Aptikta promotoriaus hypermethylation iš CpG salos E-cad skrandžio širdies adenocarcinoma

aptikimas promotoriaus hypermethylation iš CpG salos E-cad skrandžio širdies adenokarcinoma
Santrauka
Tikslas
Nenormalus hypermethylation CpG salų, susijusių su navikas slopintuvas genų gali sukelti transkripcijos nuslopinami į navikų. Šio tyrimo tikslas buvo ištirti rengėjas metilinimas ir raišką El cad geno skrandžio širdies adenokarcinoma (GCA).
Metodai
įdėtos MSP požiūrį, imunohistocheminis metodas ir AT-PGR buvo naudojamos atitinkamai išnagrinėti metilinimas statusas 5 'CpG salos E-cad, jos baltymų ekspresijos ir iRNR išraiškos navikų ir atitinkamą normalius audinius.
rezultatai
E-cad buvo denatūruotas 63 92 (68,5%) naviko egzempliorių, kurie buvo žymiai didesnis nei, kad atitinkamose normaliuose audiniuose (p < 0,001). Metilinimo dažnis III ir IV stadijos navikų audiniuose, buvo gerokai didesnis nei I etapas ir II navikų audiniuose (p = 0,01). Metilinimas statusas prastos diferenciacijos grupėje buvo reikšmingai didesnis nei vidutinio ir prastos vidutinio diferenciacijos grupių (p < 0,01). Iki imunodažymu 51 92 naviko tisssues parodė nevienalytė, teigiamą imunodažymu vėžinių audinių (44,6%), žymiai skiriasi nuo suderintų normaliuose audiniuose (p < 0,001). Teigiamas imunodažymu III ir IV stadijos navikų audiniuose buvo gerokai mažesnis nei I etapas ir II navikų audiniuose (p < 0,01). Prastas diferenciacija grupė taip pat buvo gerokai mažesnis nei vidutinio ir prastos vidutinio diferenciacijos grupių (p < 0,05). 80 procentų vėžinių audinių su E-cad geno metilo parodė inaktyvuota iRNR išraiška.
Išvados Viesbutis High metilinimo statusą 5 'CpG salos E-cad geno gali būti vienas iš skrandžio širdies adenokarcinoma vystymosi mechanizmus .
Raktiniai žodžiai
El cad metilinimas skrandžio širdies adenokarcinoma Įvadas
E-cad yra M R 120.000 transmembraninis glikoproteinas išreikštas epitelio ląstelių ir yra atsakingas už homophilic Ca 2 + -dependent tarpląstelinės adhezijos, kad yra būtina, kad normalaus audinio architektūros išlaikymo epitelinio audinio [1]. Citoplazmos domeno E-cad jungiasi prie a-, β- ir gama-catenins, kurie savo ruožtu susijęs su actins ir ši sąveika yra labai svarbi jo funkcija [2]. Mobilusis vienaląsčiai ir ląstelių matricos sąveika itin dalyvauja neoplastiniu transformavimo ir metastazių [3, 4]. Sugedęs ląstelių sukibimą gali prisidėti prie nuostolių kontaktinę slopinamas augimas ir praradimo ląstelių sukibimą gali atsiskaityti už vėžinių ląstelių sugebėjimą kirsti sveikus audinius ribas ir metastazių [5]. E-cad svarba palaikant ląstelių sukibimą reiškia, kad jos disfunkcija gali vaidinti svarbų vaidmenį Tumorigenesis. Praradimas El cad išraiška atsiranda įvairių žmogaus navikų įvairovė ir iškėlė hipotezę, kad būtų svarbus žingsnis progresavimą nuo navikų susidarymo iki invazijos ir metastazių [6].
