellules cancéreuses gastriques et micrométastases de type grappe de cellules ont été observées. En revanche, les cellules cancéreuses formées micrométastases de type cellulaire unique dans les zones ponctuelles non-laiteux. MFCs exprime CCR4, qui a été localisée à la surface cellulaire et dans le cytoplasme ou. Différentes concentrations de CCL22 ont augmenté de manière significative la capacité de prolifération des MFCs. En outre, les concentrations de CCL22 entre 10-100 ng /ml ont augmenté de manière significative la migration des MFCs. À l'intérieur des taches laiteuses omentales, CCL22 était localisée principalement à la surface cellulaire et dans le cytoplasme ou. Dans les sections de épiploïques micrométastases spot laiteux, CCR4 a été reconnu sur ou dans les cellules de cancer gastrique, les cellules constitutives laiteuse taches, des cellules sanguines et des cellules endothéliales sanguins. Les conclusions de taches laiteuses Omental sont un microenvironnement agréable pour les cellules cancéreuses gastriques libres péritonéale de migrer, de survivre, et d'établir des métastases de type grappe de cellules. L'axe CCL22-CCR4 contribue à ce processus d'infiltration sélective. Métastases péritonéales
Mots-clés
cancer gastrique Omental tache laiteuse métastase péritonéale CCL22 CCR4 introduction est un modèle commun de métastases à distance dans le cancer gastrique. De nombreuses études ont confirmé que le pronostic des patients atteints de cancer gastrique avec métastases péritonéales est faible, même chez les patients traités par chirurgie radicale [1]. Métastases péritonéales se développe à partir des micrométastases provenant de cellules péritonéales libres de cancer [2]. Par conséquent, il est important de comprendre les caractéristiques et les mécanismes impliqués dans la formation de micrométastases péritonéale. Une telle compréhension contribuera à la prévention et la récurrence des métastases péritonéales, améliorant ainsi le pronostic des patients atteints de cancer gastrique.
taches laiteuses sont les tissus lymphoïdes primitifs dans la cavité péritonéale des humains et des animaux, qui existe principalement dans le grand épiploon. En revanche, relativement peu de taches laiteuses se trouvent dans le mésentère et du plancher pelvien, et pas de taches laiteuses se trouvent dans d'autres régions du péritoine [3]. taches laiteuses comprennent de nombreux macrophages et lymphocytes agrégations et sont impliqués dans la clairance des particules, des bactéries et des cellules tumorales de la cavité péritonéale, jouant un rôle important dans la défense péritonéale [4] - [6]. En particulier, les macrophages omentales se sont révélés être cytotoxique contre les cellules tumorales [7], [8]. Certaines études ont démontré que des taches laiteuses épiploïques sont des sites bien connus des métastases de carcinomes des ovaires, de l'estomac et du côlon [9]. Les cellules cancéreuses infiltrent sélectivement dans les taches laiteuses dans les premiers stades de la diffusion du cancer péritonéal et de localiser un microenvironnement dans lequel ils sont capables de survivre, se développer et former des métastases solides [10]. Cet attachement préférentiel peut être expliquée par l'existence de certaines caractéristiques particulières des taches laiteuses, y compris des niveaux plus élevés de molécules d'adhésion cellulaire et des facteurs de croissance stimulant [11], [12]. Par conséquent, tandis que des taches laiteuses ont des propriétés cytotoxiques contre des cellules tumorales et jouent un rôle important dans la défense peritoneale, ils fournissent également des sites où la prolifération des cellules tumorales et des micrométastases se produisent.
