Der Nachweis von Promotor-Hypermethylierung der CpG-Insel von E-Cadherin in Magen-Herz adenocarcinoma

Nachweis von Promotor-Hypermethylierung der CpG-Insel von E-Cadherin in Magen-Herz-Adenokarzinom
Zusammenfassung
mit Abnormal hypermethylation von CpG-Inseln Ziel
assoziiert Tumor-Suppressor-Gene können Transkriptions-Silencing in Neoplasien führen. Das Ziel dieser Studie war es, die Promotor-Methylierung und die Expression von E-Cadherin-Gens in Magen-Herz-Adenokarzinom (GCA) zu untersuchen.
Methoden
Eine verschachtelte MSP Ansatz, Immunhistochemie Methode und RT-PCR wurden verwendet, bzw. die zu untersuchen Methylierungsstatus des 5'-CpG-Insel von E-Cadherin, dessen Proteinexpression und mRNA-Expression in Tumoren und entsprechenden normalen Geweben.
Ergebnisse | E-Cadherin wurde in 63 von 92 (68,5%) Tumorproben methyliert, die signifikant höher war als normale Gewebe (P < 0,001) entspricht. Methylierungsfrequenzen der Stufe III und IV Tumorgewebe war signifikant höher als die in Stufe I und II Tumorgewebe (P = 0,01). Methylierungsstatus der schlechten Differenzierung Gruppe war signifikant höher als moderat und schlechte moderate Differenzierung Gruppen (P < 0,01). Durch Immunfärbung 51 von 92 Tumor tisssues gezeigt heterogen, positive Immunfärbung von Tumorgewebe (44,6%), signifikant von angepassten normalen Geweben (P < 0,001). Positive Immunfärbung der Stufe III und IV Tumorgewebe war signifikant niedriger als im Stadium I und II Tumorgewebe (P < 0,01). Schlechte Differenzierung Gruppe war auch deutlich niedriger als moderat und schlechte moderate Differenzierung Gruppen (P < 0,05). 80 Prozent der Tumorgeweben mit E-Cadherin-Gens zeigte inaktivierten mRNA Expression methyliert.
Schlussfolgerungen
hoch Methylierungsstatus der 5 'CpG island of E-cadherin-Gen einer der Mechanismen kann von Magen kardialen Adenokarzinom in der Entwicklung sein, .
Schlüsselwörter E-Cadherin-Methylierungs-Magen-Einführung Herz Adenokarzinom
E-Cadherin ist ein M r 120.000 Trans Glykoprotein auf Epithelzellen exprimiert und ist verantwortlich für die homophile, Ca 2 + -abhängigen interzelluläre Adhäsion, die für die Aufrechterhaltung der normalen Gewebearchitektur in Epithelgewebe wesentlich ist [1]. Die zytoplasmatische Domäne von E-Cadherin bindet an a-, β-, und &ggr; catenins, die Actine verbunden wiederum sind und diese Interaktion ist entscheidend für seine Funktion [2]. Zell-Zell- und Zell-Matrix-Interaktionen sind in neoplastischen Transformation und Metastasierung entscheidend beteiligt sind [3, 4]. Defective Zelladhäsion können zum Verlust der Kontakthemmung des Wachstums und der Verlust der Zellhaftung beitragen für die Fähigkeit von Krebszellen verantwortlich sein normalen Gewebegrenzen und Metastasierung zu überqueren [5]. Die Bedeutung von E-cadherin in Zelladhäsion Aufrechterhaltung impliziert, dass seine Funktionsstörung eine wichtige Rolle in der Tumorgenese spielen. Verlust der E-Cadherin-Expression in einer Vielzahl von menschlichen Tumoren auftritt, und die Hypothese aufgestellt wird, ein wichtiger Schritt in der Progression von Tumorbildung Invasion und Metastasierung [6] zu sein.
