Detekcia promótor hypermetylace z CPG ostrova e-cadherinu v žalúdku srdcovej adenokarcinóm

Detekcia promótor hypermetylace z CPG ostrova e-cadherinu v žalúdku srdcovej adenokarcinóm
Abstrakt
Cieľ
Abnormálne hypermetylace CPG ostrovov spojených s tumor supresorových génov môže viesť k transkripčný umlčanie v neoplázie. Cieľom tejto štúdie bolo preskúmať metylácie promótorom a expresie E-cadherinu génu v žalúdku srdcovej adenokarcinóm (GCA).
Metódy
vnorené MSP prístup, boli použité metódy imunohistochemické a RT-PCR, respektíve skúmať metylačného statusu ostrova 5 'CPG E-cadherinu, jeho expresiu proteínu a mRNA expresie v nádoroch a zodpovedajúce normálne tkanív.
Výsledky
E-cadherin sa methyluje v 63 z 92 (68,5%) nádorových vzoriek, ktoré bola výrazne vyššia ako v zodpovedajúcej normálnej tkaniva (P 0,001). Metylácia frekvencia fázy III a IV nádorovom tkanive bola významne vyššia ako v štádiu I a II nádorové tkanivá (p = 0,01). Stav metylácie zlé diferenciácie skupiny bola významne vyššia ako stredne a zlé stredne diferenciačný skupiny (P 0,01). Imunobarvením 51 z 92 nádorových tisssues preukázaná heterogénne, pozitívne imunologické nádorových tkanív (44,6%), podstatne odlišné od spárovaných normálnych tkanív (P 0,001). Pozitívne imunologické stupňa III a IV nádorovom tkanive bola významne nižšia ako stupňa I a II nádorovom tkanive (P 0,01). Zlá diferenciácie skupina bola tiež významne nižšia ako stredne a zlé stredne diferenciačný skupiny (P menšia ako 0,05). 80 percent z nádorového tkaniva s E-cadherin génu metylovaného preukázali, inaktivovaný expresie mRNA.
Závery
Vysoká metylačného statusu ostrova 5 'CPG z E-cadherin génu môže byť jedným z mechanizmov v rozvoji žalúdku srdcovej adenokarcinómu .
Kľúčové
E-cadherin metylácie žalúdku srdcovej adenokarcinóm Úvod
E-cadherinu je M r 120.000 transmembránový glykoproteín exprimovaný na epitelové bunky a je zodpovedný za homophilic, Ca 2 + -dependentní intercelulárnej adhézie, ktorý je nevyhnutný pre udržanie normálnej architektúry tkaniva v epitelových tkanivách [1]. Cytoplazmatickej domény E-cadherin sa viaže na a-, β- a y-catenins, ktoré sú zase spojené s actins, a táto interakcia je rozhodujúca pre jeho funkciu [2]. Bunka-bunka a bunka-matrix interakcie sa zásadným spôsobom podieľa na neoplastické transformácie a metastáz [3, 4]. Chybné adhézie buniek môže prispieť k strata kontaktnej inhibície rastu a k strate bunkovej adhézie môže byť zodpovedná za schopnosť nádorových buniek prekročiť hranice normálnych tkanív a metastáz [5]. Význam E-cadherinu v udržiavaní bunkovej adhézie vyplýva, že jeho dysfunkcia môže hrať dôležitú úlohu pri vzniku nádorov. Strata E-cadherin expresie sa vyskytuje v rôznych ľudských nádorov a existuje hypotéza, že je dôležitým krokom pri prechode medzi tvorby nádoru na inváziu a metastázy [6].
