Galimas dalyvavimas Nrf2 sąlygojamą hemo ciklooksigenazės-1 iki-reguliavimo apsauginį poveikį nuo protonų siurblio inhibitorius pantoprazolo prieš indometacino sukelta skrandžio žalos žiurkių

Galimas dalyvavimas Nrf2 sąlygojamą hemo ciklooksigenazės-1 iki-reguliavimo apsauginį poveikį nuo protonų siurblio inhibitorius pantoprazolo prieš indometacino sukelta skrandžio žalos žiurkių
Anotacija pervežimas Background pervežimas protonų siurblio yra neatskiriama membranos baltymo, kad yra visur ATF privalomas kasetė (ABC) dalyvauja daugelyje transporto procesų visų gyvų organizmų, tarp kurių vadinamųjų specializuotų forma siurblys, p
-type protonų siurblio egzistuoja parietalinėse ląstelių skrandį. Nors protonų siurblio inhibitoriai (PSI) dažnai nustatytas siekiant užkirsti kelią nesteroidiniai vaistai nuo uždegimo (NVNU) indukuotų skrandžio žalą, rūgšties slopinimas, veiksmai nepakanka paaiškinti.
Metodai
Siekiant dokumentuoti pantoprazolo poveikis , vienas iš PSI, dėl NVNU sukeltos skrandžio žalos, in vitro
ir in vivo buvo atliktas
tyrimai. Imunocitocheminiais, Vakarų dėmė analizė, elektroforezės mobilumas perėjimas tyrimas ir AT-PGR buvo atliekami siekiant įvertinti hemo ciklooksigenazės-1 (HO-1) indukcinės per Nrf2 aktyvavimo normaliomis skrandžio gleivinės RGM-1 ląstelių arba in vivo pervežimas skrandžio audinių iš žiurkių indometacino ir /ar pantoprazolo.
rezultatai
pantoprazolas aktyvuota Nrf2 per nukenksminimo Keap1, po kurių HO-1 išraiška buvo žymiai padidėjo nuo dozės priklausomu būdu RGM-1 ląstelių. Padidėjęs ARE-DNR privalomas veikla buvo pastebėta maksimaliai bent 1 h 300 mikromolių pantoprazolo. Ho-1 išraiška sukeltas pantoprazolo buvo reikšmingai susijęs su padidėjusiu in vitro
vamzdžių formavimo (P
< 0,05) ir angiogeninių veiksniai, įskaitant VEGF, bFGF, ir HIF-1α. Indometacino ženkliai padidino TNF-alfa, IL-1ß išraiškas, IL-8, NOx-1, ICAM-1 ir KLAM, o pantoprazolo žymiai sumažino indometacino sukeltos šių uždegiminių mediatorių išraiškas sutarimu su pantoprazolo sukeltais HO-1 (P
< 0,05), kaip dokumentais su HO-1 inhibitoriaus. In vivo
modelio indometacino sukelta skrandžio žalą gali patvirtinti in vitro
-drawn rezultatus, kad pantoprazolas nepaprastai apsaugoti nuo indometacino sukelta skrandžio žalą, kuri cinko protoporfirino (5 mg /kg IP
) žymiai pašalintos apsauginis veiksmingumas pantoprazolas.
Išvada
Šie rezultatai rodo, kad Nrf2 tarpininkaujant HO-1 indukcija PSI suteikta didelę apsauginį poveikį prieš NVNU sukeltos skrandžio žalos už rūgšties Slopinamoji veiksmus.
Raktiniai žodžiai
hemo oksigenazės-1 protonų siurblio inhibitorius NVNU sukeltos gastropatijos Nrf2 Background
NVNU turi didžiulį receptinių apimtis daugiausia remiasi šių dviejų privalumų, vienas yra vyresnių pacientų padidėjo prireikė NVNU receptą atleisti degeneracinės kaitos sukeltas skausmas, o kitas yra Papildoma bandomoji arba gaubtinės žarnos polipų profilaktikai arba pabėgti nuo išeminės širdies ir kraujagyslių ligų [1, 2]. Tačiau didžioji naudojimas NVNU riboja varginantis nepageidaujamų poveikių, tokių kaip skrandžio erozijos /opa, sudėtingas kraujavimas iš opos, ir daugiau rimtų komplikacijų tuo plonosios žarnos ir storosios žarnos. Kadangi Farmakologinis NVNU yra per prostaglandinų (PG) sintezę per iš cyclooxygenases (COX) slopinimo [3], nepastebimas mažinami gastritas prostaglandinų E 2 (PGE 2) yra atsakingas už šių virškinimo trakto (GI) neigiamas poveikis. Nors selektyvus COX-2 inhibitorius, koksibų, užtikrinti GI saugumą išradimas buvo pasiūlyta kaip sprendimo potencialas strategijos, šis sprendimas taip pat reikia gerinti. Nors NVNU yra naudojami kaip stipriai antiopinės narkotikų, papildomos Atvirus mechanizmai NVNU toksinis poveikis [4, 5] sukelti mums sukurti stipresnis ir saugesnis agentus.