In den letzten Jahren gibt es einige Untersuchungen über die kritische Rolle von E-cadherin in Tumorigenese. Es hat sich gezeigt, dass Keimbahnmutationen des Gens zu familiären Magen-und Darmkrebs im Zusammenhang mit E-Cadherin gezeigt [7, 8]. Weiterhin wurden somatische Mutationen von E-Cadherin auch in Magenkarzinom und allelischen Verlust der E-Cadherin-Locus bei 16q22.1 gefunden wurde in verschiedenen epithelialen Tumoren, wie Brust-, Eierstock-, Endometrium-, und Prostatakarzinomen [9, 10] berichtet . Mit Ausnahme dieser genetischen Veränderungen, sind epigenetische Veränderung hypermethylation der 5'-CpG-Insel innerhalb des Promotors von E-Cadherin auch für Transkriptionsrepression des Gens verantwortlich ist [11]. Es ist bekannt, dass abnormale hypermethylation of CpG islands zugeordnet Tumorsuppressorgene zur transkriptionalen Silencing in Neoplasien führen kann [12]. Tatsächlich Methylierung assoziierte Silencing von E-Cadherin ist die häufigste Ursache für seine Inaktivierung in verschiedenen Krebsarten wie Leber, Prostata, Brust und Speiseröhre [13-15]. Magen-Herz-Adenokarzinom (GCA)
, die früher registriert wurde, unabhängig in jüngsten Jahren diagnostiziert, aufgrund der Verbesserung in frühen endoskopischen Screening und pathologische Diagnose als Speiseröhrenkrebs oder Magenkrebs ist. China ist ein Land mit hoher Inzidenz Regionen von GCA, vor allem in Taihang Berg von Nordchina. Exogene Faktoren, einschließlich Ernährung Mangel, ungesunde Lebensgewohnheiten, Konsum von Alkohol und Tabak, sind pathogene Infektionen allgemein als Risikofaktoren betrachtet für GCA in China zu entwickeln [16-18]. Jedoch nur eine Untergruppe von Personen zu den oben genannten exogenen Risikofaktoren ausgesetzt würde GCA entwickeln, dass mehrere genetische und epigenetische Ereignisse darauf hindeutet, kann das Fortschreiten der GCA beitragen. Es wird nun zunehmend erkannt, dass epigenetische Silencing der Genexpression durch Promotor CpG hypermethylation eine wichtige Alternative Mechanismus ist in inaktivierende Tumorsuppressorgenen und tumorassoziierte Gene in Krebserkrankungen [19]. Mutationen des E-Cadherin-Gen sind selten in GCA somit in dieser Studie haben wir die Rolle der Methylierung der 5 'CpG island of E-cadherin und ihre Korrelation mit reduziertem E-Cadherin-Expression in GCA ausgewertet.
Methods
Patienten und Proben
Tumor und gepaart normalen Gewebeproben von 92 Patienten gewonnen wurden. Diese Gewebe wurden in zwei parallele Teile, wurde ein Teil eingefroren und gelagert bei -80 ° C bis zur RNA extrahiert, der andere Teil wurde in Formalin fixiert und in Paraffin eingebettet. Die Fälle waren alle stationären Patienten für die chirurgische Behandlung in der Vierten Affiliated Hospital, Hebei Medizinische Universität zwischen 2004 und 2006 histologische Tumor Typisierung wurde auf der Grundlage von reseziert Proben in der Abteilung für Pathologie des gleichen Krankenhaus durchgeführt. Alle Magen-Herz-Karzinomen waren Adenokarzinome mit ihren Epizentren am gastroösophagealen Übergang, das heißt von 1 cm über bis 2 cm unterhalb der Verbindung zwischen dem Ende des rohrförmigen Speiseröhre und dem Beginn des saccular Magen [20]. Informationen über TNM war aus dem Krankenhaus-Aufnahmen und pathologische Diagnose zur Verfügung. Die Studie wurde von der Ethikkommission der Hebei Cancer Institute und informierte Zustimmung genehmigt wurde von allen rekrutierten Probanden erhalten.