Pastaraisiais metais, yra keletas tyrimų kritinės vaidmenį E-cad į tumorigenesis. Įrodyta, kad gemalo linija mutacijos E-cad geno yra susijusi su šeimine skrandžio ir storosios žarnos vėžio [7, 8]. Be to, somatinės mutacijos E-cad, taip pat buvo rasta skrandžio karcinoma ir alelių praradimas E-cad lokuso ne 16q22.1 buvo pranešta įvairiose epitelinių navikų, tokių kaip krūties, kiaušidžių, gimdos gleivinės, ir prostatos karcinoma [9, 10] , Išskyrus šią genetinę pakitimų, epigenetinius pakeitimas apima hypermethylation iš 5 "CpG saloje, E-cad rengėjas taip pat yra atsakingas už transkripcijos represijų geno [11]. Ji yra žinoma, kad nenormalus hypermethylation CpG salos, susijusių su navikų supresorinių genų gali sukelti transkripcijos yra nuslopinami į neoplazijos [12]. Iš tiesų, metilinimas susijęs triukšmo slopinimo E-cad atstovauja dažniausia dėl jo nukenksminti keliais vėžio, pavyzdžiui, kepenų, prostatos, krūties ir stemplės [13-15].
Skrandžio širdies adenokarcinoma (GCA), kuri anksčiau buvo registruotas kaip stemplės vėžio ar skrandžio vėžio, buvo diagnozuota nepriklausomai labai pastaraisiais metais dėl to, kad pradžioje endoskopinės patikrą ir patologinio diagnozę tobulinti. Kinija yra šalis su aukšto sergamumo regionuose GCA, ypač Taihangšanas Šiaurės Kinijoje. Egzogeniniai veiksniai, įskaitant mitybos trūkumas, nesveiko gyvenimo įpročiai, alkoholio vartojimas ir tabako, patogeninių infekcijos paprastai laikomi rizikos faktorių GCA Kinijoje [16-18]. Tačiau tik asmenims gresia pirmiau išvardytų išorinių rizikos veiksnių plėtosis GCA poaibis, o tai rodo, kad daug genetinių ir epigenetinius įvykiai gali prisidėti prie GCA progresavimą. Šiuo metu vis labiau pripažįstama, kad epigenetinius triukšmo slopinimo genų išraiškos promotoriaus CpG hypermethylation yra svarbi alternatyva mechanizmas neutralizuojant navikas slopinančias genus ir naviko susijęs genų vėžio [19]. Mutacijos E-cad geno yra reti GCA, todėl šiame tyrime mes įvertino metilinimo iš 5 'CpG salos E-cad ir jo koreliacija su riboto El cad raiškos GCA vaidmenį.
Būdai
pacientai ir jų pavyzdžiai
naviko ir suporuoti normalaus audinio mėginiai buvo gauti iš 92 pacientų. Šie audiniai buvo suskirstyti į du lygiagrečius dalių, iš vienos pusės buvo užšaldytas ir saugomi -80 ° C temperatūroje, kol RNR buvo išskirta, kita dalis ir formalinu fiksuoto ir parafinu uZlietq. Bylos buvo visų ligonių chirurginio gydymo ketvirtosios filialas ligoninė, Hebei medicinos universiteto tarp 2004 ir 2006 m histologinis naviko rašyti buvo atliktas remiantis rezekcijos egzempliorių į patologijos paties ligoninę departamento pagrindu. Visi skrandžio širdies karcinomos buvo adenokarcinomos su jų seisminis tuo gastroezofaginio sandūroje, t.y. nuo 1 cm atstumu virš iki 2 cm žemiau tarp vamzdinio stemplės pabaigoje ir į saccular skrandžio [20] pradžioje sandūroje. Informacija apie TNM sustojimo buvo galima iš ligoninės įrašų ir patologinės diagnozės. Tyrimas patvirtino Etikos komiteto Hebei vėžio instituto ir buvo gautas sutikimas iš visų įdarbintų asmenų.
Metilinimas specifinė polimerazės grandininė reakcija (JEP) E-cad promotoriaus metilinimo pervežimas Genomo DNR iš skrandžio, širdies adenokarcinomos ir greta nonmalignant skyriai buvo izoliuotas nuo parafino įterptųjų audinių skaidres standartiniais metodais, naudojant supaprastintą proteinazės K virškinimo metodu. Nagrinėti DNR metilinimo modelius, mes apdorojimo genomo DNR su natrio bisulfitu, kaip aprašyta anksčiau [21]. Trumpai tariant, 2 mikrogramų DNR buvo denatūruotas su 2 M NaOH 37 ° C temperatūroje 10 minučių, po to inkubacijos su 3 M natrio rūgščiojo sulfito, pH5.0, esant 50 ° C temperatūroje 16 valandų. Bisulfitas apdorojimo tada DNR buvo gryninamas (DNR valymo rinkinys; PROMEGA, Madisonas, Viskonsinas, JAV), inkubuojamos su 3 M NaOH kambario temperatūroje penkias minutes, nusodinamas 10 M amonio acetato ir 100% etanolio, išplautos su 70% etanolio, ir sumaišymo 20 įxL distiliuotu vandeniu.