V posledných rokoch existuje niekoľko štúdií na kritickú úlohu E-cadherinu v vzniku nádorov. Bolo preukázané, že zárodočných mutácia génu E-cadherin sa vzťahuje k familiárnej žalúdka a kolorektálneho karcinómu [7, 8]. Ďalej bolo tiež zistené, somatické mutácie E-cadherinu v karcinómu žalúdka a alel stratou E-cadherin lokuse v 16q22.1 bola hlásená u rôznych epiteliálnych nádorov, ako je rakovina prsníka, vaječníkov, endometria a prostaty karcinómov [9, 10] , Okrem tohto genetickými zmenami, epigenetické zmena zahŕňajú hypermetylace z 5 'CPG ostrova v propagátor E-cadherinu je tiež zodpovedný za transkripčný represiu génu [11]. Je známe, že abnormálne hypermetylace CPG ostrovov spojených s tumor supresorových génov môže viesť k umlčanie transkripcie v neoplázie [12]. V skutočnosti, metylácie-spojené umlčanie E-cadherinu predstavuje najčastejšiu príčinu jeho inaktivácie v niekoľkých druhov rakoviny, ako sú pečeň, prostaty, prsníka a pažeráka [13-15].
Žalúdočné srdcovej adenokarcinóm (GCA), ktorá bola predtým registrovaná ako rakoviny pažeráka alebo karcinómu žalúdka, bola diagnostikovaná nezávisle v nedávnych rokoch, vďaka zlepšeniu v ranom endoskopických vyšetrení a stanovená diagnóza. Čína je krajinou s vysokým výskytom regiónmi GCA, najmä v Tchaj-chang severnej Číne. Exogénne faktory, vrátane nedostatku výživy, nezdravých životných návykov, konzumácia alkoholu a tabaku, patogénne infekcie sú všeobecne považované za rizikové faktory pre rozvoj GCA v Číne [16-18]. Avšak, iba časť, ktorí sú vystavení vyššie uvedených exogénnych rizikových faktorov by vyvíjať GCA, čo naznačuje, že viac genetické a epigenetické udalosti môže prispievať k progresii GCA. V súčasnej dobe je stále viac zrejmé, že epigenetické umlčanie génovej expresie od promotora CPG hypermetylace je dôležitou alternatívny mechanizmus na inaktiváciu tumor supresorových génov a nádorových spojené génov v nádorových ochorení [19]. Mutácia génu pre E-cadherinu sú zriedkavé v GCA, teda v tejto štúdii sme hodnotili úlohu metylácie ostrova 5 'CPG z E-cadherinu a koreláciu so zníženou E-cadherin expresie v GCA.
Metódy
Pacienti a vzorky
Tumor a spárovaný vzorky normálneho tkaniva boli získané od 92 pacientov. Tieto tkanivá boli rozdelené do dvoch paralelných častí, jedna časť bola zmrazené a skladované pri -80 ° C, kým sa extrahuje RNA, druhá časť bola formalínom fixovaných a parafínu zaliate. Tieto prípady boli všetky inpatients pre chirurgickou liečbou vo štvrtom Affiliated nemocnice Hebei lekárskej univerzity medzi 2004 a 2006. histologického nádoru písanie bolo vykonané na základe vybratých vzoriek v Ústave patológie rovnakej nemocnici. Všetky žalúdočné srdcové karcinómy boli adenokarcinómy s ich ohniskách v gastroezofageálneho spojenia, to znamená od 1 cm nad až 2 cm pod spojenie medzi koncom rúrkového pažeráka a začiatkom saccular žalúdka [20]. Informácie o TNM stagingu bola k dispozícii od nemocničných záznamov a patologické diagnózy. Štúdia bola schválená etickou komisiou Hebei Cancer Institute a dal informovaný súhlas zo všetkých prijatých osôb.
Metylácia špecifická polymerázová reťazová reakcia (MSP) pre E-cadherin metylácie promótorom
genómovej DNA žalúdočných srdcových adenokarcinómov a priľahlý nemalígna sekcia bola izolovaná z parafínových tkanivových šmykľavky štandardnými metódami s použitím zjednodušeného proteinázy k spôsob trávenia. Preskúmať vzorca metylácie DNA, sme liečili genómovej DNA s bisulfitového sodným, ako bolo opísané skôr [21]. V stručnosti, 2 ug DNA boli denaturované s 2 M NaOH pri 37 ° C počas 10 minút, nasledovala inkubácia s 3 M síranu sodného, ​​pH5.0, pri teplote 50 ° C počas 16 hodín. Hydrogensiričitanom spracuje DNA sa potom čistí (DNA Cleanup Kit; Promega, Madison, Wisconsin, USA), inkubujú s 3 M roztokom hydroxidu sodného pri teplote miestnosti po dobu piatich minút, vyzráža 10 M octanu amónneho a 100% etanolu, premytá 70% etanolom, a resuspendované v 20 ul destilovanej vody.