Methylierungs spezifischen Polymerase-Kettenreaktion (MSP) für E-Cadherin-Promotor-Methylierung
genomischer DNA aus Magen-Herz-Adenokarzinome und angrenzend nonmalignant Abschnitte wurde aus in Paraffin eingebetteten Gewebeschnitten durch Standardverfahren isoliert, eine vereinfachte Abbau durch Proteinase K-Verfahren. Um die DNA-Methylierungsmuster zu untersuchen, behandelten wir genomische DNA mit Natriumbisulfit, wie zuvor beschrieben [21]. Kurz, 2 ug DNA wurden für 10 Minuten bei 37 ° C durch Inkubation mit 3 M Natriumbisulfit, pH 5,0, für 16 Stunden bei 50 ° C gefolgt von 2 M NaOH denaturiert. Bisulfit-behandelte DNA wurde dann gereinigt (DNA Cleanup Kit; Promega, Madison, Wisconsin, USA), inkubiert mit 3 M NaOH bei Raumtemperatur für fünf Minuten präzipitiert mit 10 M Ammoniumacetat und 100% Ethanol mit 70% Ethanol gewaschen, und in 20 ul destilliertem Wasser resuspendiert. Eine verschachtelte PCR-Ansatz
verwendet wurde, den Methylierungsstatus in der E-Cadherin-CpG-Insel in Exon 1 (Sequenz -126 bp bis +144 bp relativ zum Transkriptionsstart, GenBank-Zugangsnummer D49685 zu bestimmen ), die zuvor veröffentlicht wurde [15]. In der ersten Runde der PCR wurden 100 ng Bisulfit-behandelter DNA wurden amplifiziert. Die Sequenzierungsprimer waren 5'-GTTTA GTTTTGGGGAGGGGTT-3 '(sense) und 5'-ACTAC TACTCCAAAAACCCATAACTAA-3' (Antisense), und die Zyklusbedingungen waren ein Zyklus von 95 ° C für 5 min, gefolgt von 30 Zyklen von 95 ° C für 30 s, 50 ° C für 30 s, 72 ° C für 30 s, und einer abschließenden Extension bei 72 ° C für 5 min. Die Größe des Produkts nach dieser ersten PCR-Reaktion betrug 270 bp. 50 in Wasser und 2 ul der Verdünnung wurden für MSP verwendet: für die zweite Runde der PCR wurde dieses Produkt 1 verdünnt. Geschachtelten Primersequenzen für E-cadherin für die methylierten Reaktion waren 5'-TG TAGTTACGTATTTATTTTTAGTGGCGTC-3 '(sense) und 5'-CGAATACGATCGAATCGAACCG-3' (Antisense), und Primersequenzen für die unmethylierte Reaktion waren 5'-TGGTTGTAGTTATGTATTTATT TTTAGTGGTGTT-3 '(sense) und 5'-ACACCAAATA CAATCAAATCAAACCAAA-3' (Antisense). PCR-Parameter waren wie oben aufgeführt, mit der Ausnahme, daß die Annealing-Temperaturen für die methylierten und unmethylierten Reaktionen waren 64 ° C und 62 ° C. Die Produktgrößen der methylierten und unmethylierten Reaktionen waren 112 und 120 bp auf. Die Brustkrebs-Zelllinie MB-MDA-231, die Methylierung und Silencing von E-Cadherin und Reagenzleerwerte zeigt, wurden als positive und negative Kontrollen verwendet.
Immunhistochemische Färbung für E-Cadherin
E-Cadherin-Expression wurde bestimmt durch immunostaining die Avidin-Biotin-Komplex Immunperoxidase Methode, die auf parallelen histopathologischen Abschnitte von in Paraffin eingebetteten Tumorschnitt und gepaart normalen Gewebe durchgeführt wurde. Endogene Peroxidase wurde für 10 Minuten mit 3% Wasserstoffperoxid blockiert, gefolgt von Mikrowellen Antigen-Retrieval für 9 Minuten bei 98 ° C in 10 mM Natriumcitrat-Puffer (pH 6,0) und in 2% normalem Pferdeserum inkubiert, zu minimieren unspezifische Bindung. Die Objektträger wurden nacheinander mit primären monoklonalen inkubiert, Maus-Anti-E-Cadherin-Antikörper (1: 100 Verdünnung in phosphatgepufferter Salzlösung, Santa Cruz sc-8426) über Nacht bei 4 ° C, biotinylierten sekundären Antikörper für 30 min bei 37 ° C und ABC-Reagenz für 45 min bei 37 ° C. 0,5% 3,3'-Diaminobenzidin (Sigma, St. Louis, MO) wurde als Chromogen verwendet. Für eine negative Kontrolle wurde der primäre Antikörper mit Maus-IgG ersetzt. Objektträger mit normaler Magenschleimhaut wurden als positive Kontrolle.