Šiuo metu geriausias pasirinkimas siekiant užkirsti kelią NVNU susijusių GN toksiškumas yra arba NVNU ir protonų siurblio inhibitorių (PSI) derinys arba koksibai pasirinkimas [6, 7]. Nuo nuolatinio naudojimo NVNU metu gydymo kursas VT opos buvo didesnis PSI grupės kaip histamino tipo 2 receptorių antagonistas (H2 RA) grupei, PSI buvo pageidaujamą nei H2-RA susidoroti su neigiamo poveikio NVNU [8, 9 ]. Be pagrindinių rūgščių Slopinamoji veiksmų PSI, kelios funkcijos buvo atskleista, kurios yra proapoptozinis signalizacijos sumažinimas, rūgščiai nepriklausoma restauravimas plinta ir remontas keliai [10], A gleivinės oksidacinės žalos mažinimo, gydymo skatinimo veiksmų ir Endoplazminis tinklas stresas malšinančių mechanizmas [11-16]. Hahm et al.,
[17-19] taip pat pranešė, kad PSI parodyti galimą veiklą nuo vėžio terapija grindžiama atrankiniu sukeliama apoptozė anti-angiogenezę prieš Helicobacter pylori pervežimas -associated kancerogenezėje, ir tiesioginių kovos su mutageninių veiksmų per tumorigenesis. Tačiau atsakingi už apsauginių poveikio PSI mechanizmus NVNU sukeltos skrandžio žalą dar reikia nustatyti.
Heme oksigenazės-1 (HO-1), indukuojamą pirmą ir normos ribojimo fermento hemo degradacijos, buvo žinoma, kad apsisaugoti nuo oksidacinio streso ir apoptozės ląstelių žūtį citotoksiškumo, taip pat uždegiminės būklės [20, 21]. Pagrindinės apsauginiai poveikis HO-1 nuo uždegimo tarpininkaujant per antioksidaciniu hemo degradacija, bet ir susijęs su anti-uždegiminių mediatorių, kurių oksidacijos-redukcijos priklausomą transkripcijos aktyvatorius NF-E2 susijusią faktorius 2 (Nrf2) gamyba, ir jos fosforilinimo /aktyvinimo ir oksidacija KELCH-kaip ECH-jungiančių baltymų 1 (Keap1) yra mechaniškai pasiūlė [22-24]. Kadangi HO-1 išraiška buvo sukeltas antioksidaciniu, priešuždegiminių, ir išeminės malšinančių atsakymų, dabartiniame tyrime mes iškėlė hipotezę, kad apsauginiai poveikis PSI prieš NVNU sukeltos skrandžio žalą gali būti susiję su HO-1 ir dėl to angiogenezę už įgimtą rūgšties slopinimo. Iš viso, mūsų rezultatai rodo, kad naujų mechanizmų, kad PSI indukuoti HO-1 išraišką per aktyvuoti Nrf2 /nukenksminti Keap1 kartu su išeminės kaita atlyginimo ir uždegiminių mediatorių slopinimą taip skatinant apsaugą nuo indometacino sukelta skrandžio žalą.
metodai
medžiagos ir ląstelių kultūrų
Indomethacin buvo įsigytas iš Sigma-Aldrich (Saint Louis, MO) ir pantoprazolas buvo teikiama iš Amore Ramiojo Pharmaceutical Co (Seulas, Korėja). Antikūnai už beta-aktino, Ho-1, α-tubulino, Keap1, Nrf2 ir VEGF visi buvo gauti iš Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Normalus žiurkių skrandžio gleivinės RGM-1 ląstelės buvo numatyta prof Hirofumi Matsui, MD, PhD (Tsukuba Univ., Japonija), buvo auginamos Dulbecco modifikuota Eagle terpėje (DMEM), kuriame yra 10% (v pervežimas /t pervežimas ) vaisiaus jaučio serumo, 100 V /ml penicilino. Žmogaus Jungiamieji kraujagyslių endotelio ląstelės (HUVECs) buvo auginamos M199 terpe (InnoPharma ekranas, Seoul, Korea). Ląstelės buvo palaikoma 37 ° C temperatūroje drėgnoje atmosferoje sudėtyje yra 5% CO 2. Atitinkamą kiekį RGM-1 ląstelių arba HUVECs buvo pasėjamos ir inkubuojami 24 valandas, po to jie buvo gydomi nurodytą dozę pantoprazolo arba indometacino ir inkubuojami nurodyto laiko. HUVECs buvo perkeltas į 1% O 2 ir 5% CO 2 hipoksija kameros ir inkubuojami 0-12 h in vitro pervežimas vamzdis formavimo metodu.
