Havaitseminen promoottorin hypermetylaatiota CpG saaren E-kadheriinin mahalaukun sydämen adenokarsinoomaa

Havaitseminen promoottorin hypermetylaatiota CpG saaren E-kadheriinin mahalaukun sydämen adenokarsinoomaa
Abstract
Tavoite
Epänormaali hypermetylaatiota CpG-saarekkeiden liittyy tuumorisuppressorigeeneille voi johtaa transkription hiljentämisen neoplasia. Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia promoottorin metylaation ja ilmentyminen E-kadheriinin geenin mahalaukun sydämen adenokarsinoomaa (GCA). Tool Menetelmät
Sisäkkäinen MSP lähestymistapa, immunohistokemia menetelmä ja RT-PCR käytettiin vastaavasti tutkia metylaatiostatuksen 5'-CpG-saarekkeen E-kadheriinin, sen proteiinin ekspression ja mRNA: n ekspression kasvaimissa ja vastaavat normaalit kudokset.
tulokset
E-kadheriinin metyloitiin 63 92 (68,5%) Tuumorinäytteet, joka oli merkittävästi korkeampi kuin vastaava normaaleissa kudoksissa (P < 0,001). Metylointi taajuudet vaiheen III ja IV tuumorikudoksia oli huomattavasti korkeampi kuin vaiheen I ja II tuumorikudoksia (P = 0,01). Metylaatiostatuksen huono eriyttäminen ryhmässä oli merkittävästi suurempi kuin kohtalainen ja huono-kohtalainen eriyttäminen ryhmät (P < 0,01). Immunovärjäyksellä 51 92 kasvaimen tisssues osoittanut heterogeeninen, positiivinen immunovärjäyksen tuumorikudoksista (44,6%), poikkeavat merkittävästi vastaaviin normaaleihin kudoksiin (P < 0,001). Positiivinen immunovärjäys vaiheen III ja IV tuumorikudoksia oli huomattavasti pienempi kuin vaiheen I ja II tuumorikudoksia (P < 0,01). Huono eriyttäminen ryhmässä oli myös merkitsevästi alempi kuin kohtalainen ja huono-kohtalainen eriyttäminen ryhmät (P < 0,05). 80 prosenttia kasvaimen kudosten E-kadheriinin geenin metyloitu osoitti inaktivoitu mRNA: n ilmentymisen.
Päätelmät
korkea metylaatiostatuksen 5'-CpG-saarekkeen E-kadheriinin geeni voi olla yksi niistä mekanismeista, kehittämisessä mahalaukun sydämen adenokarsinoomaa .
Avainsanat
E-kadheriinin metylaatio mahalaukun sydämen adenokarsinoomaa Johdanto
E-kadheriinin on M r 120,000 läpäisevä glykoproteiini ilmentyy epiteelisolujen ja vastaa homofiilisiä, Ca 2 + -riippuvaisella välistä adheesiota, joka on välttämätön normaaleista kudosrakenne epiteelikudoksissa [1]. Sytoplasmisen alueen E-kadheriinin sitoutuu a-, β- ja y-catenins, jotka ovat puolestaan ​​liittyy actins, ja tämä vuorovaikutus on kriittinen sen toiminta [2]. Solu-solu- ja solu-matriisi vuorovaikutuksia ratkaisevasti mukana neoplastisen transformaation ja etäpesäkkeiden [3, 4]. Vialliset soluadheesiota voi edistää kontakti-inhibition menetys kasvun ja menetys soluadheesion saattaa selittää kyky syöpäsolujen ylittää normaalin kudoksen rajoja ja etäpesäkkeiden [5]. Tärkeys E-kadheriinin ylläpitämisessä soluadheesion merkitsee, että sen toimintahäiriö voi olla tärkeä rooli kasvainten synnyssä. Menetys E-kadheriinin ilmentymisen esiintyy erilaisissa ihmisen kasvaimia ja on arveltu olevan tärkeä askel etenemistä kasvainten muodostumista ja metastaasit [6].