Messung der mRNA-Expression von E-Cadherin verwendet
RNA aus gefrorenen Abschnitt Geweben durch Standardverfahren extrahiert wurde mit Trizol (Invitrogen, USA). cDNA wurde mit der Advantage-RT-for-PCR-Kit (Clontech, Palo Alto, CA) mit Oligo (dT) Priming synthetisiert, wie vorgesehen im Protokoll empfohlen. Das GAPDH-Gen wurde als Kontrolle verwendet. Primer Sequenzen von E-Cadherin waren 5 ° ‰ -CGACCCAACC CAAGAATCTA-3 ° ‰ (sense) und 5 ° ‰ -AATGGCAG GAATTTGCAATC-3 ° ‰ (Antisense) Primersequenz von GAPDH waren 5 ° ‰ -GGGAAACTGTGGCGT GAT-3 ° ‰ (Sinn) und 5 ° ‰ -GTGGTCGTTGAGGG CAAT-3 ° ‰ (Antisense), waren Produktgröße 202 bp und 342 bp auf. PCR-Produkte wurden auf einem 2% Agarose-Gelen und Signalintensitäten gelöst wurden ein Computer-Bildgebungssystem quantifiziert. Die Niveaus der Gen-Transkripte wurden als das Verhältnis der Intensität des E-cadherin-Signal zu der Intensität des β-Actin quantifiziert. Inaktivierte Expression wurde erzielt, wenn die Expression eines E-Cadherin-Gens in der Tumorprobe war < 25% der seinen Ausdruck in der entsprechenden normalen Probe.
Statistische Analyse
Die statistische Analyse wurde unter Verwendung von SPSS10.0 Softwarepaket (SPSS Company, Chicago, Illinois, USA). Fisher-Test und Chi-Quadrat-Test wurden verwendet, statistische Signifikanz der Unterschiede zu bewerten und kategorische Verbände vergleichen. Zweiseitigen Tests wurden verwendet, um Bedeutung zu bestimmen, und P-Werte von weniger als 0,05 als statistisch signifikant angesehen wurden für alle Tests Statistik.
Ergebnisse
Subject Eigenschaften
Wie in Tabelle 1 gezeigt, 92 GCA Patienten wurden erhalten in diese Forschung, einschließlich 73 männlich und 19 weiblich, Alter reichte von 38 ~ 76, mittleres Alter 56,9. Alle Fälle wurden in 4 tumor-node-Metastasierung (TNM) Stufen nach UICC Standard I 8 der Stufe eingestuft (8,7%), 32 der Stufe II (34,8%), 38 der Stufe III (41,3%), 14 der Stufe IV (15,2%). Nach den pathologischen Phasen wurden die Fälle in drei Gruppen eingeteilt, 42 (45,7%) der gemäßigten Gruppe, 34 (36,9%) der armen mittelschwerer Gruppe und 16 (17,4%) von schlechter group.Table 1 klinischen und pathologischen Merkmale von GCA Patienten
Gruppen
n (%)
Sex
männlich
73 (79,3)
Weiblich
19 (20,7 )
Das mittlere Alter in Jahren (SD)
56,9 (8,86)
TNM-Stadium
I 8 (8.7
)
II
32 (34,8)
III
38 (41,3)
IV
14 (15.2)
Pathologische Differenzierung von Tumor
moderate
42 (45,7)
Armen moderate
34 (36,9)
schlecht
16 (17,4)
Methylierungsanalyse von E-Cadherin-Gen
Die Analyse-Methylierung wurde in allen Tumor und gepaart normalen Gewebeproben (Abbildung 1) erfolgreich durchgeführt. Für 10% der Proben wurde die Methylierungsanalyse zur Qualitätskontrolle wiederholt. In 63 (68,5%) von 92 Tumoren GCA E-Cadherin-Methylierung erkannt wurde, während nur 10 (10,9%) der gekoppelten normalen Geweben E-Cadherin-Methylierung erkannt wurde. Die Häufigkeit der E-Cadherin-Methylierung von Tumorgewebe war signifikant höher als gepaarte normalen Geweben (P < 0,001). Wenn geschichtete für TNM Stadien, die Häufigkeit der E-Cadherin-Gen-Methylierung von GCA Patienten mit Stadium III und IV (78,8%) waren signifikant höher als GCA Patienten mit Stadium I und Phase II (55%) (χ2 = 5,96, p = 0,01 ). Wenn für die pathologische Stufen geschichtet