vnorené PCR prístup bol použitý na zistenie stavu metylácie v rámci E-cadherin CPG ostrova v exóne 1 (sekvencia -126 bp do +144 bp vzhľadom k začiatku transkripcie, GenBank prístupové číslo D49685 ), ktorý bol predtým publikovaný [15]. V prvom kole PCR boli amplifikované 100 ng bisulfitového-DNA ošetrené. Tieto sekvenčné priméry 5'-GTTTA GTTTTGGGGAGGGGTT-3 '(sense) a 5'-ACTAC TACTCCAAAAACCCATAACTAA-3' (antisencie), a že Podmienky cyklovania boli jeden cyklus 95 ° C po dobu 5 minút, nasleduje 30 cyklov 95 ° C C počas 30 s, 50 ° C počas 30 s, 72 ° C počas 30 s a konečná extenzia pri teplote 72 ° C počas 5 min. Veľkosť softvéru po tejto počiatočnej reakcie PCR bola 270 bp. Pre druhé kolo PCR, bol tento produkt zriedený v pomere 1: 50 vo vode, a 2 ul riedenie boli použité pre MSP. Vnorené sekvencie primérov pre E-cadherinu pre methylata reakcie boli 5'-TG TAGTTACGTATTTATTTTTAGTGGCGTC-3 '(sense) a 5'-CGAATACGATCGAATCGAACCG-3' (antisencie), a sekvencie primérov pre nemethylovaný reakcie boli 5'-TGGTTGTAGTTATGTATTTATT TTTAGTGGTGTT-3 "(sense) a 5'-ACACCAAATA CAATCAAATCAAACCAAA-3 '(antisencie). Parametre PCR boli, ako je uvedené vyššie, okrem toho, že žíhacie teploty pre metylesterov a nemethylovaných účinkov bola 64 ° C a 62 ° C, resp. Veľkosti produktové metylesterov a nemethylovaných reakcie boli 112 a 120 bp, resp. Rakovina prsníka bunková línia MDA-MB-231, čo ukazuje, metylácii a umlčanie E-cadherinu a slepé pokusy boli použité ako pozitívne a negatívne kontroly.
Imunohistochemické farbenie pre E-cadherinu
E-cadherin expresie bola určená imunobarvením za použitia komplexného imunoperoxidázové metódy avidín-biotín, ktorá bola vykonaná na paralelných sekcií histopatologických zo sekcie nádoru zaliatych v parafínu a párové normálne tkanivo. Endogénne peroxidáza bola blokovaná 3% peroxidu vodíka po dobu 10 minút, nasleduje vyhľadávanie mikrovlnná antigénu po dobu deviatich minút pri teplote 98 ° C v 10 mM citrátu sodnom (pH 6,0) a inkubuje sa v 2% normálnym konským sérom, aby sa minimalizovalo nešpecifické väzby. Sklíčka bola následne inkubovali s primárnou monoklonálne, myší anti-E-cadherin protilátkou (riedenie 1: 100 vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom, Santa Cruz, sc-8426) cez noc pri 4 ° C, biotinylizované sekundárne protilátka počas 30 minút pri teplote 37 ° C a ABC činidlo po dobu 45 minút pri teplote 37 ° C. 0,5% 3,3'-Diaminobenzidine (Sigma, St. Louis, MO) bol použitý ako chromagen. U negatívnej kontroly sa primárna protilátka bola nahradená myšiam IgG. Sklíčka s normálnou žalúdočnej sliznici boli použité ako pozitívna kontrola.