Viime vuosina on useita tutkimuksia kriittinen rooli E-kadheriinin kasvainten synnyssä. On osoitettu, että ituradan mutaatioiden E-kadheriinin geeni liittyy familiaalinen mahalaukun ja paksusuolen syövän [7, 8]. Lisäksi somaattiset mutaatiot E-kadheriinin havaittiin myös mahalaukun syöpä ja alleeliset menetys E-kadheriinin lokuksen 16q22.1 on raportoitu eri epiteelikasvaimissa, kuten rinta-, munasarja-, endometriumin, ja eturauhasen karsinoomien [9, 10] . Paitsi tätä geneettisiä muutoksia, epigeneettiset muutos sisältyy hypermetylaatiota 5'-CpG-saarekkeen sisällä promoottori E-kadheriinin vastaa myös transkription tukahduttamisesta geenin [11]. On tunnettua, että epänormaali hypermetylaatiota CpG-saarekkeiden liittyy tuumorisuppressorigeeneille voi johtaa transkriptionaalisen hiljentämisen neoplasia [12]. Todellakin, metylointi liittyvä vaiennettu E-kadheriinin edustaa yleisin syy sen inaktivaation useissa syövissä, kuten maksa-, eturauhas-, rinta- ja ruokatorven [13-15].
Mahalaukun sydämen adenokarsinooma (GCA), joka oli aiemmin rekisteröity kuten ruokatorven syöpä tai mahasyövän, on diagnosoitu itsenäisesti aivan viime vuosina, koska paraneminen varhain endoskooppiset seulontaa ja patologisen diagnoosin. Kiina on maa, jossa esiintyy paljon alueilla GCA, Erityisesti Taihang vuori Pohjois-Kiinassa. Ulkoiset tekijät kuten ravitsemus puute, epäterveelliset elintavat, alkoholin ja tupakan, patogeenisten infektioiden pidetään yleensä riskitekijöitä kehittää GCA Kiinassa [16-18]. Kuitenkin vain osa yksilöitä altistuu edellä luetelluista eksogeeninen riskitekijöitä kehittyisi GCA, viittaa siihen, että useita geneettisiä ja epigeneettisiä tapahtumia voivat edistää etenemistä GCA. Nykyään tunnustetaan yhä että epigeneettisellä vaiennettu geeniekspressiota promoottori CpG hypermetylaation on tärkeä vaihtoehtoinen mekanismi inaktivoivan kasvainten synnyssä ja kasvaimeen liittyvien geenien syöpiin [19]. Mutaatiot E-kadheriinin geeni ovat harvinaisia ​​GCA, joten tässä tutkimuksessa arvioimme rooli metylaation 5'-CpG-saarekkeen E-kadheriinin ja sen korrelaatio pienemmällä E-kadheriinin ilmentymisen GCA. Tool Menetelmät
potilaat ja näytteet
kasvain ja pariksi normaali kudosnäytteet saatiin 92 potilaasta. Nämä kudokset jaettiin kahteen yhdensuuntaiseen osaan, yksi osa pakastettiin ja varastoitiin -80 ° C: ssa, kunnes RNA uutettiin, toinen osa oli formaliinilla kiinnitetyt ja parafiiniin upotettu. Tapaukset olivat kaikki inpatients varten leikkaushoitoa neljännessä Affiliated sairaala, Hebei Medical University vuosina 2004 ja 2006. Histologinen kasvain tyypitys suoritettiin pohjalta resektoitua yksilöiden patologian osaston saman sairaalan. Kaikki mahalaukun sydämen karsinoomien oli adenokarsinoomia niiden epicenters on gastroesofageaalinen risteyksessä, eli 1 cm: n korkeudelle asti 2 cm alle välinen liitos putkimaisen ruokatorven ja alusta saccular mahan [20]. Tiedot TNM pysähdyspaikan oli saatavilla sairaalassa tallenteita ja patologinen diagnoosi. Tutkimuksen hyväksyi eettisen komitean Hebein Cancer Institute ja tietoinen suostumus saatiin kaikilta palvelukseen aiheista.