Elektronų sukinio rezonanso (ENG) spektroskopija ir ROS kartos matavimo
Įvairios koncentracijos pantoprazolo įtraukta į bendras tūris 200 įxL sudėtyje yra 0,05 mM FeSO 4, 1 mM O 2O 2, 1 mmol 5,5-dimethylpyrroline-N-oksidas (DMPO, Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO), ir 50 mM natrio fosfato, esant pH 7,4 esant kambario temperatūrai. Reakcijos buvo pradėtas pridedant H 2O 2. Po inkubacijos 1 min, mėginiai reakcijų buvo perkelti į kvarco ląstelių ir spektro DMPO-OH išnagrinėjo naudojant ESR spektrofotometru (JES-TE300, JEOL, Tokijas, Japonija) tokiomis sąlygomis: magnetinį lauką, 338,0 ± 5,0 mT; Mikrobangų galia, 4,95 MW; dažnis, 9.421700 GHz; moduliacija amplitudė, 5 m; nurašymas laiką, 0,5 minutės; ir laiko konstanta, 0.03 Š. Mobilieji ROS turinys buvo matuojamas inkubacijai kontrolei ar pantoprazolo elgiamasi RGM-1 ląstelės su 10 mikromolių H 2DCF-DA (INVITROGEN Life technologies ", Carlsbad, Kalifornija) 30 min. Fluorescencija buvo matuojamas naudojant Confocal lazerinis mikroskopas (LSM710, "Carl Zeiss, Oberkochen, Vokietija).
Vakarų dėmė analizė
Apdoroti ląstelės buvo išplauti du kartus su PBS ir tada lizuoti į ledinio ląstelių lizės buferiniame tirpale (Mobilusis Signalizacijos technologijos) , kuriame yra 1 mM fenilmetilsulfonilfluoridą (PMSF, Sigma-Aldrich). Baltymai, esantys lizatuose buvo atskirtos SDS-PAGE ir perkelti į polivinilideno fluorido (PVDF) membranų, kuri buvo inkubuojamos su pirminių antikūnų, plauti, inkubuojamas su peroksidaze konjuguotų antrinių antikūnų, rewashed, ir tada vizualizuojami naudojant chemiliuminescencijos sustiprinimo (EST) sistemos ( "GE Healthcare", Buckinghamshire, Jungtinė Karalystė).
elektroforeziniai mobilumas gelis perėjimas analizė (EJSA)
Branduolinė ir citoplazmos frakcijos buvo paimti naudojant NE už branduolinės ir citoplazmos reagentai (Pierce, Rokfordas, Ilinojus), pagal gamintojo nurodymus. Antioksidantas atsakas elementas (ARE) oligonukleotidas zondas, 5'TTT-TCT GCT GAG TBS AGG TCC G-3 "ir HIF-1α oligonukleotidas zondas, 5'-TCT GTA CGT GAA ŠMC AKTAS ŠMC BTK-3" buvo paženklinti [ ,,,0],γ- 32P] ATF naudojant T4 polinukleotidų kinazės (Promega Madison, WI) ir atskirtas nuo neturinčių juridinio asmens statuso [γ- 32P] ATF gelfiltracijos naudojant slapyvardį gręžimo kolonėlė (GE Healthcare "). Prieš pridėdami 32P-oligonukleotidą (1x10 5 CPM), 10 mikrogramų branduolinės ekstrakto buvo laikomi ant ledo 15 min gelio pamainos privalomą rezervą. Norėdami nustatyti sekos specifiškumą NF-κB DNR sąveikos, mes pridėjome iš etiketės oligonukleotidų perteklius. Po to, kai 20 min inkubavimo kambario temperatūroje, buvo įtraukta 2 mikrol, 0,1% bromfenolio mėlynasis, ir mėginiai buvo atliekama elektroforezė per 6% ne-denatūravimo PAGE 150 V šaltoje patalpoje. Pagaliau, geliai buvo džiovinti ir veikiami rentgeno juostą (Kodak, Rochester, NY).
Imunocitochemiją
paveiktų ląstelių kameroje skaidres buvo nustatyti 3,7% formaldehido 15 min. Po plovimo, ląstelės buvo užblokuotas 5% BSA tirpalas, kuriame yra 0,1% Triton X-100 PBS 1 val kambario temperatūroje, ir tada inkubuojami su pirminiais antikūnais (1: 100) 12 valandų, esant 4 ° C temperatūroje. tada ląstelės buvo plaunamas 3 kartus, perintus su antriniu antikūnu (1: 300) 1 h, ir tada su 4'-6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI, 100 ng /ml) 1 min kambario temperatūroje. Nuplovus 3 kartus, ląstelės buvo montuojamos Pratęsti Gold antifade reagento (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA). Fluorescencija buvo ryškinamos pagal confocal lazerio mikroskopu (LSM710, "Carl Zeiss®").