Les chimiokines sont de petites protéines sécrétées classées en quatre sous-familles sur la base de la séquence d' les résidus de cysteine ​​conservés N-terminaux: CXC, CC, C et CX3C [13], [14]. De nombreuses études ont montré que les chimiokines et les récepteurs de chimiokines sont causalement impliqués dans la métastase du cancer [15] - [21]. Le macrophage dérivé de chimiokine MDC /CCL22 est l'un des chimiokines CC produite par les macrophages et CCR4 a été identifié comme récepteur spécifique [17] - [21], qui est également le récepteur fonctionnel pour d'autres chimiokines CC. L'expression des récepteurs de chimiokines est connue pour être associée à des métastases cancéreuses, telles que le CXCR4, CCR7 et CCR10 dans le cancer du sein [16] et CXCR5, CCR6, CCR7, et CCR4 dans les cancers du pancréas, de l'estomac et de la prostate [22], [23] . Certaines études ont démontré que définitivement CXCR4 et CXCL12 jouent un rôle important dans la métastase des cellules de cancer gastrique dans la cavité péritonéale [23] - [25]
taches laiteuses Omental comprennent de nombreux macrophages, mais le rôle du MDC /CCL22-. axe de CCR4 dans les cellules de cancer de l'estomac infiltrant de manière sélective dans des taches laiteuses n'a pas encore été identifiés. Nous avons donc examiné l'expression du MDC /CCL22 et CCR4 dans micrométastases spot laiteux, dans le but d'établir une nouvelle méthode de traitement pour la prévention de métastases péritonéales en se concentrant sur la chimiotaxie des cellules de cancer gastrique. Matériaux et méthodes
cellules tumorales murins MFCs de cancer gastrique de ligne et les animaux, les dérivés de la souche 615 murin de carcinome de l'estomac proximal, ont été obtenus à partir du laboratoire central de l'hôpital Frist affilié de l'Université médicale de Dalian. MFCs ont été cultivées dans un milieu RPMI-1640 (Gibco) supplémenté avec 10% de sérum de foetus de bovin (Sigma) dans un incubateur à 5% de CO 2 à 37 ° C. Une fois confluentes, les cellules ont été trypsinées et rincés dans les médias D-Hanks. Un nombre de cellules viables a été réalisée en utilisant l'exclusion du bleu trypan.
Six semaines d'âge souche 615 souris ont été obtenues à partir de l'université médicale de Dalian de Chine. Les souris ont été maintenues dans des conditions de laboratoire standard et avaient un accès libre à la nourriture de laboratoire standard et de l'eau. Les protocoles d'étude ont été approuvés par le Comité pour la recherche animale de l'université médicale de Dalian de Chine conformément aux directives nationales (Numéro de permis: SYXK2008-0002). Toutes les mesures ont été prises pour minimiser toute douleur ou d'inconfort. La microscopie électronique à balayage
échantillons Omental ont été collectés, fixés pendant une nuit avec 2,5% de glutaraldéhyde dans 0,1 M TUBES tampon (pH 6,9), lavé trois fois dans Pipes frais tampon (pH 6.9), et le tampon post-fixe pendant 1,5 heures à 1% tétroxyde d'osmium dans 0,1 M Tubes (pH 6,9). Les échantillons ont été lavés dans dH 2O trois fois, puis déshydraté dans des concentrations d'éthanol (50, 70, 90 et 100%) augmente. Les échantillons ont été microscopie critique du point séché à partir de dioxyde de carbone liquide, revêtue sur une épaisseur de 3 nm à l'aide d'un plasma coucheuse à l'osmium et observé avec un microscope Hitachi S-520 électronique à balayage.
Électronique à transmission
Six bandes de graisse omentale obtenus de trois 615 souris de chaque sexe ont été utilisés. Les bandes ont été immergées dans une solution de fixation contenant 2% de glutaraldéhyde pendant 2 heures, puis post-fixés dans une solution contenant 2% de tétroxyde d'osmium et 1,5% de saccharose dans un tampon phosphate 0,05 M pendant 2 heures à 4 ° C. Les échantillons ont été déshydratés dans une série graduée d'éthanol. Après son remplacement par de l'acétone pour l'éthanol, les spécimens ont été intégrés dans des blocs de résine époxy. des sections ultra-minces ont été colorées avec de l'acétate d'uranyle et du citrate de plomb et observées avec un microscope électronique à transmission (JEM-2000EX) Tumour Cell d'attachement. à l'épiploon
Les cellules SFM ont été incubées dans RPMI-1640 complet à une concentration de 2 mg /l Dil (Sigma) pendant 60 min à 37 ° C. Les cellules ont été lavées trois fois avec une solution saline équilibrée de Hanks. Le taux cellulaire étiquetage a été de 100% et 1 × 10 4 cellules ont été injectées par voie intrapéritonéale. Les souris ont été euthanasiés à 4, 12, 36, 48, 72 et 120 heures, et 7, 10 et 14 jours après l'injection intrapéritonéale. L'épiploon a été excisée et tendue sur des lames de microscope pour un traitement ultérieur.
