Mogući uključenost Nrf2 posredovanog heme oksigenaza-1 doreguliranje u zaštitnom učinku inhibitora pantoprazola protonske crpke, protiv oštećenja želuca indometacin induciranih rats

moguću uključenost Nrf2 posredovanog hem oksigenaze-1 doreguliranje u zaštitnom učinku proton pump inhibitor pantoprazol od indometacina induciranih oštećenja želuca u štakora
Sažetak
Pozadina
protonske crpke je integralni membranski protein koji je sveprisutan ATP veže kazeta (ABC) uključen u mnoge transportnih procesa u svih živih organizama, među koji specijalizirani oblik pumpe, tzv p pregled -tipa protonske pumpe, postoji u parijetalni stanicama želuca. Iako protonske pumpe inhibitori (IPP) su često propisane za sprječavanje nesteroidni protuupalni lijekovi (NSAR) koji inducira oštećenje želuca, kisele supresivno akcije nisu dovoljni da bi se objasniti.
Metode
Kako bi praćenje učinaka pantoprazola jedan od PPI na oštećenje želuca NSAID inducirani in vitro pregled i in vivo su izvedeni
studije. Fosforilacija, Western blot analiza, elektroforetskome test pokretljivosti pomak i RT-PCR provedena su za procjenu indukciju hem oksigenaze-1 (HO-1) do Nrf2 aktivacije u normalnim želučane sluznice RGM-1 stanicama ili in vivo
želučanog tkiva iz kod štakora tretiranih indometacina i /ili pantoprazola. | Rezultati
pantoprazol aktivira Nrf2 do inaktivacije Keap1, nakon čega je ekspresija HO-1 značajno je povećan na način ovisan o dozi u RGM-1 stanicama. Pojačana aktivnost vezanja-DNA opažena je maksimalno nakon 1 sat sa 300 uM pantoprazola. Ekspresija HO-1 inducira pantoprazola značajno povezan s povećanim vitro
formiranje cijevi za u (P pregled < 0,05) i angiogenih čimbenika, uključujući VEGF, bFGF i HIF-1 a. Indometacin značajno povećao izraza TNF-a, IL-1ß, IL-8, NOX-1, ICAM-1 i VCAM, a pantoprazol značajno smanjila izrazi indometacina inducirane tih upalnih medijatora u skladu s pantoprazol induciranu HO-1 (P pregled < 0,05) kao što je dokumentirano u HO-1 inhibitor. In vivo pregled modelu oštećenja želuca indometacin inducirane može provjeriti in vitro
-drawn rezultate pantoprazola značajno zaštićene od oštećenja želuca indometacin induciranu, u kojoj cink protoporfirin (5 mg /kg, ip pregled) značajno ukinuti je zaštitna učinkovitost pantoprazola.
Zaključak
Ovi rezultati pokazuju da Nrf2 posredovanog HO-1 indukcija PPI dalo je značajan zaštitni učinak protiv NSAID inducirano oštećenje želuca izvan kiselina potiskuju postupke. pregled Ključne riječi
hemom oxygenase-1 proton inhibitor crpke NSAR inducirane gastropatije Nrf2 Pozadina pregled NSAR imaju ogromne količine recept govore na temelju sljedeće dvije prednosti, jedan je porast od starijih bolesnika zahtijeva nesteroidni protuupalni lijekovi recept za ublažavanje boli degenerativne promjene inducirane a drugi je dodatni suđenje bilo za prevenciju polipoza kolona, ​​odnosno bijeg od ishemijskih kardiovaskularnih bolesti [1, 2]. Međutim, velika upotreba nesteroidnih protuupalnih lijekova ograničena problematičnih štetnih učinaka, kao što su želučani ulkus, erozija /komplicira krvarenje čira, a ozbiljnijih komplikacija koje proizlaze u tankom crijevu i debelom crijevu. Budući da je farmakološko djelovanje NSAID-a je putem inhibicije prostaglandina (PG) sinteza preko suzbijanje ciklooksigenaza (COX) [3], neprimjetni smanjuju se Gastroprotektivni prostaglandina E 2 (PGE 2) odgovoran je za ove gastrointestinalnog (GI) nuspojave. Iako je izum selektivni COX-2 inhibitora, coxib, kako bi se zajamčila sigurnost GI je predloženo kao strategija rješavanja, ovo rješenje također treba poboljšati. Iako su nesteroidni protuupalni lijekovi koriste kao moćan protiv čira droge, dodatne nepokriveni mehanizmi NSAID toksičnost [4, 5] vodi nas razviti jače i sigurnije sredstva.