lizdinė PGR metodą, buvo siekiama nustatyti metilinimo statusą E-cad CpG saloje Exon 1 (seka -126 BP +144 bp, palyginti su transkripcijos pradžios, GenBank prisijungimas skaičius D49685 ), kad anksčiau buvo paskelbtas [15]. Į pirmojo turo PGR, buvo papildyta 100 ng bisulfito-apdoroto DNR. Sekos sudarymo pradmenys buvo 5'-GTTTA GTTTTGGGGAGGGGTT-3 '(pojūtis) ir 5'-ACTAC TACTCCAAAAACCCATAACTAA-3' (Priešprasminis), ir Minantis sąlygos buvo vienas ciklas 95 ° C temperatūroje 5 min, o po to 30 ciklų 95 ° C temperatūroje 30 S, 50 ° C temperatūroje 30 S, 72 ° C temperatūroje 30 s, ir galutinis išplėtimas 72 ° C temperatūroje 5 min. Produkto po šio pradinio PGR reakcijos dydis buvo 270 bp. Dėl antrojo turo PGR, šis produktas buvo skiedžiamas 1: 50 vandeniu ir 2 mikrol Praskiedimo buvo naudojami JEP. Įdėtos gruntas sekas E-cad už denatūruotą reakcija buvo 5'-TG TAGTTACGTATTTATTTTTAGTGGCGTC-3 "(jausmas) ir 5'-CGAATACGATCGAATCGAACCG-3" (Priešprasminis) ir gruntas sekų nedenatūruotu reakcija buvo 5'-TGGTTGTAGTTATGTATTTATT TTTAGTGGTGTT-3 '(pojūtis) ir 5'-ACACCAAATA CAATCAAATCAAACCAAA-3' (Priešprasminis). PGR parametrai buvo kaip nurodyta pirmiau, išskyrus tai, kad atkaitinimo temperatūra apie metilintas ir nemetilintas reakcijų buvo 64 ° C ir 62 ° C, atitinkamai. Dydžiai produktas denatūruotu ir nedenatūruotą reakcijų buvo 112 ir 120 bp, atitinkamai. Krūties vėžio ląstelių linija MB-MDA-231, kuris rodo, metilinimas ir nutildymo E-cad ir reagentų ruošiniai buvo naudojami kaip teigiamų ir neigiamų kontrolinių.
Imunohistocheminį dažymo E-cad pervežimas El cad išraiška lėmė imunodažymu naudojant avidino-biotino kompleksas imunoperoksidaziniu metodą, kuris buvo atliktas lygiagrečiai histopatologinių skyriuose iš parafino įterptųjų naviko skyriuje ir suporuotas normalų audinį. Endogeninės peroksidazės buvo užblokuotas su 3% vandenilio peroksido 10 minučių, po to mikrobangų antigeno paiešką bei devynių minučių 98 ° C temperatūroje 10 mM natrio citrato buferio (pH 6,0) ir inkubuojami 2% normalaus arklių serumo, siekiant sumažinti nespecifinį. Skaidres buvo iš eilės inkubuojamas su pirmine monokloninio, pelės anti-E-cad antikūnas (1: 100 atskiedimas fosfatinio buferio druskų tirpalo, Santa Cruz, SC-8426) per naktį 4 ° C, biotinilinto antrinis antikūnas 30 min 37 ° C temperatūroje ir ABC reagentas 45 min, esant 37 ° C temperatūroje. 0,5% 3,3'-diaminobenzidinas (Sigma, St. Louis, MO) buvo naudojamas kaip spalvotas junginys. Dėl neigiama kontrolė, pagrindinis antikūnas buvo pakeistas su pelės IgG. Skaidrės su normalia skrandžio gleivinės buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė.