HE et la coloration immunohistochimique
échantillons ont été prélevés Omental, fixés dans une solution de formaldéhyde à 4% (pH 7,4) à 4 ° C pendant 24 heures, on les rince à trois reprises avec une solution saline tamponnée au phosphate (pH 7,4) pendant 3 heures, déshydratée dans une série graduée d'éthanol, et inclus dans de la paraffine. Ensuite, 5 pm d'épaisseur sections consécutives ont été traitées pour HE et par immunocoloration deparaffinisation avec du xylène et réhydratation avec de l'éthanol gradué. Le plus pour augmenter l'expression de l'antigène dans les tissus, une solution tampon de citrate a été ajouté aux échantillons et on a fait bouillir dans un four micro-ondes four. Les échantillons ont été traités avec une solution de peroxyde d'hydrogène à 3% pendant 10 min pour supprimer l'activité de la peroxydase endogène, puis rincées avec du tampon phosphate salin (PBS). Pour éviter des réactions immunitaires non spécifiques, les échantillons ont été traités avec 3% de sérum de chèvre normal pendant 10 minutes, et on les rince avec du PBS. Le lapin polyclonal primaire anti-souris CCL22 anticorps (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) et de lapin anti-anticorps de souris CCR4 (Abcam, Cambridge, Royaume-Uni) ont été dilués 1: 100 à l'aide de sérum de chèvre et incubé à température ambiante pendant 1 heure. Après trois lavages 2 min avec du PBS, les coupes ont été incubées avec un anticorps secondaire de chèvre biotinylé pendant 30 min (DAKO, Carpinteria, CA, USA). Après trois lavages 2 min avec du PBS, la streptavidine peroxydase -horseradish (DAKO) a été ajouté à la section pendant 30 minutes, suivie par trois autres 2 lavages min avec du PBS. Les échantillons ont été développés avec 3,3'-diaminobenzidine substrat (Vector Laboratories, Burlington, Ontario, Canada) pendant 1 min et de contraste avec de l'hématoxyline de Mayer. Les lames ont été déshydratées en suivant une procédure standard et scellés avec des lamelles. Le contrôle négatif a été préparé par la même procédure en utilisant PBS au lieu de l'anticorps primaire. tissus de l'estomac normaux ont été utilisés comme contrôle positif. Le plus Immunocytochimie coloration des cellules cancéreuses gastriques de CCR4 ont été étalées dans des lames à chambres recouvertes de poly-L-lysine, on le laisse se fixer pendant 48 heures, puis utilisés pour immunocytochimie. Les cellules ont été fixées avec 0,3% de H 2 O 2 dans du methanol pendant 60 minutes à la température ambiante, on l'a lavé 4 fois dans du PBS, bloquées avec 3% de BSA et perméabilisées avec du PBS contenant 0,1% de Triton X-100 pendant 60 min à température ambiante. L'anticorps anti-souris polyclonal conjugué à FITC CCR4 (1 pg /ml, eBioscience) a été mis en incubation pendant 60 min à 37 ° C, on l'a lavé 4 fois et inspectée sous un microscope à fluorescence (BX-51 TR32000, Olympus).