Meranie mRNA expresie E-cadherinu
RNA bola extrahovaná z tkaniva nazmrz- štandardnými spôsobmi za použitia TRIzolu (Invitrogen, USA). cDNA sa syntetizuje za použitia Advantage RT-pre-PCR kit (Clontech, Palo Alto, CA) s oligo (dT) primérov, ako sa odporúča v protokole uvedeného. Gen GAPDH bola použitá ako kontrola. Primer sekvencie E-cadherinu bola 5 ° ‰ -CGACCCAACC CAAGAATCTA-3 ° ‰ (sense) a 5 ° ‰ -AATGGCAG GAATTTGCAATC-3 ° ‰ (antisencie), primer sekvenciu GAPDH boli 5 ° ‰ -GGGAAACTGTGGCGT GAT-3 ° ‰ (sense) a 5 ° ‰ -GTGGTCGTTGAGGG CAAT-3 ° ‰ (antisencie), veľkosť produktu bolo 202 bp a 342 bp, resp. PCR produkty boli rozdelené na 2% agarosovém gélu a intenzity signálu boli kvantifikované za použitia počítačového zobrazovacieho systému. Hladiny génových transkriptov boli kvantifikované ako pomer intenzity E-cadherinu signálu intenzity beta-aktínu. Inaktivovaná expresia bola hodnotená pri expresie E-cadherinu génu vo vzorke nádoru bola < 25% z jeho expresie v zodpovedajúcom normálnom vzorke.
Štatistická analýza
Štatistická analýza bola vykonaná pomocou SPSS10.0 softvérový balík (SPSS Company, Chicago, Illinois, USA). Fisherov presný test a Chi-kvadrát test boli použité na posúdenie štatistickej významnosti rozdielov a porovnať kategorické asociácie. Pre obojstrannú testy boli použité pre určenie významnosti, a hodnoty P menšie ako 0,05 boli považované za štatisticky významné vo všetkých štatistických testov. Výsledky
Subject vlastnosti
Ako je uvedené v tabuľke 1, 92 pacientov GCA boli získané tento výskum, vrátane 73 samcov a 19 žien, vek sa pohyboval od 38 ~ 76, priemerný vek 56,9. Všetkých prípadoch boli rozdelené do 4 nádoru uzlov metastázy (TNM) fáza podľa UICC v štandarde, 8 stupňa I (8,7%), 32 stupňa II (34,8%), 38 stupňa III (41,3%), 14 javiskové IV (15,2%). Podľa patologických fázach konania boli rozdelené do 3 skupín, 42 (45,7%) striedme skupiny, 34 (36,9%) so zlou stredne ťažkej skupine a 16 (17,4%) so zlou group.Table 1 Klinické a patologické charakteristika pacienti GCA
Skupiny
n (%)
sex
Muž
73 (79,3)
Žena
19 (20,7 )
Priemerný vek v rokoch (SD)
56,9 (8,86)
TNM štádium
Aj
8 (8,7)
II
32 (34,8)
III
38 (41,3)
IV
14 (15,2)
Patologická diferenciácie nádoru
mierneho
42 (45,7)
zlé mierne
34 (36,9)
zlá
16 (17,4)
metylačnej analýzu E-cadherin génu
metylačnej analýzu bola úspešne vykonaná u všetkých nádorov a spárovaný vzorky normálneho tkaniva (obrázok 1). 10% vzoriek, analýza metylácie sa opakuje na kontrolu kvality. V 63 (68,5%) z 92 GCA nádory E-cadherin metylácie bola zistená, pričom len v 10 (10,9%) spárovaných normálnych tkanív bola detekovaná E-cadherin metylácie. Frekvencia E-cadherin metylácie nádorových tkanivách bola významne vyššia ako párových normálnych tkanivách (p 0,001). Keď rozvrstvené pre TNM štádií, frekvencia E-cadherin génu metylácie pacientov GCA s štádia III a štádiu IV (78,8%) sú výrazne vyššie ako u pacientov GCA s fázou I a fázou II (55%) (X2 = 5,96, p = 0,01 ). Keď rozdelení podľa