Matavimas iRNR raiška E-cad
RNR buvo išskirta iš šaldytų skyriuje audinių standartiniais metodais, naudojant Trizol (INVITROGEN, JAV). kDNR buvo susintetintas naudojant Advantage RT-už-PCR Kit (Klontex, Palo Alto, CA) su oligo (dT) gruntavimui kaip rekomenduojama numatyto protokolo. GAPDH genas buvo naudojamas kaip kontrolės. Gruntas sekos E-cad buvo 5 ° ‰ -CGACCCAACC CAAGAATCTA-3 ° ‰ (jausmas) ir 5 ° į ‰ -AATGGCAG GAATTTGCAATC-3 ° ‰ (Priešprasminis), gruntas seka GAPDH buvo 5 ° ‰ -GGGAAACTGTGGCGT GAT-3 ° ‰ (jausmas) ir 5 ° į ‰ -GTGGTCGTTGAGGG CAAT-3 ° ‰ (Priešprasminis), produkto dydis buvo 202 bp ir 342 bp, atitinkamai. PGR produktai buvo išspręstas 2% agarozės gelyje ir signalo intensyvumo buvo įvertinami naudojant kompiuterio vaizdo gavimo sistema. Genų nuorašai lygiai buvo išmatuoti, kaip į E-cad signalą į beta-aktino intensyvumo intensyvumo santykis. Inaktyvuota išraiška buvo įmuštas, kai išraiška elektroninės cad geno auglio mėginį buvo < 25% savo išraiška atitinkamoje normalaus pavyzdžio.
Statistinė analizė
Statistinė analizė atlikta naudojant SPSS10.0 programinės įrangos paketu (SPSS Company, Chicago, Illinois, USA). Fišerio tikslusis testas ir Chi kvadrato testas buvo naudojamas įvertinti statistinio reikšmingumo skirtumus ir palyginkite kategorinius asociacijas. Dvipusis testai buvo naudojami siekiant nustatyti reikšmę, ir P vertės yra mažesnės nei 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas visiems statistinių testų.
Rezultatai
Dalyko savybes
Kaip parodyta 1 lentelėje, 92 GCA pacientai buvo gautas šis tyrimas, įskaitant 73 vyrų ir 19 moterų, amžius svyravo nuo 38 ~ 76, amžiaus vidurkis 56,9. Visais atvejais buvo suskirstyti į 4 naviko limfmazgius metastazių (TNM) etapai pagal UICC standartą, 8 I etapo (8,7%), 32 II etape (34,8%), 38 III etape (41,3%), 14 IV stadijos (15,2%). Pagal patologinius etapais, bylos buvo suskirstyti į 3 grupes, 42 (45,7%) vidutinio grupės, 34 (36,9%) prastos vidutinio sunkumo grupės ir 16 (17,4%) prastos group.Table 1 klinikiniai požymiai ir patologiniai savybėmis GCA pacientai
Grupės

N (%)
Sex
Vyras
73 (79,3)
Moteris
19 (20,7 )
vidutinis amžius metais (SD)
56,9 (8,86)
TNM etapą
Aš
8 (8,7)
II
32 (34,8)
III
38 (41,3)
priedo IV
14 (15,2)
Patologinė diferenciacija naviko
vidutinio
42 (45,7)
prastos vidutinio
34 (36,9)
prasta
16 (17,4)
Metilinimas analizė El cad geno pervežimas metilinimo analizei buvo sėkmingai atliktas visose naviko ir suporuotas normalaus audinio egzempliorių (1 paveikslas). 10% mėginių, metilinimas analizė buvo pakartotas už kokybės kontrolės. 63 (68,5%) 92 GCA navikai El cad metilinimas buvo aptikta, o tik 10 (10,9%) suporuotų normaliuose audiniuose buvo aptiktas El cad metilinimas. E-cad metilinimo naviko audiniuose dažnis buvo reikšmingai didesnis nei suporuotas normaliuose audiniuose (p < 0,001). Kai stratifikuotu TNM etapais, dažnis E-cad genų metilinimas GCA pacientams, sergantiems III stadijos ir IV etapas (78,8%) buvo reikšmingai didesnis nei GCA pacientams, sergantiems I etapas ir II etapą (55%) (χ2 = 5,96, p = 0,01 ). Kai stratifikuotu patologinių etapais, E-cad genų metilinimo dažnis vidutinio sunkumo, prasta-vidutinio sunkumo ir prastos grupėje buvo 52,4%, 73,5% ir 100%, dažnį E-cad genų metilinimas prastos grupės gerokai didesnis nei vidutinio sunkumo ir vargšų -moderate grupės (χ2 = 8,92, p = 0,003) (2 lentelė). 