U ovom trenutku, najbolji izbor za sprečavanje NSAR vezane GI toksičnost ili kombinacija NSAID i inhibitora protonske pumpe (PPI) ili izbor coxibs [6, 7]. Budući da je ljekovito stopa GI ulkusa tijekom kontinuiranog korištenja NSAR bio veći u jom IPP skupinu od tipa histamin 2 antagonista receptora (H2-RA) skupini, IPP su preferirani od H2-RA se nositi s nepovoljnim učinkom NSAR [8, 9 ]. Osim osnovnih kiselina koja potiskuju akcijama IPP, nekoliko funkcije su pokazale koje su smanjenje pro-apoptoze signalizacije, kiselina neovisan obnova razmnožavanje i popravak putova [10], smanjenje sluznice oksidativnog oštećenja, iscjeljivanje promoviranje akcije i endoplazmatska mrežica stres olakšavanja mehanizam [11-16]. Hahm i sur.
[17-19] također su izvijestili da je IPP pokazuju potencijalne aktivnosti kao antitumorski terapeutika se temelji na selektivnom indukciju apoptoze, anti-angiogenezu protiv Helicobacter pylori
-associated karcinogeneze i izravnih anti-mutagena djelovanja u nastanku tumora. Međutim, mehanizmi odgovorni za zaštitni učinak IPP u NSAR-inducirana oštećenja želuca i dalje treba utvrditi. Pregled Hem oksigenaza-1 (HO-1), može inducirati za prvi i enzima koji ograničava brzinu razgradnje hema, je poznato je da štiti od citotoksičnosti oksidativnog stresa i apoptičkoj smrti stanice, kao i upalnih stanja [20, 21]. Temeljne zaštitni učinci HO-1 protiv upala posredovano anti-oksidativne razgradnje hema, ali koji je povezan s proizvodnjom anti-upalnih medijatora, za koje je redoks ovisnu faktor aktivacije transkripcije, vezanu uz NF-E2 2 (Nrf2) i njegova fosforilacija /aktivacija, a oksidacija Kelch nalik eCH-udruživanje protein 1 (Keap1) mehanički je sugerirao [22-24]. Budući da se ekspresija HO-1 je inducirana protiv oksidacijske, protu-upalno, i ishemijskih olakšavanja reakcije, u studiji, pretpostavili smo da su zaštitni učinci PPI protiv NSAID inducirano oštećenje želuca može se povezati s HO-1 i posljedično angiogeneza izvan suzbijanje urođeni kiseline. Sve u svemu, naši rezultati pokazuju nove mehanizme koji IPP induciraju ekspresiju HO-1 kroz aktiviranje Nrf2 /deaktivaciju Keap1 praćen naknada za ishemijske promjene i prigušenje medijatora upale, čime se olakšava zaštitu od oštećenja želuca indometacin-inducirana. Pregled metode
Materijali i staničnim kulturama
indometacin je kupljen od tvrtke Sigma Aldrich (Saint Louis, MO) i pantoprazol se osigurati iz Amore Pacific Pharmaceutical Co. (Seoul, Korea). Protutijela za P-aktin, HO-1, α-tubulin, Keap1, Nrf2 i VEGF su svi dobiveni od Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Normalno štakorske sluznice želuca RGM-1 stanice pružaju prof Hirofumi Matsui, dr (Tsukuba Univ., Japan), uzgojene su u Dulbeccovom modificiranom Eagle mediju (DMEM) koji sadrži 10% (v
/v
) fetalnog goveđeg seruma, 100 U /ml penicilina. Humane vaskularne endotelne stanice (HUVEC) uzgojene su u M199 mediju (InnoPharma Screen, Seoul, Koreja). Stanice su održavane na 37 ° C u vlažnoj atmosferi koja sadrži 5% CO 2. Odgovarajuće količine RGM-1 stanica i HUVEC su nasadeni i inkubirane 24 h, a zatim su tretirani s označenoj dozi pantoprazola ili indometacin i inkubirani u navedenim vremenima. HUVEC su se preselili na 1% O 2 i 5% CO 2 hipoksija komore i inkubira 0-12 h za in vitro
testu formacije cijev na mjestu. Pregled elektronske spinske rezonancije (ESR) spektroskopije i ROS mjerenje proizvodnje pregled različitih koncentracija pantoprazol dodan u ukupnom volumenu od 200 ul koji sadrži 0,05 mM FeSO 4, 1 mM 'H sub> 2O 2, 1 mM 5,5-dimethylpyrroline-N-oksid (DMPO, Sigma Aldrich, Saint Louis, MO), te 50 mM natrijevog fosfata, pH 7,4 pri sobnoj temperaturi. Reakcije su započete dodavanjem H 2O 2. Nakon inkubacije od 1 min, alikvot reakcija se prenese u kvarcnoj ćeliji i spektra DMPO-OH ispitana upotrebom ESR spektrometar (JES-TE300, JOEL, Tokyo, Japan), u sljedećim uvjetima: magnetsko polje, 338,0 ± 5,0 mT; mikrovalna snaga, 4,95 mW; frekvencija, 9.421700 GHz; modulacija amplitude, 5 mT; pomesti vrijeme, 0,5 min; i vremenska konstanta, 0.03 s. Stanični sadržaj ROS je mjerena inkubacijom kontrolu ili pantoprazola pomiješa RGM-1 stanice s 10 uM H 2DCF-DA (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) tijekom 30 minuta. Fluorescencija je mjerena pomoću konfokalnog laserskog mikroskopom (LSM710, Carl Zeiss, Oberkochen, njemačka).