waren die E-Cadherin-Gen-Methylierung Frequenzen moderater, schlechter mittelschwerer und schlechter Gruppe 52,4%, 73,5% und 100%, die Häufigkeit der E-Cadherin-Gen-Methylierung von schlechter Gruppe signifikant höher als in den gemäßigten und Armen -moderate Gruppen (χ2 = 8,92, P = 0,003) (Tabelle 2). Abbildung 1 Methylierungsanalyse von E-cadherin in Tumorgewebe (T) und die entsprechenden normalen Gewebe (N). u: zeigt das Vorhandensein von nicht-methylierten Gene; m: zeigt die Anwesenheit von methylierter Gene. Fälle 1 und 2: tumorspezifische Methylierung; Fall 3: Der Tumor ist vollständig methyliert, während das entsprechende normale Gewebe hat eine sehr schwache Bande Methylierung demonstrieren; Fall 4: beide Tumor und entsprechenden normalen Gewebe nicht methylierten
Tabelle 2 E-Cadherin-Methylierung und immunhistochemischen Färbungseigenschaften von GCA Patienten
<. col> Gruppe
Methylierungsstatus
P
Immunhistochemische Färbung
P
M
U
-
+
TNM-Stadium
I 4
4 2
6 II
18
14
13
9
III
29
9
26
12
IV
12 2
0.015a 10
4
0.002a
Pathologische Differenzierung von Tumor
moderate
22
20
20
2 Armen moderate
25
9
18
16
schlecht
16
0
0.003b
13
3
0.022b
einem P-Wert von Stadium III und IV Patienten gegen Stadium I und II Patienten, b P-Wert von Armen Differenzierung Gruppe gegen moderate und schlechte moderate Gruppen
Immunostaining von E-Cadherin-Gen
Wie in Tabelle 2 gezeigt, die Färbung war heterogen in 51 Tumorgewebe, Tumorzellen mit einer verringerten membranöse E-Cadherin-Färbung wurden mit Tumorzellen gemischt zeigt starke membranöse Färbung (Abbildung 2). Die Häufigkeit der Proteinexpression betrug 44,6% im Tumorgewebe, während gepaart normalen Gewebeproben zeigten alle starke membranöse E-Cadherin-Färbung diffundieren. Häufigkeit der Proteinexpression war signifikant verschieden zwischen Tumor und normalen Geweben gepaarte (P < 0,001). Wenn geschichtete für TNM Stufen, die Häufigkeit der E-Cadherin-Gen-Protein-Expression der Stufe III und Tumorgeweben IV (30,8%) war signifikant niedriger als der in Stufe I und II Tumorgeweben (62,5%) (χ2 = 9,21, P = 0,002) . Die Häufigkeit der E-Cadherin-Gen-Protein-Expression von schlechter Gruppe signifikant niedriger als in den gemäßigten und Armen moderate Gruppen (χ2 = 5,23, p = 0,022). Abbildung 2 E-Cadherin immunostain in GCA Gewebe. A: positive Färbung (normales Gewebe). B:. Negativfärbung (GCA Gewebe)
mRNA-Expression für die E-Cadherin-Gen
Levels der Transkripte wurden in den 32 ausgewählten frozen GCA Proben durch RT-PCR-Analyse (Abbildung 3) bestimmt. Die 32 GCA Proben, einschließlich 2 von Stufe I, 2 der Stufe II, 8 der Stufe III und 8 der Stufe IV der Fälle, in denen der Tumor war methyliert und 12 Fällen (2 von Stufe I, 4 der Stufen II, 4 der Stufe III und 2 der Stufe IV) mit unmethylierten E-Cadherin-Gen. Ein 202 bp Fragment des Transkripts E-Cadherin-Gen erzeugt wurde, mit einem 342 bp GAPDH-Fragment des Transkripts als Kontrolle. 16 (1 von Stufe II, 7 der Stufe III und 8 der Stufe IV) Fällen (80%) der inaktivierten mRNA Expression wurden in 20 Tumorproben mit E-Cadherin-Gens methyliert, das andere 4 (2 Stufe I, beobachtet 1 von II Stufe 1 der Stufe III) Fälle zeigten positive Ausdruck. 12 Tumorproben mit E-Cadherin-Gen nicht methylierten alle zeigten eine positive Expression von E-Cadherin-Gens. Abbildung 3 mRNA Analyse von E-cadherin in Tumorgeweben. 1: 100 bp DNA-Marker 2,4,5,6,9: positive mRNA-Expression 3,7,8:. Negativ-mRNA-Expression