Metylaatiospesifisen polymeraasiketjureaktio (MSP) E-kadheriinipromoottorin metylaatio
Perimän DNA mahalaukun sydämen adenokarsinoomista ja viereisten pahanlaatuisten kohdat eristettiin parafinoidut kudoksen diat standardimenetelmillä käyttämällä yksinkertaistettua proteinaasi K digestiomenetelmä. Tutkia DNA metylaation, käsittelimme genomista DNA: ta, jossa natriumbisulfiitti, kuten aiemmin on kuvattu [21]. Lyhyesti, 2 ug DNA: ta denaturoitiin 2 M NaOH: lla 37 ° C: ssa 10 minuutin ajan, jonka jälkeen inkuboitiin 3 M natriumbisulfiitti, pH 5,0, 50 ° C: ssa 16 tunnin ajan. Bisulfiitti käsitelty DNA puhdistettiin sitten (DNA uudelleenjärjestäminen Kit; Promega, Madison, Wisconsin, USA), inkuboitiin 3 M NaOH: lla huoneen lämpötilassa viiden minuutin ajan, saostetaan 10 M ammoniumasetaattia ja 100% etanolia, pestiin 70% etanolilla, ja suspendoitiin uudelleen 20 ul: aan tislattua vettä.
sisäkkäinen PCR lähestymistapaa käytettiin määrittämään metylaatiostatuksen sisällä E-kadheriinin CpG-saarekkeen eksonissa 1 (sekvenssi -126 bp +144 bp suhteessa transkription aloituskohtaan, GenBank D49685 ), joka on julkaistu aiemmin [15]. Ensimmäisen PCR-kierroksen, 100 ng ui bisulfiittikäsiteltyä DNA: ta monistettiin. Sekvenssointialukkeiden olivat 5'-GTTTA GTTTTGGGGAGGGGTT-3 '(sense) ja 5'-ACTAC TACTCCAAAAACCCATAACTAA-3' (antisense), ja sykliolosuhteet olivat yksi sykli 95 ° C: ssa 5 min, jota seurasi 30 sykliä 95 ° C 30 s, 50 ° C: ssa 30 s, 72 ° C: ssa 30 s, ja lopullinen pidennys 72 ° C: ssa 5 min. Koko tuotteen jälkeen tämän ensimmäisen PCR-reaktion oli 270 emäsparia. Toisen kierroksen PCR, tämä tuote laimennettiin 1: 50 veteen, ja 2 ui laimennosta käytettiin MSP. Sisäkkäin alukesekvenssit E-kadheriinin metyloidulle reaktiota olivat 5'-TG TAGTTACGTATTTATTTTTAGTGGCGTC-3 '(sense) ja 5'-CGAATACGATCGAATCGAACCG-3' (antisense), ja aluketta sekvenssit metyloimattoman reaktiota olivat 5'-TGGTTGTAGTTATGTATTTATT TTTAGTGGTGTT-3 '(sense) ja 5'-ACACCAAATA CAATCAAATCAAACCAAA-3' (antisense). PCR-parametrit olivat edellä lueteltujen, paitsi että hehkutus lämpötilat metyloitu ja metyloitumaton reaktiot olivat 64 ° C ja 62 ° C: ssa, vastaavasti. Tuote koot metyloitu ja metyloimattomien reaktiot olivat 112 ja 120 bp, vastaavasti. Rintasyöpä solulinjassa MB-MDA-231, joka osoittaa, metylaatio ja vaiennettu E-kadheriinin ja nollareagensseja käytettiin positiivisten ja negatiivisten kontrollien.
Immunohistokemiallinen värjäys E-kadheriinin
E-kadheriinin ilmentyminen määritettiin immunovärjäyksessä käyttäen avidiini-biotiini monimutkainen immunoperoksidaasimenetelmällä, joka suoritettiin rinnakkain histopatologiset osastoja parafinoidut kasvain jakso ja pariksi normaalia kudosta. Endogeeninen peroksidaasi estettiin 3% vetyperoksidia 10 minuuttia, minkä jälkeen mikro-antigeenin haku yhdeksän minuutin ajan 98 ° C: ssa 10 mM natriumsitraatti (pH 6,0) ja inkuboitiin 2% normaalia hevosen seerumia minimoida ei-spesifinen sitoutuminen. Objektilasit peräkkäin inkuboitiin ensisijaisen monoklonaalisen, hiiren anti-E-kadheriini-vasta-ainetta (1: 100 laimennos fosfaattipuskuroitua suolaliuosta, Santa Cruz, sc-8426), yön yli 4 ° C: ssa, biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineen kanssa 30 min 37 ° C: ssa ja ABC-reagenssia 45 min ajan 37 ° C: ssa. 0,5% 3,3'-diaminobentsidiini (Sigma, St Louis, MO) käytettiin kromogeenina. Jos negatiivinen kontrolli, ensisijainen vasta-aine korvattiin hiiren IgG: llä. Diat normaalin mahan limakalvon käytettiin positiivisena kontrollina.
