Morebitno sodelovanje Nrf2 posredovano hem oksidaza-1 up-regulacije v zaščitni učinek zaviralcev pantoprazola protonske črpalke proti-indometacin povzroča želodčne škodo v rats

A morebitni vpletenosti Nrf2 posredovano heme oksigenaza-1 up-regulacije zaščitni učinek od protonske črpalke zaviralec pantoprazol proti-indometacin povzroča želodčne poškodbe pri podganah
Abstract
Ozadje
protonske črpalke je integralni membranski protein, ki je vseprisoten ATP zavezujoča kaseta (ABC), ki sodeluje v številnih procesih prenosa v vseh živih organizmih, med ki specializirana oblika črpalke, tako imenovani p
-Type protonske črpalke, obstaja v parietalnih celicah želodca. Čeprav so zaviralci protonske črpalke (PPI) pogosto predpisuje, da se prepreči nesteroidna protivnetna zdravila (NSAID), sprožene želodčne škodo, kisle supresivne ukrepi ne zadostujejo za razlago.
Metode
Da dokumentiranja učinke pantoprazola en IPC, na želodčni škodo NSAID-inducirane, in vitro
in vivo so bile izvedene
študije. Imunocitokemija, Western analiza blot, elektroforetsko premik mobilnost test in RT-PCR so bili izvedeni za oceno indukcijo heme oksidaza-1 (HO-1) z aktiviranjem Nrf2 v normalnih želodčne sluznice celice RGM-1 ali in vivo
želodčne tkiv podgan z indometacin in /ali pantoprazol.
Rezultati
pantoprazol aktivira Nrf2 z deaktivacijo Keap1, po katerem je bil izraz HO-1 na način, ki je odvisen od bistveno povečala v celicah RGM-1. Povečana vezavo dejavnost SO-DNA smo maksimalno opazili po 1 uro pri 300 um pantoprazola. Izraz HO-1, ki ga povzroča pantoprazol signifikantno povezana s povečano in vitro
tvorbo cevi (P
< 0,05) in angiogenskih faktorjev, vključno VEGF, bFGF in HIF-1 a. Indometacin izrazito povečala izraze TNF-a, IL-1SS, IL-8, NOX-1, ICAM-1 in VCAM, ker pantoprazol občutno zmanjšala izraze, indometacin povzroča teh vnetnih mediatorjev v soglasju s-pantoprazol povzroča HO-1 (P
< 0,05), kar je razvidno s inhibitor HO-1. In vivo
modelu, indometacin povzroča želodčne poškodbe lahko potrdijo vitro
-drawn rezultate, ki pantoprazol izredno zaščitena proti-indometacin povzroča želodčne škodo, v katerih cink protoporfirin (5 mg /kg, ip
) znatno odpravljena učinkovitost zaščite pantoprazol.
Zaključek
Ti rezultati kažejo, da Nrf2 posredovano HO-1 indukcija jev dala pomemben zaščitni učinek proti NSAID-induciranih želodčne poškodbe izven kisline supresivno ukrepov.
Ključne besede
hem oksidaza-1 zaviralec protonske črpalke, nesteroidna protivnetna zdravila, povzročene gastropatije Nrf2 Ozadje
imajo nesteroidna protivnetna zdravila ogromne količine recept večinoma temeljijo na naslednjih dveh prednosti, ena je povečanje bolnikih, starih pa zahteva nesteroidnega protivnetnega zdravila recept za lajšanje degenerativnih bolečine, spremembe povzročajo in drugi je dodatno preskušanje bodisi preprečevanje črevesnih polipov ali pobeg iz ishemičnih bolezni srca in ožilja [1, 2]. Vendar pa je velika Uporaba nesteroidnih protivnetnih zdravil omejen s težavno škodljivih učinkov, kot so želodčne erozije /razjedo, zapleteno krvavitev iz razjed in bolj resnih zapletov, ki nastanejo pri tankega in debelega črevesa. Ker je farmakološko delovanje nesteroidnih protivnetnih zdravil je preko zaviranja prostaglandinov (PG) sinteze preko zatiranje CIKLOOKSIGENAZA (COX) [3], Neprimjetan manjšanje gastroprotektivnih prostaglandinov E 2 (PGE 2) je odgovoren za te prebavilih (GI) škodljivi učinki. Čeprav je bil izum selektivne COX-2 inhibitor, koksibov, da se zagotovi GI varnosti predlaga kot strategijo reševanja, ta rešitev je treba tudi izboljšati. Čeprav so nesteroidna protivnetna zdravila uporabljajo kot močnimi anti-razjed zdravil, dodatne nepokrite mehanizmi nesteroidnih protivnetnih zdravil toksičnosti [4, 5], vodi nas, da razvijejo močnejše in varnejše agentov.