Western blot analizu
Tretirane stanice su dvaput isprane s PBS i zatim lizirane u ledeno hladnom puferu za liziranje stanica (Cell Signaling Technology) koji sadrži 1 mM fenilmetilsulfonil fluorid (PMSF, Sigma Aldrich). Proteini lizata razdvojeni su SDS-PAGE i prenesen na poliviniliden fluorida (PVDF), membrana, koje su inkubirani sa primarnim antitijelima, isprana, inkubirani sa peroksidaza-konjugiranog sekundarnog antitijela, ispire i zatim vizualizirati pomoću pojačane kemiluminiscencije (ECL) sustav ( GE Healthcare, Buckinghamshire, UK). pregled pokretljivosti gel pomak test (EMSA) pregled, nuklearna i citoplazmatski frakcije ekstrahirana korištenjem NE po jezgri i u citoplazmi reagensa (Pierce, Rockford, IL), u skladu s uputama proizvođača. Antioksidans element odgovora (SU) oligonukleotidne sonde, 5'-TTT TCT GCT GAG TCA AGG TCC G-3 ', i HIF-1α oligonukleotidne sonde, 5'-TCT GTA CGT GAC CAC ACT CAC CTC-3', obilježen je s [ ,,,0],γ- 32P] ATP pomoću T4 polinukleotidnu kinazu (Promega, Madison, WI) i odvojen od nepovezana [γ- 32P] ATP gel filtracijom korištenjem nick centrifuge kolone (GE Healthcare). Prije dodavanja 32P-oligonukleotida (1x10 5 cpm), 10 ug ekstrakta jezgre se drži na ledu tijekom 15 minuta u gel smjeni puferu za vezanje. Odrediti slijed DNA specifičnost interakcije NF-kB, dodali smo suviška neoznačenog oligonukleotida. Nakon 20 minuta inkubacije na sobnoj temperaturi, doda se 2 ul 0,1% Bromfenol plavo, a uzorci su podvrgnuti elektroforezi kroz 6% ne-denaturiranom PAGE na 150 V u hladnoj sobi. Konačno, gelovi su osušeni i izloženi rendgenskom filmu (Kodak, Rochester, NY). Pregled imunocitokemiju pregled Obrađene stanice u komori stakalca su fiksirane 3,7% formaldehida 15 min. Nakon ispiranja, stanice su blokirane u 5% -tnom otopinom BSA koji sadrži 0,1% Triton X-100 u PBS-u 1 sat pri sobnoj temperaturi, a zatim su inkubirane s primarnim protutijelom (1: 100) kroz 12 sati na 4 ° C. Stanice su zatim isprane 3 puta, inkubirane sa sekundarnim protutijelom (1: 300) tijekom 1 h, a zatim je 4'-6-diamidino-2-fenilindol (DAPI 100 ng /ml) tijekom 1 minute na sobnoj temperaturi. Nakon ispiranja 3 puta, stanice su bile postavljene u Produljenje Gold izbljeđivanja reagensa (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA). Fluorescencija vizualizirani pod konfokalne laserske mikroskopom (LSM710, Carl Zeiss). Pregled RNA i kvantitativna reverzne transkripcije lančane reakcije polimeraze (PCR-QRT) pregled Nakon tretmana, medij se ukloni usisavanjem i stanice se isperu s Dulbeccovom fosfatom puferiranoj slanoj otopini (DPBS) dva puta. RiboEX (Gene sve Seoul, Koreja) dodan je pločama, koje su zatim inkubirane 10 min pri 4 ° C. RiboEX se skupi i stavljen u 1,5 ml epruvetu, te je dodan kloroform i blago promiješa. Nakon inkubacije od 10 minuta na ledu, uzorci su centrifugirani pri 10.000 x g tijekom 30 min. Supernatanti su ekstrahirani i pomiješa s izopropanolom, i smjesa se inkubira na 4 ° C tijekom 1 sata. Nakon centrifugiranja na 13.000 g