Mittaaminen mRNA: n ilmentymisen E-kadheriinin
RNA uutettiin jääleike kudoksista standardimenetelmillä käyttämällä Trizol (Invitrogen, USA). cDNA syntetisoitiin käyttäen Advantage RT-for-PCR Kit (Clontech, Palo Alto, CA) ja oligo (dT) pohjustus suositusten mukaisesti säädetyn pöytäkirjan. GAPDH-geeniä käytettiin kontrollina. Alukesekvenssit E-kadheriinin olivat 5 ° ‰ -CGACCCAACC CAAGAATCTA-3 ° ‰ (sense) ja 5 ° ‰ -AATGGCAG GAATTTGCAATC-3 ° ‰ (antisense), alukkeen sekvenssi GAPDH oli 5 ° ‰ -GGGAAACTGTGGCGT GAT-3 ° ‰ (sense) ja 5 ° ‰ -GTGGTCGTTGAGGG CAAT-3 ° ‰ (antisense), tuote koko oli 202 bp ja 342 bp, vastaavasti. PCR-tuotteet erotettiin 2% agaroosigeeleillä, ja signaali-intensiteetit kvantitoitiin käyttäen tietokoneen kuvantamisjärjestelmä. Tasot geenitranskriptien kvantitoitiin suhteena intensiteetti E-kadheriinin signaalin intensiteetti β-aktiini. Inaktivoitu ilmentyminen pisteytettiin, kun ilmentyminen E-kadheriinin geenin kasvaimen näyte oli < 25% sen ilmaisun vastaavassa normaalissa näytteessä.
Tilastollinen analyysi
Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen SPSS10.0 ohjelmistopakettia (SPSS Company, Chicago, Illinois, USA). Fisherin testiä ja Chi-neliö testi arviointiin käytettiin tilastollista merkitystä erojen ja vertaa kategorinen yhdistyksiä. Kaksipuolinen testejä käytettiin merkitsevyyden määrittämiseen, ja P-arvot olivat alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävä kaikissa tilastollinen testejä.
Tulokset
Aihe ominaisuudet
Kuten on esitetty taulukossa 1, 92 GCA potilaat saatiin tämän tutkimuksen, mukaan lukien 73 mies- ja 19 naaras, ikä vaihteli 38 ~ 76, keski-ikä 56,9. Kaikki tapaukset luokiteltiin 4 kasvaimen solmu-etäpesäke (TNM) vaiheissa mukaan UICC standardin 8 vaiheen I (8,7%), 32 vaiheen II (34,8%), 38 vaiheen III (41,3%), 14 vaiheen IV (15,2%). Mukaan patologinen vaiheiden tapaukset luokiteltiin 3 ryhmään, 42 (45,7%) kohtalainen ryhmä, 34 (36,9%) huono-kohtalainen ryhmä ja 16 (17,4%) huono group.Table 1 kliiniset ja patologiset ominaisuudet GCA potilaat
Ryhmät
n (%)
Sukupuoli
Mies
73 (79,3) B Nainen
19 (20,7 ) B keskimääräinen ikä vuosina (SD) B 56,9 (8,86)
TNM
I
8 (8,7) B II
32 (34,8) B III
38 (41,3) B IV
14 (15,2) B patologinen erilaistuminen kasvaimen
kohtalainen
42 (45,7) B huono-kohtalainen
34 (36,9)
huono
16 (17,4) B metyloituvuutta E-kadheriinin geenin
metyloituvuutta onnistuneesti suoritettu kaikissa kasvain ja pariksi normaali kudosnäytteiden (kuvio 1). 10% näytteistä, metylointianalyysi toistettiin laadunvalvontaan. 63 (68,5%) 92 GCA kasvainten E-kadheriinin metylaatio havaittiin, kun taas vain 10 (10,9%) pariksi normaaleissa kudoksissa E-kadheriinin metylaatio havaittiin. Taajuus E-kadheriinin metylaatio kasvaimen kudokset oli merkittävästi korkeampi kuin pariksi normaaleissa kudoksissa (P < 0,001). Kun ositettu varten TNM vaiheita, Taajuus E-kadheriinin geenin metylaatio GCA potilaista kanssa III ja vaihe IV (78,8%) oli huomattavasti korkeampi kuin GCA potilailla, joilla on vaiheen I ja vaiheen II (55%) (χ2 = 5,96, P = 0,01 ). Kun kerrostunut patologiset vaiheissa E-kadheriinin geenin metylaatio taajuuksilla kohtalainen, huono-kohtalainen ja huono ryhmässä olivat 52,4%, 73,5% ja 100%, taajuus E-kadheriinin geenin metylaatio köyhien ryhmä merkittävästi suurempi kuin vuonna kohtalainen ja huono -moderate ryhmät (χ2 = 8,92, P = 0,003) (taulukko 2). Kuvio 1 metylointi analyysi E-kadheriinin kasvainkudoksessa (T) ja vastaavassa normaalissa kudoksessa (N). u: osoittaa läsnäolon metyloitumattoman geenien; m: osoittaa läsnäolon metyloitu geenejä. Tapauksissa 1 ja 2: kasvainspesifisen metylaation; Tapaus 3: kasvain on täysin metyloitu, kun taas vastaava normaali kudos on erittäin heikko juova osoittaa, metylointi; Tapaus 4: sekä kasvaimen ja vastaavassa normaalissa kudoksessa metyloitumaton.