RNR išskyrimas ir kiekybinė atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandininė reakcija (KRL-PGR)
Po gydymo, žiniasklaida buvo pašalinta nusiurbimu ir ląstelės buvo plaunami Dulbecco fosfato -buffered fiziologinis (DPBS) du kartus. RiboEX (Genų Visi, Seulas, Korėja) buvo įtraukta į plokščių, kurios vėliau buvo inkubuojami 10 min, esant 4 ° C temperatūroje. RiboEX buvo paruošta ir įdedamas į 1,5 ml mėgintuvėlį, ir buvo įtraukta chloroformas ir švelniai sumaišyti. Po inkubacijos 10 min ledo, mėginiai buvo centrifuguojamas 10.000 × g 30 min. Supernatantų, buvo paimti ir sumaišyti su izopropanolio, ir mišiniai buvo inkubuojami esant 4 ° C temperatūroje 1 val. Po to, kai centrifugavimo 13,000 g
30 min, granulių plautas 70% (t
/prieš
) etanolio. Po leidžiant etanolio visiškai išgaruoti, granulių ištirpinti dietilenglikolio pyrocarbonate (DEPC) gydomiems vandens (INVITROGEN Life Technologies, Carlsbad, Kalifornija). kDNR buvo parengta naudojant atvirkštinę transkriptazės gautas iš pelių Maloney leukemijos viruso (Promega, Madison, WI), pagal gamintojo nurodymus. PGR buvo atliekama daugiau nei 30 ciklų: 94 ° C temperatūroje 20 sek, 58 ° C temperatūroje 30 sek, ir 72 ° C temperatūroje 45 sek. Oligonukleidų gruntai PGR (1 lentelė), buvo įsigytas iš Bioneer (Daejeon, Pietų Korėja). Visi KRL-PGR eksperimentai buvo kartojami tris kartus ir kiekybinis buvo parodyta vidurkis ± SD.Table 1 d PGR pradmenis
GAPDH
priekį 5'-GGT aktyvumo GCT GAG TAT GTC GTG GA sekos -3 "
Atvirkštinė 5'-TTC AGC TCT ggg ATG ACC "
HO-1
Persiųsti 5'-GAG" AGC ATG TCC PVG GAT TT 3 "TT 3
Atvirkštinė 5'-GGT TCT GCT TGT TTC GCT KT -3 "
COG-2
Persiųsti 5'-GAA ATG GCT GCA GAG TTG AA -3"
Atvirkštinė 5'-TCA TCT AGT CTG GAG TGG GA -3 "
HIF-1α
Persiųsti 5'-AAC AAA PVG AAT KTG TCC TC-3 "
Atvirkštinė 5'-GGT AAT GGA GAA PGS Persijos AG-3"
VEGF
Persiųsti 5'-CAA TGA TGA AGC BMT GGA "GT-3"
Atvirkštinė 5'-GAT TTC TTG CGC TTT CGT TT -3 "
PDGF
priekį 5'-AGG ARG CCA TTC CCG CAG TT-3"
Grįžtamieji 5'-CTA ACC TBS BMT GGA BMT KT -3 "
bFGF
Persiųsti 5'-TAT GAA GGA" AGA TGG ACG GC-3 "
Atvirkštinė 5'-AAC AGT ATG Persijos TTC TGT CC -3"
IL-1β
Persiųsti 5'-CAT TGT GGC TGT GGA GAA "G-3"
Atvirkštinė 5'-ATC ATC CCA CGA GTC PPK GA -3 "
IL-8
Persiųsti 5'- APG PPK GTG GCA ggg PGS CA-3 "
Atvirkštinė 5'-TTG ggg ACA CCC TTT AGC AT-3"
TNF-alfa
priekį 5'-TAC TGA AKTAS TCG ggg TGA TT -3 "
Atvirkštinė 5'-PVG BMT TCT BMK TTG ARG AG-3 "
ICAM-1
priekį 5'-TGT GCT TTG AGA ACT GTG GC-3"
Grįžtamieji 5'-GGT aktyvumo TCT GTC CAA CTT BTK AG "-3"
KLAM-1
Persiųsti 5'-GAG PPK AAA PVG ARG TGG AAT-3 "
Atvirkštinė 5'-TAC ARG TGG TCC ACT TAT TTC -3"
NOX1
Persiųsti 5'-GAG "AAA TTC TCG GAA KTG BK-3"
Atvirkštinė 5'-TGT TGG CTT CTA CTG TAG CG -3 "
in vitro
angiogenezės tyrimą
Šiuo tyrimu buvo atliekama naudojant komercinę rinkinys pagal bet kurį gamintojo nurodymus (Millipore ", BILLERICA, MA). Dėl hipoksinės sąlygomis ECMatrix ir skiediklis buferis buvo mišri padaryti tvirtą gelis, kuris vėliau buvo padengta iš 96 gerai mikrolėkštelės. Žmogaus bambos venos endotelio ląstelės (HUVEC, 1,0 × 10 5 /ml) buvo pasėjamos su kontrolės, indometacino, indometacino, pridėjus pantoprazolo, indometacino, pridėjus pantoprazolo plius ZnPPIX inkubuojamas 37 ° C temperatūroje iki 4 h. Vaizdeliai formavimas buvo stebima šviesos mikroskopu.