tijekom 30 min, talog se ispere s 70% (v /v

) etanola. Nakon što se etanol u hlapi, peleti otopljeni su u dietilen pirokarbonat (DEPC) -tretirane vode (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA). cDNA je pripremljena pomoću reverzne transkriptaze izveden iz mišjeg Maloney virusa leukemije (Promega, Madison, WI), u skladu s uputama proizvođača. PCR je izvršena preko 30 ciklusa: 94 ° C za 20 s, 58 ° C tijekom 30 sekundi i 72 ° C tijekom 45 sekundi. Oligonukleotidne početnice za PCR (tablica 1) kupljeni su od Bioneer (Daejeon, Koreja). Svi pokusi QRT-PCR su ponovljeni u tri primjerka i kvantifikacija prikazani kao srednja vrijednost ± SD.Table 1. Slijed PCR početnica pregled GAPDH pregled naprijed 5'-GGT GCT GAG TAT GTC GTG GA -3 '
unazad 5'-TTC AGC TCT GGG ATG ACC TT-3 '
HO-1 pregled Naprijed 5'-GAG AGC ATG TCC CAG GAT TT-3'
Reverse 5'-GGT TCT GCT TGT TTC GCT CT -3 'pregled, COX-2 pregled, Naprijed 5'-GAA ATG GCT OKS GAG TTG AA -3'
Reverse 5'-TCA TCT AGT CTG GAG TGG GA -3 'pregled HIF-1α
Naprijed 5'-AAC AAA CAG AAT CTG TCC TC-3 '
Reverse 5'-GGT AAT GGA GAC ATT GCC AG-3' pregled VEGF pregled Naprijed 5'-CAA TGA TGA AGC CCT GGA GT-3 '
Reverse 5'-GAT TTC tTG CGC TTT CGT TT 3'
PDGF
naprijed 5'-aGG AAG CCA TTC CCG CAG TT-3 '
Obrnut 5'-CTA ACC TCA CCT GGA CCT CT -3 'pregled bFGF
Naprijed 5'-TAT GAA GGA AGA TGG ACG GC-3'
Reverse 5'-AAC AGT ATG GCC TTC TGT CC -3 'pregled IL-1β pregled Naprijed 5'-MAČKA TGT GGC TGT GGA GAA G-3 '
Reverse 5'-ATC ATC CCA CGA GTC ACA GA -3' pregled, IL-8
Naprijed 5' CAG ACA GTG OKS GGG ATT CA-3 '
Reverse 5'-TTG GGG ACA CCC TTT AGC AT-3'
TNF-a pregled naprijed 5'-tac TGA ACT TCG GGG TGA TT -3 '
Reverse 5'-CAG CCT TCT CCC tTG AAG AG-3 'pregled, ICAM-1
naprijed 5'-TGT GCT tTG aga ACT GTG GC-3'
Obrnut 5'-GGT TCT GTC CAA CTT CTC AG -3 'pregled VCAM-1 pregled Naprijed 5'-GAG ACA AAA CAG AAG TGG AAT-3'
Reverse 5'-TAC AAG TGG TCC ACT TAT TTC -3 'pregled NOX1 pregled Naprijed 5'-GAG AAA TTC TCG GAA CTG CC-3 '
Reverse 5'-TGT TGG CTT CTA CTG TAG CG -3'
In vitro
angiogeneze testa
ovom testu izvedena je pomoću komercijalnog kompleta prema uputama proizvođača (Millipore, Billerica, MA). Za hipoksičnim uvjetima ECMatrix i razrjeđivačem pufera su pomiješani kako bi se kruti gel, koji se zatim stavljene na ploču od 96 jažica. Ljudske endotelne stanice umbilikalne vene (HUVEC, 1,0 × 10 5 /ml) se zasije s kontrolnom, indometacin, indometacin plus pantoprazola, indometacin plus pantoprazol plus ZnPPIX inkubira na 37 ° C tijekom 4 sata. Stvaranje cjevčica je promatrana pod svjetlosnim mikroskopom.