marquage immunofluorescent des macrophages dans des taches laiteuses omentales
pour l'immunohistochimie, l'épiploon a été fixé dans de la formaline pendant 60 minutes et lavées trois fois avec une solution saline tamponnée au phosphate. L'épiploon a été mis en incubation pendant 60 min à 37 ° C avec un anti-souris F4 /80 murin marqueur conjugué à FITC macrophage (1 ug /ml; BioLegend), lavées trois fois dans du sérum physiologique et un tampon phosphate, puis séché à l'air dans un endroit sombre ambiante pendant 12 heures. La coloration immunohistochimique a été marqué directement et les images ont été capturées en utilisant un microscope à fluorescence. (BX-51 TR32000, Olympus)
inverse analyse PCR par transcription ARN total a été extrait de et purifié à partir MFCs cultivées en utilisant un kit RNeasy Mini (Qiagen, Milan, Italie). L'extraction comprend une étape de digestion par la DNase I. la quantité et la qualité de l'ARN a été déterminée par spectrophotométrie UV. L'ARN a été transcrit en ADNc en utilisant le système de synthèse du premier brin Superscript (Invitrogen). La RT-PCR a été réalisée avec SuperScript One-Step (Invitrogen). Les amorces utilisées étaient les suivantes: CCR4 amorce sens 5'-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', amorce antisens 5'CCR4-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH amorce sens 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', et GAPDH amorce inverse 5'- TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
analyse par transfert de Western
Les cellules ont été lavées avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et lysées dans un test de radio-immunoprécipitation (RIPA) de tampon de lyse (150 mM de NaCl, 50 mM de Tris-HCl, 0,1% de dodécylsulfate de sodium, 1% de Nonidet P-40, 1 mM de fluorure de phénylméthylsulfonyle). Les lysats ont été clarifiés par centrifugation (15000 rpm pendant 5 min) et les concentrations en protéines ont été déterminées en utilisant le procédé à l'acide bicinchoninique avant stockage à -80 ° C. Des quantités équivalentes de protéines ont été séparées sur SDS-polyacrylamide gel électrophorèse (PAGE) et transférées sur des membranes de difluorure de polyvinylidène. Membranes ont été bloquées dans du lait sans matières grasses de 5% dans une solution saline tamponnée au Tris avec 0,1% de Tween 20 et incubées avec l'anticorps primaire pendant une nuit à 4 ° C. Les complexes immuns sont ensuite détectés en utilisant le système de chimioluminescence amplifiée (Amersham, Buckinghamshire, Royaume-Uni). Les MFCs
essai de prolifération cellulaire de l'ont été ensemencées dans des plaques à 96 puits à une densité de 1 x 10 4 cellules par puits ( 200 ml) et incubées dans du milieu complet pendant 24 heures. Le milieu a été remplacé par un milieu exempt de sérum contenant différentes concentrations de CCL22, avec du RPMI 1640 servant de témoin négatif. Après incubation pendant 24 heures, 20 pi de réactif de MTT (5 mg /ml, Sigma-Aldrich) a été ajouté et mis à incuber pendant 4 heures. Ensuite, 100 pi de réactif de détergent a été ajouté, laissé à température ambiante dans l'obscurité pendant 2 heures et l'absorbance à 492 nm enregistrée. Test
Migration
essais de migration cellulaire ont été effectuées dans des chambres de 6,4 mm de diamètre avec 8 mm les filtres de pores (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ). MFCs ont été placés dans la chambre supérieure (100 cellules par puits), tandis que la chambre inférieure a été rempli avec du DMEM contenant diverses concentrations de CCL22 (0, 1, 10 et 100 ng /ml). Les cellules ont été mises en incubation pendant 24 heures à 37 ° C dans 5% de CO2. Les cellules qui ne passent pas à travers les pores de la membrane ont été éliminés. cellules migrées ont été fixées et colorées. Le nombre de cellules dans la chambre inférieure ont été comptées dans 10 champs aléatoires (× 200) et exprimé comme le nombre moyen de cellules par champ de vision. Les résultats des données étaient représentés comme la moyenne de trois expériences indépendantes.
Morphologie des taches laiteuses
microscopie électronique ont révélé que les taches laiteuses étaient en grande partie composées de macrophages abondantes (figure 1A), avec quelques lymphocytes, les neutrophiles et diverses cellules stromales (figure 1B). Figure 1 Transmission et de la microscopie électronique à balayage des taches laiteuses épiploïques. (A) La microscopie électronique a révélé que la composition cellulaire des taches laiteuses est composé principalement de macrophages abondants (M). (B) Certains lymphocytes (L) et de neutrophiles (N) ont également été notées (grossissement, 4,000X). (C) Dans les zones ponctuelles laiteuses, les cellules de la couche de surface est composée de macrophages, les lymphocytes et les cellules mésothéliales discontinues et ont été séparés par des interstices ou pores intercellulaires. (D) Dans le non-laiteux zones ponctuelles, les lacunes ou les pores intercellulaires ont pas été observées (grossissement, 500X).