Indomethacin sukeltas skrandžio žalos modelį
A 48 žiurkių viso buvo įsigytas iš Charles River (Osaka, Japonija). Gyvūnai buvo perkrauta akredituotos gyvūnų objekto pagal asociacijos vertinimo ir akreditavimo laboratorinių gyvūnų priežiūros International (AAALAC International) gaires pagal priemonę pavadino CACU (gyvūnų priežiūrai ir naudojimui centre) Lee Gil J. vėžys ir diabetas instituto GACHON universiteto po tarnybinės etikos apžvalga tarybos pritarimą. Gyvūnai buvo suskirstyti į keturias grupes kiekvienas susideda iš 12 žiurkių ir buvo išbadėjusi 24 h iki eksperimentavimo taip; visi žiurkės buvo vartojama kartu su injekciją į pilvą iš indometacino (10 mg /kg), kad išprovokuoti skrandžio nuostolius, antrą grupę su injekciją į pilvą 10 mg /kg pantoprazolo, trečioji grupė su injekciją į pilvą 30 mg /kg kūno svorio pantoprazolo, ir ketvirtasis grupė su injekciją į pilvą iš pantoprazolo ir 5 mg 30 mg /kg /kg ZnPPIX slopina HO-1 aktyvumą. Gyvūnai buvo paaukota 16 h po kiekvieno administracija. Žiurkių skrandžiai buvo pašalinta ir atidarytas išilgai didesnio kreivumo ir perplaunami ypatingai šaltas fosfatinio buferio sprendimus. Bet kurios erozijos ar opos numeriai buvo nustatyti pagal kvapą gniaužiančiais nuotraukomis. Homogenatai gauti iš subraižyti skrandžio gleivinės buvo laikomi į skysto azoto rezervuare iki tyrimo.
Statistinė analizė
rezultatai išreiškiami kaip vidurkis ± SD. Duomenys buvo analizuojami vieną pusę ANOVA, o statistikos reikšmė tarp grupių buvo nustatomas pagal Duncan išsėtinės intervalo bandymo. Statistinis reikšmingumas buvo priimtas P
< 0,05.
Rezultatai
Pantoprazolas padidėjo HO-1 išraišką per Nrf2 aktyvacijos
Remiantis preliminariu tyrimu, mes nustatėme, pantoprazolas parodė aukščiausią indukcijos Ho-1 ekspresija RGM-1 ląstelės tarp PSI, lansoprazolo, rabeprazolio , omeprazolis, ir pantoprazolo (duomenys neparodyta). Pantoprazolas padidėjo HO-1 mRNR ekspresijai ir baltymų nuo dozės priklausomu būdu (1A paveikslas), o imunocitocheminiam analizė taip pat parodė, kad HO-1 lygis buvo žymiai padidėjo pantoprazolo režimas taikytinas RGM-1 ląstelių citoplazmoje su vaisto doze -dependent būdas (1B pav.) Suprasti mechanizmus, sukeliančius UP-reguliavimą HO-1 išraiškos pantoprazolo, mes išanalizavome savo poveikiui Nrf2, pagrindinis transkripcijos veiksnys, kuris tarpininkauja Are /EpRE-varoma išraišką antioksidantinių fermentų aktyvinimo. Kai mes matuojamas ekspresijos lygį keap1, iš Nrf2 represorius į citoplazminio frakcijos gydomi 300 pM pantoprazolo į kitą laiko taško, žymiai sumažėjo išraiška Keap1 buvo stebėtas 1 h (2a pav), o tai rodo, kad HO-1 gali būti transkripcija po pantoprazolo gydymo per Nrf2 įjungimo ir Keap1 nukenksminimą. Kaip parodyta 2A pav, Nrf2 atominės bendrai lokalizacija buvo akivaizdus RGM-1 ląstelių gydomiems pantoprazolo. Didžiausias ARE-surišimo aktyvumą iš Nrf2 buvo padidintas 1 h, taip pat jo branduolinės lokalizacijos, kurias sukelia pantoprazolo (2B pav). Norėdami išsiaiškinti branduolinę kaupimosi Nrf2, mes atlikome imunocitocheminiam analizę, naudojant anti-Nrf2 antikūnų. Kaip parodyta 2C paveiksle, Nrf2 buvo pernešamas į branduolį su 300 mikromolių pantoprazolo gydymą. Šie rezultatai nuosekliai teigė, kad pantoprazolas gali padidinti HO-1 lygį per transkripcijos aktyvavimo Nrf2 žiurkių skrandžio epitelinių ląstelių. 1 pav pantoprazolas sukeltas Ho-1 išraiška. (A), RT-PGR ir Vakarų dėmė už HO-1 išraiška, atsižvelgiant į skirtingus dozavimo pantoprazolo, 30, 100, ir 300 pM, atitinkamai. Šie skaičiai yra atstovai gautų rezultatų 3 nepriklausomų eksperimentų. (B), Confocal vaizdo Ho-1. Pantoprazolas padidino HO-1 išraišką nuo dozės priklausomu būdu į normalų žiurkė skrandžio gleivinės RGM-1 ląstelių.