indometacin-induciranog želučanog modelu oštećenja pregled Ukupno 48 štakora nabavljeni su od Charles River (Osaka, Japan). Životinje su obrađene u akreditiranom životinja objekta u skladu s Udrugom za procjenu i akreditaciju laboratorijskih životinja Care International (AAALAC International) smjernice ispod objekta pod nazivom CACU (središtu brige o životinjama i koristiti) Lee Gil Ya raka i dijabetesa Institute, Gachon Sveučilište nakon odobrenja Institutional Review Board etiku. Životinje su podijeljene u četiri skupine od kojih svaka se sastoji od 12 štakora i su držane 24 sata prije pokusa kako slijedi; svi štakori primjenjuje sa intraperitonealnom injekcijom indometacin (10 mg /kg), da se izazovu želučanih oštećenja, drugu skupinu s intraperitonealnom injekcijom 10 mg /kg pantoprazola i treće skupine s intraperitonealnom injekcijom 30 mg /kg pantoprazola i četvrta grupa s intraperitonealnom injekcijom 30 mg /kg, pantoprazola i 5 mg /kg ZnPPIX da inhibiraju aktivnost HO-1. Životinje su žrtvovane 16 sata nakon svakog davanja. Želuca štakora su uklonjene, a otvoreni uzduž veće zakrivljenosti i isprani s ledeno hladne, fosfatom puferirane otopine. Brojevi bilo erozija ili ulkusa su određene u skladu s uvećana fotografija. Homogenati dobiveni iz sastrugana želučane sluznice su bili držani u spremnik tekućeg dušika do analize.
Statistička analiza pregled Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± SD. Podaci su analizirani jednosmjernom ANOVA, a statistička značajnost između skupina određena je Duncan raspon testa višestrukog. Statistička značajnost je prihvaćena na P Netlogu < 0,05. Rezultati pregled
pantoprazol povećala HO-1 ekspresiju putem Nrf2 aktivacije
temelju prethodnog istraživanja, mi smo našli pantoprazol pokazao najveću indukciju ekspresije HO-1 u RGM-1 stanice među IPP, lansoprazol, rabeprazol , omeprazol, pantoprazol i (podaci nisu prikazani). Pantoprazola povećao ekspresiju HO-1 mRNA i proteina, na način (slika 1A), ovisno o dozi, a imunocitokemijsku analiza pokazala je da je razina HO-1 značajno porasla je pantoprazol obradom u citoplazmi RGM-1 stanice u dozi ovisna način (slika 1B). Da bismo razumjeli mehanizme na kojima se temelji regulaciji ekspresije HO-1 od pantoprazola, ispitali smo njegove učinke na aktivaciju Nrf2, jedan od glavnih faktora transkripcije koji posreduje SU /EpRE-pogon izraz antioksidativnih enzima. Kada izmjerena razinu ekspresije keap1 A represor Nrf2 na citoplazmatske frakcije tretirana s 300 uM pantoprazola u drugoj vremenskoj točki, je značajno smanjena ekspresija Keap1 zabilježeno je u 1 sat (slika 2a), što ukazuje da HO-1 može biti transkribirane nakon pantoprazol tretmana kroz Nrf2 aktivacije i Keap1 inaktivacije. Kako je prikazano na Slici 2A, Nrf2 nuklearne ko-lokaliziranje je vidljiva RGM-1 stanica koje su tretirane s pantoprazola. Maksimalna SU vežu aktivnost Nrf2 povećan je u 1 sat, kao i njegovog nuklearnog lokalizacije izazvanih pantoprazola (slika 2B). Da bi se ustanovilo nuklearne akumulacije Nrf2, proveli smo imunocitokemijskog analizu pomoću anti-Nrf2 antitijela. Kao što je prikazano na Slici 2C, Nrf2 je premještena u jezgri od 300 uM pantoprazol liječenja. Ovi rezultati dosljedno predložio da pantoprazol može povećati razinu HO-1 kroz Aktivacija transkripcije Nrf2 u štakora želuca epitelnim stanicama. Slika 1 Pantoprazol induciranu ekspresiju HO-1. (A) RT-PCR i Western blot za HO-1 ekspresije u skladu s različitim doziranjem pantoprazola, 30, 100, i 300 uM, respektivno. Ove brojke su predstavnici rezultata dobivenih u 3 neovisna pokusa. (B) Konfokalna oslikavanje HO-1. Pantoprazola povećao ekspresiju HO-1 na način koji je ovisan o dozi, u normalnim štakora želučane sluznice RGM-1 stanica.