patologických etapách E-cadherinu gen metylácie frekvencie mierne, zlé-mierne a chudobné skupine boli 52,4%, 73,5% a 100%, frekvencia E-cadherin génovej metylácii chudobné skupiny významne vyššie ako u stredne a chudobnými -moderate skupiny (χ2 = 8,92, P = 0,003) (tabuľka 2). Obrázok 1 Analýza metylácie E-cadherinu v nádorovom tkanive (T) a zodpovedajúce normálne tkanive (N). U: indikuje prítomnosť nemethylovaných génov; m: indikuje prítomnosť metylovaných génov. Púzdra 1 a 2: tumor-špecifické metylácie; Prípad 3: nádor je plne metylovaný, zatiaľ čo zodpovedajúce normálne tkanivo má veľmi slabý pás preukazujúce metylácii; Prípad 4: obaja nádoru a zodpovedajúce normálne tkanív nemethylovaný
Tabuľka 2 E-cadherinu metylácie a Imunohistochemické farbenie charakteristík pacientov GCA
<. col> Group
stav metylácie
P
Imunohistochemické farbenie
P
M
U
-
+
TNM štádium
Aj
4
4
2
6
II
18
14
13
9
III
29
9
26
12
IV
12
2
0.015
10
4
0.002
patologická diferenciácie nádoru
miernej
22
20
20
2
zlú stredne ťažké
25
9
18
16
chudobné
16
0
0.003b
13 Sims 3
0.022b
hodnota P štádia III a IV pacientov proti štádiu i a II pacientmi, b hodnotou P chudobných diferenciácia skupina proti stredne závažné a zlé moderovať skupín
imunozbarvení E-cadherin génu
Ako je ukázané v tabuľke 2, farbenie bola heterogénne 51 nádorovom tkanive, nádorové bunky so zníženou membranózna E-cadherinu farbenie boli zmiešané s nádorovými bunkami ukazujúci silnú membranózna farbenie (obrázok 2). Frekvencia expresia proteínu bola v nádorových tkanivách 44,6%, zatiaľ čo párové vzorky normálneho tkaniva všetky preukázané difúzny silné membranózna E-cadherinu farbenie. Frekvencia expresia proteínu sa významne líšila medzi nádorom a spárované normálne tkanive (P 0,001). Pri stratifikovaný pre TNM fáz, frekvencia E-cadherin génovej expresie proteínu štádia III a nádorových tkanivách IV (30,8%) bol signifikantne nižší ako v stupni I a nádorových tkanivách II (62,5%) (χ2 = 9,21, P = 0,002) , Frekvencia E-cadherin génovej expresie proteínu zlého skupiny významne nižšie ako v miernych a stredne-chudobných skupín (X2 = 5,23, p = 0,022). Obrázok 2 E-cadherin immunostain v GCA tkanive. A: Pozitívne farbenie (normálne tkanivo). B :. Farbenie negatívne (GCA tkanivo) výraz
mRNA pre E-cadherin génu
úrovniach prepisy boli stanovené v 32 vybraných zmrazených GCA vzoriek analýzou RT-PCR (obrázok 3). Všetkých 32 vzoriek GCA vrátane 2 stupne I, 2 fázy II, 8 štádia III a 8 stupňami IV prípadov, v ktorých bol nádor methylata a 12 prípadov (2 stupne I, 4 stupňov II, 4 stupne III a 2 štádiu IV) s génom nemethylovaný E-cadherin. Fragment 202 bp génového transkriptov E-cadherin bol vytvorený, s GAPDH fragmentu 342 bp prepisu ako kontrola. 16 (1 fáza II, 7 stupňa III a 8 štádiu IV) prípadov (80%) inaktivovaného mRNA expresie bol pozorovaný u 20 vzoriek nádoru s E-cadherin génu methylata, ďalšie 4 (2 stupne I, 1 etapa II, 1 štádia III) prípadov ukázal pozitívny výraz. 12 vzoriek nádorové s E-cadherin génu nemethylovaný všetci prejavili pozitívne expresie E-cadherinu génu. Obrázok 3 Analýza mRNA z E-cadherinu v nádorových tkanivách. 1: 100 bp DNA markeru 2,4,5,6,9: pozitívna mRNA expresie 3,7,8 :. Negatívne expresie mRNA