V tem času, povezanih z NSAID najboljša izbira za preprečevanje GI toksičnost je bodisi kombinacija NSAID in zaviralci protonske črpalke (PPI) ali izbira koksibi [6, 7]. Ker je bila zdravilna stopnja GI razjed med neprekinjeno uporabo nesteroidnih protivnetnih zdravil večji v PPI skupini od tipa histamin 2 antagonista (H2-RA) skupini, so raje zaviralci protonske črpalke, kot H2-RA za spopadanje s škodljivimi učinki nesteroidnih protivnetnih zdravil [8, 9 ]. Poleg temeljnih kisline supresivno ukrepov IPČ, je bilo odkritih več funkcij, ki so zmanjšanje pro-apoptotske signalizacijo, kislinsko neodvisna obnova bolj razširjeni in popravila poteh [10], zmanjšanje sluznice oksidativne poškodbe, zdravljenje spodbujanje ukrepanja, in Endoplazemski Retikulum stres lajšanju mehanizem [11-16]. Hahm et al.
[17-19] so tudi poročali, da IPČ prikazujejo morebitne dejavnosti, proti raku Therapeutics, ki temelji na selektivnem indukcijo apoptoze, anti-angiogenezo proti Helicobacter pylori
-associated rakotvornost, in neposredne anti-mutagenih ukrepov med tumorigeneze. Vendar pa mehanizmi, ki so odgovorni za zaščitnih učinkov IPČ v nesteroidnih protivnetnih zdravil, povzroča želodčne škodo je treba še določiti.
Hem oksidaza-1 (HO-1), inducibilni za prvi in ​​hitrosti, ki omejuje encima degradacije hem, je bil znano je, da zaščiti pred citotoksičnosti oksidativnega stresa in apoptotske celične smrti kot tudi vnetnega stanja [20, 21]. Temeljni zaščitni učinek HO-1 proti vnetjem so posredovani preko anti-oksidativne razgradnje heme, temveč tudi povezana s proizvodnjo anti-vnetnih mediatorjev, za katere redoksi odvisno povezan NF-E2-transkripcijski aktivator, faktor 2 (Nrf2) in njegova fosforilacija /aktiviranje in oksidacijo Kelch-kot-ECH povezujejo proteina 1 (Keap1) je sistematično predlagala [22-24]. Ker je izraz HO-1 induciran z antioksidativno, protivnetno in ishemičnih lajšanje odzivov v sedanji študiji, smo predpostavili, da se zaščitni učinek IPC proti NSAID-induciranih želodčne poškodbe lahko povezana s HO-1 in posledično angiogenezo izven zatiranje prirojeno kisline. Skupaj naši rezultati kažejo na nove mehanizme, ki IPČ sprožijo izražanje HO-1 z aktiviranjem Nrf2 /inaktivira Keap1 spremlja s plačilom ishemične spremembe in slabljenje vnetnih mediatorjev, s tem omogočiti zaščito pred-indometacin povzroča želodčne poškodbe.
metod
materiali in celičnih kultur
Indomethacin je bila kupljena od Sigma Aldrich (Saint Louis, MO) in pantoprazol je bila zagotovljena iz Amore Pacific Pharmaceutical Co (Seoul, Koreja). Protitelesa za beta-aktina, HO-1, α-tubulin, Keap1, Nrf2 in VEGF so bili vsi pridobljeni iz Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Celice normalno podgana želodčni sluznice RGM-1 so bili zagotovljeni prof Hirofumi Matsui, dr (Tsukuba Univ., Japonska), smo kultivirali v mediju, modificiranem Dulbeccovem Eagle je (DMEM), ki vsebuje 10% (v
/v
) fetalni goveji serum, 100 E /ml penicilina. Človeški centralni žilne endotelijske celice (HUVECs) smo gojili v M199 mediju (InnoPharma zaslon, Seoul, Koreja). Celice smo vzdrževali pri 37 ° C v navlaženi atmosferi, ki vsebuje 5% CO 2. Ustrezne količine celic RGM-1 ali HUVECs zasejali in inkubirali 24 ur, nato pa smo jih obdelali z navedeno odmerek pantoprazola ali indometacina in inkubirana za navedene čase. HUVECs so se preselili v 1% O 2 in 5% CO 2 hipoksija komoro in inkubirali 0-12 ur za in vitro
oblikovanja cev testu.