Microscopie électronique à balayage a révélé que la surface de ces taches laiteuses était morphologiquement distincte de celle des zones ponctuelles non laiteux de l'épiploon. Les cellules de la couche de surface consistaient en des macrophages, les lymphocytes et les cellules mésothéliales discontinues, qui sont séparés par des interstices ou pores (figure 1c) intercellulaires. Dans les zones ponctuelles non laiteuses, les lacunes ou les pores intercellulaires ont pas été observées (figure 1D).
Immunofluorescence et HE pour les taches laiteuses épiploïques
Le tout grand épiploon des souris 615 a été bordée caudale par un tissu adipeux étroite bande (figure 2A), le long de laquelle les agrégats cellulaires (vert), connu sous le nom des taches laiteuses, ont été observées (figure 2B). capillaires sanguins, les artérioles et les vaisseaux lymphocapillary ont été trouvés dans les zones ponctuelles laiteux (figure 2C). Figure 2 Morphologie des taches laiteuses. (A-B) Le grand épiploon des souris 615 a été bordé par une bande étroite de tissu adipeux (grossissement, 50X), le long de laquelle les agrégats cellulaires, appelées taches laiteuses, ont été observées. (C) Les capillaires sanguins et les vaisseaux artériole se trouvent dans les zones de tache laiteux (grossissement 200X).
Visualisation des cellules tumorales sur le épiploon aux points de temps au début de MFCs de commencé à adhérer aux taches laiteuses épiploïques à 4 heures post-injection. A 12 heures après l'injection, MFCs ont été particulièrement concentrées dans les taches laiteuses (figure 3A), alors qu'aucune des cellules tumorales ont été trouvés dans les zones ponctuelles non laiteuses de l'épiploon (figure 3B). 3 cellules cancéreuses gastriques Figure adhèrent aux zones ponctuelles laiteux épiploïques à différents points de temps. (A-B) Image de macrophages laiteux au comptant (vert) et un grand nombre de Dil-MFCs (rouge) concentrée dans les zones ponctuelles laiteux 12 h après l'injection intrapéritonéale. (C-D) Après 72 h, le nombre de Dil MFCs a diminué dans les zones ponctuelles laiteux tandis que la prolifération des cellules tumorales dans les taches laiteuses et la formation de micrométastases ont été observées. les cellules tumorales sporadiques ont été trouvés dans les zones ponctuelles non-laiteux épiploïques. (E-F) Deux semaines après l'injection intrapéritonéale, les zones ponctuelles laiteuses ont été complètement occupée par les cellules cancéreuses prolifèrent gastriques et les métastases de type grappe de cellules a été observée. Proliférantes amas de cellules cancéreuses ne sont pas observés dans les zones ponctuelles non laiteuses et les cellules cancéreuses individuelles forment des métastases du type cellulaire. (Grossissement, × 200).
Après 72 heures, la prolifération des cellules tumorales et la formation de micrométastases ont été notés dans les zones ponctuelles laiteux (Figure 3C). En revanche, à 72 heures après l'injection, les cellules tumorales sporadiques ont été trouvés dans les zones ponctuelles non-laiteux, alors qu'aucun amas de cellules ont été détectés (figure 3D).
A 2 semaines après l'injection intrapéritonéale, les zones ponctuelles laiteux étaient complètement occupée par les cellules proliférantes de cancer gastrique et des métastases de type amas de cellules ont été observées (figure 3E). En revanche, les amas de cellules cancéreuses proliférant ne sont pas observés dans les zones ponctuelles non laiteuses et les cellules cancéreuses forment un seul type de cellule métastase (figure 3F). Expression
CCR4 dans les cellules cancéreuses gastriques
MFCs clairement exprimés CCR4 ARNm (Figure 4A). L'expression des protéines de CCR4 a également été examinée par Western blots (figure 4B). MFCs protéine exprimée CCR4, qui localisée à la surface cellulaire et /ou dans le cytoplasme (figure 4C). La figure 4 CCR4 expression dans les cellules cancéreuses gastriques. (A) MFCs clairement exprimées CCR4 ARNm. (B) L'expression des protéines de CCR4 a également été examiné par Western blots. (C) MFCs protéine exprimée CCR4 et son était localisée sur la surface cellulaire et /ou dans le cytoplasme des MFCs.