2 pav pantoprazolas padidėjęs Nrf2 branduolinę perkėlimas ir citoplazmos keap1 nukenksminimą, sukėlė didelę anti-oksidacijos. (A) vakarinė dėmės dėl abiejų citozoliniame Keap1 ar branduolinės Nrf2 kitoje laiko į 300 mikromolių pantoprazolo buvimą. (B), elektroforeziniai mobilumas perėjimas analizė (EMSA), už arą-DNR jungimosi. Žymiai padidėjo DNR jungiasi Nrf2 buvo pažymėta 60 min po pantoprazolo administracija. (C) Confocal iš Nrf2 vaizdo po skirtingų dozavimo pantoprazolo, 100 m ir 300 mkm. (D), elektronų sukinio rezonanso (ENG) matavimas Fenton reakcija generuoja hidroksilo radikalus. (E) DCF DA fluorescencijos pokyčiai po skirtingų dozavimo pantoprazolui, 30, 100, ir 300 mikromolių. Pantoprazolas ženkliai sumažėjo H2O2 sukeltas oksidacinis fluorescenciją.
Kadangi biologinė reikšmė HO-1 pantoprazolo turi anti-oksidacinis veiksmus, susijusius su HO-1 indukcija. ESR matavimas buvo pagrindinis būdas atsekti laisvųjų radikalų susidarymą, naudojant gręžimo adukto, kuriam mes generuoja hidroksilo radikalus per DMPO kaip pagal Fenton reakcijos atitraukiamiesiems. Kaip matyti iš 2D paveiksle, 3 mm pantoprazolas darė aiškų prapūtimo veiksmą DMPO-adukto generuojančio hidroksilo radikalus. Nuo ENG matavimo buvo vykdomas cheminė reakcija būklė ne biologinėje sistemoje ir pantoprazolas yra ne profesionalus antioksidantas, jis tikrai prisidėjo prie Przedmuch hidroksilo radikalų, nors ji yra gana didelė koncentracija pantoprazolo Przedmuch reaktyvių deguonies. Šios cheminės rezultatai ESR tyrimo buvo toliau patikrintas su biologinis tyrimas naudojant DCF-DA fluorescencijos matavimas, rodo, kad pantoprazolas parodė didelį DPS-DA sumažinti dozės priklausomu būdu (P
< 0,05, 2E pav.)
angiogeniniai veiksmai, atlikus pantoprazolo sukeltais HO-1
PSI padidino VEGF mRNR ir baltymų išraiškas RGM-1 ląstelių (3A pav.) Siekiant dokumentais ar pavienį indukcija VEGF su PSI yra susijęs su HO-1 indukcijos, mes kartoti eksperimentus vien PSI arba bendro gydymo pantoprazolo ir cinko protoporfirino (ZnPPIX) kaip HO-1 inhibitorius. Kaip rezultatų, galėtume iš naujo patvirtina VEGF išraiška, kurį sukelia pantoprazolo ir papildomuoju bendro gydymui ZnPPIX akivaizdžiai sumažėjo GKI-sukeltos VEGF išraiška priklausomai nuo dozės priklausomu būdu (3B pav). Be to, mes ištirti atstovaujamosios angiogeninių veiksnių, bFGF, PDGF ir HIF-1α pokyčius ir stebėjo šias išraiškas, susijusią su pantoprazolo sukeltais HO-1 Fig.3C. Kaip ir tikėtasi, pantoprazolas gerokai padidėjo šių kelių angiogeninių faktorių išraiškas. Taip pat šie bFGF ir PDGF indukcijas buvo žymiai susilpnintas su bendro elgesio pantoprazolo ir ZnPPIX. Siekiant patikrinti, ar šie angiogeniniai faktorius indukcijas po pantoprazolo iš tikrųjų buvo susijęs su angiogenezę in vitro
angiogenezę tyrimas buvo atliktas (3D pav.) Vaizdeliai formavimas buvo gerokai susilpninta 500 mikromolių indometacino per HUVECs, o 100 mkm pantoprazolas gali įveikti šiuos angiogenezę gydomi indometacino sutrikimus. Tačiau papildomo gydymo ZnPPIX panaikino šias įveikti angiogenezę pantoprazolo pagal indometacino administravimo naudą. Šie rezultatai rodo, kad pantoprazolas kompensuojamas NVNU sukeltos defektu angiogenezę per savo HO-1 indukcijos pajėgumus. 3 pav pantoprazolas sukeltas angiogeninių veiksnius, susijusius su HO-1 indukcija. (A), AT-PGR ir Vakarų dėmė už VEGF. Svarbūs indukcijas VEGF su pantoprazolo buvo pastebėta gerokai po 300 mikromolių pantoprazolo (p < 0,05 pervežimas). Šie skaičiai yra atstovai gautų rezultatų 3 nepriklausomų eksperimentų. (B) VEGF ir HO-1 pokyčiai vien pantoprazolo ar kartu pantoprazolo ir ZnPPIX. Iš VEGF indukcija po pantoprazolo buvo gerokai susilpninta su HO-1 inhibitoriaus, reiškiantis HO-1 poveikio GKI sukeltos VEGF. Šie skaičiai yra atstovai gautų rezultatų 3 nepriklausomų eksperimentų. (C) Kitos angiogenezę veiksniai, susiję su pantoprazolo. bFGF ir VEGF buvo labiau išreikštas pantoprazolo, tačiau šie indukcijas buvo susilpnintas su HO-1 inhibitorius. Šie skaičiai yra atstovai gautų rezultatų 3 nepriklausomų eksperimentų. (D), in vitro,
angiogenezę tyrimas. Vaizdeliai formavimas HUVEC buvo gerokai sumažėjo 50 mkm indometacino. Pantoprazolas kompensuojamas indometacino sukeltos defektu angiogenezę, kaip vertinama su vamzdžių formavimo procentais, o HO-1 inhibitorius atšauktas jų įveikti pantoprazolo sukeltos angiogenezę. Šie skaičiai yra atstovai gautų rezultatų 3 nepriklausomų eksperimentų.