1 pav Metilinimas analizė E-cad auglio audinio (T) ir atitinkantis normalų audinį (N). U: rodo nedenatūruotą genų buvimą; M: rodo Metilinto genų buvimą. Atvejai 1 ir 2: auglys-specifinė metilinimas; 3 atvejis: navikas yra visiškai metilo, o tai atitinka normalių audinių turi labai silpną grupę, patvirtinančių metilinimas; 4 atvejis: abu naviko ir atitinkamą normalaus audinio nedenatūruotą
2 lentelė El cad metilinimas ir Imunohistocheminiais dažymo savybių GCA pacientų
<. COL> grupė
metilinimas statusas
P
imunohistocheminį dažymo
P
m
U UAB -
+
TNM stadija
Aš
4
4
2
6
II
18
14
13
9
III
29
9
26
12
IV
12
2 pervežimas 0.015A
10
4
0.002a
patologinė diferenciacija naviko
vidutinio
22
20
20
2 pervežimas prasta ar vidutinio sunkumo
25
9
18
16
prastos
16
0
0.003b
13 3
0.022b
P vertė III stadijos ir IV pacientams prieš I etapas ir II pacientams, b P vertės prasta diferenciacija grupė prieš vidutinio sunkumo ir vargšų vidutinio sunkumo grupių
imunodažymu E-cad genų
Kaip parodyta 2 lentelėje, dažymo buvo nevienalytė 51 navikų audiniuose, vėžinių ląstelių sumažėjo membraninis El cad dažymo buvo sumaišytas su vėžinių ląstelių rodo stiprią membraninis dažymo (2 paveikslas). Dažnio baltymų ekspresijos buvo 44,6% naviko audiniuose, o poriniai normalaus audinio mėginiai visi parodė difuzinis membraninis stiprus El cad dažymo. Dažnis baltymų raiškos buvo žymiai skiriasi tarp naviko ir suporuotas normaliuose audiniuose (P < 0,001). Kai stratifikuotu TNM etapais, dažnis E-cad genų baltymų raiškos III ir IV stadijos navikų audiniuose (30,8%) buvo reikšmingai mažesnis nei I etapas ir II navikų audiniuose (62,5%) (χ2 = 9,21, p = 0,002) , Dažnio E-cad genų baltymų raiškos prastos grupės žymiai mažesnis nei vidutinio ir neturtingų vidutinio sunkumo grupėse (χ2 = 5,23, p = 0,022). 2 pav El cad immunostain į GCA audinio. A: teigiamas dažymo (normalių audinių). B. Neigiamas dažymo (GCA audinio)
iRNR išraiška E-cad Genė
lygių nuorašai buvo nustatytas 32 pasirinktų šaldytų GCA mėginių RT-PGR analizei (3 paveikslas). 32 GCA mėginių, įskaitant 2 I etapas, 2 II etape, 8 III stadijos ir 8 atvejų IV etapą, kuriame navikas buvo metilo ir 12 atvejų (2 I etapas, 4 iš II etapų, 4 III etapo ir 2 IV stadijos) su nedenatūruotu E-cad geno. 202 bp fragmentas E-cad genų transkripto buvo sukurtas, su 342 bp GAPDH fragmentu transkripto kaip kontrolei. 16 (1 II etape, 7 III stadijos ir 8 IV stadijos) atvejais (80%) inaktyvuoto iRNR išraiškos buvo pastebėtas 20 navikų mėginiuose su E-cad geno metilintas, likę 4 (2 iš I etapas, 1 iš II etapas, 1 III stadijos) atvejais parodė teigiamą išraiška. 12 navikų mėginiuose su E-cad geno nedenatūruotu visi parodė teigiamą išraišką El cad geno. 3 pav iRNR analizė E-cad naviko audiniuose. 1: 100 BP DNR žymuo 2,4,5,6,9: teigiamas iRNR raiška 3,7,8. Neigiamas iRNR raiška