Electron spin resonance (ESR) spektroskopija in ROS generacija merjenje
različne koncentracije pantoprazola dodali k skupnim volumnom 200 ul vsebujejo 0,05 mM FeSO 4, 1 mM H 2O 2, 1 mM 5,5-dimethylpyrroline-N-oksid (DMPO, Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO) in 50 mM natrijevega fosfata pri pH 7,4 pri sobni temperaturi. Reakcije so se začeli z dodajanjem H 2o 2. Po inkubaciji 1 minuto, smo alikvote reakcij prenesejo kremena celice in spektru DMPO-OH preučila uporabo ESR spektrofotometra (JES-TE300, JEOL, Tokio, Japonska) pod naslednjimi pogoji: magnetno polje, 338,0 ± 5,0 mT; mikrovalovna moč, 4,95 mW; frekvenco, 9.421700 GHz; modulacija amplitude, 5 mT; sweep čas, 0,5 min; in časovna konstanta 0,03 s. Vsebina Cellular ROS smo izmerili z inkubacijo nadzora ali pantoprazol zdraviti RGM-1 celice z 10 mikrometrov H 2DCF-DA (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) za 30 minut. Fluorescence so merili s konfokalna laserski mikroskop (LSM710, Carl Zeiss, Oberkochen, Nemčija).
Western blot analizo PODJETJA
bile obdelane celice dvakrat sprali s PBS in lizirali v ledeno mrzlo razpad celic pufra (Cell signalizacija Technology) vseboval 1 mM fenilmetilsulfonil fluorid (PMSF, Sigma-Aldrich). Beljakovine v lizatih ločimo s SDS-PAGE in prenesli v poliviniliden fluorid (PVDF) membrane, ki smo jih inkubirali s primarnimi protitelesi, speremo, inkubiranih s peroksidazo konjugiranih sekundarnih protiteles, izperemo in nato vizualizirani z uporabo ojačanega luminescenco sistema (ECL) ( GE Healthcare, Buckinghamshire, UK).
Elektroforetskimi gel mobilnost shift test (EMSA)
jedrska in citoplazemska frakcije so pridobljeni z uporabo NE-nA jedrskih in citoplazme reagentov (Pierce, Rockford, IL), v skladu z navodili proizvajalca. Antioksidant odziv element (SE) oligonukleotid sonda, 5'-TTT TCT GCT GAG TCA AGG TCC G-3 ", in HIF-1α sonda oligonukleotid, 5'-TCT GTA CGT GAC CAC ACT CAC CTC-3 ', je označena z [ ,,,0],γ- 32P] ATP uporabo T4 polinukleotida kinaze (Promega, Madison, WI) in ločeno od nekorporativen [γ- 32P] ATP z gelsko filtracijo z uporabo nick spin kolono (GE Healthcare). Pred dodajanjem 32P-oligonukleotida (1x10 5 min), je 10 mikrogramov jedrske ekstrakta na ledu 15 minut v gel izmensko zavezujoč medpomnilnika. Za določanje zaporedja specifičnost interakcije DNA NF-κB smo dodali presežek neoznačeni oligonukleotidov. Po 20 minutah inkubacije pri sobni temperaturi dodamo 2 xl 0,1% Bromofenol modro in vzorci so bili elektroforezi skozi 6% ne-denaturacijsko STRANI pri 150 V v hladnem prostoru. Končno so geli posušimo in izpostavljene rentgenskim filmom (Kodak, Rochester, NY).
Imunocitokemija
Obdelane celice v komornih stekelca bile določene z 3,7% formaldehida 15 minut. Po spiranju smo celice blokiran 5% raztopine BSA, ki vsebuje 0,1% Tritona X-100 v PBS 1 uro pri sobni temperaturi in nato inkubirali s primarnim protitelesom (1: 100) za 12 ur pri 4 ° C. Celice smo nato sprali 3-krat, inkubiranih z sekundarnih protiteles (1: 300) za 1 h, nato pa s 4'-6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, 100 ng /ml) za 1 minuto pri sobni temperaturi. Po pranju 3-krat, so bile celice nameščena z Podaljšanje Gold antifade reagenta (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA). Fluorescence smo vizualizirali pod konfokalnim lasersko mikroskopom (LSM710, Carl Zeiss).