Les effets de CCL22 sur la prolifération et l'invasion des MFCs
Les effets de CCL22 sur la prolifération MFCs ont été évalués par un test MTT. CCL22 a augmenté de manière significative la capacité de prolifération à différentes concentrations (1-100 ng /ml) comparativement au groupe témoin (p < 0,05) (figure 5A). Figure 5 Les effets de CCL22 sur la prolifération et l'invasion de MFCs. (A) CCL22 a augmenté de manière significative la capacité de prolifération à différentes concentrations (1-100 ng /ml) par rapport au groupe témoin (p < 0,05). (BC) Concentration de CCL22 entre 10 à 100 ng /ml augmenté de façon significative la migration des MFCs avec la réponse optimale étant de 10 ng /ml (P < 0,01). Une concentration de
CCL22 entre 10-100 ng /ml significativement
CCL22 et d'expression de CCR4; (0,05 par rapport au milieu seul P <) (figure 5B-C) dans les épiploïques micrométastases spot laiteux
dans la migration accrue des MFCs, avec la réponse optimale étant de 10 ng /ml. omentales taches laiteuses, CCL22 a été observée principalement sur la surface des cellules et ou dans le cytoplasme des cellules constitutives (figure 6A). Dans les épiploïques micrométastases spot laiteux 12 heures, 7 jours et 14 jours après l'injection intrapéritonéale, CCR4 a été observée sur ou dans les cellules de cancer gastrique, les cellules constitutives de la tache laiteuse, les cellules mésothéliales, des cellules sanguines et des cellules endothéliales de sang (figure 5B-D ). Figure 6 CCL22 et d'expression de CCR4 dans les épiploïques micrométastases spot laiteux. (A) Dans la section des taches laiteuses omentales, CCL22 était localisée principalement à la surface cellulaire et ou dans le cytoplasme des cellules constituantes. (B-D) Dans la section des micrométastases spot laiteux épiploïques (12 h après l'injection intrapéritonéale), CCR4 a été localisé sur ou dans les cellules de cancer gastrique, les cellules constitutives de la tache laiteuse, les cellules mésothéliales, les cellules sanguines et des cellules endothéliales de sang. (C) Sept jours après l'injection intrapéritonéale. Rapport de (D) Quatorze jours après l'injection intrapéritonéale.
L'étiologie de métastases péritonéales dans le cancer gastrique reste à élucider. La libération des cellules cancéreuses libres d'une lésion où une tumeur primaire envahit la séreuse est considéré comme l'origine de métastases péritonéales [26]. Plus d'un siècle se soit écoulé depuis Paget a développé la théorie de 'semences et le sol »[27]. Il a émis l'hypothèse que certaines cellules tumorales (graines) colonisent sélectivement des organes distants (sol) avec un environnement favorable qui facilite la survie des cellules tumorales. Dans cette étude, nous avons constaté que des taches laiteuses épiploïques étaient microenvironnements agréables en raison de leurs propriétés physiques et chimiques, pour les cellules cancéreuses gastriques libres péritonéale à migrer, survivre, grandir et former des métastases solides.
Microscopie électronique à balayage a révélé que la surface de ces des taches laiteuses est morphologiquement distincte de celle des zones non ponctuelles laiteuses de l'épiploon. Les cellules de la couche de surface consistaient en des macrophages, les lymphocytes et les cellules mésothéliales discontinues et ont été séparés par de nombreuses lacunes ou pores intercellulaires. Les lacunes ou pores intercellulaires importants causés au tissu et les cellules conjonctifs submesothelial d'être exposés à la surface péritonéale, qui est proposé pour représenter un emplacement préférentiel pour l'adhérence des cellules tumorales.