Taulukko 2 E-kadheriinin metylaatio ja immunohistokemiallisella värjäyksellä ominaisuudet GCA potilaiden
Ryhmä
metylaatiostatuksen
P
immunohistokemiallinen värjäys
P
M
U
-
+
TNM
I
4
4
2
6
II
18
14
13
9
III
29
9
26
12
IV
12
2
0.015a
10
4
0.002a
patologinen eriyttäminen kasvaimen
kohtalainen
22
20
20
2
huono-kohtalainen
25
9
18
16
kehno
16
0
0.003b
13
3
0.022b
P-arvo vaiheen III ja IV potilaat vastaan ​​vaiheen I ja II potilaat, b P-arvo on huono erilaistumista ryhmä vastaan ​​kohtalainen ja huono kohtalainen ryhmien
immunovärjäys E-kadheriinin geenin
Kuten taulukossa 2 on esitetty, värjäys oli heterogeenista 51 tuumorikudoksissa, kasvainsolujen vähentynyt kalvo E-kadheriinin värjäys sekoitettiin kasvainsolujen vahvassa kalvomainen värjäytymistä (kuva 2). Taajuus proteiinin ilmentyminen oli 44,6% kasvainkudoksissa, kun taas pariksi normaali kudosnäytteiden kaikki osoittivat hajanainen vahva membranous E-kadheriinin värjäystä. Taajuus proteiinin ilmentyminen oli merkitsevästi erilainen kasvaimen ja pariksi normaaleissa kudoksissa (P < 0,001). Kun ositettu varten TNM vaiheita, Taajuus E-kadheriinin geenin proteiinin ilmentymistä vaiheen III ja IV tuumorikudoksia (30,8%) oli merkittävästi pienempi kuin vaiheessa I ja II tuumorikudoksia (62,5%) (χ2 = 9,21, P = 0,002) . Taajuus E-kadheriinin geenin proteiinin ilmentymistä köyhien ryhmä merkittävästi pienempi kuin vuonna kohtalainen ja huono-kohtalainen ryhmät (χ2 = 5.23, P = 0.022). Kuva 2 E-kadheriinin immunostain in GCA kudoksessa. V: positiivista värjäytymistä (normaali kudos). B: negatiivinen värjäytyminen (GCA kudosta).
MRNA: n ilmentymisen E-kadheriinin geenin
tasot transkriptien määritettiin 32 valitaan jäädytetyn GCA näytteiden RT-PCR-analyysillä (kuvio 3). 32 GCA näytettä, myös 2 vaiheen I, 2 II vaiheen, 8 vaiheen III ja 8 vaiheen IV tapauksia, joissa kasvain oli metyloitu ja 12 tapausta (2 vaihe I, 4 vaiheiden II, 4 vaiheen III ja 2 vaihe IV) metyloitumattomilla E-kadheriinin geeni. 202 bp: n fragmentti, E-kadheriinin geenin transkripti oli tuotettu, jossa on 342 bp: GAPDH-fragmentin transkriptin kontrollina. 16 (1 II vaiheen, 7 vaiheen III ja 8 vaihe IV) tapauksista (80%) inaktivoitua mRNA: n ilmentymisen havaittiin 20 Tuumorinäytteissä E-kadheriinin geeni metyloitu, muut 4 (2 vaihe I, 1 vaihe II, 1 vaiheen III) tapaukset osoittivat positiivista ilmaisua. 12 kasvaimen näytteiden E-kadheriinin geenin metyloimattoman kaikki positiivisesti ilmentyminen E-kadheriinin geenin. Kuvio 3 mRNA: n analyysi E-kadheriinin kasvainkudoksissa. 1: 100 emäsparin DNA-markkeri 2,4,5,6,9: positiivinen mRNA ilmaisun 3,7,8: negatiivinen mRNA: n ilmentymisen.