RNA izolacija in kvantitativno reverzno transkripcijo verižne reakcije s polimerazo (QRT-PCR)
Po zdravljenju je bila medijsko odstranimo s filtracijo in celice sprali z Dulbeccovem fosfatom -buffered soljo (DPBS) dvakrat. RiboEX (Gene Vse, Seul, Koreja) dodamo plošče, ki so jih nato inkubirali 10 min pri 4 ° C. RiboEX je poberemo in damo v 1,5 ml epruveto in dodamo kloroform in rahlo mešati. Po inkubaciji 10 minut pri ledu smo vzorce centrifugirali pri 10000 x g 30 minut. Supernatante smo ekstrahirali in zmešamo z izopropanolom in zmesi inkubirali pri 4 ° C 1 h. Po centrifugiranju pri 13000 g
30 min smo pelet sprali s 70% (v /v

) etanola. Po omogoča etanol popolnoma izhlapi, smo pelete raztopili v dietilen pirokarbonatom (DEPC) zdravljene vodo (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA). cDNK smo pripravili s pomočjo reverzne transkriptaze, ki izhaja iz virusa mišje Maloney levkemije (Promega, Madison, WI), v skladu z navodili proizvajalca. PCR smo izvedli več kot 30 ciklov: 94 ° C za 20 sekund, 58 ° C za 30 sekund in 72 ° C za 45 sekund. Oligonukleotidne primerje za PCR (tabela 1) smo dobili od Bioneer (Daejeon, Koreja). Vse QRT-PCR poskuse smo ponovili v treh izvodih in količinsko je bilo prikazano v povprečje ± SD.Table 1 Sekvenca PCR primerji
GAPDH
Forward 5'-GGT GCT GAG TAT GTC GTG GA -3 "
Povratne 5'-TTC AGC TCT GGG ATG ACC TT-3 '
HO-1
naprej 5'-GAG AGC ATG TCC CAG GAT TT-3'
Povratne 5'-GGT TCT GCT TGT TTC GCT CT -3 "
COX-2
Forward 5'-GAA ATG GCT GCA GAG TTG AA -3"
Povratne 5'-STS TCT AGT CTG GAG TGG GA -3 "
HIF-1α
Forward 5'-AAC AAA CAG AAT CTG TCC TC-3 '
Povratne 5'-GGT AAT GGA GAC ATT GCC AG-3'
VEGF
Forward 5'-CAA TGA TGA AGC SCT GGA GT-3 '
Povratne 5'-GAT TTC TTG CGC TTT CGT TT -3 "
PDGF
Forward 5'-AGG AAG CCA TTC CCG OAS TT-3'
Povratne 5'-CTA ACC TCA SCT GGA SCT CT -3 "
bFGF
Forward 5'-TAT GAA GGA AGA TGG ACG GC-3 '
Povratne 5'-AAC AGT ATG GCC TTC TGT CC -3"
IL-1β
Forward 5'-CAT TGT GGC TGT GGA GAA G-3 '
Povratne 5'-ATC ATC CCA CGA GTC ACA GA -3 "
IL-8
Forward 5'- OAS ACA GTG GCA GGG ATT CA-3 '
Povratne 5'-TTG GGG ACA CCC TTT AGC AT-3 "
TNF-a
Forward 5'-TAC TGA ACT TCG GGG TGA TT -3"
Povratne 5'-OAS SCT TCT CCC TTG AAG AG-3 '
ICAM-1
Forward 5'-TGT GCT TTG AGA ACT GTG GC-3'
Povratne 5'-GGT TCT GTC CAA CTT CTC AG -3 "
VCAM-1
naprej 5'-GAG ACA AAA OAS AAG TGG AAT-3 '
Povratne 5'-TAC AAG TGG TCC ACT TAT TTC -3"
NOX1
Forward 5'-GAG AAA TTC TCG GAA CTG CC-3 '
Povratne 5'-TGT TGG CTT CTA CTG TAG CG -3 "
in vitro
angiogenezo testa
tem testu smo izvedli z uporabo komercialne opreme v skladu z navodili proizvajalca (Millipore, Billerica, MA). Za hipoksične pogoje so ECMatrix in Vehikel varovalni mešani da trdno gel, ki smo ga potem prekrita v 96 dobro mikroplošče. Človeške endotelijske celice umbilikalne vene (HUVEC, 1,0 x 10 5 /ml) smo zasejali s krmilno, indometacin, indometacina plus pantoprazol, indometacina plus pantoprazol plus ZnPPIX inkubiramo pri 37 ° C 4 ure. Nastanek Tube opazili pod svetlobnim mikroskopom.