Slika 2 povećani pantoprazol Nrf2 nuklearne translokacije i citoplazmatski keap1 inaktivaciju, dovela je do značajnog anti-oksidacije. (A) Western hibridizacija, bilo u citosolu Keap1 ili nuklearne Nrf2 u različito vrijeme u prisustvu 300 uM pantoprazola. (B) Electrophoretic Test mobilnosti pomak (EMSA) za uvezivanje aktivnosti su-DNA. Značajno povećanje DNA vezanja Nrf2 zabilježeno je 60 min nakon pantoprazol uprave. (C) Konfokalna oslikavanje Nrf2 nakon različitog doziranja pantoprazola, 100 uM i 300 uM. (D) elektronske spinske rezonancije (ESR) Mjerenje za Fenton reakcijom generiran hidroksilne radikale. (E) Promjene DCF-DA fluorescencije nakon različitim doziranjem pantoprazola, 30, 100 i 300 um. Pantoprazola smanjio značajno H2O2 induciranu oksidativnu fluorescencije.
Budući da je biološki značaj HO-1 pantoprazola ima anti-oksidativno djelovanje u vezi s HO-1 indukcije. ESR mjerenja je krajnji način da trag slobodnih radikala generaciju pomoću centrifuge adukt, za koje smo generirana hidroksilne radikale pomoću DMPO kao aduktornu pod Fenton reakcije. Kao što se vidi na slici 2D, 3 mM pantoprazol djeluje jasno veže djelovanje DMPO-produkt stvaraju hidroksilne radikale. Budući da mjerenje ESR je pogubljen u kemijsku reakciju stanje nije biološki sustav i pantoprazol nije profesionalni antioksidans, svakako pridonijelo da se ukloni hidroksilne radikale, iako je relativno visoka koncentracija pantoprazola za uklanjanje reaktivnih kisikovih vrsta. Te kemijske rezultati ESR studije su nadalje potvrđena s biološkim testom uz uporabu DCF-DA mjerenje fluorescencije, što pokazuje da pantoprazola značajno snizuju DCF-DA na način ovisan o dozi (P pregled < 0.05, Slika 2E). Pregled angiogenih postupci posljedična pantoprazola induciranu HO-1 pregled PPI povećao izraze VEGF mRNA i proteina RGM-1 stanice (slika 3A). Kako bi se dokumentiralo da li je inkrementalni indukciju VEGF s PPI se odnosi na HO-1 indukcije, ponovio smo pokuse sa samim PPI ili ko-liječenje pantoprazol i Cink Protoporfirin (ZnPPIX) kao HO-1 inhibitora. Kao rezultat, mogli smo potvrditi ekspresiju VEGF induciranog pantoprazol i inkrementalne ko-tretmana ZnPPIX jasno smanjen ekspresiju PPI induciranog VEGF na način koji ovisi o dozi (Slika 3B). Dalje, istražili smo promjene predstavničkih angiogenih čimbenika, bFGF, PDGF i HIF-1 a i promatraju ove izraze koji su relevantni za pantoprazol-inducirana HO-1 na slici 3C. Prema očekivanjima, pantoprazol značajno povećao ove izraze nekoliko angiogenih faktora. Također, ove indukcije bFGF i PDF značajno oslabljena sa suradnicima liječenje pantoprazol i ZnPPIX. Kako bi provjerila jesu li ti indukcija angiogeneze faktora nakon pantoprazol zapravo su se odnosile na angiogeneze, in vitro pregled angiogeneza ispitivanje provedeno je (slika 3D). Stvaranje cjevčica se značajno smanjuje sa 500 uM indometacina u HUVEC, dok je 100 uM pantoprazol može prevladati ove derangements angiogeneze tretirana s indometacina. Međutim, dodatni tretman sa ZnPPIX ukinuta ove prednosti prevladavanje angiogenezu pantoprazola u indometacin uprave. Ovi rezultati sugeriraju da pantoprazol kompenzira NSAID-induciranu angiogenezu kroz neispravnu HO-1 indukcijskog sposobnost. Slika 3 Pantoprazol izazvana angiogenih čimbenika vezanih za HO-1 indukcije. (A) RT-PCR i Western blot za VEGF. Značajna indukcija VEGF su zabilježeni uz pantoprazola značajno nakon 300 uM pantoprazola (p < 0.05
). Ove brojke su predstavnici rezultata dobivenih u 3 neovisna pokusa. (B) Promjene VEGF i HO-1 samo s pantoprazolom ili kombinacijom pantoprazola i ZnPPIX. Indukcija VEGF nakon pantoprazola značajno prigušuje s HO-1 inhibitora, označava implikaciju HO-1 u PPI-inducirane VEGF. Ove brojke su predstavnici rezultata dobivenih u 3 neovisna pokusa. (C) Ostali angiogenih čimbenika koji se odnose na pantoprazola. bFGF i VEGF sve je izraženo u pantoprazola, ali ti indukcije su oslabljena s HO-1 inhibitora. Ove brojke su predstavnici rezultata dobivenih u 3 neovisna pokusa. (D) in vitro pregled angiogeneze ispitivanje. Formiranje Tube HUVEC značajno je smanjen s 50 uM indometacina. Pantoprazol kompenzirana indometacin izazvanu neispravan angiogeneze kao procjenjuje postotak formiranja cijevi, dok je HO-1 inhibitor otkazao njih prevladati pantoprazol-inducirane angiogeneze. Ove brojke su predstavnici rezultata dobivenih u 3 neovisna pokusa.