Keskustelu
Kiina on maa, jossa esiintyy paljon ruoansulatuskanavan syöpä, joka myös ruokatorven karsinooma, mahasyövän sekä mahalaukun sydämen adenokarsinoomaa (GCA). GCA, joka oli aiemmin rekisteröity ruokatorven syövän tai mahasyövän, on diagnosoitu itsenäisesti aivan viime vuosina, koska paraneminen varhain endoskooppiset seulontaa ja patologisen diagnoosin. On ehdotettu useita epidemiologisia tietoja, että esiintyvyys GCA on kasvanut viime vuosina. Jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että mekanismi ja kliininen oire GCA eroaa mahasyöpä mutta samanlainen ruokatorven syöpä. Tarkkaa mekanismia esiintymisen GCA edelleen epäselvää tällä hetkellä. On yleisesti hyväksyttyä, että perinnöllinen tekijä, joka ärsyttää esiintyminen kasvaimen mukaan lukien kaksi mekanismia, genetiikan ja epigenetiikan mekanismi. Geneettisiä poikkeavuuksia, proto-onkogeenien ja tuumorisuppressorigeeneille ovat hyvin tunnettuja muutoksia, jotka ovat usein osallisina syövän synnyssä. Kuitenkin Epigeneettiset inaktivaatio tiettyjen tuumorisuppressorigeeneille poikkeava promoottori metylaatio havaitaan usein useilla syöpiä ja voi olla keskeinen rooli kasvainten synnyssä. Vaikka geneettiset poikkeavuudet liittyvät muutokset DNA-sekvenssin, epigeneettiset tapahtumat voivat aiheuttaa muutoksia geenien ilmentyminen, jotka tapahtuvat ilman muutoksia DNA-sekvenssin. Jos tuumorisuppressorigeeneille vaikuttaa, se johtaa yleensä transkription hiljentämisen ja siten inaktivaatio, joka geeni. Se voidaan sitten antaa kasvun etuja näiden solujen, jotka suosivat syövän kehittymisen [22].
Jäsenenä soluadheesion molekyyli, E-kadheriinin on tärkeä rooli ylläpitää solujen adheesiota ja sen toimintahäiriö voi johtaa tumorigenesis.6 biologinen seurauksia sen toimintahäiriön kuuluu häiriöitä välistä adheesiota ja arvonalentumiset beta-kateniinin välittämää transactivation [23]. Tähän mennessä kuitenkin sääntelymekanismeja vastaavat muuttuneita tasoja E-kadheriinin proteiinien GCA ei ole selvitetty. On raportoitu, että hypermetylaatiota E-kadheriinin liittyi mahasyöpä ja ruokatorven adenokarsinooma [21, 24]. On kuitenkin olemassa mitään muuta raportin suhteesta Ecadherin metylaatio ja kasvaimen kehittymisen GCA. Tässä tutkimuksessa osoitimme, että hypermetylaatiota 5'-CpG-saarekkeen E-kadheriinipromoottorin tapahtui usein GCA kudoksissa (68,5%), ja että tämä metylaatio muutos nähtiin lisääntynyt ilmentyminen E-kadheriinin proteiinia. Meidän tiedot osoittivat, että epigeneettisten hiljentäminen E-kadheriinin promoottorin kautta hypermetylaation voi olla yksi kriittinen mekanismi tämän geenin in GCA. Geenien liittyy hypermetylaation välittyy metyyli-sitovat proteiinit, jotka sitoutuvat metyloidut sytosiinit ja rekrytoida kompleksi proteiineja, jotka tukahduttavat transkriptiota, mukaan lukien histonideasetylaaseja [25].