Indomethacin povzročeno želodčne modela poškodbe
je bilo skupno 48 podgan, kupljene od Charles River (Osaka, Japonska). Živali so ravna pooblaščenem objektu živali v skladu z Društvom za oceno in akreditacijo laboratorijske živali Care International (AAALAC International) smernic pod objektom imenom CACU (centra varstvu živali in uporabi) Lee Gil Ya rak in sladkorna bolezen Institute, GACHON Univerza po odobritvi Institutional etični presoji sveta. Živali so bile razdeljene v štiri skupine vsak sestavljeni iz 12 podgan in so bili sestradana 24 ur pred eksperimentiranjem, kot sledi; Vse podgane smo dajali z intraperitonealno injekcijo indometacina (10 mg /kg), da povzroči želodčne poškodbe, drugo skupino z intraperitonealno injekcijo 10 mg /kg pantoprazola, tretja skupina z intraperitonealno injekcijo 30 mg /kg pantoprazola in četrti skupina z intraperitonealno injekcijo 30 mg /kg pantoprazola in 5 mg /kg ZnPPIX da inhibira aktivnost HO-1. Živali so žrtvovali 16 ur po vsaki uprave. Želodci podgan smo odstranili in odpre vzdolž večje ukrivljenosti in nato speremo z ledeno hladnim fosfatnih puferskih raztopinah. Število bodisi erozije ali razjede so bile določene na podlagi fotografske povečave. Homogenate pridobljeni iz opraskan želodčne sluznice so bili nastanjeni v tekočem rezervoar dušika do testa.
Statistične analize
Rezultati so izraženi kot povprečje ± SD. Podatke smo analizirali z enosmerno ANOVA in statistična značilnost med skupinama smo določili s testom multipla območja Duncan je. Statistična značilnost je bila sprejeta v P
< 0,05.
Rezultati
pantoprazol povečala HO-1 izražanje skozi Nrf2 aktivacije
Na podlagi predhodne študije, smo ugotovili, pantoprazol pokazala najvišjo indukcijo HO-1 izražanja v RGM-1 celice med zaviralci protonske črpalke, lansoprazol, rabeprazol omeprazol in pantoprazol (podatki niso prikazani). Pantoprazol povečala ekspresijo HO-1 mRNA in proteina v odvisnosti od odmerka način (slika 1A) in imunocitokemijski Analiza je tudi pokazala, da je stopnja HO-1 znatno poveča pantoprazol obdelavo v citoplazmi celic RGM-1 v dozi -dependent način (slika 1B). Da bi razumeli mehanizme, ki podpirajo regulacijo navzgor HO-1 izražanja pantoprazol, smo pregledali njegove učinke na aktivaciji Nrf2, ki je pomemben transkripcijski faktor, ki posreduje na SO /EpRE usmerja izražanje antioksidativnih encimov. Ko smo merili stopnjo ekspresije keap1, represor Nrf2 v citoplazemski frakciji obdelamo s 300 uM pantoprazola v drugi časovni točki, bistveno zmanjšala izražanje Keap1 opazili pri 1 h (slika 2A), kar kaže, da lahko HO-1 prepisana po pantoprazol zdravljenju z aktivacijo Nrf2 in Keap1 deaktivacijo. Kot je prikazano na sliki 2A, jedrska co-lokalizacija je Nrf2 očitno v celicah RGM-1, ki so se zdravili z pantoprazol. Največja SO-vezavo aktivnost Nrf2 bila v 1 uri, kot tudi njegovega jedrskega lokalizacija s pantoprazola (slika 2B) induciranih povečala. Da bi ugotovili jedrske kopičenje Nrf2 smo opravili imunocitokemijski analizo z anti-Nrf2 protitelesa. Kot je prikazano na sliki 2C, smo Nrf2 prenesen v jedro s 300 uM pantoprazol zdravljenja. Ti rezultati dosledno kažejo, da bi lahko pantoprazol povečajo raven HO-1 preko transkripcijske aktivacije Nrf2 pri podganjih želodca epitelijskih celic. Slika 1 Pantoprazol inducirane ekspresije HO-1. (A), RT-PCR in Western blot za HO-1 ekspresijo po drugačnem odmerjanja pantoprazola, 30, 100 in 300 uM, oz. Te številke so predstavniki doseženih rezultatov v 3 neodvisnimi poskusi. (B) Konfokalni slikanje HO-1. Pantoprazol poveča izražanje HO-1 na način, ki je odvisen od odmerka v celicah normalno rat želodčni sluznici RGM-1.