Pantoprazol induciranu HO-1 prigušuju indometacin povezana upalne napad pregled Iako indometacin je anti-upalni agens, bilo je poznato da nesteroidni protuupalni lijekovi induciranog želučanog oštećenja putem povećane izrazi upalnih medijatora uključujući TNF-a, IL-1, IL-8, i NADPH oksidaze 1 (NOX-1). Kao što se vidi na Slici 4A, 500 uM indometacina značajno povećava iskaza TNF-a, IL-1 i IL-8 u želuca epitelnih stanica, dok je smanjena ekspresija HO-1, što potvrđuje da upalni medijatori mogu biti mehanički povezana s indometacin inducirani želučani oštećenja epitelnih stanica. U tom stanju, istovremena primjena 500 uM indometacina i 300 uM pantoprazola značajno je smanjila izraze TNF-a, IL-1 i IL-8 u pratnji sa statistički značajna povećanja ekspresije HO-1. Osim toga, indometacin izazov značajno povećao iskaza NOX-1, u kojoj pantoprazol značajno smanjuje povećanu ekspresiju NOX-1, što ukazuje da pantoprazol-inducirana HO-1 nametnute protuupalno djelovanje pod indometacina. Dalje, kako bi se dodatno dokazati da li su ovi oslabljenja upalnih medijatora nakon pantoprazola su rezultat HO-1 indukcije, ponovi mi ove eksperimente s ZnPPIX uprave. Kao što se vidi na slici 4B, ko-tretman ZnPPIX u prisutnosti pantoprazola značajno ukinuo prednosti protuupalno djelovanje. Pojedinačni indukcije ICAM-1 i VCAM nakon indometacin liječenja su bili odgovorni za ishemije i tešku organa štete, u kojoj je bio angažiran ili vaskularne upale ili povećana agregacije leukocita. Tretman s indometacin značajno povećava iskaza ICAM-1 i VCAM u HUVEC, a co-izazov indometacina i pantoprazola značajno smanjen indometacin inducirane ICAM-1 ekspresije relevantne povećane indukcije HO-1 (Slika 4C). U tom stanju, ZnPPIX ne nameće prigušenje ICAM ili VCAM unatoč pantoprazol liječenja, dodatno osiguranje djelovanje blagotvorno pantoprazola povezane s HO-1 indukcije. Slika 4 Pantoprazol prigušuje indometacin izazvanu upalnih medijatora preko HO-1. (A) RT-PCR za TNF-a, IL-1, IL-8, i HO-1. 500 uM indometacina povisuje ekspresiju upalnih medijatora uključujući TNF-a, IL-1, IL-8, no značajno je smanjio HO-1 ekspresiju. NOX-1 je bila značajno povećana kod indometacina. Ove brojke su predstavnici rezultata dobivenih u 3 neovisna pokusa. (B) Pantoprazol se značajno smanjio indometacin inducirane IL-1 i TNF-a, ali ove radnje Korisnik pantoprazola su ukinute sa ZnPPIX, što dovodi do zaključka da je anti-upalni akcije pantoprazola su zahvaljujući HO-1 indukcije. Ove brojke su predstavnici rezultata dobivenih u 3 neovisna pokusa. (C) pantoprazola značajno smanjio indometacin inducirane ICAM-1 i VCAM u HUVEC stanicama, a ti postupci korisnica pantoprazola također su ukinuta kod ZnPPIX HO-1 inhibitor. Ove brojke su predstavnici rezultata dobivenih u 3 neovisna pokusa.