Diskussion
China ist ein Land mit hoher Inzidenz von Magen-Darm-Trakt Krebs, der Speiseröhre, einschließlich Karzinom, Magenkrebs und Magen-Herz-Adenokarzinom (GCA). unabhängig in jüngsten Jahren diagnostiziert, aufgrund der Verbesserung in frühen endoskopischen Screening und pathologische Diagnose GCA, die früher als Speiseröhrenkrebs oder Magenkrebs registriert wurde, ist. Es wurde durch mehrere epidemiologische Daten legten nahe, dass die Inzidenz von GCA ist in den letzten Jahren erhöht. Einige Untersuchungen haben gezeigt, dass der Mechanismus und klinische Symptom der GCA unterscheidet sich von Magenkrebs, aber ähnlich wie Speiseröhrenkrebs. Der genaue Mechanismus des Auftretens von GCA bleibt im Augenblick unklar. Es ist allgemein, dass der Erbanlage akzeptiert, die das Auftreten von Tumor einschließlich zweier Mechanismus, der Genetik und epigenetics Mechanismus zu reizen. Genetische Anomalien von Proto-Onkogenen und Tumorsuppressorgenen sind bekannte Veränderungen, die in der Krebs Pathogenese häufig beteiligt sind. Jedoch epigenetische Inaktivierung bestimmter Tumorsuppressorgene durch aberrante Promotormethylierung wird häufig in verschiedenen Krebsarten beobachtet und kann eine wichtige Rolle in der Tumorgenese spielen. Während genetische Anomalien, die mit Veränderungen in der DNA-Sequenz verbunden sind, können epigenetische Ereignisse zu Veränderungen in der Genexpression führen, die ohne Veränderungen in der DNA-Sequenz auftreten. Wenn Tumorsuppressorgene betroffen sind, führt dies in der Regel in transkriptionalen Silencing und damit Inaktivierung des Gens. Es kann dann Wachstum Vorteile dieser Zellen verleihen, die die Entwicklung von Krebs begünstigen [22].
Als Mitglied der Zelladhäsion Molekular, E-Cadherin eine wichtige Rolle spielen Zelladhäsion bei der Aufrechterhaltung und seine Dysfunktion in tumorigenesis.6 Die biologische führen kann Folgen ihrer Dysfunktion gehören Störungen der intercellular adhesion und Beeinträchtigung von ß-Catenin-vermittelten Trans [23]. Bisher sind jedoch verantwortlich für die Regulationsmechanismen veränderte Niveaus von E-cadherin-Proteine ​​in GCA nicht aufgeklärt. Es wurde berichtet, dass hypermethylation of E-cadherin mit Magenkrebs und Speiseröhren Adenokarzinom assoziiert waren [21, 24]. Allerdings gibt es keinen anderen Bericht über die Beziehung zwischen Ecadherin Methylierung und tumorigenesis von GCA. In dieser Studie haben wir gezeigt, dass hypermethylation der 5'-CpG-Insel des E-Cadherin-Promotor häufig in GCA Gewebe aufgetreten (68,5%), und daß diese Methylierung Änderung mit reduzierter Expression von E-cadherin-Protein verbunden war. Unsere Daten legen nahe, dass epigenetische Inaktivierung des E-Cadherin-Promotor via hypermethylation einer der kritischen Mechanismus für die Inaktivierung dieses Gens in GCA sein kann. Gen-Silencing mit hypermethylation zugeordnet ist, vermittelt durch Methyl-bindende Proteine, die an methylierte Cytosine binden und einen Komplex von Proteinen, die die Transkription reprimieren rekrutieren, einschließlich Histon-Deacetylasen [25].