Slika 2 pantoprazol večjo jedrsko translokacijo Nrf2 in citoplazemske keap1 izključitev, je privedlo do znatnega anti-oksidacijo. (A) Western blots za bodisi citosolno Keap1 ali jedrsko Nrf2 v različnem času v prisotnosti 300 uM pantoprazola. (B) Elektroforetskimi premik mobilnost test (EMSA) za SO-DNA vezavne aktivnosti. Znatno povečal DNA vezavo Nrf2 opazili 60 min po pantoprazol dajanju. (C) Konfokalni slikanje Nrf2 po drugačnem odmerjanju pantoprazola, 100 uM in 300 uM. (D) Electron spin resonance (ESR) za merjenje Fenton reakciji ustvari hidroksilne radikale. (E) Spremembe DCF-DA fluorescence po drugačnem odmerjanju pantoprazol, 30, 100 in 300 um. Pantoprazol znatno zmanjšale, H2O2-inducirano oksidativno fluorescence.
Ker biološki pomen HO-1 pantoprazol ima anti-oksidativne ukrepe v zvezi s HO-1 indukcijo. Meritev ESR je bil končni način za sledenje prostih radikalov generacijo pomočjo spin adukta, za katerega smo ustvarjeni hidroksilne radikale, ki uporabljajo DMPO kot priteznice pod Fenton reakciji. Kot je razvidno na sliki 2D, 3 mM pantoprazol deluje jasno lovilno delovanje DMPO-adukta ustvarjajo hidroksilne radikale. Ker je bila meritev ESR izvedeno v kemijske reakcije pogoj ne biološkega sistema in pantoprazol ni strokovno antioksidant, prav gotovo prispevala k Očistiti hidroksilne radikale, čeprav je relativno visoka koncentracija pantoprazola Očistiti reaktivne kisikove spojine. Te kemične rezultati ESR študije so bili dodatno potrjeni z biološkega testa, z merjenjem fluorescence DCF-DA, ki kaže, da je pantoprazol pokazali veliko DCF-DA zmanjšanje način odvisnosti od odmerka (P
< 0,05, slika 2E).
angiogenih ukrepi posledično do povzroča pantoprazol HO-1
IPČ povečala izraze VEGF mRNA in proteina v celicah RGM-1 (slika 3A). Da bi dokumentirala, ali se posamezni indukcija VEGF z zaviralci protonske črpalke, povezane z HO-1 indukcije, smo ponovili poskuse s samim PPI ali sočasnim zdravljenjem pantoprazola in cinka protopor (ZnPPIX) kot zaviralec HO-1. Kot rezultati, smo lahko ponovno potrditi ekspresijo VEGF s pantoprazola in primarnega sočasnem zdravljenju ZnPPIX inducirano jasno zmanjšala izražanje PPI-inducirane VEGF na način, odvisen od doze (slika 3B). Dalje, smo raziskovali spremembe reprezentativnih angiogenskih faktorjev, bFGF, PDGF in HIF-1 a in upoštevati te izraze, pomembne za pantoprazol-inducirane HO-1 na sliki 3C. Kot je bilo pričakovano, pantoprazol bistveno povečala te izraze več angiogenskih faktorjev. Prav tako so bile te indukcije v bFGF in PDGF znatno zmanjšalo s sočasnim zdravljenjem pantoprazola in ZnPPIX. Da bi preverili, ali so te indukcije angiogenih faktorja so bile po pantoprazol dejansko povezane z angiogenezo, in vitro
angiogenezo test smo naredili (slika 3D). Nastanek Tube se je znatno zmanjšalo s 500 uM indometacin v HUVECs, ker bi 100NM pantoprazol premagovanje teh neredu za angiogenezo, zdravljenih z indometacin. Vendar pa je dodatno zdravljenje z ZnPPIX prekinila te prednosti premagovanje angiogenezo, ki pantoprazol pod indometacin upravo. Ti rezultati kažejo, da pantoprazol nadomestilo nesteroidna protivnetna zdravila, povzroča okvarjen angiogenezo prek HO-1 indukcijsko zmogljivosti. Slika 3 pantoprazol povzroča angiogenim dejavnike, povezane z HO-1 indukcijo. (A), RT-PCR in western blot za VEGF. Pomembne indukcije VEGF so bile ugotovljene z pantoprazol, precej čez 300 uM pantoprazol (p < 0,05
). Te številke so predstavniki doseženih rezultatov v 3 neodvisnimi poskusi. (B) Spremembe VEGF in HO-1 s samim pantoprazol ali kombinacije pantoprazola in ZnPPIX. Indukcija VEGF po pantoprazola je precej oslabljen z zaviralcem HO-1, kar pomeni glede posledic HO-1 v PPI povzročene VEGF. Te številke so predstavniki doseženih rezultatov v 3 neodvisnimi poskusi. (C) Drugi angiogenskih dejavniki, povezani z pantoprazol. bFGF in VEGF je bila bolj izražena s pantoprazol, vendar te indukcije so bile oslabljene z zaviralcem HO-1. Te številke so predstavniki doseženih rezultatov v 3 neodvisnimi poskusi. (D) in vitro
angiogenezo preizkus. oblikovanje cev HUVEC je bistveno zmanjšala s 50 uM indometacin. Pantoprazol nadomestilo, indometacin povzroča okvarjen angiogenezo kot je bilo ocenjeno z odstotkom oblikovanja cevi, medtem ko HO-1 inhibitor prekliče to premagali of-pantoprazol povzroča angiogenezo. Ti podatki so predstavniki doseženih rezultatov v 3. neodvisnih eksperimentov.