Diskusia
Čína je krajinou s vysokým výskytom rakoviny zažívacieho traktu, ktoré vrátane pažeráka karcinóm, rakovina žalúdka a žalúdka srdcové adenokarcinóm (GCA). GCA, ktorá bola predtým registrovaná ako rakoviny pažeráka alebo karcinómu žalúdka, bola diagnostikovaná nezávisle v nedávnych rokoch, vďaka zlepšeniu v ranom endoskopických vyšetrení a stanovená diagnóza. Bolo navrhnutých niekoľko epidemiologických údajov, že incidencia GCA so zvyšujúcou sa v posledných rokoch. Niektoré výskumy ukázali, že mechanizmus a klinickým príznakom GCA je odlišný od karcinómu žalúdka, ale podobné rakoviny pažeráka. Presný mechanizmus vzniku GCA zostáva nejasný pre túto chvíľu. Je všeobecne uznávané, že dedičný faktor, ktorý dráždi vzniku nádoru vrátane dvoch mechanizmov, genetiky a epigenetiky mechanizmu. Genetické abnormality preto-onkogénov a tumor supresorových génov sú dobre známe zmeny, ktoré sa často podieľajú na patogenéze rakoviny. Avšak, epigenetické inaktivácia niektorých nádorových supresorových génov, aberantne metylácie promótorom je často pozorovať u niekoľkých nádorov, a môže hrať hlavnú úlohu pri vzniku nádorov. Zatiaľ čo genetické abnormality sú spojené so zmenami v sekvencii DNA, epigenetické udalosti môžu viesť k zmenám v génovej expresii, ktoré sa vyskytujú bez zmeny v sekvencii DNA. Ak sú ovplyvnené tumor supresorové gény, to má za následok zvyčajne v transkripčný umlčanie, a teda inaktiváciu uvedeného génu. Sa potom môže udeliť výhody rastu týchto buniek, ktoré uprednostňujú vývoj rakoviny [22].
Ako člen bunkovej adhézie molekulárnej, E-cadherin hrajú dôležitú úlohu pri udržiavaní bunkovej adhézie a jeho dysfunkcia môže mať za následok tumorigenesis.6 Biologická dôsledky jeho dysfunkcie patrí k narušeniu medzibunkovej adhézie a zníženie hodnoty ß-katenin-sprostredkovanú transaktivaci [23]. K dnešnému dňu však neboli objasnené regulačné mechanizmy zodpovedné za zmenené hladiny E-cadherinu proteínov v GCA. Bolo oznámené, že hypermetylace E-cadherinu boli spojené s rakovinou žalúdka a pažeráka adenokarcinómu [21, 24]. Avšak, tam sú žiadna iná správa o vzťahu medzi Ecadherin metylácie a vzniku nádorov z GCA. V tejto štúdii sme ukázali, že hypermetylace ostrova 5 'CPG promótorom E-cadherin došlo často v GCA tkanivách (68,5%), a že táto zmena metylácie bolo spojené so zníženou expresiou E-cadherinu proteínu. Naše údaje naznačujú, že epigenetické umlčanie na E-cadherin promótorom cez hypermetylace môže byť jedným z kritických mechanizmu pre deaktiváciu tohto génu v GCA. Umlčanie génu spojené s hypermetylace je sprostredkovaná proteínmi metyl-väzby, ktoré sa viažu k metylovaných cytozinov a nábor komplex proteínov, ktoré potláčajú transkripciu, vrátane histondeacetyláz [25].