Pantoprazolo sukeltais HO-1 susilpnintos indometacino-susijęs uždegiminės puolimui
Nors indometacino yra priešuždegiminis agentas, ji buvo žinoma, kad NVNU sukeltos skrandžio žalą per padidėjo išraiškos uždegimo mediatorių, įskaitant TNF-alfa, IL-1β, IL-8, ir NADPH oksidazės-1 (NOx-1). Kaip matyti iš 4a paveiksle, 500 mkm indometacino žymiai padidino TNF-alfa, IL-1β, ir IL-8 skrandžio epitelinių ląstelių išraiškos, kadangi sumažino HO-1 išraišką, patvirtinantis, kad uždegimo mediatoriai gali būti mechaniškai siejamas su indometacino sukelta skrandžio epitelio ląstelių pažeidimą. Be šios sąlygos, kartu skiriant 500 mikromolių indometacino ir 300 mikromolių pantoprazolo žymiai sumažino TNF-alfa, IL-1β, ir IL-8 išraiškas kartu su statistiškai reikšmingai, padidėjo Ho-1 išraiška. Be to, indometacino iššūkis žymiai padidino NOX-1 posakių, kuriuose pantoprazolas gerokai susilpnintas padidėjusį išraišką NOX-1, tai rodo, kad pantoprazolas sukeltos HO-1, skiriamų priešuždegiminių veiksmus pagal indometacino. Be to, siekiant dar labiau įrodyti, ar šie uždegimo mediatorių attenuations po pantoprazolo lėmė HO-1 indukcijos, mes pakartojo šiuos eksperimentus su ZnPPIX administracija. Kaip matyti 4B paveiksle, bendro gydymas ZnPPIX į pantoprazolo buvimas žymiai panaikino priešuždegiminį poveikį naudą. Pavienių indukcijas iš ICAM-1 ir VCAM po indometacino gydymo buvo atsakingi už išemija ir pablogino organų pažeidimų, kurioje buvo verčiasi kraujagyslių uždegimas arba padidėjęs leukocitų agregacija. Gydymas indometacino žymiai padidino ICAM-1 ir VCAM išraiškas HUVEC, bet bendrai iššūkis indometacino ir pantoprazolo gerokai sumažėjo indometacino sukeltos ICAM-1 išraišką, susijusią su didesnio indukcijos HO-1 (4c pav). Be šios sąlygos, ZnPPIX nenustatė, kad ICAM ar VCAM slopinimas nepaisant pantoprazolo gydymo, toliau užtikrinti lengvatas gaunančiai veiksmų pantoprazolo susijęs su HO-1 indukcija. 4 pav pantoprazolas susilpnintas indometacino sukeltas uždegimo mediatorių per HO-1. (A), RT-PGR už TNF-alfa, IL-1β, IL-8, ir HO-1. 500 pM indometacino padidėjo uždegimo mediatorių įskaitant TNF-alfa, IL-1β, IL-8 išraiška, bet ir žymiai sumažėjo HO-1 išraiška. NOx-1 buvo žymiai padidėjo indometacino. Šie skaičiai yra atstovai gautų rezultatų 3 nepriklausomų eksperimentų. (B), pantoprazolas gerokai sumažėjo indometacino sukeltos IL-1β ir TNF-alfa, tačiau šie gaunančios veiksmai pantoprazolo buvo panaikintas ZnPPIX, leidžiančių daryti išvadą, kad priešuždegiminiai veiksmai pantoprazolo buvo dėl HO-1 indukcija. Šie skaičiai yra atstovai gautų rezultatų 3 nepriklausomų eksperimentų. (C), pantoprazolas gerokai sumažėjo indometacino sukeltos ICAM-1 ir KLAM į HUVEC ląstelių, tačiau šie gaunančios veiksmai pantoprazolo taip pat buvo panaikintas ZnPPIX kaip HO-1 inhibitorius. Šie skaičiai yra atstovai gautų rezultatų 3 nepriklausomų eksperimentų.