Pantoprazol-inducirano HO-1 oslabljen, indometacin, povezane vnetne napad
Čeprav indometacin je protivnetno sredstvo pa je znano, da je nesteroidna protivnetna zdravila povzroča želodčne poškodbe prek povečano izražanje vnetnih mediatorjev, vključno s TNF-a, IL-1β, IL-8 in NADPH oksidaze-1 (NOX-1). Kot je prikazano na sliki 4A, 500 uM indometacin znatno povečal izraze TNF-a, IL-1β in IL-8 v epitelijskih celic želodca, ker je zmanjšal ekspresijo HO-1, ki potrjuje, da se lahko vnetnih mediatorjev mehanično povezan z indometacin inducirane želodčne epitelne poškodbe celic. V tem stanju, sočasna uporaba 500 uM indometacin in 300 um pantoprazol bistveno zmanjšala izraze TNF-a, IL-1β in IL-8 skupaj s statistično pomembna povečanja HO-1 izražanja. Poleg tega, indometacin mu znatno povečal izraze NOx-1, v kateri je pantoprazol bistveno oslabljena povečano ekspresijo NOx-1, kažejo, da pantoprazol inducirano HO-1 naloženih protivnetno ukrepov v indometacin. Dalje, da bi nadalje dokazali ali ti atenuacije vnetnih mediatorjev po pantoprazol so posledica HO-1 indukciji smo ponovili te poskuse z ZnPPIX administracijo. Kot je prikazano na sliki 4B, co-zdravljenje ZnPPIX v prisotnosti pantoprazol znatno odpravljena prednosti protivnetnim delovanjem. Posamični indukcije ICAM-1 in VCAM po indometacin zdravljenja so bili odgovorni za ishemija in poslabšanje organov odškodnine, v katerem je bil, ki se ukvarjajo bodisi vaskularnega vnetja ali povečala levkocitov združevanja. Zdravljenje z indometacin znatno povečal izraze ICAM-1 in VCAM v HUVEC, a co-izziv indometacin in pantoprazol občutno zmanjšala, indometacin povzroča ICAM-1 izraz, ki so pomembne za večjo indukcijo HO-1 (slika 4C). V tem stanju, ZnPPIX ni naložilo dušenje ICAM ali VCAM kljub pantoprazol zdravljenja, dodatno zagotavljanje dejanje upravičenca pantoprazol, povezane z HO-1 indukcijo. Slika 4 Pantoprazol oslabljen-indometacin povzročene vnetne mediatorje s HO-1. (A) RT-PCR za TNF-a, IL-1β, IL-8, in HO-1. 500 uM indometacin povečala ekspresijo vnetnih mediatorjev, vključno s TNF-a, IL-1β, IL-8, vendar je občutno zmanjšala HO-1 ekspresije. NOX-1 se je bistveno povečala z indometacin. Te številke so predstavniki doseženih rezultatov v 3 neodvisnimi poskusi. (B) pantoprazol znatno zmanjšal, indometacin povzroča IL-1β in TNF-a, vendar ti ukrepi upravičenke pantoprazol bile odpravljene z ZnPPIX, ki vodi do zaključka, da protivnetna ukrepi pantoprazol so zaradi HO-1 indukcijo. Te številke so predstavniki doseženih rezultatov v 3 neodvisnimi poskusi. (C) pantoprazol znatno zmanjšal, indometacin povzroča ICAM-1 in VCAM v HUVEC celic, vendar pa ti ukrepi upravičenke pantoprazol so bile odpravljene tudi ZnPPIX zaviralec HO-1. Te številke so predstavniki doseženih rezultatov v 3 neodvisnimi poskusi.