V našej štúdii sme zistili, že vo väčšine prípadov sme skúmali, E-cadherin metylácie bola konkrétna nádor. Avšak, 10 prípadov, v ktorých bol prítomný ako v nádore zmena metylácie a škárovanie normálneho tkaniva od rovnakého pacienta. Vzhľadom na citlivosť vnorené MSP, je možné, že normálne vyzerajúci vzorky obsahovali vzácnu rakovinová bunka, ktorá bola nezistiteľné histomorphology. Vzhľadom na obmedzenia vzorky sme nemali študovať metylácii E-cadherinu v normálnych Cardia tkanivách. Avšak, normálne tkanivo pažeráka nevykazovala aberantne E-cadherinu metylácie v niektorých štúdiách [21] a v predchádzajúcich štúdiách vyšetrovania E-cadherinu metylácie v rôznych typov nádorov, normálnych tkanivách z kostnej drene, prsníka, štítnej žľazy, a ústnej sliznici boli nemethylovaný [ ,,,0],14, 26]. Tieto údaje silne naznačujú, že E-cadherin metylácie promótorom je aberantne udalosti. Skutočnosť, že sme iba detekovaný metylácie v párových normálneho tkaniva od pacientov, u ktorých bol nádor tiež zodpovedajúci metylovaných je v súlade s hypotézou, že rakovina u týchto jedincov vznikla z methylata klonálnej prekurzora. V štúdii nádorové progresie Barrettova pažeráka, hypermetylace génu p16 tumor supresorového bola zistená v patologicky normálne vyzerajúce vzoriek získaných od pacienta, ktorý neskôr vyvinutým dysplázie [27]. Z tohto dôvodu, epigenetické inaktivácia supresorových génov nádoru môže byť skorý rys vzniku nádorov.
Naše výsledky ukazujú, že expresia proteínov z Ecadherin v nádorových tkanivách signifikantne nižšia ako v párových normálnych tkanivách je však imunohistochemické farbenie tiež ukázal, normálne membranózna farbenie E -cadherin v niektorých nádorových vzoriek s E-cadherinu metylácie. Existuje niekoľko možných dôvodov udalosti. Po prvé, To bolo pravdepodobne spôsobené tým, že imunohistochemické farbenie bolo nie sú tak citlivé, ako PCR pre detekciu subpopulácia buniek s génovou metyláciou, a teda downregulace E-cadherinu. Po druhé, nádorové tkanivá môžu stretávať sa niektoré normálne tkanivá a môže sa ukázalo normálne membranózna farbenie E-cadherinu. Po tretie, gén heterogénne metylácie alebo alela metylácie môže byť dôležitým dôvodom. V našich štúdiách sme zistili, že je stav metylácie nádorových tkanivách, že ako ukázali pozitívny expresie proteínu a hypermetylace boli neúplné Ecadherin metylácie. Okrem toho bolo preukázané, že metylácie DNA, ktorá potlačená expresia génu najmä v úrovni transkripcie a hustota CPG ostrova metylácie bola v súvislosti s potlačenou stupeň transkripcie [28]. Dicky promótor môže byť úplne potlačená nižšou hustotou metylácie, však, keď bola zvýšená promótor enhanser, budú vyvolané funkcie transkripcie. V našej štúdii sme tiež našiel pozitívnu expresie mRNA v niektorých nádorových vzoriek s E-cadherinu génu metylovaných. To čiastočne vzhľadom na to, že rozsah metylácie promótorom bol insufficent potlačiť E-cadherinu transkripciu. Vo všetkých, naša štúdia naznačila, že epigenetické umlčanie E-cadherin promótor cez hypermetylace môže byť jedným z mechanizmu pre deaktiváciu E-cadherinu v GCA.
Vyhlásenie
Poďakovanie
Ďakujeme pacientov a kontrolných osôb za účasť v tejto štúdii.
podporovaná granty značnej výrazné predmetov založenia provincii Che-pej.

• Klinický význam systému UPA v karcinómu žalúdka s peritoneálnej metastasis
• Epstein-Barr vírus špecifické metylácie ľudských génov v karcinómu žalúdka cells