In unserer Studie fanden wir, dass in der Mehrzahl der Fälle untersuchten wir, E-Cadherin-Methylierung war tumorspezifisch. 10 jedoch Fälle, in denen die Methylierung Änderung war in beiden Tumor und normalem Gewebe des gleichen Patienten gepaart. Angesichts der Empfindlichkeit von verschachtelten MSP, ist es möglich, dass normal erscheinenden Proben eine seltene Krebszellen enthalten, die durch Histomorphologie nicht nachweisbar war. Durch die Begrenzung der Probe, haben wir studieren die Methylierung von E-Cadherin in normalen Cardia Gewebe nicht. Jedoch normalen Ösophagusgewebe nicht aberrant E-cadherin-Methylierung in einigen Studien [21] und in früheren Studien untersucht E-cadherin-Methylierung in verschiedenen Tumorarten, normale Gewebe aus Knochenmark zeigten, Brust, Schilddrüse und Mundschleimhaut wurden unmethylierte [ ,,,0],14, 26]. Diese Daten dringend empfohlen, dass die E-Cadherin-Promotor-Methylierung ist ein anomale Ereignis. Die Tatsache, dass wir nur die Methylierung in paarigen normalen Geweben von Patienten, bei denen die entsprechenden Tumor methyliert wurde ebenfalls nachgewiesen ist konsistent mit der Hypothese, dass der Krebs in diesen Individuen aus einer methylierten klonalen Vorläufer entstanden sind. In einer Studie von neoplastischen Progression in Barrett-Ösophagus, hypermethylation des Gens p16 Tumorsuppressor wurde in pathologisch normal erscheinenden Proben von einem Patienten erhalten, der später detektiert Dysplasie entwickelt [27]. Daher können epigenetische Inaktivierung von Tumorsuppressorgenen ein frühes Merkmal tumorigenesis werden. Unsere Ergebnisse zeigten, dass
Proteinexpression von Ecadherin in Tumorgeweben deutlich geringer als die in gepaarte normalen Geweben jedoch auch immunohistochemische Färbung normalen membranöse Färbung von E zeigten -cadherin in einigen Tumorproben mit E-Cadherin-Methylierung. Es gibt mehrere mögliche Gründe für die Ereignisse. Erstens Dies war wahrscheinlich auf die Tatsache zurückzuführen, dass die immunhistochemische Färbung als PCR nicht so empfindlich war Subpopulationen von Zellen mit Genmethylierung und somit Herunterregulation von E-Cadherin bei der Erkennung. Zweitens Tumorgewebe kann einige normale Gewebe mischen und kann normal membranöse Färbung von E-Cadherin zeigte. Drittens Gen heterogenes Methylierung oder ein Allel-Methylierung könnte ein wichtiger Grund sein. In unseren Studien haben wir festgestellt, dass der Methylierungsstatus des Tumorgewebe, die beide zeigten eine positive Proteinexpression und Hyper unvollständig Ecadherin Methylierung waren. Weiterhin wurde gezeigt, dass die DNA-Methylierung nachgewiesen, die Genexpression unterdrückt hauptsächlich in Transkriptionsebene und die Dichte der CpG-Insel-Methylierung wurde dem unterdrückt Grad der Transkription im Zusammenhang [28]. Dicky Promotor kann vollständig durch geringere Dichte Methylierung unterdrückt werden, wenn jedoch Promotor durch enhanser verstärkt wurde, die Funktion der Transkription wird abgerufen. In unserer Studie fanden wir auch positive mRNA-Expression in einigen Tumorproben mit E-Cadherin-Gens methyliert. Es teilweise aufgrund der Tatsache, dass das Ausmaß der Promotor-Methylierung war insufficent E-Cadherin-Transkription zu unterdrücken. Insgesamt schlug Unsere Studie, dass epigenetische Inaktivierung des E-Cadherin-Promotor über Hypermethylierung eines der Mechanismus zur Inaktivierung von E-Cadherin in GCA sein kann.
Erklärungen
Danksagung kaufen Wir, die Patienten und Kontrollpersonen danken Teilnahme an dieser Studie für die Aufnahme. und Videos Zuschüsse aus dem erheblichen unverwechselbaren Themen Gründung der Provinz Hebei Stützen.

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