Pantoprazol induciranu HO-1 oslabljen indometacin induciranih ozljeda želuca
ispitati zaštitni učinak pantoprazol in vivo
, indometacin (10 mg /kg ) intraperitonealno 16 sati kod štakora. Liječenje s indometacin značajno izazvao želučane sluznice ozljede, krvarenja erozija i ulceracija. Međutim, ovi želučanih patologija izazvanih s indometacin su značajno prigušuje s intraperitonealnom injekcijom 30 mg /kg pantoprazol (Slika 5A). Od tih zaštitnih učinaka od 30 mg /kg pantoprazol protiv indometacin inducirana želučanih oštećenja značajno su ukinuti uz istovremeno liječenje intraperitonealno primijenjenog 5 mg /kg ZnPPIX, utvrdili smo da se zaštitno djelovanje pantoprazola je na temelju svoje sposobnosti HO-1 indukcije , Kada je mjerena izrazi HO-1 i ICAM-1 u mukoznim homogenatima iz svake skupine, indometacin davanje značajno je smanjila izraza HO-1, a povećava ekspresiju ICAM-1. Međutim, zbog povećane HO-1 izraza nakon pantoprazola kao značajno smanjuje razine ICAM-1, indometacin inducirane gastrointestinalnih oštećenja je proporcionalno poboljšana unatoč indometacin izlaganja (Slika 5B). Kako bi se dokazalo kako je pantoprazol poboljšana neispravni angiogeneze i ishemije uzrokovanoj indometacin, EMSA korištenjem HIF-1α je provedena (Slika 5c). HIF-1α-DNA obvezujuća aktivnost je vrlo povećan u indometacin samo skupine, što je znatno smanjena u želučanim homogenatima pantoprazol liječenoj skupini, što znači pantoprazol značajno olakšanje hipoksično stanje izazvano indometacina. Uzeti zajedno, IPP vrši snažnu zaštitu protiv indometacin izazvanog oštećenja želuca sluznice kroz značajne HO-1 indukcije, što je izvan autentičnog kiselina koje potiskuje djelovanje, iako nismo izmjerili promjene želučane kiselosti. Slika 5 Pantoprazol sprečava na oštećenje želuca indometacin induciranih putem ovisno o indukcije HO-1. (A) Srednja indeks indometacin induciranog želučanog štete. (B) RT-PCR za HO-1 i ICAM-1, prema skupini. (C) EMSA za HIF-1 a prema skupini. Indometacin značajno povećao HIF-1 a-DNA vezanje, a značajno je smanjen pantoprazol HIF-1 a-DNA vezanje na način ovisan o dozi. Pregled Rasprava
Prije ovom istraživanju, nekoliko istraživači su objavili da IPP mogu spriječiti ozljede sluznice želuca drugim mehanizmima izvan djelovanja specifičnog inhibicije kiseline [11, 14, 25-28], može se dodati još dokaza vezi zaštitnog djelovanja protiv PPI NSAID. Pantoprazol se značajno inducira ekspresiju HO-1 kroz Nrf2 aktivacije koji se odnose na anti-upalne, anti-oksidativnih i ishemije olakšavanja djelovanja. Roman je nalaz ove studije se razlikuje od drugih istraživanja je da se pantoprazol pokazuje zaštitne radnje ozljede NSAID-inducirana putem ili korekciju angiogeneze mane ili slabljenja upale sklonosti.
Becker JC et al.
[16] pokazao da su omeprazol i lansoprazol zaštićeni ljudskog želučanog epitela i endotelne stanice od oksidativnog stresa sličan našem istraživanju, ali se koristi različite vrste IPP. Budući da je ovaj učinak poništava uz prisustvo inhibitora HO-1, ZnPPIX, HO-1, čini se pravo meta PPI u oba endotelne i epitelne stanice želuca. U ovom istraživanju, gledali smo netaknutu novi nalaz da HO-1 inducira IPP smanjeni su NSAR-nastale upale i angiogeneze poremećenosti. Svi autori pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Epstein-Barr virus karcinom povezan želuca: izvještaj iz Irana u posljednja četiri desetljeća
• Veza između RUNX3 promotora metilacije i raka želuca: meta-analysis