Micrométastases sont actuellement classés en une seule cellule et groupe à petites cellules types [28]. La présente étude a révélé un type différent de métastases de cellules tumorales dans des taches laiteuses par rapport aux zones ponctuelles non lactée. Deux semaines après l'injection intrapéritonéale, les zones ponctuelles laiteuses ont été complètement occupée par les cellules proliférantes de cancer gastrique, et les cellules de cancer gastrique forment des métastases de type grappe de cellules. Cependant, les cellules cancéreuses à prolifération n'a été observée dans les zones ponctuelles non lactées au même stade, et les cellules cancéreuses individuelles forment des métastases du type cellulaire. Ce phénomène peut être expliqué par les nombreux capillaires sanguins et les vaisseaux artériels présents dans les zones ponctuelles laiteuses omentales, qui fournissent un apport sanguin suffisant pour la croissance des cellules cancéreuses gastriques.
Certaines études ont indiqué que le processus de la croissance tumorale et les métastases implique une variété de cellule à cellule et les interactions cellule-matrice extracellulaire qui sont médiées par des molécules d'adhésion cellulaire. Chaque étape nécessite des molécules d'adhérence cellulaire et de récepteurs [29]. Les cellules mésothéliales qui tapissent les taches laiteuses produisent des niveaux plus élevés de molécules d'adhésion cellulaire (à savoir, l'adhésion intercellulaire de la molécule-1) que les zones ponctuelles non laiteux, contribuant ainsi à une adhérence améliorée [11], [12]. Le rôle des chimiokines dans les cellules de cancer de l'estomac infiltrant sélectivement dans les taches laiteuses n'a pas encore été identifié. taches laiteuses comprennent de nombreux macrophages qui produisent la chimiokine MDC /CCL22 [30]. CCL22 et son 'CCR4 des récepteurs sont impliqués dans un large éventail de pathologies. les maladies inflammatoires CCL22 est fortement exprimé dans les lésions créées par les cellules T [29]. CCR4 a d'abord été rapporté être préférentiellement exprimé par les cellules Th2, qui sont impliquées dans l'immunité humorale et les réactions allergiques [30]. CCL22 et CCR4 jouent également un rôle important dans la croissance tumorale et les métastases [17] - [21], ainsi de nombreux antagonistes du récepteur CCR4, ainsi qu'un anticorps anti-CCR4 sont développés dans l'industrie pharmaceutique, [31], [32]. Dans cette étude, nous avons constaté que les MFCs clairement exprimées CCR4 ARNm. protéine CCR4 a également été examiné par Western blots. CCR4 a été exprimé sur ou dans les cellules de cancer gastrique dans la section des épiploïques micrométastases spot laiteux 12 heures, 7 jours et 14 jours après l'injection intrapéritonéale. CCL22 a été exprimé principalement sur la surface cellulaire et dans le cytoplasme ou des macrophages. CCL22 a augmenté de manière significative la capacité de prolifération des cellules du cancer de l'estomac, et les concentrations de CCL22 entre 10 à 100 ng /ml augmenté de façon significative la migration des MFCs. Macrophages dans des taches laiteuses omentales non seulement ont des propriétés cytotoxiques contre des cellules tumorales, mais ils produisent aussi CCL22, ce qui aide les cellules cancéreuses gastriques survivent et se développent dans des métastases solides. L'axe MDC /CCL22-CCR4 joue un rôle important dans les cellules cancéreuses gastriques infiltrant sélectivement dans des taches laiteuses épiploïques et former des métastases solides.
Conclusion
cellules cancéreuses libres gastriques (graines) localiser un microenvironnement contenant les propriétés physiques et chimiques favorables au sein taches laiteuses dans lequel ils sont capables de survivre et se développer, établir des métastases de type grappe de cellules. L'axe CCL22-CCR4 contribue à cette infiltration sélective. L'information de
Auteurs
Yi Zhang et Liang Cao sont répertoriés comme auteurs de co-première
Déclarations Remerciements.
Ce projet a été soutenu par le national Natural science Foundation de Chine (numéro Grant: 81101633), la Fondation des sciences naturelles de la province du Liaoning (numéro Grant: 201202047), le projet science et technologie de Dalian (numéro Grant: 2012E15SF142)
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Tous les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts.

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