Diskusijos
Kinija yra šalis su aukšto dažnio virškinamojo trakto vėžio, kuris, įskaitant stemplės karcinomos, skrandžio vėžys ir skrandžio širdies adenokarcinoma (GCA). GCA, kuris anksčiau buvo įregistruota kaip stemplės vėžio ar skrandžio vėžio, buvo diagnozuota nepriklausomai labai Pastaraisiais metais dėl to, kad pradžioje endoskopinės patikrą ir patologinio diagnozę tobulinti. Jis buvo pasiūlyta keletą epidemiologinių duomenų, kad GCA dažnis didėja pastaraisiais metais. Kai kurie tyrimai parodė, kad mechanizmas ir klinikinė simptomas GCA skiriasi nuo skrandžio vėžio, tačiau panašus į stemplės vėžiu. Tikslus mechanizmas iš GCA atsiradimo lieka neaišku, šiuo metu. Visuotinai pripažįstama, kad paveldimas veiksnys, kuris dirgina naviko atsiradimo įskaitant du mechanizmas, genetikos ir epigenetics mechanizmą. Genetiniai anomalijas prokalbės onkogenų ir naviko slopintuvas genų yra gerai žinomi pokyčiai, kurie dažnai dalyvauja vėžio patogenezėje. Tačiau epigenetinius inaktyvacijai tam tikrų vėžinių slopintuvas genų iki nukrypusiu nuo normos promotoriaus metilinimo dažnai stebimas keletą vėžio ir gali vaidinti pagrindinį vaidmenį Tumorigenesis. Nors genetiniai pakitimai yra susiję su pokyčiais DNR sekos, Epigenetiniai įvykiai gali sukelti pokyčius genų ekspresiją, kurie atsiranda be pokyčių DNR sekos. Jei navikas slopintuvas genų įtakos, tai sukelia paprastai transkripcijos nuslopinami ir, vadinasi, nukenksminimą to geno. tada ji gali suteikti augimo privalumus šių ląstelių, skatinančius vėžio vystymąsi [22].
Kaip ląstelių adhezijos molekulinės, E-cad narys vaidina svarbų vaidmenį palaikant ląstelių sukibimą ir jos disfunkcija gali sukelti tumorigenesis.6 biologinis pasekmės savo disfunkcija yra sutrikimų tarpląstelinės adhezijos ir vertės sumažėjimo SS-kateninai sąlygojamą transactivation [23]. Iki šiol, tačiau nebuvo išsiaiškinta reguliavimo mechanizmai, atsakingi už pasikeitusių lygių El cad baltymų GCA. , Buvo pastebėta, kad hypermethylation E-cad buvo susijęs su skrandžio vėžio ir stemplės adenokarcinomos [21, 24]. Tačiau nėra kito ataskaita apie tarp Ecadherin metilinimo ir Tumorigenesis BKG santykius. Šiame tyrime mes parodėme, kad hypermethylation iš 5 'CpG salos E-cad promotoriaus įvyko dažnai GCA audinių (68,5%) ir kad tai metilinimas pokytis buvo susijęs su sumažėjusiu raiškos E-cad baltymų. Mūsų duomenys rodo, kad epigenetinius triukšmo slopinimo ir E-cad promotoriaus per hypermethylation gali būti vienas iš kritinių mechanizmo nukenksminti šio geno GCA. Genai yra nuslopinami susijęs su hypermethylation tarpininkaujant metilo surišančių baltymų, jungiasi prie denatūruotu cytosines ir įdarbinti baltymų, kad nuslopinti transkripciją, įskaitant Histonas deacetilazių [25] kompleksą.