Pantoprazolo sukeltais HO-1 susilpnino indometacino sukelta skrandžio žalos
ištirti apsauginį poveikį pantoprazolo in vivo
, indometacino (10 mg /kg ) buvo pilvaplėvės ertmę 16 h žiurkėms. Gydymas indometacino žymiai išprovokavo skrandžio gleivinės sužalojimus, įskaitant hemoraginių erozijos ir opų. Tačiau, šie skrandžio patologijos, sukeltas su indometacino buvo žymiai susilpnintas su injekciją į pilvą 30 mg /kg kūno svorio pantoprazolo (5A pav). Nuo šių apsauginių poveikio 30 mg /kg kūno svorio pantoprazolo prieš indometacino sukelta skrandžio žalos buvo žymiai panaikinta su bendro gydymui intraperitoniniu būdu suvartotos 5 mg /kg kūno svorio ZnPPIX, mes patvirtinta, kad apsaugos veiksmų pantoprazolio priklauso nuo jo pajėgumą HO-1 indukcijos , Tada, kai "HO-1 ir ICAM-1 išraiškos buvo matuojamas gleivinės homogenatai iš kiekvienos grupės, indometacino administravimo žymiai sumažėjo Ho-1 išraiškos ir padidėjo ICAM-1 išraiška. Tačiau dėl padidėjusių HO-1 išraiškos po pantoprazolo, taip pat žymiai susilpnintų lygių ICAM-1, indometacino sukelta skrandžio žala buvo proporcingai pagerėjo nepaisant indometacino iššūkis (5b pav.) Norėdami parodyti, kaip pantoprazolas pagerino defektu angiogenezę ir išemiją išprovokavo iki indometacino EMSA naudojant HIF-1α buvo atlikta (5c pav). HIF-1α-DNR privalomas veikla buvo labai padidėjo indometacino vien grupės, kuri buvo žymiai sumažėjo skrandžio homogenatai pantoprazolo gydymo grupėje, reiškiantis pantoprazolo žymiai atleidžiamas hipoksinio būklę sukeltas indometacino. Kartu paėmus, PSI darė stiprią apsaugą nuo indometacino sukeltas skrandžio gleivinės pažeidimų per didelę HO-1 indukcija, kuri yra už autentišką rūgštis slopinančio veiksmų, nors mes ne matuoti skrandžio rūgštingumo pokyčius. 5 pav pantoprazolas neleidžia į indometacino sukelta skrandžio žalos per priklausomai nuo HO-1 indukcijos. (A), vidutinis indeksas indometacino sukelta skrandžio žalą. (B) RT-PGR už HO-1 ir ICAM-1 pagal grupės. (C), Europos jūrų saugos agentūros HIF-1α pagal grupės. Indometacino gerokai padidėjo HIF-1α DNR privalomas, o pantoprazolo gerokai sumažėjo HIF-1α DNR privalomas nuo dozės priklausomu būdu.
Diskusijų
Prieš atliekant dabartinį tyrimą, keli mokslininkai paskelbė, kad PSI galėjo išvengti skrandžio gleivinės pažaidų kitų mechanizmų, nepriklausančių nuo jo konkretaus rūgšties slopinimo [11, 14, 25-28] veiksmų, mes galime pridėti daugiau įrodymų dėl apsauginio veikimo PSI prieš NVNU. Pantoprazolas gerokai paskatino Ho-1 išraišką per Nrf2 aktyvavimo, susijusią su priešuždegiminiu, antioksidaciniu ir išemija malšinančių veiksmus. Nauji išvada Šio tyrimo skiriasi nuo kitų tyrimų yra tai, kad pantoprazolas rodo apsaugos priemonių, kurių NVNU sukeltos traumos per vieną iš dviejų angiogeniniai negalią korekcijos ar uždegimas polinkis slopinimas.
Becker, JC ir kt.
[16] parodė, kad tiek omeprazolas ir lansoprazolo apsaugotas žmogaus skrandžio epitelio ir endotelio ląsteles nuo oksidacinio streso, panašų į mūsų tyrime, tačiau naudojamas įvairių rūšių PSI. Kadangi šis poveikis buvo panaikinta atsižvelgiant į HO-1 inhibitoriaus akivaizdoje, ZnPPIX, Ho-1 atrodo teisinga tikslas PSI abiejose endotelio ir skrandžio epitelinių ląstelių. Šiame tyrime mes nustatėme, nepaliestą romano išvada, kad HO-1 sukeltas PSI sumažėjo NVNU-patirtos uždegimą ir angiogeninf suirutės. Takagi T et al.,
[25] taip pat tyrė Nrf2 vaidmenį, jos fosforilinimo /aktyvinimo ir oksidaciją Keap1 lansoprazolio sukeltos HO-1 up-reglamentą, taikant tą patį ląstelių liniją su mumis, RGM-1 ląstelių. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Epstein-Barr virusas susijęs skrandžio karcinoma: ataskaita iš Irano per pastaruosius ketverius decades
• Asociacija tarp RUNX3 promotoriaus metilinimo ir skrandžio vėžio: meta-analysis