Pantoprazol-inducirano HO-1 oslabelih-indometacin povzročene škode želodca
Da bi raziskali zaščitni učinek pantoprazol vivo
, indometacin (10 mg /kg ) smo dali intraperitonealno 16 ur pri podganah. Zdravljenje z indometacin bistveno izzvala želodčne poškodbe sluznice, vključno s hemoragično erozije in razjede. Vendar pa so te želodčne patologij izzvali z indometacina močno oslabljen z intraperitonealno injekcijo 30 mg /kg pantoprazol (slika 5A). Od teh zaščitnih učinkov 30 mg /kg pantoprazol proti-indometacin povzroča želodčne škodo, ki so znatno odpravljena s sočasnim zdravljenjem z intraperitonealno dajemo 5 mg /kg ZnPPIX, smo potrdili, da je zaščitni ukrepi pantoprazola, ki temelji na zmožnosti HO-1 indukcijo . Ko so izrazi HO-1 in ICAM-1 merijo v sluznici homogenatih iz vsake skupine, indometacin dajanje znatno zmanjšal izraze HO-1 in povečano izražanje ICAM-1. Vendar se zaradi povečanega HO-1 izrazov po pantoprazol kot tudi bistveno oslabljena ravni ICAM-1-indometacin povzročene želodca škoda je bila sorazmerno izboljšala kljub indometacin izzivu (slika 5B). Za ponazoritev, kako pantoprazol izboljšala okvarjenega angiogenezo in ishemijo, ki indometacin izzvala, EMSA uporabo HIF-1α je bila izvedena (slika 5C). HIF-1α-DNA vezavno aktivnost je bila močno povečana v indometacin samo skupini, ki je bila bistveno zmanjšal v želodčnih homogenatih pantoprazola skupine zdravljenja, kar pomeni pantoprazol bistveno razrešen hipoksični pogoja indometacin povzročeno. Skupaj, zaviralci protonske črpalke, ki deluje močno zaščito pred-indometacin povzroča želodčne poškodbe sluznice s pomembnim indukcije HO-1, ki je onstran pristni akciji kislina omejevalno, čeprav nismo meriti spremembe kislosti želodca. Slika 5 pantoprazol preprečuje, da želodčne poškodbe, indometacin inducirane preko glede na indukcijo HO-1. (A) Povprečni indeks, indometacin povzroča želodčnih škode. (B) RT-PCR za HO-1 in ICAM-1 v skladu s skupino. (C) EMSA za HIF-1 a glede na skupino. Indometacin znatno povečal HIF-1 a-DNA vezavo, ker pantoprazol občutno zmanjšala HIF-1 a-DNA vezavo na način, ki je odvisen od odmerka.
Razprava
Pred sedanjo preiskavo, je več raziskovalcev objavila, da bi IPČ preprečuje želodčne sluznice poškodbe z drugimi mehanizmi izven delovanja svoje specifično inhibicijo kisline [11, 14, 25-28], bi lahko dodali še več dokazov v zvezi z zaščitnim ukrepom IPČ proti nesteroidnih protivnetnih zdravil. Pantoprazol bistveno inducirane ekspresije HO-1 preko aktiviranja Nrf2 pomembne za protivnetno, antioksidativno in ishemija lajšanje ukrepov. Novel spoznanje, ki se razlikuje od drugih preiskav, da pantoprazol kaže zaščitne ukrepe do poškodbe NSAID-induciranih z obeh popravek angiogensko hendikepa ali dušenje vnetje nagnjenosti.
Becker JC et al.
[16] pokazala, da sta omeprazol in lansoprazol zaščitene človekove želodčne epitelijske in endotelijske celice pred oksidativnim stresom, podobno naši raziskavi, vendar pa se uporabljajo različne vrste IPČ. Ker je bil ta učinek odpravljen v prisotnosti zaviralca HO-1 ZnPPIX, HO-1 zdi, da je pravica tarča IPC tako v endotelijskih in epitelijskih celic želodca. V tej študiji smo ugotovili, nedotaknjeni nov ugotovitev, da HO-1, ki ga jev povzroča zmanjšano-nesteroidnega protivnetnega zdravila, ki nastanejo vnetja in angiogensko neurejenostjo. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Epstein-Barr karcinom virus želodca, povezanih: poročilo iz Irana v zadnjih štirih desetletjih
• Zveza med RUNX3 promotorja metilacije in rak želodca: meta-analiza