Mūsų tyrime, mes nustatėme, kad atsižvelgiant į daugeliu atvejų mes išanalizavome E-cad metilinimas buvo specifinis navikas. Tačiau, 10 bylų, kuriose metilinimo pokytis buvo pateikti tiek naviko ir suporuotas normalius audinius nuo paties paciento. Atsižvelgiant į tai, įdėtos JEP jautrumas, tai yra įmanoma, kad normalaus pasirodo pateiktą pavyzdį retą vėžio ląstelę, kad buvo neaptinkamas histomorphology. Dėl pavyzdį apribojimų, mes nesimokė E-cad metilinimas normaliomis CARDIA audiniuose. Tačiau normalus stemplės audinių neparodė netipiško El cad metilinimas kai kuriuose tyrimuose [21] ir ankstesniuose tyrimuose tiriant El cad metilinimas įvairių tipų navikais, normalūs audiniai iš kaulų čiulpų, krūties, skydliaukės, ir burnos gleivinės buvo nemetilintas [ ,,,0],14, 26]. Šie duomenys aiškiai rodo, kad E-cad rengėjas metilinimas yra netipinė įvykis. Tas faktas, kad mes tik aptikti metilinimas į suporuotas normalių audinių iš pacientų, kuriems atitinkama auglys buvo denatūruotu atitinka hipotezę, kad šių asmenų vėžys atsirado iš denatūruotą klonų pirmtakas. Daugelyje neoplastiniu progresavimo tyrimo Bareto stemplė, hypermethylation iš auglio slopinamojo genų P16 buvo aptiktas patologiškai normaliomis-pasirodo egzempliorius gaunamas paciento, kuris vėliau sukūrė displazija [27]. Todėl epigenetinius inaktyvacijai naviko slopintuvas genų gali būti ankstyvas požymis Tumorigenesis.
Mūsų rezultatai parodė, kad baltymų ekspresija Ecadherin naviko audinių gerokai mažesnės nei, kad suporuotas normaliuose audiniuose, tačiau imunohistocheminį dažymo taip pat parodė, normalus membraninis dažymas E -cadherin kai navikų mėginiuose su E-cad metilinimo. Yra keletas galimų priežasčių įvykiai. Pirma, tai buvo tikriausiai dėl to, kad imunohistocheminį dažymo buvo ne taip jautriai kaip PGR aptikti antrinių ląstelių populiacijų su genų metilinimas, taigi downregulation E-cad. Antra, navikų audiniuose gali susilieti kokią nors normalią audinių ir gali parodė normalią membraninis dažymas E-cad. Trečia, genų metilinimas heterogeninės arba alelis metilinimas gali būti svarbi priežastis. Mūsų tyrimų, mes nustatėme, kad metilinimas statusas navikų audiniuose, kad tiek rodė teigiamas baltymo ekspresija ir hypermethylation buvo neišsamios Ecadherin metilinimas. Be to, buvo įrodyta, kad DNR metilinimas kuris nuslopintą genų ekspresiją daugiausia transkripcijos lygio ir CpG salos metilinimo tankis buvo susijęs su nuslopintas laipsnis transkripcijos [28]. Dicky rengėjas gali būti visiškai nuslopintas mažesnę tankio metilinimo, tačiau, kai rengėjas buvo sustiprintas enhanser, funkcija transkripcijos bus išimtos. Mūsų tyrime mes taip pat nustatė teigiamą iRNR išraišką kai navikų mėginiuose su E-cad geno denatūruotu. Tai iš dalies dėl to, kad promotoriaus metilinimo mastas buvo insufficent slopinti El cad transkripciją. Iš viso Mūsų tyrimas rodo, kad epigenetinius triukšmo slopinimo ir E-cad promotoriaus per hypermethylation gali būti viena iš nukenksminimo E-cad į GCA mechanizmą.
Deklaracijas
Padėka
Dėkojame pacientams ir kontrolės asmenis už dalyvavimą šiame tyrime.
Palaikoma dotacijas iš didelės skiriamosios dalykų pamatai Hebei provincijoje.

• Klinikinė reikšmė UPA sistemos skrandžio vėžio peritoninės metastazių
• Epstein-Barr virusas konkrečių metilinimas žmogaus genų skrandžio vėžio ląsteles