Tutkimuksessamme havaitsimme, että useimmissa tapauksissa tutkimme, E-kadheriinin metylaatio oli kasvain erityisiä. kuitenkin, 10 tapauksissa, joissa metylaation muutos oli läsnä sekä kasvaimen ja pariksi normaaleissa kudoksissa samasta potilaasta. Arkaluonteisuuden sisäkkäisiä MSP, on mahdollista, että normaali-näkymästä näytteet sisälsivät harvinainen syöpäsolun, joka oli ei havaita histomorphology. Rajoituksista johtuen näytteen, emme tutkia metyloinnin E-kadheriinin normaaleissa cardia kudoksissa. Kuitenkin normaali ruokatorven kudos ei näytä poikkeavaan E-kadheriinin metylaatio joissakin tutkimuksissa [21] ja aiemmissa tutkimuksissa tutkinnassa E-kadheriinin metylaatio eri kasvaintyypeissä, normaaleissa kudoksissa luuytimestä, rinta, kilpirauhasen, ja suun limakalvoilla olivat metyloimaton [ ,,,0],14, 26]. Nämä tiedot viittasivat vahvasti siihen, että E-kadheriinin promoottorin metylaation on poikkeava tapahtuma. Se, että me vain havaittu metylaation pariksi normaaleissa kudoksissa potilailla, joilla vastaavaa kasvain myös denaturoitu on sopusoinnussa hypoteesin, että syöpää näillä henkilöillä syntyi metyloitua klonaalinen esiaste. Tutkimuksessa, neoplastisen etenemisen Barrettin ruokatorvi, hypermetylaatiota tuumorisuppressorigeenin p16 havaittiin patologisesti normaalin esiintyvät näytteet saadaan potilaalta, joille myöhemmin kehittyi dysplasia [27]. Näin ollen, epigeneettinen inaktivoimiseksi tuumorisuppressorigeeneille voi olla varhainen ominaisuus kasvaimen.
Tulokset osoittavat, että proteiinin ilmentymisen Ecadherin kasvainkudoksissa huomattavasti pienempi kuin pariksi normaaleissa kudoksissa, mutta immunohistokemiallisella värjäyksellä osoitti myös normaalia kalvo värjäys E -cadherin joissakin tuumorinäytteissä E-kadheriinin metylaatio. On olemassa useita mahdollisia syitä tapahtumista. Ensinnäkin Tämä johtui todennäköisesti siitä, että immunohistokemiallista värjäystä ei ollut niin herkkä kuin PCR havaitsemisessa alaryhmien solujen geenin metylaatio ja siten downregulation E-kadheriinin. Toiseksi, kasvain kudoksia voidaan sekoittaa jonkin verran normaaleissa kudoksissa ja saattavat osoittivat normaalia membranous värjäytymisen E-kadheriinin. Kolmanneksi geeni heterogeenisen metylointi tai alleelin metylointi voi olla tärkeä syy. Meidän tutkimuksissa, huomasimme, että metylaatiostatuksen kasvainkudoksessa että molemmat myönteisesti proteiinin ilmentymisen ja hypermetylaation olivat puutteellisia Ecadherin metylaatio. Lisäksi on osoitettu, että DNA: n metylaatio, joka tukahdutti geenin ilmentymisen lähinnä transkription tasolla ja tiheys CpG-saarekkeen metylaation liittyi tukahdutti astetta transkription [28]. Dicky promoottori voidaan tukahduttaa täydellisesti pienempi tiheys metylaatio, mutta kun promoottori tehostui enhanser, toiminta transkription noudetaan. Tutkimuksessamme löysimme myös positiivisia mRNA ilmaisun joissakin Tuumorinäytteissä E-kadheriinin geenin metyloitu. Se johtuu osittain siitä, että laajuus promoottorin metylaation oli insufficent tukahduttaa E-kadheriinin transkription. Kaikkiaan Meidän tutkimuksessa todettiin, että epigeneettisten hiljentäminen E-kadheriinin promoottorin kautta hypermetylaation voi olla yksi mekanismi inaktivoimiseksi E-kadheriinin in GCA.
Ilmoitukset
Kiitokset
Kiitos potilaiden ja verrokkiyksilöiden osallistumisesta tähän tutkimukseen.
tukemana Avustukset huomattavat erottuva aiheita perusta Hebein maakunnassa.

• Kliininen merkitys uPA järjestelmän mahasyövän vatsakalvon etäpesäkkeitä
• Epstein-Barr-virus-specific metylaation ihmisen geenien mahasyövässä cells